一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物及其制备方法，它包含如下重量份数的原料药：柴胡10~20份、香附10~20份、大黄5~15份、青皮5~15份、川芎5~15份、莪术5~15份、浙贝母5~15份、当归10~20份、白芍10~20份、土鳖虫5~15份、王不留行5-15份。本发明根据中医药理论，辨证论治，经科学组方制定本发明，并且采用现代化学成分提取分离和药理实验跟踪方法，筛选出活性成分及其最佳的制备工艺，并且药理实验表明，本发明提供的中药复方提取物具有很好的治疗乳腺增生的效果，无毒副作用。本发明提供的制备方法，工艺稳定，重现性好，制备得到的提取物，质量稳定，可制备多种口服药物制剂，临床服用方便，生物利用度高，安全性高。
【专利说明】一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物及其制备方法
[0001]优先权
[0002]对于本申请， 申请人:要求在中国申请的专利，申请日为2013年7月30日，申请号为201310326156.4的优先权。
【技术领域】
[0003]本发明涉及一种中药复方，具体是涉及一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物及其制备方法。
【背景技术】
[0004]乳腺增生病是常见的妇女外科疾病，其发病率占全部乳房疾病的75%，占育龄妇女的40%，严重影响广大妇女的身心健康，更在于该病具有发展成乳腺癌的危险性，引起癌变的可能性约占2~4%。因而积极治疗乳腺增生病，提高妇女健康水平，降低癌变率有非常重大的意义。
[0005]现代医学认为，乳腺增生病的发生是因内分泌功能紊乱、卵巢功能失调，致使体内雌激素水平增高或活性增强，孕激素水平下降所致。对于乳腺增生疼痛较重或局部结节明显，压痛明显的患者，临床多用性激素疗法和内分泌疗法。如黄体酮，丹那唑、他莫昔芬、溴隐亭等。用上述方法治疗，疗效虽好，但副作用较大，药物价格较昂贵，不能长期坚持治疗，而停药后疼痛复发，肿块增大，最终仍需继续治疗一手术切除。尤其是性激素应用后可能会进一步干扰人体激素间的平衡，增加癌变的可能性。综上所述，现代医学治疗此病目前以手术为主，药物为辅。无论是手术切除、药物治疗，都存在费用高、副作用明显、创伤面大、手术或停药后易复发等缺点。因此西医对该病尚无理想的解决途径和治疗方法。
[0006]祖国医药对乳腺增生病自古以来就有深刻的认识，乳腺增生属于“乳癖”、“乳痞”、“乳中结核”的范畴，有关“乳癖”的证候论述从汉代的《中藏经》到清代《疡医大全》均有详细记载。认为此病与精神因素有关，主要与肝、肾、脾等腑脏关系密切。病因、病机为情志内伤、气滞血瘀、冲任失调、痰瘀凝结、乳络受阻所致。肝主疏泄，宜调达，肝经气郁，气血周流失度，气血凝滞；思虑伤脾，脾运失司，痰浊内生；痰浊和血瘀互结阻于乳络而结成乳癖。采用中医药对乳腺增生病进行治疗，具有疗效可靠、副作用小等优势。
[0007]雷允上药业有限公司产品消癥丸(国药准字Z20100057)，其发明专利一种治疗乳腺增生病和子宫肌瘤的药物组合物及其制备方法(专利号:ZL201110057527.4)公开了一种治疗乳腺增生病和子宫肌瘤的药物组合物及其制备方法，该方法使用简单的水或醇提取各药材，喷雾干燥的浸膏粉，而且大黄部分原粉入药，其不足之处在于:
[0008]1、简单的水或醇提取各药材，部分大黄原粉入药，患者日服药量太大，不方便，依从性低。
[0009]2、简单提取、原粉入药，生物利用率低，未经纯化，药物含杂质较多，安全性低。
[0010] 综上所述，现有技术具有对提取物纯化不够，患者日服用量过多，依从性差，生物利用度低，安全性低等缺陷。
【发明内容】
[0011]发明目的:本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种疗效可靠，依从性高，生物利用度高，安全性能高，不良反应低，价格易于广大病患接受的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物及其制备方法。
[0012]技术方案:为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为:
[0013]一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，它由下列重量份数的原料制得:
[0014]柴胡10~20份、香附10~20份、大黄5~15份、青皮5~15份、川弯5~15份、莪术5~15份、浙贝母5~15份、当归10~20份、白芍10~20份、土鳖虫5~15份、王不留行5-15份。
[0015]作为优选方案，它由下列重量份数的原料制得:
[0016]柴胡12~18份、香附12~18份、大黄8~12份、青皮8~12份、川弯8~12份、莪术8~12份、浙贝母8~12份、当归12~18份、白芍12~18份、土鳖虫8~12份、王不留行8~12份。
[0017]作为优选方案，它由下列重量份数的原料制得:
[0018]柴胡15份、香附15份、大黄10份、青皮10份、川芎10份、莪术10份、浙贝母10份、当归15份、白芍15份、土鳖虫10份、王不留行10份。
[0019]各原料药的重量配比还优选:
[0020]柴胡20份、香附20份、大黄5份、青皮5份、川芎5份、莪术15份、浙贝母15份、当归10份、白芍20份、土鳖虫5份、王不留行15份。
[0021]各原料药的重量配比还优选:
[0022]柴胡10份、香附10份、大黄15份、青皮15份、川芎15份、莪术5份、浙贝母5份、当归20份、白芍10份、土鳖虫15份、王不留行5份。
[0023]各原料药的重量配比还优选:
[0024]柴胡10份、香附10份、酒炙大黄5份、炒青皮5份、川芎5份、莪术5份、浙贝母5份、当归10份、白芍10份、土鳖虫5份、炒王不留行5份。
[0025]各原料药的重量配比还优选:
[0026]柴胡12份、香附12份、大黄8份、青皮8份、川芎8份、莪术8份、浙贝母8份、当归12份、白芍12份、土鳖虫82份、王不留行8份。
[0027]各原料药的重量配比还优选:
[0028]柴胡18份、香附18份、大黄12份、青皮12份、川芎12份、莪术12份、浙贝母12份、当归18份、白芍18份、土鳖虫12份、王不留行12份。
[0029]本发明配方中，大黄优选酒炙大黄，青皮优选炒青皮，王不留行优选炒王不留行。
[0030]本发明提供的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，可以和可接受的载体制备成口服液体制剂、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂、散剂。
[0031]所述中药提取物，其制备方法包括下述工艺步骤:
[0032]a、取柴胡、大黄、浙贝母、白芍、王不留行加水或(:卜3醇提取，提取液过滤，滤液浓缩至0.25~4g生药/mL药液；
[0033]b、取香附、川芎、莪术、当归、青皮采用水蒸气蒸馏法提取，获得的挥发油采用环糊精包合；提取液过滤，滤液浓缩，加入乙醇使乙醇的浓度为60%~80%，放置沉淀，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至0.25~4g生药/mL药液；
[0034]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上大孔吸附树脂柱，静置吸附后，用去离子水洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为5%~20%的C卜3醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用浓度为40%~90%的(:卜3醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去C1~3醇，浓缩至0.5~2g生药/ml药液；
[0035]d、取土鳖虫5~15份，加水或(:卜3醇提取，提取液过滤，滤液浓缩至0.5~2g生药/ml药液；
[0036]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，浓缩干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0037]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤a、C、d所述的C1~3醇为甲醇、乙醇或丙醇。
[0038]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤a为取柴胡、大黄、浙贝母、白芍、王不留行加8~12倍量水或(:卜3醇提取I~3次，每次I~3小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.25~4g生药/mL药液；
[0039]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤b取川芎、莪术、当归、青皮采用8~15倍量水水蒸气蒸馏法提取3~12h，获得的挥发油每毫升挥发油采用5~10gi3 -环 糊精包合；提取液过滤，加入乙醇使乙醇的浓度为60%~80%，放置6~24小时，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至0.25~4g生药/mL药液；
[0040]作为更优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤b所述的环糊精包合方法为:每毫升挥发油用8~10gi3-环糊精，溶于80~100mL水中，在60V~70°C的条件下，搅拌I~3小时包合，包合物70°C以下干燥，得挥发油β -环糊精包合物；
[0041]作为更优选的方法，步骤b所述的环糊精包合方法为:每毫升挥发油用Sg β_环糊精，溶于80ml水中，在60°C的条件下，搅拌I小时包合，包合物在70°C以下干燥。本发明通过大量实验筛选，优选得到最佳的包合工艺，制备得到的挥发油包合物稳定性高，从而可以保证药效。
[0042]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤c所述的大孔吸附树脂为D101、HPD100、X-5或AB-8大孔吸附树脂。
[0043]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤c中大孔树脂柱其径高比为:1:3~1:10，采用5~10倍柱体积，浓度为40%~90%的(:卜3醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去C1~3醇，浓缩至0.5~2g生药/ml药液；
[0044]作为优选方案，以上所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，步骤d取土鳖虫5~15份，10~12倍量的水或(:卜3醇提取I~3次，每次I~3小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.5~2g生药/ml药液。
[0045]本发明提供的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物在制备抗乳腺增生药物中的应用。
[0046]本发明提供的具有抗乳腺增生作用的中药复方口服液、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂、散剂，由以上所述的中药复方提取物中加入相应的常规制剂辅料制得。[0047]本发明提供的抗乳腺增生作用的中药复方提取物制成片剂时，把上述中药复方提取物和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，整粒，然后压片制成片剂。
[0048]本发明提供的抗乳腺增生作用的中药复方提取物制成胶囊剂时把上述中药复方提取物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
[0049]本发明提供的抗乳腺增生作用的中药复方提取物制成颗粒剂时，把上述中药复方提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
[0050]本发明提供的抗乳腺增生作用的中药复方提取物制成口服液时，把上述中药复方提取物加纯化水溶解，加入糖浆，调节PH，制成口服液。
[0051]有益效果:本发明提供的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物与现有技术相比具有以下优点:
[0052]本发明采用现代化学成分提取分离和药理实验跟踪方法，筛选出活性成分及其最佳的制备工艺，分离纯化得到有效成分，工艺稳定，重现性好，制备得到的提取物，质量稳定，使用方便，可制备多种口服药物制剂，临床应用服用量少，方便临床服用，生物利用度高，安全性高。并且药理实验表明，本发明提供的中药复方提取物具有很好的治疗乳腺增生的效果，无毒副作用。
【具体实施方式】
[0053]下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0054]实施例1
[0055]一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，
[0056]处方:柴胡15份、香附15份、大黄10份、青皮10份、川芎10份、莪术10份、浙贝母10份、当归15份、白芍15份、土鳖虫10份、王不留行10份。
[0057]制备步骤:
[0058]a、取:柴胡15份、大黄10份、浙贝母10份、白芍15份、王不留行10份过60目筛的粉混合，加12倍量70%乙醇回流提取3次，每次3h，过滤，滤液浓缩至0.3g生药/mL药液；
[0059]b、取香附15份、川芎10份、莪术10份、当归15份、青皮10份按比例混合，加药材总重量15倍的水，采用水蒸气蒸馏法提取3h，得挥发油成分；提取液过滤，滤液浓缩至生药量为0.75g/ml，然后加乙醇至醇浓度为70%，静置沉淀24h，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至0.3g生药/ml药液；
[0060] 挥发油部分每毫升使用10gi3-环糊精，溶于80ml水中，在60°C的条件下包结、搅拌I小时，包合物70°C下干燥，得挥发油β-环糊精包合物；
[0061 ] C、将步骤a提取液和步骤b提取液混合，上AB-8大孔吸附树脂，径高比1:10，静置吸附12h后，用去离子水洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用20%的乙醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用5倍柱体积的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇，浓缩至1.5g生药/ml药液；
[0062]d、取土鳖虫10份，加入药材重量10倍的水提取I次，每次lh，过滤，合并滤液，浓缩至1.5g生药/ml药液；
[0063]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，喷雾干燥，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物粉碎，混合均匀，即得。
[0064]f、取步骤e提取物加入乳糖，加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，整粒，然后压片制成片剂。
[0065]实施例2
[0066]本发明所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物制备方法，
[0067]处方:柴胡20份、香附20份、酒炙大黄15份、炒青皮15份、川芎15份、莪术15份、浙贝母15份、当归20份、白芍20份、土鳖虫15份、炒王不留行15份。
[0068]制备步骤:
[0069]a、取柴胡20份、酒炙大黄15份、浙贝母15份、白芍20份、炒王不留行15份，分别加12、10和8倍量的水提取3次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.4g生药/mL药液；[0070]b、取香附20份、川弯15份、莪术15份、当归20份、炒青皮15份，加药材总重量12倍的水，采用水蒸气蒸馏法提取6h，获得的挥发油，每毫升挥发油用Sg β -环糊精，溶于90ml水中，在70°C的条件下，搅拌2小时包合，包合物于60°C干燥，得挥发油β -环糊精包合物；提取液过滤，滤液浓缩至生药量为0.85g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为80%，放置12小时，过滤，滤液减压回收去除乙醇，浓缩至0.4g生药/mL药液；
[0071]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上Dltll大孔吸附树月旨，径高比1: 5，静置吸附后，用去离子水洗脱至流洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为15%的乙醇醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用10倍柱体积浓度为70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇，浓缩至2g生药/ml药液；
[0072]d、取土鳖虫15份，加10倍量的水提取I次，每次I小时，提取液过滤，滤液浓缩至2g 生药 /Iml ；
[0073]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，60°C真空压干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0074]f、取步骤e提取物加入适量淀粉或环糊精，制粒，装胶囊制成胶囊剂。
[0075]实施例3
[0076]本发明所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物制备方法，
[0077]处方:柴胡10份、香附10份、酒炙大黄15份、炒青皮15份、川芎15份、莪术5份、浙贝母5份、当归20份、白芍10份、土鳖虫15份、炒王不留行5份。
[0078]制备步骤:
[0079]a、取柴胡10份、酒炙大黄15份、浙贝母5份、白芍10份、炒王不留行5份，加入10倍量，浓度为85%乙醇提取3次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩至Ig生药/mL药液；
[0080]b、取香附10份、川弯15份、莪术5份、当归20份、炒青皮15份，加入8倍量水，米用水蒸气蒸馏法提取12h，获得的挥发油，每毫升挥发油用5gi3-环糊精，溶于80ml水中，在60°C的条件下，搅拌3小时包合，包合物于65°C干燥，得挥发油β -环糊精包合物；提取液过滤，滤液浓缩至生药量0.65g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为60%，放置24小时，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至Ig生药/mL药液；[0081]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上HPD100大孔吸附树脂，径高比1:8，静置吸附后，用去离子水洗脱至流洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为20%的乙醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用10倍柱体积浓度为90%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇，浓缩至Ig生药/ml药液；
[0082]d、取土鳖虫15份，加10倍量的浓度为75%的乙醇提取2次，每次3小时，提取液过滤，滤液浓缩至Ig生药/ml药液；
[0083]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，微波干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0084]f、取步骤e提取物加入纯化水溶解，加入糖浆，调节pH，制成口服液。
[0085]实施例4
[0086]本发明所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物制备方法，
[0087]处方:柴胡10份、香附10份、酒炙大黄5份、炒青皮5份、川芎5份、莪术5份、浙贝母5份、当归10份、白芍10份、土鳖虫5份、炒王不留行5份。
[0088]制备步骤:
[0089]a、取柴胡10份、酒炙大黄5份、浙贝母5份、白芍10份、炒王不留行5份，加入10倍量水，提取3次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.8g生药/mL药液；
[0090]b、取香附10份、川弯5份、莪术5份、当归10份、炒青皮5份,加10倍量水，米用水蒸气蒸馏法提取8h，获得的挥发油，每毫升挥发油用9gi3-环糊精，溶于100mL水中，在70°C的条件下，搅拌2小时包合，包合物于60°C干燥，得挥发油β-环糊精包合物；提取液过滤，滤液浓缩至生药量0.7g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为70%，放置12h，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至0.8g生药/mL药液；
[0091]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上X-5大孔吸附树脂柱，柱径高比为1:6，静置吸附后，用去离子水洗脱至流洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为20%的乙醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用10倍柱体积浓度60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇醇，浓缩至2g生药/ml药液；
[0092]d、取土鳖虫5份，加12倍量的水提取2次，每次3小时，提取液过滤，滤液浓缩至2g生药/ml药液；
[0093]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，真空干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0094]f、取步骤e提取物加入纯化水溶解，加入糖浆，调节pH，制成口服液。
[0095]实施例5
[0096]本发明所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物制备方法，
[0097]柴胡12份、香附12份、大黄8份、青皮8份、川芎8份、莪术8份、浙贝母8份、当归12份、白芍12份、土鳖虫8份、王不留行8份。
[0098]制备步骤:
[0099]a、取柴胡12份、酒炙大黄8份、浙贝母8份、白芍12份、炒王不留行8份，加入12倍量水，提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩至1.0g生药/mL药液；
[0100] b、取香附12份、川弯8份、莪术8份、当归12份、炒青皮8份,加15倍量水，米用水蒸气蒸馏法提取10h，获得的挥发油，每毫升挥发油用10gi3-环糊精，溶于100mL水中，在60°C的条件下，搅拌3小时包合，包合物于60°C干燥，得挥发油β -环糊精包合物；提取液过滤，滤液浓缩至生药量0.8g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为60%，放置12h，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至1.0g生药/mL药液；
[0101]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上AB-8大孔吸附树脂柱，柱径高比为1:3，静置吸附后，用去离子水洗脱至流洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为20%的乙醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用10倍柱体积浓度60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇醇，浓缩至1.0g生药/ml药液；
[0102]d、取土鳖虫8份，加12倍量的水提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩至
1.0g生药/ml药液；
[0103]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，真空干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0104]f、取步骤e提取物加入纯化水溶解，加入糖浆，调节pH，制成口服液。[0105]实施例6
[0106]本发明所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物制备方法，
[0107]柴胡18份、香附18份、大黄12份、青皮12份、川芎12份、莪术12份、浙贝母12份、当归18份、白芍18份、土鳖虫12份、王不留行12份。
[0108]制备步骤:
[0109]a、取柴胡18份、酒炙大黄12份、浙贝母12份、白芍18份、炒王不留行12份，加入8倍量水，提取3次，每次3小时，提取液过滤，滤液浓缩至1.5g生药/mL药液；
[0110]b、取香附18份、川弯12份、莪术12份、当归18份、炒青皮12份，加8倍量水，米用水蒸气蒸馏法提取12h，获得的挥发油，每毫升挥发油用5gi3-环糊精，溶于100mL水中，在70°C的条件下，搅拌3小时包合，包合物于60°C干燥，得挥发油β -环糊精包合物；提取液过滤，滤液浓缩至生药量0.85g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为60%，放置18h，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至1.5g生药/mL药液；
[0111]C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上DlOl大孔吸附树脂柱，柱径高比为1:10，静置吸附后，用去离子水洗脱至流洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为20%的乙醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用10倍柱体积浓度60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去乙醇醇，浓缩至2g生药/ml药液；
[0112]d、取土鳖虫12份，加5倍量的水提取3次，每次3小时，提取液过滤，滤液浓缩至2g生药/ml药液；
[0113]e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，真空干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
[0114]f、取步骤e提取物加入纯化水溶解，加入糖浆，调节pH，制成口服液。
[0115]实施例7
[0116]中药复方提取物对大鼠乳腺增生作用的影响研究
[0117]1、实验动物造模:取体重为170~200g清洁级SD雌性未孕大鼠120只，用雌二醇及黄体酮联合诱导形成乳腺增生模型，方法为:除空白对照组肌注生理盐水0.25ml/kg、I次/天，连续注射25天外,其余各组均肌注雌二醇0.5mg/kg、l次/天、连续20天，继而改用肌注黄体酮5mg/kg、l次/天、连续5天。[0118]2、实验分组:将造模大鼠按乳腺增生情况随机分组并给药。给药组分为消乳散结组(0.9g/kg)，国药准字Z20100057的消癥丸低剂量组(2.7g生药量/kg)，国药准字Z20100057的消癥丸高剂量组(8.1g生药量/kg)，本发明实施例1制备得到的中药复方提取物低剂量组(2.7g生药量/kg)和中药复方提取物高剂量组(8.1g/生药量kg)，本发明实施例2制备得到的中药复方提取物低剂量组(2.7g生药量/kg)和中药复方提取物高剂量组(8.1g生药量/kg)。另设模型组，每组15只，并以15只正常SD雌性未孕大鼠作为空白对照组。模型组及空白对照组给予相应的生理盐水，其余各组按上述剂量灌胃给药，每天I次，连续20天，并进行下列指标测定。:
[0119]乳房高度:实验开始后，每周用数显卡尺测I次大鼠第三对乳房高度。
[0120]乳腺组织病理学检查:大鼠处死后，取其乳腺组织，固定于10%福尔马林内，常规石蜡包埋，切片厚5 μ m，HE染色，进行病理组织学检查。
[0121]3、实验结果如下:
[0122]3.1对大鼠乳房高度的影响
[0123]从开始给药后，每周测I次乳房高度。结果表明:模型组大鼠乳房高度与空白对照组比较有明显差异(P < 0.05，0.01)。消乳散结组、消癥丸原方组、本发明实施例1和2高低剂量组与模型组比较均有降低乳房高度的作用，与模型组比较差异明显(P < 0.05,0.01),且随给药时间延长，效果更佳。并且通过对比实验结果表明，本发明提供的中药复方提取物与原消癥丸原方组在同等生药量的剂量下具有更好的抗乳腺增生功效，表明经本发明优选制备方法制备得到的中 药复方提取物，同等剂量下，抗乳腺增生功效更优。见表1 ;表2。
[0124]表1消癥丸及其活性部位对大鼠左侧乳房高度的影响(X 士S)
【权利要求】
1.一种具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡10~20份、香附10~20份、大黄5~15份、青皮5~15份、川芎5~15份、莪术5~15份、浙贝母5~15份、当归10-20份、白芍10-20份、土鳖虫5~15份、王不留行5~15份。
2.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡12~18份、香附12~18份、大黄8~12份、青皮8~12份、川弯8^12份、莪术8~12份、浙贝母8~12份、当归12~18份、白芍12~18份、土鳖虫8~12份、王不留行8~12份。
3.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡15份、香附15份、大黄10份、青皮10份、川弯10份、莪术10份、浙贝母10份、当归15份、白芍15份、土鳖虫10份、王不留行10份。
4.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡20份、香附20份、大黄5份、青皮5份、川芎5份、莪术15份、浙贝母15份、当归10份、白芍20份、土鳖虫5份、王不留行15份。
5.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡10份、香附10份、大黄15份、青皮15份、川弯15份、莪术5份、浙贝母5份、当归20份、白芍10份、土鳖虫15份、王不留行5份。
6.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡10份、香附10份、酒炙大黄5份、炒青皮5份、川芎5份、莪术5份、浙贝母5份、当归10份、白芍10份、土鳖虫5份、炒王不留行5份。
7.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡12份、香附12份、大黄8份、青皮8份、川芎8份、莪术8份、浙贝母8份、当归12份、白芍12份、土鳖虫8份、王不留行8份。
8.根据权利要求1所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，它由下列重量份数的原料制得: 柴胡18份、香附18份、大黄12份、青皮12份、川芎12份、莪术12份、浙贝母12份、当归18份、白芍18份、土鳖虫12份、王不留行12份。
9.根据权利要求1~8任一项所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物，其特征在于，所述的大黄为酒炙大黄，王不留行为炒王不留行，青皮为炒青皮。
10.权利要求1~8任一项所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、取柴胡、大黄、浙贝母、白芍、王不留行加水或CV3醇提取，提取液过滤，滤液浓缩至.0.25~4g生药/mL药液； b、取香附、川芎、莪术、当归、青皮采用水蒸气蒸馏法提取，获得的挥发油采用环糊精包合；提取液过滤，浓缩，加入乙醇使乙醇的浓度为60%~80%，放置沉淀，过滤，滤液减压回收除去乙醇，浓缩至0.25~4g生药/mL药液； C、取步骤a制备得到的药液和步骤b制备得到的药液，混合后上大孔吸附树脂柱，静置吸附后，用去离子水洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，然后用浓度为5%~20%的CV3醇洗脱至洗脱液为淡色，弃去洗脱液，再用浓度为40%~90%的CV3醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去Cr3醇，浓缩至0.5^2.0g生药/ml药液； d、取土鳖虫，加水或Cr3醇提取，提取液过滤，滤液浓缩至0.5~2.0g生药/ml药液； e、取步骤c制备得到的药液和步骤d制备得到的土鳖虫提取药液混合均匀，浓缩干燥，粉碎，所得浸膏粉与步骤b制备得到的挥发油环糊精包合物混合均匀，即得。
11.根据权利要求10所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，其特征在于，步骤a、C、d所述的Cr3醇为甲醇、乙醇或丙醇。
12.根据权利要求10所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，其特征在于: (1)、步骤a取柴胡、大黄、浙贝母、白芍、王不留行加8~12倍量水或CV3醇提取I~3次，每次I~3小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.25~4g生药/mL药液； (2)、步骤b取川芎、莪术、当归、青皮采用8~15倍量水水蒸气蒸馏法提取3~12h，获得的挥发油每毫升采用5~IOg β -环糊精包合；提取液过滤，浓缩至生药量为0.65~ 0.85g/ml，加入乙醇使乙醇的浓度为60%~80%，静置6~24小时，过滤，滤液浓缩减压回收除去乙醇，浓缩至0.25~4g生药/mL药液； (3)、步骤c中大孔树脂柱其径高比为1:3~1:10，采用5~10倍柱体积，浓度为40%~90%的Cr3醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压回收除去CV3醇，浓缩至0.5^2g生药/Iml药液； (4)、步骤d取土鳖虫，加5~15倍量水或CV3醇提取I~3次，每次I~3小时，提取液过滤，滤液浓缩至0.5~2g生药/ml ； (5)、步骤e所述浓缩干燥方法其特征为:真空干燥、喷雾干燥、微波干燥。
13.根据权利要求10所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，其特征在于，步骤b所述的环糊精包合方法为:每毫升挥发油用5~IOg β-环糊精，溶于80~100mL水中，在60°C~70°C的条件下，搅拌I~3小时包合，包合物于70°C以下干燥。
14.根据权利要求10所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物的制备方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为D101、HPD100、X-5或AB-8大孔吸附树脂。
15.一种具有抗乳腺增生作用的中药复方制剂，其特征在于:用权利要求1~8任一项所述的中药复方提取物，加入药学上可接受的载体制得。
16.根据权利要求15所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方制剂，其特征在于，所述的具体剂型包括口服液、丸剂、颗粒剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂或散剂。
17.权利要求1至8任一项所述的具有抗乳腺增生作用的中药复方提取物在制备抗乳腺增生药物中的应用。
【文档编号】A61P15/14GK103908631SQ201410122333
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年3月28日 优先权日:2013年7月30日
【发明者】狄留庆, 许惠琴, 赵晓莉, 严燕青, 贡磊, 李全, 叶华 申请人:雷允上药业有限公司