珊瑚萃取物及其萃取方法以及其用途、珊瑚萃取物保养品的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于皮肤美白、保湿、改善弹性、抗发炎以及伤口愈合的珊瑚萃取物及其萃取方法；该珊瑚萃取物为一种皮软珊瑚（Briareumexcavatum）的萃取物；该萃取方法包括：以有机溶剂萃取、以水和乙酸乙酯分配萃取，并以管柱层析法分离；该珊瑚萃取物可应用于皮肤美白、保湿、改善弹性、抗发炎以及伤口愈合等领域。
【专利说明】珊瑚萃取物及其萃取方法以及其用途、珊瑚萃取物保养品
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种珊瑚萃取物、萃取方法以及用途，尤其是指一种皮软珊瑚 (Briareum excavatum)，该萃取物具有提高皮肤保湿、弹性、抑制酪胺酸酶活性、减少黑色 素形成，并减缓发炎细胞浸润与控制伤口面积等功效。
【背景技术】
[0002] 由于海洋生态环境的特殊性使得海洋生物产生的次级代谢产物的生物合成途径 和酶反应系统与陆地生物相比有显著的差异，导致海洋生物往往能够产生一些化学结构新 颖、生物活性多样的具有与陆地生物完全不同结构特征的海洋次级代谢产物。
[0003] 珊瑚属于腔肠动物门，有9000余种，是海洋中最常见的生物之一，约占海洋生物 种类的22. 4%，是可以大量利用的海洋生物资源。软珊瑚目（gorgonian)俗称海扇、海鞭、 海柳，是珊瑚动物中的一大分支。在对珊瑚化学成分的研究中，自美国的Weinheiner等于 1969年从软珊瑚目中发现丰富的具有独特结构和强烈生理活性的前列腺素前体以来，吸引 了众多天然产物化学家把研究对象从陆地生物转向海洋生物，大量被发现的海洋天然产物 具有广泛的生物活性，主要作用于神经系统、心血管系统、免疫系统等，且许多有显著的抗 肿瘤活性。
[0004] 近年来对软珊瑚的研究仍很活跃，例如，从Briareum属的软珊瑚目中发现众多有 活性的briarane型二萜，但囿于野生珊瑚来源的限制，故有学者尝试对软珊瑚目中的皮软 珊瑚（Briareum excavatum)进行实验室人工养殖，然而迄今并无任何文献数据或专利前案 曾经揭示，可以从皮软珊瑚得到具有抑制酪胺酸酶活性、加速伤口愈合并可抗发炎的萃取 产物或经纯化的化合物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种一种珊瑚萃取物，其由皮软珊瑚（Briareum excavatum)萃取而得，具有提高皮肤保湿、弹性、抑制酪胺酸酶活性、减少黑色素形成，并减 缓发炎细胞浸润与控制伤口面积等功效。
[0006] 本发明的另一目的在于提供一种珊瑚萃取物的萃取方法，其方法简便易于量产。
[0007] 本发明的再一目的在于提供一种珊瑚萃取物的用途，其将前述的珊瑚萃取物施用 于一活体的皮肤，以使皮肤美白、保湿、改善皮肤弹性、抗发炎且可以促使伤口愈合。
[0008] 为了达成上述目的，本发明的解决方案是：
[0009] -种用于皮肤美白、保湿、改善弹性、抗发炎以及伤口愈合的珊瑚萃取物，其借由 下列步骤所制得：
[0010] a.以一有机混合液萃取干燥皮软珊瑚（Briareum excavatum)样品，获得有机层 初萃取液，其中该有机混合液包含等比例的C1-C4醇类和C1-C4的含氯烷类；b.以水和低 级酯类分配萃取该有机层初萃取液，获得一低级酯类粗萃物，该低级酯类粗萃物含有5? 50 %的一珊瑚活性成分。 toon] 上述b.步骤的该低级酯类粗萃物进一步以一管柱层析分析加以纯化，其以一冲 提液冲提该低级酯类粗萃物，以得一冲提物，其中该冲提液的冲提梯度由正己烷/乙酸乙 酯的一第一混合溶剂与乙酸乙酯/甲醇的一第二混合溶剂所提供。
[0012] 上述a.步骤的C1-C4醇类为甲醇。
[0013] 上述a.步骤的C1-C4的含氯烷类为二氯甲烷。
[0014] 上述b.步骤的低级酯类为乙酸乙酯。
[0015] 上述第一混合溶剂中正己烷的溶剂梯度为0%_99%。
[0016] 上述第二混合溶剂中乙酸乙酯的溶剂梯度比例为0%_90%。
[0017] 上述珊瑚活性成分将该低级酯类粗萃物进一步由该第一混合溶剂加以冲提而 得，其中该第一混合溶剂的冲提梯度为：正己烷：乙酸乙酯为90:10至70:30的划分 (fraction)。
[0018] 上述珊瑚活性成分经冲提后于该低级酯类粗萃物所占比例为5-30%。
[0019] 上述珊瑚活性成分将该低级酯类粗萃物进一步由该第一混合溶剂加以冲提而 得，其中该第一混合溶剂的冲提梯度为：正己烷：乙酸乙酯为60:40至50:50的划分 (fraction)。
[0020] 上述珊瑚活性成分经冲提后于该低级酯类粗萃物所占比例为20-50%。
[0021] 一种所述的珊瑚萃取物的萃取方法，包含：
[0022] a.以一有机混合液萃取干燥皮软珊瑚（Briareum excavatum)样品，获得有机层 初萃取液，其中该有机混合液包含等比例的C1-C4醇类和C1-C4的含氯烷类；b.以水和低 级酯类分配萃取该有机层初萃取液，获得一低级酯类粗萃物，该低级酯类粗萃物含有5? 50 %的一珊瑚活性成分。
[0023] 上述b.步骤的该低级酯类粗萃物进一步以一管柱层析分析加以纯化，其以一冲 提液冲提该低级酯类粗萃物，以得一冲提物，其中该冲提液的冲提梯度由正己烷/乙酸乙 酯的一第一混合溶剂与乙酸乙酯/甲醇的一第二混合溶剂所提供。
[0024] -种珊瑚萃取物的用途，其所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮肤，以使皮肤美 白。
[0025] -种珊瑚萃取物的用途，其将所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮肤，以使皮肤 保湿。
[0026] -种珊瑚萃取物的用途，其将所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮肤，以改善皮 肤弹性。
[0027] -种珊瑚萃取物的用途，其施用所述的珊瑚萃取物，以抗发炎。
[0028] -种珊瑚萃取物的用途，其施用所述的珊瑚萃取物，以促使伤口愈合。
[0029] 一种保养品，其包含所述珊瑚萃取物，该珊瑚萃取物具0. 00001?10%的重量比。
[0030] 采用上述结构后，本发明为珊瑚萃取物及其萃取方法，该珊瑚萃取物借由下列步 骤所制得：a.以一有机混合溶剂萃取干燥皮软珊瑚（Briareum excavatum)样品，获得有 机层初萃取液，其中该有机混合液包含等比例的C1-C4醇类和C1-C4的含氯烷类；b.以水 和低级酯类分配萃取该有机层初萃取液，获得一低级酯类粗萃物，该低级酯类粗萃物含有 5?50%的一珊瑚活性成分；其由皮软珊瑚（Briareum excavatum)萃取而得，具有提高皮 肤保湿、弹性、抑制酪胺酸酶活性、减少黑色素形成，并减缓发炎细胞浸润与控制伤口面积 等功效。
[0031] 本发明珊瑚萃取物的用途，其将前述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮肤，以使皮 肤美白、皮肤保湿、改善皮肤弹性、抗发炎、且可以促使伤口愈合。
[0032] 本发明保养品包含前述的珊瑚萃取物，其中珊瑚萃取物可具0. 00001?10%的重 量比。
【专利附图】
【附图说明】
[0033] 图1是养殖型皮软珊瑚（Briareum excavatum)有效成分的粗萃及分离步骤；
[0034] 图 2 是 BP1 的 1H-NMR 图谱；
[0035] 图 3 是 BP2 的 1H-NMR 图谱；
[0036] 图 4 是 BP3 的 1H-NMR 图谱；
[0037] 图 5 是 BP4 的 1H-NMR 图谱；
[0038] 图 6 是 BP5 的 1H-NMR 图谱；
[0039] 图 7 是 BP6 的 1H-NMR 图谱；
[0040] 图 8 是 BP7 的 1H-NMR 图谱；
[0041] 图9是皮软珊瑚各粗萃取进行动物皮肤过敏性测试结果；
[0042] 图10是离体酪胺酸酶活性测试的实验结果；
[0043] 图11是离体黑色素含量测试的实验结果；
[0044] 图12是BP2活体美白活性分析的实验结果；
[0045] 图13是BP3活体美白活性分析的实验结果；
[0046] 图14是以老鼠的纤维母细胞：NIH/3T3进行离体伤口愈合测试实验的结果，图中 A、B为控制组，不给予测试物；C、D为BP2低剂量组，浓度为10 μ g/ml ;E、F为BP2高剂量 组，浓度为2〇μ8/πι1 ;G、H为BP3低剂量组，浓度为lOyg/ml ;I、J为BP3高剂量组，浓度为 20 μ g/ml ;K为各组的统计数据；
[0047] 图15是以人类脐静脉内皮细胞株：EA. hy926进行离体伤口愈合测试实验的结果， 图中A、B为控制组，不给予测试物；C、D为BP2低剂量组，浓度为10 μ g/ml ;E、F为BP2高 剂量组，浓度为2(^8/1111;6、!1为8?3低剂量组，浓度为1(^8/1111 ;1、1为8?3高剂量组，浓 度为20 μ g/ml ;K为各组的统计数据；
[0048] 图16是以3mg/0. 2ml的ΒΡ2、ΒΡ3、纯乳液治疗的伤口愈合试验的实验结果；
[0049] 图17是以40μ g/0. 2ml的BP2、BP3、粗萃物、纯乳液治疗的伤口愈合试验的实验 结果；
[0050] 图18是利用HE染色（5X)的大白鼠烧烫伤皮肤组织病理切片，图中A为控制组、 B为烧烫伤组、C为BP2组、D为BP3组，给予天然物浓度皆为3mg/0. 2ml ;
[0051] 图19是利用HE染色（5X)的大白鼠烧烫伤皮肤组织病理切片，图中A为控制组、 B为烧烫伤组、C为BP2组、D为BP3组、E为粗萃物组，给予天然物浓度皆为40 μ g/0. 2ml ;
[0052] 图20是3种雏型保养品与空白组及乳霜基质在保湿比较；
[0053] 图21是3种雏型保养品与空白组及乳霜基质在弹力的比较。
【具体实施方式】
[0054] 为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐 述。
[0055] 制备例1 :以有机溶剂萃取皮软珊瑚
[0056] 将大量养殖于0· 6吨养殖水缸的生物样品Briareum excavatum皮软珊瑚 (1021. 49g，湿重）进行冷冻干燥，并将干燥的珊瑚组织磨碎（得干重417. 75g)，接着以 有机溶剂甲醇/二氯甲烷（1:1)混合比例在室温下萃取，经多次重复萃取至添加的有机 溶剂呈现澄清后，得到有机层初萃取液。再将初萃取液过滤后进行减压浓缩，得到的粗萃 物以水和乙酸乙酯进行分配萃取，经过分配萃取与减压浓缩后得到乙酸乙酯层的粗萃物 (15. 75g)。再进行下述分离流程后可取得BP2 (2. 44g，约占粗萃物的15. 5%)及BP3 (5. 6g， 约占粗萃物的35.6%)。
[0057] 制备例2 :粗萃物分离流程
[0058] 参见图1，利用管柱层析法对乙酸乙酯层进行初步的分离，选用的填充剂为硅胶 (Merck，230-400me Sh)，以正己烷/乙酸乙酯与乙酸乙酯/甲醇的混合溶剂为冲提液作梯度 冲提，共分为七个划分（fraction)，各划分的冲提条件如下所示 ：
[0059] 划分 1 (BP1) :Hexane:EtOAC(正己烧：乙酸乙酯）99:1 ?93:7。
[0060] 划分 2(BP2) :Hexane:EtOAC(正己烷：乙酸乙酯）90:10 ?70:30。
[0061] 划分 3(BP3) :Hexane:EtOAC(正己烷：乙酸乙酯）60:40 ?50:50。
[0062] 划分 4(BP4) :Hexane:EtOAC(正己烷：乙酸乙酯）40:60 ?20:80。
[0063] 划分 5(BP5) :Hexane:EtOAC(正己烷：乙酸乙酯）10:90 ?0 :100。
[0064] 划分 6(BP6) :Et0AC:Me0H(乙酸乙酯：甲醇）90:10 ?50:50。
[0065] 划分 7(BP7) :Et0AC:Me0H(乙酸乙酯：甲醇）40:60 ?0 :100。
[0066] 之后每一个划分经过减压浓缩后以核磁共振仪作检测，得到1H-NMR图谱的讯号 (请参见图2至图8)作为判断指标成分存在依据，以利进行更进一步的生物活性实验的依 据。
[0067] 测试例1 :离体抗发炎活性测试 [0068] 1.天然物筛选及细胞株使用
[0069] 针对梯度冲提步骤后粗萃取物，使用酯多糖诱发小鼠巨噬细胞RAW264. 7细胞株 离体发炎模式进行筛选工作。控制6公分培养皿的小鼠巨噬细胞RAW264. 7数目在3xl06 个，先给予粗萃取物，再给予酯多醣（LPS) 16-18小时后收集细胞。
[0070] 2.西方点墨法蛋白质表现量分析
[0071] 使用 4%憐酸盐缓冲溶液（phosphate buffered saline, PBS) (137mM NaCl, 2. 68mM KC1, lOmM Na2HP04, 1. 76mM KH2P04, pH=7. 2)收集至 1. 5ml 离心管中，待以 3000rpm 离心 8分钟后去除上清液，再加入温度4°C的lysis buffer200y l(50mM Tris，pH7. 5, 150mM NaCl, l%TritonX-100,0. ImM EDTA,0. ImM EGTA, 100 μ g/ml phenylmethylsulfonyl fluoride, 1 μ g/ml Aprotinin, 20mM NaF, 0· 2mM Na3V04)打破细胞膜后，在温度4°C之下，以 14, OOOrpm离心30分钟，取出上清液并仿照Lowry等人的方法（Lowry et al.，1951)进行 蛋白质定量。
[0072] 使用 Bio-Rad DC protein assay kit (Hercules，CA，USA)及酶测读仪（Thermo Electron Corporation, USA)分析上清液的吸光值，以测定各标本的蛋白质量。将经校正 后取样本总体积的三分之一体积的标本缓冲液（sample buffer ;2%SDS, 10%glycerol, 0. 1% bromophenol bule, 10%2-mercaptoethanol, 50mM Tris, Bio-Rad Laboratories, inc)〇 利 用7%、10%的SDS-PAGE以80伏特电压分离蛋白质。将SDS-PAGE上的蛋白质以135毫安电 流转置 overnight 到 PVDF 膜（0· 45mm pore size, Tmmobi 1 on~P, Millipore, Bedford, MA, U SA)上。
[0073] 转印后的 PVDF 膜以含 5% 脱酯奶粉 TTBS 溶液（Tris-Tween buffer saline) (Tris-HC120mM,NaC1137mM，pH7. 4,0. l%Tween20)在室温下覆盖 40 分钟，再与 1:1000 稀 释比例的针对诱发型一氧化氮合成酶和第二型环氧化酶作用的一级抗体在室温下反应 两小时。随后以TTBS溶液清洗三次，接着以HRP-conjugated的anti-rabbit IgG抗 体（1 :2000)在室温中反应一小时三十分钟，二级抗体结束后以TTBS溶液清洗三次， 最后利用呈色液(Tmmobi 1 on Western Chemi luminescent HRP Substrate, Millipore Corporation, Billerica, MA01821U. S. A.)与 PVDF 膜反应，并以影像分析处理设备（UVP Biospectrum AC System, UVP Inc, U. S. A.)侦测冷光反应，纪录蛋白质的表现量，以计算机 分析软件（VisionWorks LS Acquisition and analysis software, copyright2007, LLC, U. S. A.)侦测并计算相对量。并以单独加入酯多醣组别为100%，最后以a-actin作为内控制 组。
[0074] 其结果比较不同划分层的粗萃取物在离体抗发炎的成果，进一步作为活体实验模 式和其他离体实验模式做为参考。
[0075] 3.使用的目标抗体
[0076] (1)诱发型一氧化氮合成酶（BD Pharmingen, San Diego, CA, USA :catalog no. 6103322 :polyclonal antibody),稀释比例 1:1000。
[0077] (2)第二型环氧化酶（Cayman Chemical, USA; catalog no. 160106;polyclonal antibody),稀释比例 1:1000。
[0078] (3) β -actin (sigma, St. Louis, M0, USA; catalog no. A5316-2ML; monoclonal antibody),稀释比例 1:2000。
[0079] 4.试验结果
[0080] 参见图9,其比较不同划分层的粗萃取物在离体抗发炎的效果，结果发现20 μ g/ ml的BP2(划分2)及BP3(划分3)即具有非常明显的离体抗发炎效果。
[0081] 测试例2 :美白活性分析A.离体酪胺酸酶活性测试（in vitro tyrosinase activity assay)
[0082] 1.试验步骤
[0083] 试验步骤参照Wang(2010)的研究报告，其整体皆引作为本案的参考数据。将 B16-F10种入24小格培养盘（24well plate)的孔洞中，每小格种入1*105个细胞，放置 于37°C、5%C02的培养箱24小时后，将原有的细胞培养液移除，并加入含有粗萃物的细胞培 养液，再放入培养箱培养48小时。给药结束后移除原有细胞培养液，并加200 μ 1 PBS润 洗一次，然后加入100 μ 1 trypsin作用1?2分钟使细胞脱离底面，然后加入200 μ 1细 胞培养液中和trypsin反应，并将含细胞的培养液装入微量离心管内以3000rpm离心5分 钟后去除上清液，加入200 μ 1 PBS润洗一次，再以3000rpm离心5分钟，去除上清液，加入 100 μ ll%triton X-100/PBS，混合均匀使细胞破碎。接着在4°C下以lOOOOrpm离心10分 钟，取上清液进行蛋白质定量。在同浓度下的蛋白质，取等体积上清液和L-dopa(2mg/ml) 混合，反应一小时后利用酶测读仪测波长475nm的吸光值做统计整理。
[0084] 2.试验结果
[0085] 参见图10,其利用加入不同浓度BP2及BP3于黑色素瘤细胞，48小时后进行酪 胺酸酶活性分析的实验结果，其中X轴为各浓度药物，Y轴为离体酪胺酸酶活性/黑色素 含量，若产生的生成物愈多，则表示催化强度愈强量。由此结果发现在相同蛋白质浓度 下，给予BP2及BP3的组别皆具有抑制酪胺酸酶的活性，且随着浓度提升呈现剂量依存 (dose-dependent)的趋势。
[0086] B.离体黑色素含量测试（in vitro melanin content assay)
[0087] 1.试验步骤
[0088] 试验步骤参照Wang(2010)的研究报告，其整体皆引作为本案的参考数据。将 B16-F10种入24小格培养盘的孔洞中，每小格种入1*105个细胞，放置于37°C、5%C02的培 养箱24小时后，将原有的细胞培养液移除，加入含有粗萃物的细胞培养液，再放入培养箱 培养48小时后，以200 μ 1 PBS润洗一次，然后加入100 μ 1 trypsin作用1?2分钟使细 胞脱离盘底，然后加入200 μ 1细胞培养液中和trypsin反应，装入微量离心管内以3000rpm 离心5分钟，去除上清液。再加入200 μ 1 PBS润洗一次，并以3000rpm离心5分钟，去除上 清液后，加入100 μ 11N NaOH在80°C下反应一小时。利用酶测读仪测波长405nm的吸光值 做统计整理。
[0089] 2.试验结果
[0090] 参见图11，其利用加入不同浓度BP2及BP3于黑色素瘤细胞48小时后进行黑色 素（melanin)含量测定的实验结果。将细胞加入氢氧化钠并加热溶解后，利用分光光度计 测定波长为490nm的吸收值时，吸收值愈高则说明黑色素含量也愈高。由数据显示结果与 酪胺酸酶活性相吻合，随着药物浓度愈高，降低的酪胺酸酶活性愈显著，而黑色素的表现量 亦随着下降。
[0091] C.蘑菇酪胺酸酶抑制能力分析
[0092] 1.实验步骤
[0093] 在96well plate中，于每个孔洞中加入70μ 1的ΡΒ、20μ 1各种不同浓度的检品 溶液，混合均匀。接着加入1〇μ 1的12U酪胺酸酶，放入37°C培养箱中反应30分钟。再加 入10 μ 1的15mM L-dopa，继续放入培养箱中反应30分钟后，于波长492nm之下测其吸光值 的变化量。以H20或50%Et0H作为控制组。以下式的抑制酪氨酸酶百分率求得待测物的抗 氧化率。抑制脂质过氧化率（%)愈高，表示抗氧化性愈强。
[0094] 抑制酪氨酸酶百分率（Inhibition of Tyrosinase%, IT%) = [1 -(样品于 492nm 的吸光值）八未添加样品的控制组于49211111的吸光值）]\100。
[0095] 2.实验结果
[0096] 酪胺酸酶为黑色素形成的速率决定因子，如果待测物可抑制酪胺酸酶的活性，便 可减少dopaquinone类化合物的产生，在492nm的波长下所测得的吸光值则相对减少，由吸 光值的高低可推算出待测物抑制酪胺酸酶活性的能力，进而可抑制黑色素生成。实验结果 发现，在500 μ g/ml及1000 μ g/ml的BP2及BP3具有显著抑制酪胺酸酶活性，其实验结果 可参见下表1 :
[0097]
【权利要求】
1. 一种用于皮肤美白、保湿、改善弹性、抗发炎以及伤口愈合的珊瑚萃取物，其特征在 于，借由下列步骤所制得： a. 以一有机混合液萃取干燥皮软珊瑚（Briareum excavatum)样品，获得有机层初萃取 液，其中该有机混合液包含等比例的C1-C4醇类和C1-C4的含氯烷类； b. 以水和低级酯类分配萃取该有机层初萃取液，获得一低级酯类粗萃物，该低级酯类 粗萃物含有5?50 %的一珊瑚活性成分。
2. 如权利要求1所述的珊瑚萃取物，其特征在于：b.步骤的该低级酯类粗萃物进一步 以一管柱层析分析加以纯化，其以一冲提液冲提该低级酯类粗萃物，以得一冲提物，其中该 冲提液的冲提梯度由正己烷/乙酸乙酯的一第一混合溶剂与乙酸乙酯/甲醇的一第二混合 溶剂所提供。
3. 如权利要求1所述的珊瑚萃取物，其特征在于：a.步骤的C1-C4醇类为甲醇。
4. 如权利要求1所述的珊瑚萃取物，其特征在于：a.步骤的C1-C4的含氯烷类为二氯 甲烷。
5. 如权利要求1所述的珊瑚萃取物，其特征在于：b.步骤的低级酯类为乙酸乙酯。
6. 如权利要求2所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该第一混合溶剂中正己烷的溶剂梯 度为 0%-99%。
7. 如权利要求2所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该第二混合溶剂中乙酸乙酯的溶剂 梯度比例为0%_90%。
8. 如权利要求6所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该珊瑚活性成分将该低级酯类粗萃 物进一步由该第一混合溶剂加以冲提而得，其中该第一混合溶剂的冲提梯度为：正己烷： 乙酸乙酯为90:10至70:30的划分（fraction)。
9. 如权利要求8所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该珊瑚活性成分经冲提后于该低级 酯类粗萃物所占比例为5-30%。
10. 如权利要求1所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该珊瑚活性成分将该低级酯类粗萃 物进一步由该第一混合溶剂加以冲提而得，其中该第一混合溶剂的冲提梯度为：正己烷： 乙酸乙酯为60:40至50:50的划分（fraction)。
11. 如权利要求10所述的珊瑚萃取物，其特征在于：该珊瑚活性成分经冲提后于该低 级酯类粗萃物所占比例为20-50%。
12. -种如权利要求1所述的珊瑚萃取物的萃取方法，包含： a. 以一有机混合液萃取干燥皮软珊瑚（Briareum excavatum)样品，获得有机层初萃取 液，其中该有机混合液包含等比例的C1-C4醇类和C1-C4的含氯烷类； b. 以水和低级酯类分配萃取该有机层初萃取液，获得一低级酯类粗萃物，该低级酯类 粗萃物含有5?50 %的一珊瑚活性成分。
13. 如权利要求12所述的萃取方法，其特征在于：b.步骤的该低级酯类粗萃物进一步 以一管柱层析分析加以纯化，其以一冲提液冲提该低级酯类粗萃物，以得一冲提物，其中该 冲提液的冲提梯度由正己烷/乙酸乙酯的一第一混合溶剂与乙酸乙酯/甲醇的一第二混合 溶剂所提供。
14. 一种珊瑚萃取物的用途，其将如权利要求1所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮 肤，以使皮肤美白。
15. -种珊瑚萃取物的用途，其将如权利要求1所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮 肤，以使皮肤保湿。
16. -种珊瑚萃取物的用途，其将如权利要求1所述的珊瑚萃取物施用于一活体的皮 肤，以改善皮肤弹性。
17. -种珊瑚萃取物的用途，其施用如权利要求1所述的珊瑚萃取物，以抗发炎。
18. -种珊瑚萃取物的用途，其施用如权利要求1所述的珊瑚萃取物，以促使伤口愈 合。
19. 一种保养品，其包含如权利要求1?11任一项所述珊瑚萃取物，其特征在于：该珊 瑚萃取物具0. 00001?10%的重量比。
【文档编号】A61P29/00GK104095883SQ201410066589
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年2月26日 优先权日:2013年4月1日
【发明者】宋秉钧, 王维贤, 温志宏, 温依珊, 周泰延, 郑银彬, 郭智杰 申请人:统欣生物科技股份有限公司