阿霉素肾病动物模型的构建方法
【专利摘要】本发明公开了一种阿霉素肾病动物模型的构建方法，旨在解决现有的阿霉素肾病动物模型操作复杂、成功率低的技术问题。包括下列步骤：选取符合实验标准的大鼠作为造模组；给造模组的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾静脉注射阿霉素，相隔1周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素；从第1次给造模组大鼠注射阿霉素起，给以两周高蛋白饲料喂养后再改为6天正常饲料喂养；从第1次注射阿霉素起，至第20天时，将24h尿蛋白总量大于30mg的大鼠计入阿霉素肾病动物模型。本发明简便易行，成功率高、一致性和稳定性好，能有效降低动物死亡率，是一种进一步研究足细胞病变的较为理想的动物模型。
【专利说明】阿霉素肾病动物模型的构建方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及动物模型构建【技术领域】，具体涉及一种阿霉素肾病动物模型的构建方法。
【背景技术】
[0002]阿霉素(ADR)是含醌的蒽环抗生素，可在肾脏内代谢还原为半醌型自由基，后者与氧反应产生活性氧，诱发肾小球上皮细胞脂质过氧化反应，影响糖蛋白代谢，破坏滤过膜的结构和功能，最终导致膜滤过屏障的选择性变化而引起蛋白尿。阿霉素的肾毒性作用及大量蛋白尿的刺激，进一步诱发肾小球内固有细胞及其他炎性细胞产生并释放各种细胞因子和炎性介质，刺激肾小球系膜细胞增殖和系膜基质增多，缓慢发展形成肾小球硬化。急性阿霉素肾病模型，即单次经鼠尾静脉注射5~7.5mg/kg阿霉素而诱发的，与人类微小病变性肾病相似，为国内外公认的微小病变性肾病模型，慢性阿霉素肾病模型是指通过多次注射阿霉素，或合并应用一侧肾切除的方法而诱导的局灶节段性肾小球硬化。
[0003]阿霉素肾病动物模型是当今肾病科研领域较多应用的经典模型，有大量文献探讨了此模型的建立方法，但其中也存在着诸多的问题。该模型的建立与阿霉素的剂量、给药途径、次数、间隔时间、单侧肾切除或一侧肾动脉钳夹等因素密切相关。由于阿霉素对心脏、肝脏、骨髓、胃肠等系统具有较强的毒副作用，单次大剂量注射使得该模型死亡率偏高，虽然采用缩短建模时间和减少阿霉素用量的措施能提高模型存活率，但会影响建模效果。也有人采用右肾切除加重复注射ADR的方法造模，但实验中会因手术意外或感染造成大鼠死亡，而且在注射ADR后会增加大鼠的死亡率。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种成功率高、一致性好、简便易行的阿霉素肾病动物模型的构建方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明阿霉素肾病动物模型的构建方法包括下列步骤:
(1)选取体重为130~150g的SPF级雄性SD大鼠，适应性喂养一周后，进行尿常规检测，将检测结果正常、体重在180~200g的大鼠作为造模组；
(2)用生理盐水将阿霉素配制为0.2g/ml的浓度,给造模组的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾静脉注射阿霉素；相隔I周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素；
(3)从第一次给造模组大鼠注射阿霉素起，给以两周高蛋白饲料喂养后再改为6天正常饲料喂养；
(4)从第一次给造模组大鼠注射阿霉素起，分别收集每只大鼠24h尿液，并测定记录每只大鼠的24h尿蛋白总量，至第20天时，将24h尿蛋白总量大于30mg的大鼠计入阿霉素肾病动物模型。
[0006]优选的，所述高蛋白饲料含大豆分离蛋白18%_25%。
[0007]优选的，所述大鼠24h尿蛋白总量的检测方法为:将大鼠放于干燥的代谢笼中，收集24h尿液,测定尿液体积后,摇匀取ImL尿液,在4°C条件下用4000r/min的速度进行离心处理5min ;弃去沉淀后采用磺基水杨酸-硫酸钠法测定24h尿蛋白总量。
[0008]本发明阿霉素肾病动物模型的构建方法的有益效果在于，建模过程中不需采用单侧肾切除或肾动脉钳夹术等方法，避免了因此而产生的足细胞损伤、手术意外、合并感染导致的动物死亡率高等问题，操作更加简便易行，建模时间短、成功率高；该模型内大鼠间病变差异小，一致性和稳定性好；且该模型能够动态观察从MCD (微小病变肾病)到FSGS (早期局灶节段肾小球硬化)的渐进发展过程，是一种进一步研究足细胞病变的较为理想的动物模型。
[0009]对于本发明的具体操作步骤及流程，将在下面结合实施例作出进一步详细的说明。
【具体实施方式】
[0010]实施例1:按照下面的步骤构建阿霉素肾病动物模型:
(I)选取体重为130~150g的6周龄SPF级雄性SD大鼠，适应性喂养一周后，进行尿常规检测，将检测结果正常(尿蛋白为阴性)、体重在180~200g的70只大鼠随机分为对照组A组和造模组；其中，对照组A组7只，其余63只为造模组；再将所述造模组内的大鼠随机分为正常饲料组B组和高蛋白饲料组C组；其中，B组31只，C组32只。
[0011]在分组前，检测大鼠体内的葡萄糖(GLU)、尿胆原(UR0)、胆红素(BIL)、酮体(KET)、比重(SG)、潜血(BLD)、酸碱度(pH)、蛋白质(PRO)、亚硝酸盐(NIT)、白细胞(LEU)和抗坏血酸(VC)。各项结果均正常，方可用于建模。建`模前大鼠尿常规检测结果如下表1所
【权利要求】
1.一种阿霉素肾病动物模型的构建方法，其特征在于，包括下列步骤: (1)选取体重为130~150g的SPF级雄性SD大鼠，适应性喂养一周后，进行尿常规检测，将检测结果正常、体重在180~200g的大鼠作为造模组； (2)用生理盐水将阿霉素配制为0.2g/ml的浓度,给造模组的大鼠第1次按4mg/kg的用量尾静脉注射阿霉素；相隔I周，第2次按3.5mg/kg的用量注射阿霉素； (3)从第一次给造模组大鼠注射阿霉素起，给以两周高蛋白饲料喂养后再改为6天正常饲料喂养； (4)从第一次给造模组大鼠注射阿霉素起，分别收集每只大鼠24h尿液，并测定记录每只大鼠的24h尿蛋白总量，至第20天时，将24h尿蛋白总量大于30mg的大鼠计入阿霉素肾病动物模型。
2.如权利要求1所述的阿霉素肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述高蛋白饲料含大豆分离蛋白18%-25%。
3.如权利要求1所述的阿霉素肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述大鼠24h尿蛋白总量的检测方法为:将大鼠放于干燥的代谢笼中，收集24h尿液，测定尿液体积后，摇匀取ImL尿液,在4°C条件下用4000r/min的速度进行离心处理5min ;弃去沉淀后采用磺基水杨酸-硫酸钠法测定2 4h尿蛋白总量。
【文档编号】A61K31/704GK103860570SQ201410062154
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年2月25日 优先权日:2014年2月25日
【发明者】何美霞, 贺石林, 赵瑛瑛, 王巨才, 张勇, 朱建立, 李杨, 李志刚, 何叶, 张翰明, 杜斌, 华海婴, 张卫茹, 张莉蓉 申请人:河南省医药科学研究院