黑莓籽有效成分的新应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于植物提取物应用【技术领域】，具体涉及一种黑莓籽有效成分的新应用。应用涉及在制备保肝、护肝保健品或药物上的应用及在抗氧化方面的应用。本发明从黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，研究证实了其对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤具有一定保护作用，同时增强急性肝损伤小鼠机体的抗氧化功能，保护机体免受自由基的进一步伤害。
【专利说明】黑莓籽有效成分的新应用
[0001]【技术领域】
本发明属于植物提取物应用【技术领域】，具体涉及一种黑莓籽有效成分的新应用。
[0002]【背景技术】
黑莓{Rubus spp.Blackberry)属于蔷薇科(Rasaceae)悬钩子属聚合果类植物,其果实具有很高的营养价值和药用价值，具有改善人体新陈代谢、清除自由基、延缓衰老、增强免疫力等功能，特别具有降低胆固醇含量、防治心脏疾病、抗癌(降低化疗引起的毒副作用)和抗血栓的功效。
[0003]黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工产品的副产物，含有丰富的多酚类化合物，多年来被大量遗弃，造成资源的大量浪费。近几年，技术人员从黑莓籽中提取了黑莓籽油。
[0004]研究表明，黑莓籽油含有较高的不饱和脂肪酸，如棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸等，能够提供给人体基本的脂肪酸，而且这些脂肪酸不能通过任何已知的化学途径合成，必须从食物中获取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血和VC- FeSO4体系诱导的小鼠肝组织丙二醛生成及VC-FeSO4体系诱导的小鼠肝线粒体肿胀的作用，与其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相关；此外，还发现黑莓籽经脱脂后的主要有效成分为原花青素，是由单体黄烷-3-醇以不同聚合度连接而成的多酚类化合物，具有高效的清除自由基的能力，具有治疗动脉硬化、消炎防肿、抗突变和预防癌症等广泛用途。未见对黑莓籽 治疗急性肝损伤作用的报道。
[0005]
【发明内容】
本发明为了扩大黑莓籽的应用领域，通过腹腔注射CCl4油溶液诱导小鼠急性肝损伤，测定血清中GPT和GOT的活力，评价其保肝护肝作用，测定肝脏匀浆液中SOD的活力和MDA的水平，评价其体内抗氧化作用，为合理开发和利用黑莓籽资源提供科学依据，提供了黑莓籽在保肝护肝、抗氧化方面的新应用。
[0006]本发明为实现上述目的，采用以下技术方案:
黑莓籽有效成分在制备保肝、护肝保健品或药物上的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0007]黑莓籽有效成分在抗氧化方面的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0008]黑莓籽有效成分(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油)采用以下方法制得，黑莓籽用石油醚冷浸脱脂，脱脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油；脱脂后的黑莓籽残渣用乙醇(65-80V9O冷浸，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0009]为了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前将黑莓籽粉碎。
[0010]石油醚冷浸脱脂时，重复4-5次，每次3-4d，合并提取液；每次石油醚的用量是黑莓籽质量的8-10倍，冷浸温度为室温。
[0011]乙醇冷浸时，重复2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液；每次乙醇的用量是黑莓籽残渣质量的8-10倍，冷浸温度为室温。
[0012]本发明从黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，并采用腹腔注射四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠模型，首次研究黑莓籽对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的影响，研究证实了这些有效部位均具有不同程度的降低血清中GPT和GOT的活力，其对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤具有一定保护作用；能通过不同程度地降低急性肝损伤小鼠肝脏匀浆液中MDA的含量，升高SOD水平，增强急性肝损伤小鼠机体的抗氧化功能，保护机体免受自由基的进一步伤害，推测其可能是黑莓籽保肝护肝的作用机制之一。
[0013]【具体实施方式】 实施例1
黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145.04g ；脱脂后的黑莓籽残渣341g用2800mL乙醇(70V%)冷浸，重复3次，每次3d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.34g、乙酸乙酯萃取物5.46g和正丁醇萃取物
13.42g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0014]实施例2
黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用5000mL石油醚冷浸脱脂，重复5次，每次3d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.50g ；脱脂后的黑莓籽残渣332g用3000mL乙醇(65V%)冷浸，重复2次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.02g、乙酸乙酯萃取物5.1Og和正丁醇萃取物
14.28g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0015]实施例3
黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4500mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.26g ；
脱脂后的黑莓籽残渣335g用3300mL乙醇(80V%)冷浸，重复3次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.26g、乙酸乙酯萃取物5.54g和正丁醇萃取物12.94g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0016]效果实验黑莓籽不同部位对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的影响
实验原料:将实施例1-3制得的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油分别混合作为四种实验原料。
[0017]实验动物:昆明种小鼠，体重22 土 2 g，SPF级，由山东鲁抗医药股份有限公司质检中心动物实验室提供，生产许可证号:SCXD鲁20080002。
[0018] 实验试剂:谷草转氨酶(GOT)试剂盒(20140115)、谷丙转氨酶(GPT)试剂盒(20140217)、丙二醛(MDA)试剂盒(20131214)、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(20131214)均购于南京建成生物工程研究所；联苯双酯(120314，浙江万邦药业股份有限公司)；四氯化碳(分析纯，开封化学试剂总厂);橄榄油(上海卫辉化学试剂厂);考马斯亮蓝G250 (20050115，上海化学试剂公司分装厂)；牛清蛋白(20100526，北京奥博星生物技术有限责任公司)；其它试剂均为分析纯。
[0019]实验仪器:LRH-150恒温培养箱；DELTA 320型pH计；Multiskan MK3酶标仪；电子天平；旋转蒸发仪；UV-2000型紫外可见分光光度计；CS-H1型混合器；各规格的微量移液器及枪头等。
[0020]实验方法与结果
1、实验方法
动物分组和造模方法:取健康昆明小鼠(4~6周龄，体重22±2 g) 150只，随机分为15组，每组IO只，分别为黑莓籽石油醚部位高、中、低剂量组(800、400、200mg/kg )，黑莓籽乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(400、200、100mg/kg)，黑莓籽正丁醇部位高、中、低剂量组(600、300、150mg/kg)，黑莓籽油高、中、低剂量组(1000、500、250mg/kg)，联苯双酯阳性对照组(75 mg/kg)，模型组和空白组。模型组和空白组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na )水溶液，其它试验组用0.5%CMC-Na水溶液分别配制成相应浓度的溶液，灌胃给药，I次/天，连续给药8天。于末次给药2 h后对小鼠进行造模(即按照0.1 mL/10g小鼠体重腹腔注射
0.4V%四氯化碳橄榄油溶液，空白组除外)。禁食不禁水16 h后，摘除小鼠眼球取血并分离出血清，检测血清中GPT和GOT的活力。快速分离肝脏，制备10%和1%的肝脏组织匀浆液，离心取上清液，0-3°C保存，测定MDA的含量和SOD的活力，利用考马斯亮蓝除蛋白。
[0021]2、实验结果如下
表1黑莓籽不同部位对急性肝损伤小鼠血清中GPT和GOT活力的影响(
'Ζ±.5,/7 = 10)
【权利要求】
1.黑莓籽有效成分在制备保肝、护肝保健品或药物上的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
2.黑莓籽有效成分在抗氧化方面的应用，所述黑莓籽有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
【文档编号】A61K36/73GK103908503SQ201410137714
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年4月8日 优先权日:2014年4月8日
【发明者】张伟, 康文艺, 尹震花 申请人:黄河科技学院