一种诱导母马超数排卵的药物组合及其使用方法
【专利摘要】本发明公开了一种诱导母马超数排卵的药物组合及其使用方法，其中，药物组合包括由以下原料药材组成的中药药物：淫羊藿、益母草、蛇床子、菟丝子、女贞子、红花和香附。药物组合还可以进一步包括促卵泡素和/或人绒毛膜促性腺激素。本发明的有益效果是：中药药物能够将母马排卵数由自然状态下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵2.6枚，实现了母马的超数排卵；还可以与外源激素组合使用，采用中西药结合的方法，更好的克服马卵巢排卵位点受限而难实现超数排卵的弊端，将母马排卵时间精确控制在36-48小时内，并将排卵数由自然状态下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵4.87枚，实现了母马的超数排卵。
【专利说明】一种诱导母马超数排卵的药物组合及其使用方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及马胚胎工程【技术领域】，特别涉及一种诱导母马超数排卵的药物组合及其使用方法。
[0003]【背景技术】
[0004]目前，诱导母马超数排卵是马胚胎工程【技术领域】的新技术。在自然状态下，动物卵巢上约有99%的有腔卵泡发生闭锁而退化，只有1%能发育成熟而排卵。超数排卵是通过外援补充促卵泡激素等刺激卵泡发育的激素或者通过外援激素或药物刺激下丘脑和垂体使其分泌高于正常水平的内源性促卵泡激素等刺激卵泡发育的激素，从而使将要闭锁的有腔卵泡发育成熟而排卵。超数排卵是通过在一次发情周期获得多枚卵泡而提高胚胎移植效率和成功率的有效方法。实验证明，促卵泡素(FSH)、孕马血清促性腺激素(PMSG)能使大量卵泡不闭锁而发育成熟；在排卵之前注射促黄体生成素(LH)或人绒毛膜促性腺激素(hCG)可以保证大量成熟卵母细胞同时排卵。通过FSH/PMSG与LH/hCG协作促进超排在牛、羊、猪等家畜已经应用广泛且成熟。但是由于马属动物卵巢具有独特的排卵窝结构，其排卵位点受到限制，只能排出排卵窝附近发育成熟的卵泡；且由于机体正常激素水平及营养状况限制，每个发情周期排卵窝附近一般只有一个卵泡发育成熟，因此广泛应用于牛、羊等家畜的常规超排方法无法实现马属动物的超数排卵。
【发明内容】
[0005]为了使供体母马在一次发情周期排出多枚成熟卵泡，为胚胎移植工作奠定基础，本发明实施例提供了一种诱导母马超数排卵的药物组合及其使用方法。
[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种诱导母马超数排卵的药物组合，其中，所述药物组合至少包括由以下原料药材组成的中药药物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟丝子、女贞子、红花和香附。
[0007]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比可以优选为:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、蛇床子15~25份、英丝子15~25份、女贞子7~15份、红花7~15份和香附20~30份。
[0008]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比也可以优选为:淫羊藿25~30份、益母 草20~25份、蛇床子20~25份、菟丝子18~23份、女贞子10~15份、红花10~15份和香附25~30份。
[0009]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比还可以优选为:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟丝子22份、女贞子13份、红花13份和香附28份。
[0010]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比又可以优选为:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟丝子22份、女贞子15份、红花10份和香附26份。
[0011]其中，所述药物组合还可以进一步包括促进卵泡快速发育的外源激素。
[0012]其中，所述外源激素为1000-2500单位的促卵泡素和/或1000-2500单位的人绒毛膜促性腺激素。
[0013]其中，所述中药药物的剂型为散剂时，其制备方法包括以下步骤:
步骤(1):将所述原料药材按比例混合，粉碎成60-150目的粉末。
[0014]其中，所述制备方法还可以进一步包括以下步骤:
步骤(2):将步骤(1)获得的粉末加入冷水中浸泡6~12小时，以文火煎煮，煎煮时间为2~5小时，将煎煮液过滤，获得第一滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的3~6倍；
步骤(3):将步骤(2)过滤获得的滤渣再次加入冷水中，以文火煎煮2~4小时，过滤获得第二滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的2~5倍；
步骤(4):将步骤(2)获得的第一滤液和步骤(3)获得的第二滤液混合，减压浓缩除去水，干燥，粉碎成粉末，粒度为80~120目。
[0015]为了更好的实现上述发明目的，本发明又提供了一种上述任意一种诱导母马超数排卵的药物组合的使用方法，其中，所述中药药物的使用方法为:对进入发情季节且有正常发情周期的空怀母马 ，将所述中药药物和饲料搅拌均匀后饲喂母马，每天一剂直至发情季节结束；
所述促卵泡素的使用方法为:对进入发情期的母马肌肉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹，每天一次直至母马进入发情后期；
所述人绒毛膜促性腺激素的使用方法为:对进入发情后期、多数卵泡直径在35mm以上的母马一次性静脉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹。
[0016]本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:中药药物具有营养母马的下丘脑和垂体、促进生殖细胞生长发育，并影响其与卵泡发育相关激素和细胞因子的合成分泌的作用，能够有效克服马卵巢排卵位点受限而难实现超数排卵的弊端，将母马排卵数由自然状态下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵2.6枚，实现了母马的超数排卵；还可以将本发明的中药药物与能够促进卵泡快速发育的外源激素组合使用，采用中西药结合的方法，更好的克服马卵巢排卵位点受限而难实现超数排卵的弊端，将母马排卵时间精确控制在36-48小时内，并将排卵数由自然状态下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵4.87枚，实现了母马的超数排卵。本发明原理简单，工艺过程易控，控制目标准确，效率高，效果好，可在马的繁殖和胚胎移植技术中广泛应用，提高胚胎移植效率和成功率。
[0017]
【具体实施方式】
[0018]本发明实施例提供了一种诱导母马超数排卵的药物组合，其中，所述药物组合至少包括由以下原料药材组成的中药药物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟丝子、女贞子、红花和香附。
[0019]其中，上述原料药材的药理药性如下:
淫羊藿:辛、甘，温。归肝、肾经。补肾阳，强筋骨，祛风湿。用于阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛；更年期高血压。
[0020]益母草:苦、辛，微寒。归肝、心包经。活血调经，利尿消肿。用于月经不调，痛经，经闭，恶露不尽，水肿尿少；急性肾炎水肿。
[0021]蛇床子:辛、苦，温；有小毒。归肾经。温肾壮阳，燥湿，祛风，杀虫。用于阳痿，宫冷，寒湿带下，湿痹腰痛；外治外阴湿疹，妇人阴痒；滴虫性阴道炎。
[0022]菟丝子:甘，温。归肝、肾、脾经。滋补肝肾，固精缩尿，安胎，明目，止泻。用于阳痿遗精，尿有余浙，遗尿尿频，腰膝酸软，目昏耳鸣，肾虚胎漏，胎动不安，脾肾虚泻；外治白癜风。
[0023]女贞子:甘、苦，凉。归肝、肾经。滋补肝肾，明目乌发。用于眩晕耳鸣，腰膝酸软，须发早白，目暗不明。
[0024]红花:辛，温。归心、肝经。活血通经，散瘀止痛。用于经闭，痛经，恶露不行，症瘕痞块，跌扑损伤，疮疡肿痛。
[0025]香附:辛、微苦、微甘，平。归肝、脾、三焦经。行气解郁，调经止痛。用于肝郁气滞，胸、胁、脘腹胀痛，消化不良，胸脘痞闷，寒疝腹痛，乳房胀痛，月经不调，经闭痛经。
[0026]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比可以优选为:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、 蛇床子15~25份、英丝子15~25份、女贞子7~15份、红花7~15份和香附20~30份。
[0027]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比也可以优选为:淫羊藿25~30份、益母草20~25份、蛇床子20~25份、菟丝子18~23份、女贞子10~15份、红花10~15份和香附25~30份。
[0028]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比还可以优选为:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟丝子22份、女贞子13份、红花13份和香附28份。
[0029]其中，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比又可以优选为:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟丝子22份、女贞子15份、红花10份和香附26份。
[0030]其中，所述药物组合还可以进一步包括促进卵泡快速发育的外源激素。
[0031]其中，所述外源激素为1000-2500单位的促卵泡素和/或1000-2500单位的人绒毛膜促性腺激素。
[0032]其中，所述中药药物的剂型为散剂时，其制备方法包括以下步骤:
步骤(1):将所述原料药材按比例混合，粉碎成60-150目的粉末。
[0033]其中，所述制备方法还可以进一步包括以下步骤:
步骤(2):将步骤(1)获得的粉末加入冷水中浸泡6~12小时，以文火煎煮，煎煮时间为2~5小时，将煎煮液过滤，获得第一滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的3~6倍；
步骤(3):将步骤(2)过滤获得的滤渣再次加入冷水中，以文火煎煮2~4小时，过滤获得第二滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的2~5倍；
步骤(4):将步骤(2)获得的第一滤液和步骤(3)获得的第二滤液混合，减压浓缩除去水，干燥，粉碎成粉末，粒度为80~120目。
[0034]为了更好的实现上述发明目的，本发明又提供了一种上述任意一种诱导母马超数排卵的药物组合的使用方法，其中，所述中药药物的使用方法为:对进入发情季节且有正常发情周期的空怀母马，将所述中药药物和饲料搅拌均匀后饲喂母马，每天一剂直至发情季节结束；
所述促卵泡素的使用方法为:对进入发情期的母马肌肉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹，每天一次直至母马进入发情后期；
所述人绒毛膜促性腺激素的使用方法为:对进入发情后期、多数卵泡直径在35mm以上的母马一次性静脉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹。
[0035]以下采用具体实施例来详细说明本发明的中药药物的实施方式，借此充分理解本发明如何应用技术手段来解决技术问题，达成技术效果并据以实施。
[0036]中药药物实施例1:散剂一
取淫羊藿280g、益母草220g、蛇床子220g、菟丝子220g、女贞子130g、红花130g和香附280g；
其制备方法包括以下步骤:
步骤(1):将上述原料药材按比例混合，粉碎成120目的粉末。
[0037]中药药物实施例2:散剂二
取淫羊藿250g、益母草250g、蛇床子200g、菟丝子220g、女贞子150g、红花100g和香附260g；
其制备方法包括以下步骤:
步骤(1):将上述原料药材按比例混合，粉碎成80目的粉末；
步骤(2):将步骤(1)获得的粉末加入冷水中浸泡10小时，以文火煎煮，煎煮时间为4小时，将煎煮液过滤，获得第一滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的6倍；步骤(3):将步骤(2)过滤获得的滤渣再次加入冷水中，以文火煎煮3小时，过滤获得第二滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的4倍；
步骤(4):将步骤(2)获得的第一滤液和步骤(3)获得的第二滤液混合，减压浓缩除去水，干燥，粉碎成粉末，粒度为120目。
[0038]中药药物毒性实验:
急性毒性实验:应用小鼠80只，雌雄各半，体重18~26g，进行急性毒性试验。小鼠随机分为两组，即对照组和给药组，实验前禁食12小时，将本发明的实施例2制备的中药散剂二溶解在水中，(浓度为6.48g生药/ml，最高浓度)灌胃，灌胃容积为5ml/kg (即单次给药剂量为32.4生药/kg)，对照组给予等量生理盐水，一天给药2次，给药间隔时间6小时，给药后连续观察14天，并记录小鼠的的毒性反应及死亡数。实验结果表明:与对照组比较，给药后小鼠未见明显差异，实验连续观察14天，小鼠全身状况、饮食、饮水、体重增长均正常。小鼠口服灌胃本发明的散剂药物LD50>32.4生药/kg，每日最大给药量为64.8生药/kg/日。本发明的中药药物临床用药量为58g生药/日/马，成年马匹体重以600KG计，平均用药剂量为0.097g生药/kg/日。按体重 计:小鼠(平均体重以22g计)口服灌胃本发明的中药药物的耐受量为临床用量的668倍。因此本发明的中药药物急性毒性极低，临床用药安全。
[0039]长期毒性实验:本发明中药药物实施例2的散剂二对小鼠按14.28、22.56和38.62g生药/kg连续用药15周(1.0ml/100g体重，每天2次)及停药3周后，结果表明:本发明中药药物对小鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，用药15周及停药3周后，小鼠各脏器均无明显改变。说明本发明中药药物对小鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，应用安全。
[0040]对比试验:
选择2.5^3.5岁的成年蒙古母马和伊犁马母各40匹，随机分成4组，每组10匹蒙古马、10匹伊犁马。
[0041]其中，对照组1:20匹，采用自然状态排卵；
对照组2:20匹，采用本发明中注射外源激素的促排卵方法:使用超声波B超诊断仪检查并跟踪母马卵泡发育情况；对进入发情期的母马肌肉注射促卵泡素，使用剂量为1500单位/匹，每天一次直至母马进入发情后期；对进入发情后期、多数卵泡直径在35mm以上的母马一次性静脉注射人绒毛膜促性腺激素，使用剂量为1000单位/匹。
[0042]实施例组1:20匹，采用本发明中饲喂中药药物的促排卵方法:选择进入发情季节且有正常发情周期的空怀母马，将中药药物实施例1的散剂一和饲料搅拌均匀，饲喂母马，每日一剂直至发情季节结束。
[0043]实施例组2:20匹，采用本发明中饲喂中药药物和注射外源激素的促排卵方法:选择进入发情季节且有正常发情周期的空怀母马，将中药药物实施例2的散剂二和饲料搅拌均匀，饲喂母马，每日一剂直至发情季节结束；使用超声波B超诊断仪检查并跟踪母马卵泡发育情况；对进入发情期的母马肌肉注射促卵泡素，使用剂量为1500单位/匹，每天一次直至母马进入发情后期；对进入发情后期、多数卵泡直径在35mm以上的母马一次性静脉注射人绒毛膜促性腺激素，使用剂量为1000单位/匹。
[0044]按照上述分组和方法进行试验，马匹在其每个发情周期均进行配种和胚胎移植操作，跟踪至四组马匹均排卵并配种和移植三次，统计每组马匹总排卵数、平均排卵数及获得的胚胎数和胚胎移植获得的后代数。
[0045]试验结果:四组马匹分别跟踪至所有马匹排卵三次，统计结果参见下表。
[0046]
【权利要求】
1.一种诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述药物组合至少包括由以下原料药材组成的中药药物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟丝子、女贞子、红花和香附。
2.根据权利要求1所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比为:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、蛇床子15~25份、菟丝子15~25份、女贞子7~15份、红花7~15份和香附20~30份。
3.根据权利要求1或2所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比为:淫羊藿25~30份、益母草20~25份、蛇床子20~25份、菟丝子18~23份、女贞子10~15份、红花10~15份和香附25~30份。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比为:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟丝子22份、女贞子13份、红花13份和香附28份。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述中药药物中的各种原料药材的重量份数比为:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟丝子22份、女贞子15份、红花10份和香附26份。
6.根据权利要求1至5任意一项所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述药物组合还包括促进卵泡快速发育的外源激素。
7.根据权利要求6所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述外源激素为1000-2500单位的促卵泡素和/或1000-2500单位的人绒毛膜促性腺激素。
8.根据权利要求1至7任 意一项所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述中药药物的剂型为散剂时，其制备方法包括以下步骤: 步骤(1):将所述原料药材按比例混合，粉碎成60-150目的粉末。
9.根据权利要求8所述的诱导母马超数排卵的药物组合，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤: 步骤(2):将步骤(1)获得的粉末加入冷水中浸泡6~12小时，以文火煎煮，煎煮时间为2~5小时，将煎煮液过滤，获得第一滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的3~6倍； 步骤(3):将步骤(2)过滤获得的滤渣再次加入冷水中，以文火煎煮2~4小时，过滤获得第二滤液，所加入的水的质量是步骤(1)获得的粉末质量的2~5倍； 步骤(4):将步骤(2)获得的第一滤液和步骤(3)获得的第二滤液混合，减压浓缩除去水，干燥，粉碎成粉末，粒度为80~120目。
10.一种根据权利要求1-9任意一项所述的诱导母马超数排卵的药物组合的使用方法，其特征在于，所述中药药物的使用方法为:对进入发情季节且有正常发情周期的空怀母马，将所述中药药物和饲料搅拌均匀后饲喂母马，每天一剂直至发情季节结束； 所述促卵泡素的使用方法为:对进入发情期的母马肌肉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹，每天一次直至母马进入发情后期； 所述人绒毛膜促性腺激素的使用方法为:对进入发情后期、多数卵泡直径在35mm以上的母马一次性静脉注射，使用剂量为1000-2500单位/匹。
【文档编号】A61K36/8905GK103800603SQ201410085172
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年3月11日 优先权日:2014年3月11日
【发明者】李中航, 邹敬清, 邹志钢, 孙吉胜, 荣美洁, 马玉萍 申请人:伊犁德瑞骏发生物科技有限公司, 青岛德瑞骏发生物科技有限公司, 青岛德瑞鳌澜马术有限公司