一种黑莓籽有效成分及其提取方法、应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于植物提取【技术领域】，具体涉及一种黑莓籽有效成分及其提取方法、应用。该方法包括以下步骤：黑莓籽用石油醚冷浸脱脂，脱脂后的黑莓籽残渣用乙醇冷浸，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。本发明采用新的提取方法从黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，并研究证实了这些有效成分均具有一定的升高肝糖元含量的作用。
【专利说明】一种黑莓籽有效成分及其提取方法、应用
[0001]
【技术领域】
本发明属于植物提取【技术领域】，具体涉及一种黑莓籽有效成分及其提取方法、应用。
[0002]【背景技术】
黑莓{Rubus spp.Blackberry)属于蔷薇科(Rasaceae)悬钩子属聚合果类植物,其果实具有很高的营养价值和药用价值，具有改善人体新陈代谢、清除自由基、延缓衰老、增强免疫力等功能，特别具有降低胆固醇含量、防治心脏疾病、抗癌(降低化疗引起的毒副作用)和抗血栓的功效。
[0003]黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工产品的副产物，含有丰富的多酚类化合物，多年来被大量遗弃，造成资源的大量浪费。近几年，技术人员从黑莓籽中提取了黑莓籽油。
[0004]研究表明，黑莓籽油含有较高的不饱和脂肪酸，如棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸等，能够提供给人体基本的脂肪酸，而且这些脂肪酸不能通过任何已知的化学途径合成，必须从食物中获取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血和VC- FeSO4体系诱导的小鼠肝组织丙二醛生成及VC-FeSO4体系诱导的小鼠肝线粒体肿胀的作用，与其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相关；此外，还发现黑莓籽经脱脂后的主要有效成分 为原花青素，是由单体黄烷-3-醇以不同聚合度连接而成的多酚类化合物，具有高效的清除自由基的能力，具有治疗动脉硬化、消炎防肿、抗突变和预防癌症等广泛用途。
[0005]
【发明内容】
本发明为了扩大黑莓籽的应用领域，为合理开发和利用黑莓籽资源提供科学依据，提供一种黑莓籽有效成分及其提取方法、应用。
[0006]本发明采用以下技术方案:
一种黑莓籽有效成分的提取方法，有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油，提取时包括以下步骤:黑莓籽用石油醚冷浸脱脂，脱脂后的黑莓籽残渣用乙醇(65-80V9O冷浸，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0007]为了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前将黑莓籽粉碎。
[0008]脱脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油。
[0009]石油醚冷浸脱脂时，重复4-5次，每次3-4d，合并提取液。
[0010]每次石油醚的用量是黑莓籽质量的8-10倍，冷浸温度为室温。
[0011]乙醇冷浸时，重复2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液。
[0012]每次乙醇的用量是黑莓籽残渣质量的8-10倍，冷浸温度为室温。
[0013]采用以上提取方法得到的黑莓籽有效成分，其特征在于，为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0014]黑莓籽有效成分在制备升高肝糖元药物方面的应用。[0015]本发明采用新的提取方法从黑莓籽中提取到了石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油，并采用尾静脉注射四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠模型，首次研究黑莓籽对糖尿病小鼠肝糖元的影响，研究证实了这些有效成分均具有一定的升高肝糖元含量的作用，可以推测其可能具有促进肝糖元的合成、降低肝糖元的分解的作用。
[0016]【具体实施方式】 实施例1
黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145.04g ；脱脂后的黑莓籽残渣341g用2800mL乙醇(70V%)冷浸，重复3次，每次3d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.34g、乙酸乙酯萃取物5.46g和正丁醇萃取物
13.42g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0017]实施例2黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用5000mL石油醚冷浸脱脂，重复5次，每次3d，过滤，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.50g ；脱脂后的黑莓籽残渣332g用3000mL乙醇(65V%)冷浸，重复2次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.02g、乙酸乙酯萃取物5.1Og和正丁醇萃取物
14.28g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0018]实施例3
黑莓籽有效成分的提取方法，步骤如下:500g黑莓籽粉碎，每次使用4500mL石油醚冷浸脱脂，重复4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162.26g ；
脱脂后的黑莓籽残渣335g用3300mL乙醇(80V%)冷浸，重复3次，每次4d，合并乙醇提取液，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物2.26g、乙酸乙酯萃取物5.54g和正丁醇萃取物12.94g，即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0019]效果实验黑莓籽有效成分体内对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的肝糖元的影响 实验原料:实施例1制得的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、黑莓籽油。
[0020]实验动物:昆明种小鼠，雄性，体重22 土 2 g，SPF级，由山东鲁抗医药股份有限公司质检中心动物实验室提供，生产许可证号:SCXD鲁20080002。
[0021]实验试剂:葡萄糖测定试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司，20131006147);肝/肌糖元测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，20131216);阿卡波糖(Acarbose，130523，杭州中美华成制药有限公司)；四氧嘧唳(Alloxan monohydrate 98%, Lot:10150059, AlfaAesar)。
[0022]实验仪器:LRH-150恒温培养箱；DELTA 320型pH计；Multiskan MK3酶标仪；电子天平；旋转蒸发仪；UV-2000型紫外可见分光光度计；CS-H1型混合器；各规格的微量移液器及枪头等。
[0023]实验方法与结果
1、实验方法动物分组和造模方法:健康昆明小鼠150只，随机分为两组，正常对照组10只，其余的为糖尿病造模组。糖尿病造模组于禁食不禁水12 h后，尾静脉注射80mg/kg四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠。正常喂养72 h后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，测空腹血糖水平，依据血糖均衡原则将血糖水平在11.1 mmol/L以上的小鼠分成14组:黑莓籽石油醚部位高、中、低剂量组，黑莓籽乙酸乙酯部位高、中、低剂量组，黑莓籽正丁醇部位高、中、低剂量组，黑莓籽油高、中、低剂量组，阿卡波糖阳性对照组，和糖尿病模型组，正常对照组作为空白组。除糖尿病模型组和空白组外，其他组分别灌胃相应的药物，I次/ d，连续给药7 d，并于当晚禁食不禁水12 h，第8 d摘取眼球取血处死动物，取肝脏并称重，制备肝糖元测定液，用于肝糖元含量的测定。
[0024]2、实验结果如下
表1不同有效成分对糖尿病小鼠血糖的影响(>±5.,/7 = 10 )
【权利要求】
1.一种黑莓籽有效成分的提取方法，其特征在于，有效成分为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油，提取时包括以下步骤:黑莓籽用石油醚冷浸脱月旨，脱脂后的黑莓籽残渣用乙醇冷浸，乙醇提取液浓缩得乙醇总浸膏，乙醇总浸膏分散于水中，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物即分别为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
2.如权利要求1所述的黑莓籽有效成分的提取方法，其特征在于，脱脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油。
3.如权利要求1所述的黑莓籽有效成分的提取方法，其特征在于，石油醚冷浸脱脂时，重复4-5次，每次3-4d，合并提取液。
4.如权利要求1所述的黑莓籽有效成分的提取方法，其特征在于，乙醇冷浸时，重复2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液。
5.采用权利要求1或2的提取方法得到的黑莓籽有效成分，其特征在于，为黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
6.权利要求5所述的 黑莓籽有效成分在制备升高肝糖元药物方面的应用。
【文档编号】A61K36/73GK103893306SQ201410081276
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年3月7日 优先权日:2014年3月7日
【发明者】康文艺, 张伟, 尹震花 申请人:黄河科技学院