一种含有艾塞那肽的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及到一种含有艾塞那肽的组合物，组合物制备采用醋酸艾塞那肽作为起始原料，在制备艾塞那肽微球的过程中，选择适当的清洗液及其用量，在微球冻干过程中，选择适当的再干燥温度固化微球，使得微球中醋酸的含量降至极低，获得符合质量标准且特性良好的微球产品，使微球的稳定性提高，延长药物的储存时间。
【专利说明】一种含有艾塞那肽的组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及到一种含有艾塞那肽的组合物，所述组合物是微球形式，本发明采用醋酸艾塞那肽作为起始原料制备微球，通过降低醋酸的浓度至极低含量，使微球的稳定性提高，延长药物的储存时间。
【背景技术】
[0002]艾塞那肽是人工合成的肠促胰岛素类似物GLP-1家族的第一个成员，它模拟人体生理状态下分泌GLP-1的生物模式，从肠内释放入循环中后可以增强葡萄糖依赖性胰岛素分泌。艾塞那肽的氨基酸序列与人类GLP-1部分重叠，在体显示可以结合并活化已知的人类GLP-1受体，通过包括cAMP和/或其他细胞内信号传导机制使葡萄糖依赖性胰岛素合成及胰岛β细胞在体内分泌胰岛素增加。在葡萄糖浓度升高的情况下，艾塞那肽可促进胰岛素从β细胞中释放同时艾塞那肽通过减少2型糖尿病患者空腹和餐后血糖浓度，从而改善血糖控制。
[0003]艾塞那肽已上市的产品主要有注射剂，仅用于皮下注射。推荐起始剂量为5 μ g，每日两次，治疗I个月后，可根据临床反应将剂量增加至10 μ g。该制剂每日两次(bid)注射，平均达峰时间为2.lh，平均消除半衰期为2.4h，主要由肾脏消除。这种注射剂需要频繁给药，且不能持续活化GLP-1受体，对于需要长期给药的糖尿病患者而言依从性较差。
[0004]现有技术已有采用相分离方法制备艾塞那肽微球，采用相分离方法生产操作步骤多，对设备工艺要求高，医药产品相关无菌及溶剂残留等质量标准要求，也会使的相分离方法制备工艺制备的微球还需要多个工序的产品处理；因为相分离生产艾塞那肽微球存在以上不足，一些研究机构开展采用溶剂挥发法生产艾塞那肽微球研究，其生产设备要求低，工作操作步骤较少，采用较少的后处理工序处理产品即可达到相关质量标准要求。艾塞那肽市售产品为艾塞那肽的醋酸盐，产品标准要求:3% <醋酸含量< 12%，现有技术对生产的艾塞那肽微球过程未有相关醋酸含量控制，但是通过研究发现艾塞那肽微球醋酸含量对储存期内艾塞那肽生物利用度有影响，当醋酸含量超过0.01%，会产生使储存期内微球中的艾塞那肽生物利用度下降的问题。
【发明内容】
[0005]针对现有技术存在的上述缺陷，本发明人进行深入研究，提供一种含有艾塞那肽的组合物，所述组合物是微球，起始原料采用艾塞那肽醋酸盐(市售产品，3 <醋酸含量(12%)和聚丙交酯乙交酯(PLGA)，所述制备的艾塞那肽微球控制醋酸含量为0.01%以下。
[0006]制备的艾塞那肽微球中艾塞那肽含量相对于组合物总重量为2-10%,优选3-8%,更优
[0007]选4_6%。
[0008]制备的艾塞那肽微球中聚丙交酯乙交酯(PLGA)含量相对于组合物总重量为90-98%,优选 92-97%，更优选 94_96%。[0009]所述丙交酯-乙交酯共聚物，英文名称为Poly (lactide-co-glycolide),简称PLGA0所述PLGA的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10 - 10:90，优选75:25 — 25:75，更优选 60:40-40:60，尤其是 50:50。
[0010]丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)的特性粘度为0.1-0.40dL/g,优选范围
0.10-0.35dL/g,更优选为 0.10-0.30dL/g。PLGA 白勺特性粘度(inherent viscosity)测定方法:将PLGA用氯仿配制成约0.5% (w/ v)的溶液,于30°C采用Cannon-Fenske玻璃毛细管粘度计测定其特性粘度。
[0011]本发明所说的丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)分子量为6000-45000道尔顿，优选为10000-30000道尔顿，更优选10000-25000道尔顿。所述分子量指“重均分子量”，简称为“分子量”。
[0012]为方便描述，下文对丙交酯和乙交酯的摩尔比以及特性粘度在其括号中进行表示。如“PLGA (50/50,0.20，16000)”表示丙交酯和乙交酯的摩尔比为50:50，特性粘度为
0.20dl/g，分子量为16000道尔顿的丙交酯-乙交酯共聚物。
[0013]本发明所述微球是通过溶剂挥发法制备获得，所述溶剂挥发法，过程可以如下:称量一定量的市售醋酸艾塞那肽，可以同时称量一定量的助溶剂、蛋白保护剂、表面活性剂、致孔剂等辅料，可以先用蒸馏水溶解醋酸艾塞那肽，选用的辅料也可以溶解于蒸馏水中，称量一定量的PLGA，用有机溶剂溶解，所述有机溶剂可以是二氯甲烷、丙酮、乙腈等可以溶解PLGA的有机溶剂，优选二氯甲烷；将含有艾塞那肽和辅料的水溶液与有机溶剂混合，形成初乳，；将含有醋酸艾塞那肽和PLGA的初乳添加至所述水相(如聚乙烯醇溶液)中乳化，形成、W/0/W复乳，固化、挥发有机溶剂，清洗控制醋酸的含量，冻干进一步减少醋酸的含量，最终获得符合要求的微球。
[0014]在制备艾塞那肽微球的过程中，清洗液用量的选择及冻干微球时间和温度对制备的微球的醋酸含量减少起到关键作用，本发明可采用蒸馏水或碱性缓冲液作为清洗液对微球清洗，清洗液与微球的重量比为1:250以上，优选重量比为1:330以上；在选定的重量比下清洗微球，为获得极低醋酸含量的艾塞那肽微球打下基础。
[0015]采用蒸馏水或碱性缓冲液作为清洗液对微球清洗，可以使清洗液的pH值稳定在一定的范围，采用的缓冲液可以是枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、邻苯二甲酸盐缓冲液等缓冲液，为了减少清洗过程给微球带来新的物质，同时方便GMP无菌操作，优选蒸馏水。
[0016]在制备艾塞那肽微球的过程中，冻干过程中的再干燥温度对制备的微球醋酸的含量起到重要作用，本发明采用再干燥温度为醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化转变温度以下，可以获得符合质量标准且特性良好的微球产品。
[0017]再干燥为冻干过程当升华干燥阶段完成后，为尽可能除去残余的水，需要进一步的干燥。
[0018]本发明通过在制备微球过程中控制醋酸的含量制备艾塞那肽微球，使微球达到较长的储存期内，生物利用度不变的特性，延长产品的储存期。
【具体实施方式】
[0019]下面通过实施例对本发明加以进一步的说明，但不以任何形式限制本发明。[0020]实施例1采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:250制备艾塞那肽微球
[0021]制备方法:称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将初乳加入至微球制备爸中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持5h，待微球固化后过滤收集微球，称量37.5kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为40°C (测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C )，干燥时间为36小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0022]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1[0023]实施例2采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:300制备艾塞那肽微球
[0024]制备方法:称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A17000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将初乳加入至微球制备釜中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持4h，待微球固化后过滤收集微球，称量45kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为40°C(测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C)，干燥时间为36小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0025]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1
[0026]实施例3采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:330制备艾塞那肽微球
[0027]制备方法:称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将初乳加入至微球制备爸中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持4h，待微球固化后过滤收集微球，称量49.5kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为40°C (测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C )，干燥时间为36小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0028]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1
[0029]实施例4采用醋酸艾塞那肽+PLGA重量:清洗液=1:400制备艾塞那肽微球
[0030]制备方法:称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将初乳加入至微球制备釜中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持4h，待微球固化后过滤收集微球，称量60kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为40°C(测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C )，干燥时间为36小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0031]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1
[0032]实施例5采用再干燥温度设定为38°C制备艾塞那肽微球
[0033]制备方法:称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A16000)，加二氯甲烷(CH2Cl2) 675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微 球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将初乳加入至微球制备爸中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持4h，待微球固化后过滤收集微球，称量49.5kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为38°C (测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C )，干燥时间为96小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0034]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1
[0035]对比例I制备醋酸含量超过0.01%的艾塞那肽微球
[0036]称取7.5g醋酸艾塞那肽原料，加蒸馏水25ml搅拌溶解，配制成溶液，称取142.5g乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA50502A)，加二氯甲烷(CH2Cl2)675ml搅拌溶解，将二个溶液混合均匀得初乳；将配制好的1%PVA溶液75L除菌过滤后加入至真空乳化搅拌机(以下简称微球制备釜)中并冷却至7~13°C，作为水相。将已除菌过滤的油相加入至微球制备釜中，均质乳化速度为400rpm,加料结束继续乳化60s后，降低均质搅拌速度为150rpm,维持4h,待微球固化后过滤收集微球，称量15kg蒸馏水作为清洗液冲洗微球，转移至冻干盘中，加入甘露醇注射液和适量水溶液，置冷冻干燥机中冻干；再干燥温度设定为38°C(测定醋酸艾塞那肽+PLGA混合物的玻璃化转变温度为43°C)，干燥时间为36小时，冻干品经过筛混匀，得到微球。
[0037]对微球的醋酸含量进行测定，具体见表1
[0038]试验例I不同艾塞那肽微球醋酸含量检测
[0039]检测方法:照气相色谱法[中国药典2010年版二部附录V E第(3)法]测定。
[0040]色谱条件与系统适用性试验色谱柱为长10米，内径0.32mm,内层涂有0.33 μ m的FFAP — CB熔融石英毛细管柱。进样口温度:220°C ;检测器温度:250°C ;分流比100:1 ;柱温程序:起始温度50°C，停留时间0.10分钟，升温速率30°C /分钟，最终温度230°C，停留时间5分钟；进样量I μ I ;理论塔板数按乙酸峰计算应不低于5000，乙酸峰与内标峰的分尚度应付合规定。
[0041]校正因子测定取正十六烷1.0ml置50ml量瓶中，加二甲基甲酰胺30ml溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。另取乙酸对照品约625mg，精密称定，置100mL量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。精密量取上述溶液IOml至100mL量瓶中，精密加入内标溶液5ml，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀。取Iy I注入气相色谱仪，连续进样3 — 5次，按平均峰面积计算校正因子。[0042]供试品溶液的制备与测定按实施例1、制备的戈舍瑞林微球取约50mg,精密称定，置2ml量瓶中，加二甲基甲酰胺Iml溶解，精密加入100 μ I内标溶液，用二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。取1μ I注入气相色谱仪，按内标法计算。
[0043]检测结果见表1
[0044]
【权利要求】
1.一种含有艾塞那肽的组合物，所述组合物是微球形式，其特征在于所述艾塞那肽微球起始原料采用醋酸艾塞那肽和聚丙交酯乙交酯(PLGA)，制备完成后的组合物醋酸含量小于 0.01%。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述相对于组合物总重量，艾塞那肽的含量为2-10%，优选3-8%，更优选4-6%。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于相对于组合物总重量，聚丙交酯乙交酯(PLGA)的含量为90-98%，优选92_97%，更优选94_96%。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于所述聚丙交酯乙交酯(PLGA)的分子量为6000-45000道尔顿，优选为10000-30000道尔顿，更优选10000-25000道尔顿，PLGA的丙交酯和乙交酯的摩尔比为90:10 — 10:90，优选75:25 — 25:75，更优选60:40-40:60，尤其是50:50, PLGA的特性粘度为0.1-0.40dL/g，优选范围0.10-0.35dL/g，更优选为0.10-0.30dL/g。
5.制备权利要求1所述的组合物采用溶剂挥发法，其特征在于选用与微球重量比为1:250以上重量的清洗液清洗微球，同时设定再干燥温度为醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化转变温度以下。
6.根据权利要求5所述的方法，所述溶剂挥发法采用的有机溶剂可以溶解丙交酯乙交酯(PLGA)，其可以是二氯甲烷、丙酮、乙腈等可以溶解PLGA的有机溶剂，优选二氯甲烷。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述清洗液采用蒸馏水或碱性缓冲液，优选蒸馏水。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于选用的清洗液的重量与微球的重量比为1:330以上。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述冻干微球设定再干燥温度为醋酸艾塞那肽+PLGA混合物玻璃化转变温度以下3度。
10.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述组合物在制备2型糖尿病治疗药物中的应用。
【文档编号】A61K38/22GK103932992SQ201410153089
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年4月16日 优先权日:2014年4月16日
【发明者】王涛, 王麒麟, 徐钱钱, 孙丽芳, 孟莹, 李菊 申请人:山东绿叶制药有限公司