血根碱及其盐作为杀精子剂的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了血根碱及其盐作为女性外用杀精子剂的应用。其显著地特点是能低浓度、快速杀灭精子且价格便宜、安全可靠。血根碱水溶液（pH=4.5）20s的最低杀精浓度为0.25mg/L,3min的最低杀精浓度为0.15mg/L,血根碱的羟甲基丙基纤维素凝胶在家兔抗生育试验中的低杀精浓度为0.5mg/kg，ED50值为0.129mg/kg。与常用的壬苯醇醚相比，血根碱的各项杀精指标均优于壬苯醇醚，有望成为一种新型、高效的女性外用避孕药。
【专利说明】血根碱及其盐作为杀精子剂的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及发现了血根碱及其盐的一个新用途，具体来说就是以血根碱及其可溶性盐为主要成分，制备女性外用(阴道)杀精子避孕药物，属生物医学领域。
【背景技术】
[0002]避孕是生殖与计划生育领域中广为研究的内容，避孕的方法有许多，如使用避孕药，避孕套，避孕膜，安全期避孕法、体外排精避孕法、手术避孕法等等，其中以避孕药(女用)的使用最为常见。避孕药也有许多种类，如外用杀精子剂与口服避孕药等，由于外用杀精剂一般不干扰女性的内分泌功能，且价格便宜、使用方便并兼有杀菌消毒的作用而得到了许多育龄妇女的青睐。现在已有许多的外用杀精剂(主要指阴道杀精剂)如壬苯醇醚类化学合成药物得到了广泛的应用，天然药物中的杀精剂，如茶皂素、苦参/白头翁的提取物、印楝油等植物源的杀精剂亦有相关报道，但基于生物碱的杀精剂却少有报道。我们在研究植物源杀钉螺的药物中发现某些具有抗菌、杀虫作用的生物碱如血根碱，显示出很好的杀精效果，且对人体的毒性很低，具有开发成女性外用避孕药的良好应用前景。
[0003]血根碱是从罂粟科植物如博落回、血水草中提取的苯并菲啶类生物碱，其化学式为:C2tlH14NO4+,相对分子质量:332,化学名为:(13-methyl [I, 3]benzodioxolo [5, 6-c]-1, 3-dioxolo [4, 5-1] phenanthridinium)。分子结构如图1 所不。
[0004]据文献报道，血根碱及其盐具有丰富的药理活性，如杀菌、抗病毒、杀虫、杀钉螺、杀尾蝴及抗肿瘤等作用，但血根 碱及其盐的杀精子作用目前未见报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供血根碱及其盐的一个新用途，即作为女性外用杀精、避孕药的开发。其显著的特点是:能低浓度、快速杀灭精子，价格便宜、安全可靠。
[0006]本发明药物可以按多种药剂学上的常规方法制备成适合女性外用(阴道中使用)的凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、膜剂、栓剂、泡腾片剂、缓释制剂等。
[0007]为了更好地理解本发明的实质和验证其临床效果，进行了血根碱及其盐的体外杀灭人精子的实验研究，但本发明的内容并不仅限如此。试验方法如下:
1.血根喊的制备及其制剂
试验中所采用的药物按照钟明(博落回总生物碱对钉螺生殖腺超微结构的影响研究，中国病原生物学杂志，2009，4 (10): 758-761)论文提供的方法，从博落回果荚中提取出含血根碱(约40%)的提取物，再按李发旺在论文(博落回果实中生物碱的提取分离与鉴定.内蒙古工业大学学报，2008，27(1):49-53)中提供的柱层析法制备血根碱原碱，通过原碱与各种稀酸(HC1，H2SO4, H3PO4, CH3COOH等)反应，制备血根碱的相关盐类。
[0008]将血根碱原碱溶于pH为4.5 (同于女性阴道正常的pH值)的酸水中，并采用生理盐水将其稀释成0.30,0.25,0.20,0.15,0.10mg/L系列浓度的溶液备用。
[0009]制备血根碱凝胶制剂时采用羟甲基丙基纤维素(HPMC)为基质，将血根碱原碱溶于稀盐酸后与基质一起配制成血根碱含量为1、0.5,0.25,0.12,0.06,0.03 mg/kg的系列凝胶备用。
[0010]2.人精子悬混液制备
按照WHO规定的标准(世界卫生组织.人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册.北京:人民卫生出版社，2001，5-28)，收集并筛选出20份正常健康且年龄在20-25周岁男性的精液。取样前禁欲一周，2天内禁酒与咖啡，手淫法取精。精液分析采用WHO推荐的方法，试验所用精液符合以下条件:体积大于3 ml，液化时间〈30 min，精子密度>60X IO6 /ml，活动率70% -80%，活动力为IV，a + b级精子≤50%，畸形精子〈10%，无精子凝集现象，不符合以上质量标准的精液不采用。精液液化后经Percoll梯度离心法优化，然后用生理盐水(NS)稀释精液浓度至(60-80) X IO6 /ml。
[0011]3.体外杀精
体外杀精试验采用改进的Sander-Cramer方法(王江，复方凝胶制剂体外杀精作用的研究，天津药学，2007年01期)进行。试验设立了空白对照组(调pH值为7.6的NS组)、对照组试验药物组(含不同浓度的血根碱组)和阳性药物组(壬苯醇醚-9，即NP-9组)。本试验之所以选用NP-9作为阳性药物，主要是考虑到NP-9是目前世界上使用最多的阴道杀精剂，且现在市售的杀精剂的活性成分主要是NP-9，有关它的杀精实验研究最多，效果也最为确切，故选择NP-9作为血根碱杀精试验的阳性药物，以便比较。将制备好的人精子悬混液，置于37°C水温箱中恒温孵育，然后取0.2ml的人精子悬混液与制备好的血根碱系列溶液等量混合均匀，取一滴于载玻片上进行显微观察(200x)，分别观察并记录20 s’ 40 s’ I min,2 min和3 min的杀精效果。每个样品观察10个视野，如果有一个及以上的活精子则记为“ + ”，活动精子为30% -50%记为“++” ；活动精子为50%则记为“+++”，无活精记为“一”，并依此判断最低的有效杀精浓度。每组实验用20位供精者的精液，且每份标本连续检测3次，取其平均值。将与药物作用后的精子按精子活力恢复法进行处理:加入NS后离心，弃上清液，再加入0.5ml F-1O精子营养液，37C°孵育30 min，观察I小时内精子的活力恢复情况。结果如表1所示。
[0012]表1血根碱浓度与杀精时间的关系
【权利要求】
1.一种具有杀灭精子作用的生物碱药物(血根碱)，其特征在于其主要成分为血根碱或血根减的盐类，化学名为:(13-methyl [1，3]benzodioxolo [5, 6_c] _1，3-dioxolo [4, 5_i]phenanthridinium)，其结构式见图1。
2.如权利I所述的药物，其特征在于由血根碱与药剂学上允许的水溶性溶剂或凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、膜 剂、栓剂、泡腾片剂、缓释制剂混合制备而成。
【文档编号】A61P15/18GK103768065SQ201410004442
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月6日 优先权日:2014年1月6日
【发明者】钟明, 冯务群, 阎建辉, 易健民, 唐课文, 向阳 申请人:湖南理工学院, 钟明