心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用。本发明证实心脑欣对帕金森小鼠行为学的改善较明显，显著提高模型小鼠脑纹状体DA和HVA含量及黑质区TH阳性表达。心脑欣胶囊各剂量组显著改善帕金森小鼠的运动症状，有效地提高脑纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量。
【专利说明】心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 帕金森病（PD)是人类第二大中枢神经系统退行性疾病，多发病于50岁以后，是危 害老年人生命健康的一类疾病。帕金森病的临床三大表现包括静止性震颤、运动迟缓、肌强 直和姿势步态障碍等。我国的ro患病率在30?60岁之间的为0. 5%，60岁以上为1 %，80 岁以上人群的发病率超过5%，对老年人健康生活影响极大。随着全世界人口老龄化，对该 病的研究已越来越受到人们的重视。目前临床治疗常用药物为左旋多巴、美多巴等，但因其 不良反应如"开关效应"等应用受到限制。
[0003] 心脑欣胶囊为三普药业股份有限公司产品，国药准字Z20025866,主治益气养阴、 活血化瘀，但治疗帕金森病症还未见报道。
【发明内容】
[0004] 发明目的：本发明的目的在于提供心脑欣胶囊的一种新用途。
[0005] 技术方案：本发明公开了心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用。
[0006] 上述心脑欣胶囊，可以由重量份数为3?6份的红景天，5?15份的枸杞，3?9 份的沙棘组成。
[0007] 有益效果：本发明证实心脑欣对帕金森小鼠行为学的改善较明显，显著提高模型 小鼠脑纹状体DA和HVA含量及黑质区TH阳性表达。心脑欣胶囊各剂量组显著改善帕金森 小鼠的运动症状，有效地提高脑纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1为LC-MS/MS法测定纹状体内DA含量（A为标准品图谱，B为样品图谱）；
[0009] 图2为LC-MS/MS法测定纹状体内HVA含量（A为标准品图谱，B为样品图谱）； [0010]图3为心脑欣胶囊对MPTP致小鼠脑黑质TH阳性表达的影响（注：A?F分别 是空白组，模型组，美多巴组，心脑欣胶囊低、中、高剂量组）；
[0011] 图4为心脑欣胶囊对C57BL/6小鼠TH阳性表达累积光密度的影响（注：与空白组 相比，#P〈〇. 05, ##P〈0. 01 ;与模型组相比，*P〈0. 05, #P〈0. 01。）
【具体实施方式】
[0012] 实施例1 :
[0013] 心脑欣胶囊由重量份数为3份的红景天、5份的枸杞和3份的沙棘混合而成。
[0014] 实施例2 :
[0015] 心脑欣胶囊由重量份数为4份的红景天、10份的枸杞和6份的沙棘混合而成。
[0016] 实施例3:
[0017] 心脑欣胶囊由重量份数为5份的红景天、12份的枸杞和8份的沙棘混合而成。
[0018] 实施例4:
[0019] 心脑欣胶囊由重量份数为6份的红景天、15份的枸杞和9份的沙棘混合而成。
[0020] 实施例5 :
[0021] 心脑欣胶囊治疗帕金森症的动物实验
[0022] 1 材料：
[0023] 1.1药物心脑欣胶囊由三普药业提供，批号120803;多巴丝肼片（左旋多 巴200mg+卞丝肼50mg/片），批号：SH1574,上海罗氏制药有限公司；1-甲基-4-苯 基-1，2, 3, 6-四氢吡啶（MPTP)，多巴胺（DA)，高香草酸（HVA)，兔酪氨酸羟化酶（TH)多克隆 抗体均购自美国sigma公司。
[0024] 1. 2 仪器AcquityUPLC/QuattroPremierXEmiromassTechnologies系统， Waters串联四级杆质谱（Waters美国），MasslynxV4. 1工作软件（Waters美国），高速冷 冻离心机，C18 色谱柱（2. 1X100mmi.d.，1. 7XlCT6m;Waters)等。
[0025] 1. 3动物C57BL/6种小鼠，雄性，18_22g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证 号SCXK(苏）2012-0004。动物分笼饲养，保持12h昼夜节律，室温22±1°C，自由饮水摄食。
[0026] 1.4溶液的配制磷酸盐缓冲液（PBS)的配制：8.00gNaCl，0.20gKCl，1.44g Na2HP04, 0 . 24gKH2P04溶于800ml的双蒸水中，用HC1调制PH至7. 4,加水定容至1000ml。
[0027] 2 方法
[0028] 2. 1动物分组及造模方法小鼠随机分成6组：心脑欣胶囊低剂量组、中、高剂量组 (167、333、50〇11^/1^)、多巴丝肼片组（12〇11^/1^)，模型组、空白组。除空白组外，每只小鼠 每天腹腔注射20mg/kgMPTP，空白组腹腔注射等体积的生理盐水，连续5d。造模后2d，按 0.lml/10g给药体积灌胃给药；模型组和空白组给予等量的生理盐水，连续给药14d。测定 其给药d7、dl4的行为学变化，小鼠处死后测定神经递质及代谢产物DA、HVA、D0PAC和黑质 TH表达情况。
[0029] 2. 2行为学实验
[0030] 2.2. 1爬杆实验目的是检测模型小鼠肢体运动协调情况。将一直径为25cm的软 木球固定于一根长60cm粗lcm的杆顶端，杆上缠上黑胶带以防打滑，然后将被测小鼠头向 下放到小球上，并记录小鼠从杆顶上下来所需要的时间。
[0031] 2.2.2旷场实验目的是测定模型小鼠自主活动次数。将小鼠放入开野测定盒内， 适应2min，测之后4min内小鼠穿格次数和直立次数，并作统计学分析。每测一只小鼠后，清 理干净盒内小鼠排泄物，再进行测定。
[0032] 2. 2. 3游泳实验评分目的是测定模型小鼠肢体运动协调情况。将受试小鼠放入一 个2500ml规格的烧杯中，加水至水高度16cm，水温为25°C?30°C。评分标准如下：在受试 时间内能连续不断游泳者记3. 0分；大部分时间游泳仅偶尔漂浮者记2. 5分；漂浮时间占 整个受试时间50%以上者记2. 0分；偶尔游泳者记1. 5分；偶尔用后肢游动者并漂浮在一 边者记1. 0分。最后计算得分情况。
[0033] 2. 3对神经递质及代谢产物DA，HVA含量的影响
[0034]在行为学测试后每组取3只小鼠处死。断头取脑，于冰扳上剥离纹状体，液氮保 存。取组织按1:15加入混合溶液（lmol/LK2HP04:lmol/LKH2P04 = 80:20)于冰浴中充分 匀浆混匀，加入匀浆液体积一半的10%HCL04。充分涡旋后，在4°C以12000rpm离心15min后精密吸取上清液，用10m〇l/LNaOH调节PH至7. 0保存在-80°C待测。
[0035]流动相：水（含0? 5%。的甲酸）一乙腈（82:18)，流速：0? 8mL?min-1，柱温为常温， 进样20ul，采用LC-MS/MS法测定DA，HVA含量，用MasslynxV4. 1工作软件分析结果。
[0036] 2. 4对小鼠中脑组织形态学的影响：
[0037] 2. 4. 1灌注：各组动物用水合氯醛麻醉后后迅速左心室插管（黑色头皮针），剪开 右心耳使回心血液流出，接入注射器lOOmLPBS快速左心灌注后，之后用100ml4%多聚甲酵 溶液注射器快速左心灌注固定，此时可见小鼠出现颤抖和尾巴翅起表示灌注成功，待快速 灌注完成时完整取出脑组织，置于10%福尔马林中固定24小时。
[0038] 2.4.2免疫组化：取黑质区域不同部位于冰冻切片机作连续冠状切片，片厚 30um，孵以兔抗TH多克隆抗体，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法进行染色，光 镜下观察采图。采集的图像用ImageProPlus6.0图像分析系统对
[0039] TH阳性表达进行分析。
[0040] 2. 5统计学处理
[0041] 所有数据以均数土标准差G土d表示，采用t检验对实验数据统计分析，P〈0. 05 为有统计学意义。
[0042] 3 结果
[0043] 3. 1对MPTP致小鼠的行为学影响
[0044] 3. 1. 1爬杆实验：
[0045]如表1所示，致模后模型组小鼠明显比空白组小鼠的的爬杆时间慢（P〈0. 05)， 表示小鼠的肢体协调能力已出现显著性减退。多巴丝肼片组小鼠爬杆时间比模型组有明 显的缩短（P〈〇. 05)，心脑欣低、中剂量组对小鼠爬杆时间也有显著的减少作用（P〈0. 05， P〈0. 05)，高剂量组对爬杆时间也有减少作用。
[0046] 表1心脑欣胶囊对MPTP致ro小鼠爬杆时间的影响（I土 &n= 10)
[0047]
【权利要求】
1. 心脑欣胶囊在制备治疗帕金森药物中的应用。
2. 权利要求1所述的心脑欣胶囊，其特征在于，由重量份数为3?6份的红景天，5? 15份的枸杞，3?9份的沙棘组成。
【文档编号】A61K36/815GK104257876SQ201410276266
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年6月19日 优先权日:2014年6月19日
【发明者】史公权, 邹存生, 马俊仓 申请人:三普药业有限公司