小檗碱用于制备抑制食欲的药物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物医药和生理学领域，公开了小檗碱在制药方面应用，具体是将小檗碱用于制备抑制食欲的药物，尤其是用于减少糖尿病或肥胖症患者进食量。小檗碱副作用小，又能够降低血糖血脂，为2型糖尿病和肥胖症治疗提供了新的方向。
【专利说明】小檗碱用于制备抑制食欲的药物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药和生理学领域，具体为小檗碱在制药方面应用，尤其是用于 制备抑制食欲的药物。
【背景技术】
[0002] 随着人们生活水平的不断提高，肥胖及其相关性疾病如2型糖尿病（T2DM)、心脑 血管病等这些以前常见于西方发达国家的与能量代谢相关的疾病现在越来越成为威胁中 国人群健康的重要疾病。据统计，目前中国成年人中超重和肥胖的发病率分别为30. 6%和 12.0%。如此高的发病率以及各种严重的并发症，使得对肥胖的防治已然成为一项全民性 问题。
[0003] T2DM患者很容易并发高血压和动脉粥样硬化等大血管病变以及视网膜和肾脏等 微血管病变，这些并发症成为2型糖尿病患者致残、致死的主要原因。另外，T2DM患者大多 数伴有肥胖（腹型肥胖）和高血脂。这两种伴随症状的存在会加速2型糖尿病并发症的出 现。因此，目前临床医生在有效控制T2DM患者血糖的同时会积极治疗肥胖和高血脂。
[0004] 肥胖是遗传因素和环境因素共同作用的结果，是由机体能量摄入超过能量消耗所 造成。肥胖与T2DM有着密切的关系。研究证实肥胖本身即可引起胰岛素抵抗，而肥胖引 起的机体慢性低度炎性状态又直接影响了胰岛功能和胰岛素信号传递。虽然这两种常见 的代谢性疾病在发病原因上密切相关，但目前临床对于这两种疾病的常规治疗仍是各自为 政、分而治之。根据热力动力学，任何治疗肥胖的手段必须能降低能量摄入，有效地增加能 量的消耗，二者有一或二者兼顾。原则虽然看起来很简单，但肥胖的治疗仍旧充满着挑战。 目前在临床上所被接受的治疗肥胖的方案包括节食、运动、减少卡路里摄入及吸收的药物 治疗，以及对极度肥胖患者的外科手术治疗。不幸的是，仅有一小部分人通过节食和运动 能维持长期的体重减轻，此外，虽然手术治疗效果明显，但手术的风险还是让很多人忘而却 步。许多抑制食欲的药物因未达到审批标准或上市后发现严重的不良反应被撤出。大麻 素-受体拮抗剂利莫那班（rimonabant)因为增加抑郁，焦虑风险未能被美国食品和药品 管理局（FDA)批准并从欧洲市场上撤回，该类药物失败的经验告诉我们，饱食中枢与脑部 其它调节中枢交错在一起，因而在应用上可能会带来精神及心理方面难以预料的副作用另 夕卜，5-羟色胺系统激动剂西布曲明和芬氟拉明也由于不可接受的副作用及缺乏充分的长期 临床有效性的验证，在临床上被限制使用。另外，近年筛选研发新型降糖药物时除注意药物 本身的副作用外，对体重、血脂等代谢指标的作用也成为一个重要的衡量因素，比如肠胰高 血糖素样肽（GLP-1)通过抑制胃肠道蠕动和胃液分泌，抑制食欲及摄食，延缓胃内容物排 空等来降低患者体重，可减轻体重、降低血脂、降血压及保护神经。
[0005] 小檗碱（Berberine，BBR)又名黄连素，是从我国传统中药黄连中提取出来的一种 季胺类生物碱。黄连用于治疗消渴症在我国医药典籍中早有记载。而BBR为黄连的主要成 分一直以其抗感染作用应用于临床。研究证实BBR不但具有较广的抗菌谱，而且对病毒和 真菌感染也有一定作用。上世纪80年代，我国临床工作者在应用BBR治疗胃肠道感染性疾 病过程中发现BBR具有降低血糖的作用，应用BBR治疗T2DM的研究并取得了较好的疗效。 研究结果还显示BBR通过稳定低密度脂蛋白受体（LDLR) mRNA来促进LDLR表达进而降低血 月旨，这一机制与目前临床广泛应用的他汀类药物作用机理完全不同。2006年韩国首尔国立 大学的研究人员发表在《Diabetes》上的文章指出，小檗碱通过作用于AMPK改善糖尿病小 鼠的糖脂代谢并且能够减轻肥胖小鼠体重。
【发明内容】
[0006] 本发明旨在提供小檗碱在制备药物方面的应用。
[0007] 小檗碱可以用作制备抑制食欲的药物。优选的，小檗碱用于制备减少糖尿病患者 或肥胖症患者进食量的药物。更优选的，小檗碱可以用于制备减少2型糖尿病患者或肥胖 症患者进食量的药物。
[0008] db/db小鼠 （diabetes mouse)是一种瘦素受体缺陷的糖尿病小鼠模型，由C57BL/ KsJ近亲交配株常染色体隐性遗传衍化而来，属II型糖尿病模型，表现为3-4周龄时开始出 现肥胖，同时伴有血糖升高。随着周龄的增长肥胖和糖尿病症状逐渐加重，最后可因酮症酸 中毒而死亡，是糖尿病药理实验和糖尿病机制研究中常用的小鼠模型。本发明中，以db/db 小鼠为模型，将实验小鼠随机分为BBR干预组和空白溶剂对照组，通过观察两组小鼠的体 重、摄食量、血糖代谢指标的变化探讨BBR对肥胖机体代谢的影响作用。
[0009] 结果发现，小檗碱可以明显抑制肥胖小鼠的体重增长，并且减少肥胖小鼠进食量。 也就是说，小檗碱能够抑制肥胖糖尿病小鼠的食欲。
[0010] 因此，小檗碱能够用作制备抑制食欲的药物，尤其是制备减少糖尿病患者或肥胖 症进食量肥胖症进食量的药物。
[0011] 本发明通过对小檗碱的研究，提供了小檗碱新的医药用途，这种抑制食欲的药物 副作用小，又能够降低血糖血脂，为2型糖尿病和肥胖症治疗提供了新的方向。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1为实施例1中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的体重
[0013] 图2为实施例1中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的平均摄食 量
[0014] 图3为实施例2中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的随机血糖
[0015] 图4为实施例2中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的胰岛素耐 量测试结果
[0016] 图5实施例2中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠进行腹腔注射 葡萄糖耐量试验血糖结果
[0017] 图6为实施例2中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的腹腔注射 葡萄糖耐量试验中血清胰岛素水平
[0018] 图7实施例2中小檗碱干预组（BBR)和溶剂对照组（Vechile)小鼠的丙酮酸耐量 试验结果
【具体实施方式】
[0019] 所使用的小鼠为：8周龄雄性、健康SPF级C57bl/Ksj_db/+m Leprdb(db/db)小鼠， 购于南京大学模式动物研究所。
[0020] db/db小鼠饲养条件：环境温度为22±0. 5°C，12小时/12小时明暗交替。
[0021] 普通饲料由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，基本组成：鱼粉、小麦、玉米、 豆柏、植物油、奶粉、苜蓿草粉、各种维生素、矿物质、必需氨基酸等。普通饲料热量组成为碳 水化合物占65 %、蛋白质22 %、脂肪5 %、纤维和其它成份8 %。每1克饲料含热量3. 3Kcal。
[0022] 实验数据用均数土标准误表示，BBR干预组小鼠与空白溶剂对照组小鼠对比， *Ρ〈0· 05, **p < 0· 01BBR, ***p < 0· 001, η = 5。
[0023] 实施例1小檗碱对db/db小鼠进食量和体重的影响
[0024] 经普通饲料适应性饲养一周后，将db/db小鼠随机分成溶剂对照组（Vehicle)和 小檗碱干预组（BBR)两组，并按体重、空腹血糖校准。分组后开始给予药物干预，小檗碱干 预组给予Smg+kg-Scf 1小檗碱注射液腹腔注射，空白溶剂对照组给予腹腔注射对照溶剂。
[0025] 小檗碱注射液配制：将DMS0用超声仪超声处理15min，再加入聚乙二醇（PEG) 400， 经超声仪超声处理15min后再加入生理盐水，然后再超声15min以此作为对照溶剂 (Vehicle)，其中DMS0、聚乙二醇和生理盐水的体积比为1 :20 :79。将小檗碱溶于上述溶剂 中搅拌混勻制成BBR混悬液。
[0026] 小鼠进食量计算：每日称取小鼠进食后所剩食物重量，用前一日投食量减去所剩 适量计算每日进食量。
[0027] 实验过程中，从开始给药第一天起，每天称量小鼠的体重与食物重量。两组小鼠给 药前体重无明显差异，给药第7天时两组小鼠体重开始出现差异，BBR组体重明显低于对照 组（P〈0. 01)，并且随时间变化差异逐渐增大（如图1)。实验中通过对两组小鼠进食量的监 测发现BBR组的平均摄食量低于对照组，差异具有统计学意义。（P〈0. 001，如图2)。
[0028] 我们的实验结果显示，BBR能够明显抑制肥胖小鼠的体重增长。虽然BBR处理组 小鼠体重明显低于对照组小鼠，但与实验开始时相比BBR干预组小鼠自身体重并没有明显 降低，这可能与实验动物的年龄有关。在db/db小鼠9周龄时开始BBR干预，而这时期小鼠 正处于身体生长期，因此BBR对小鼠主要表现为抑制体重增长。
[0029] 实施例2
[0030] 分别于给药前（0周）、给药1周、2周、3周和4周检测小鼠随机血糖胰岛素。结果 显示，如图3所示，在给药前两组小鼠随机血糖没有明显差异，但随着实验进展对照组小鼠 的血糖逐渐升高，而BBR处理组（小檗碱干预组）小鼠血糖测呈现出逐渐下降的趋势，在给 药2周时两组小鼠血糖经统计学分析有了显著性差异，3周和4周时差异逐渐增大。
[0031] 给药后第2周时进行胰岛素耐量试验（ITT):小鼠禁食6h后，腹腔注射胰岛素 (2U/Kg体重），分别于0、15、30、45、60、90及120min通过尾静脉采血，应用美国强生公司血 糖仪（One Touch)测取血糖值。
[0032] 在注射胰岛素后，BBR干预组小鼠各个监测时间点的血糖均明显低于对照组小鼠 (图4)。这说明db/db小鼠对胰岛素的敏感性在经BBR干预后得到了改善。
[0033] 给药第3周时行腹腔注射葡萄糖耐量试验（IPGTT)，并眼眶取血测血清胰岛素水 平。葡萄糖耐量实验（IPGTT):小鼠禁食12-16h后，腹腔注射葡萄糖（2g/Kg体重），分别于 0、15、30、45、60、90、120及180min检测小鼠血糖。血清胰岛素检测通过眼睛窦静脉丛采血 方式进行，分别于0、30及60min时间点采血，每次采血约20 μ 1。实验结果显示，给予葡萄 糖后BBR处理组小鼠各时间点血糖值均低于对照组小鼠，且血糖达到峰值的时间提前（图 5Α)，两组小鼠血糖的曲线下面积具有统计学差异（图5Β)。在葡萄糖耐量实验中我们分别 于给糖前、给糖30min和60min时采集眼眶静脉血进行血清胰岛素检测，发现在各个时间点 BBR处理组小鼠血清胰岛素水平均明显低于对照组小鼠（图6)。这些结果说明BBR使db/ db小鼠的糖耐量和胰岛素抵抗得到了改善。
[0034] 第4周时进行丙酮酸耐量试验（PTT):小鼠禁食12_16h后，腹腔注射丙酮酸（lg/ Kg体重），分别于0、15、30、45、60、90、120及180min采血测血糖。结果发现BBR干预组小 鼠在给予丙酮酸后从60min开始血糖值明显低于对照组小鼠（图7)。这说明BBR对db/db 小鼠肝脏糖异生产生了抑制作用。
【权利要求】
1. 小檗碱用于制备抑制食欲的药物。
2. 小檗碱用于制备减少糖尿病患者或肥胖症患者进食量的药物。
3. 小檗碱用于制备减少2型糖尿病患者或肥胖症患者进食量的药物。
【文档编号】A61K31/4375GK104095848SQ201410286415
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年6月24日 优先权日:2014年6月24日
【发明者】宁光, 张会志, 王卫庆, 张志国 申请人:上海交通大学医学院附属瑞金医院