一种复方泰拉菌素抗菌药物的制作方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，提供了一种复方泰拉菌素抗菌药物，其有效成分为生地榆水提物和泰拉菌素，其剂型为水包油型纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物1～18份、表面活性剂15～40份、助表面活性剂0～20份、泰拉菌素1～20份、油1～20份、蒸馏水20～70份。本发明的纳米乳分布均匀、体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有良好的流动性，服用方便；给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，增强药效、减少药物的用量和使用次数。
【专利说明】一种复方泰拉菌素抗菌药物
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种复方泰拉菌素抗菌药物。
【背景技术】
[0002] 泰拉菌素（Tulathromycin)是一种新近上市且为动物专用的大环内酯类半合成抗 生素，分子式为C 41H7具O12 (分子量806)。我国农业部在2008年第957号公告中首次允许 泰拉菌素在动物生产中使用。泰拉菌素主要用于放线杆菌、支原体、巴氏杆菌、副嗜血杆菌 引起的猪、牛的呼吸系统疾病。具有用量少、一次给药、低残留和动物专用等众多优点。在 我国，大环内酯类药物现行使用较为广泛的是泰乐菌素和替米考星，虽然这2种药物在生 产中都取得了良好的效果，但随着使用时间的延长，我国很多地区出现了不同程度的耐药 性，导致用量不断增大，但治疗效果却在逐步降低，而泰拉霉素药效均强于泰乐菌素和替米 考星等市场广泛使用的大环内酯类药物。因此，泰拉霉素在畜禽生产中使用前景非常广阔， 其残留分析方法研究也显得尤为必要。本品为白色或者类白色粉末，具有高脂溶性和良好 的化学稳定性。
[0003] 生地榆水提物，根中含多种鞣质成分：地榆素（sanguiin) H-1、H-2、H-3， H-4、H-5、H-6、H-7、H-8、H-9、H-10、H-11，1，2,6-三没食子酰-β-D-葡萄糖（1， 2.6- trigalloyl-0-D-glucose)、l，2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖（1，2, 3.6- tetragalloyl-0-D-glucose), 2,3,4,6-四没食子酰-D-葡萄糖（2,3,4, 6-tetragalloyl-D-glucose), 1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖（1,2,3,4, 6-Pentagalloyl_i3 -D- glucose)，6-〇_ 没食子酰甲基-β -D-批喃葡萄糖式（methyl-6 -O-galloyl-β -D-glucopyranoside)，6_〇-双没食子酰甲基-β -D-批喃葡萄糖式（met hyl_6-〇-digalloyl-β -D-glucoPyr- anoside)，4. 6-〇-双没食子醜甲基-β -D-批喃 葡萄糖式（methyl-4,6-di_〇- galloyl- β -D-glucopyranoside)，2, 3, 6-〇-三没食子酰 甲基-β -D-批喃葡萄糖式（methyl-2, 3,6_tri-〇-galloyl- β -D-glucopy- ranoside), 3.4.6- 0-三没食子酰甲基-β -D-批喃葡萄糖式（11161:1171-3,4,6-1：1'；[-0-8311071-0-0-glucopyranoside)，2, 3,4,6-0-四没食子酰甲基-β -D-批喃葡萄糖（methyl-2, 3,4,6-tet ra-O-galloyl-β -D-glucopyranoside)，没食子酸-3-0-β -D- (6'-0-没食子酰)-批喃葡 萄糖式[gallic acid-3-0_i3-D-(6，-0-gal loyl)-glu_ (30卩50^]1〇81(16]，3,4,3，-三-0-甲 基并没食子酸（3,4,3' -tri-〇-methy lellagic- acid)，地偷酸双内酯（sanguisorbic acid dilactone)。还含有2种没食子酰金缕梅糖衍生物：5, 2'-双-0-没食子酰金缕梅糖 (5, 2' -di-〇-galloylhama- melose)，2'，3, 5-三-〇-没食子酰-D-呋喃金缕梅糖。
[0004] 药理作用： 1)收敛作用，地榆含有鞣质，具有收敛作用，能止泻和止血。外用炒地榆粉，对兔及狗的 Π 度、III度实验性烫伤面有显著收敛作用，能使渗出减少、感染及死亡率降低，但从地榆中 提取出的鞣质或市售之鞣酸，对烧伤的疗效均不如地榆粉，提示地榆治疗烧伤的有效成分 除了所含鞣质外，尚有其他因素参与。地榆对去神经组织上的烧伤的疗效比没有去神经组 织上的疗效稍差。
[0005] 2)抗菌作用，体外实验证明：地榆100%的煎液对伤寒杆菌、脑膜炎双球菌、福氏 痢疾杆菌、宋内痢疾杆菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、大 肠杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、绿脓杆菌、霍乱弧菌及人型结核杆菌均有不同程 度的抑制作用，对某些真菌亦有不同程度的抑制作用。煎剂在〇. 5mg/ml时对亚洲甲型流感 病毒有效。
[0006] 3)抗炎作用，地榆对甲醛性足跖肿胀小鼠巴豆油性耳壳肿胀有明显的抑制作用； 对前列腺素 E引起的皮肤微血管通透性亢进，地榆有很强的抑制作用；尚能抑制大鼠棉球 肉芽肿的增生，并能促进伤口愈合。
[0007] 4)止血作用，生地榆、水提物、地榆炭、地榆制剂均有制血作用。地榆水提物可使出 血时间明显缩短。地榆炭煎剂给家兔口服能使凝血时间明显缩短；给小鼠腹腔注射可使出 血时间缩短；蛙后肢灌流试验可见血管收缩。有报告指出，地榆加热炮制可使其鞣质含量降 低，止血作用减弱。由于地榆的止血作用主要与鞣质有关，因此报告者建议在用于治疗出血 为主的疾病时以生品为好，并建议以鞣质含量为地榆的质量标准。
[0008] 5)对心脏和血压的作用，地榆煎剂低浓度可使离体蛙心收缩加强，频率减慢，心 脏排出量增加，高浓度则呈抑制作用。对麻醉兔有暂时性的轻度降压作用。
[0009] 6 )其他作用，地榆煎剂低浓度使离体兔肠收缩减弱，高浓度则使收缩加强，甚至呈 痉挛状态。煎剂给鸽灌服3g/kg，每日2次，共服4次，对静脉注射洋地黄引起的呕吐有止 吐作用，表现为呕吐次数减少；但狗服5g/kg，共服2次，对静脉注射阿朴吗啡引起的呕吐无 效。鲜地榆注射液有升高白细胞的作用。地榆水提取物给胃瘘手术后的大鼠口服，能显著 增加其对蛋白质的消化能力。
[0010] 泰拉菌素常用的给药方式是皮下注射和肌肉注射，口服给药会出现低度急性毒 性，静脉注射给药会出现中度的毒性。因此，已经上市的泰拉菌素制剂主要是注射剂(瑞可 新)。生地榆水提物虽然能够被口服吸收，但却存在作用缓慢的缺陷。可见，两者的现有剂 型均有不足之处。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的旨在提供一种复方泰拉菌素抗菌药物。
[0012] 基于上述目的，本发明采取了以下技术方案： 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其有效成分为生地榆水提物和泰拉菌素。
[0013] 优选的，复方泰拉菌素抗菌药物剂型为水包油型纳米乳。
[0014] 进一步优选的，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物1?18份、表面活性剂 15?40份、助表面活性剂0?20份、泰拉菌素1?20份、油1?20份、蒸馏水20-70份。
[0015] 进一步优选的，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物1?12份、表面活性剂 20?35份、助表面活性剂1?12份、泰拉菌素5?15份、油5?20份、蒸馏水25-65份。
[0016] 进一步优选的，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物8. 7份、表面活性剂28份、 助表面活性剂4份、泰拉菌素9. 4份、油14份、蒸馏水35. 9份。
[0017] 优选的，表面活性剂为：聚氧乙烯40氢化蓖麻油（RH40)、蓖麻油聚氧乙烯醚 40 (EL40)、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物。
[0018] 优选的，助表面活性剂选自乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400和丙三醇。
[0019] 优选的，油选自大豆油、肉桂醛、甲酸乙酯、油酸乙酯、脂肪酸甘油脂、蓖麻油、菜籽 油、亚油酸、丁酸乙酯、肉豆蘧酸异丙酯、乙酸乙酯和油酸。
[0020] 进一步优选的，所述油为肉桂醛。
[0021] 本发明的纳米乳通过以下步骤制得：取泰拉菌素、表面活性剂和助表面活性剂，搅 拌均匀，然后向其中缓慢滴入含有生地榆水提物的水溶液。随着水溶液量的增加，体系黏稠 度增大，当加入水溶液的量使体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠 的状态变稀，此时产生的即是无色透明的复方泰拉菌素纳米乳。也可先取少量水将生地榆 水提物溶解，将其加入体系后再加入剩余的水。制成纳米乳后可制成口服液直接服用、也可 经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。
[0022] 生地榆水提物可通过传统水煎法提取获得。
[0023] 纳米乳（nanoemulsion)又称微乳（microemulsion)，是由水、油、表面活性剂和助 表面活性剂等自发形成，粒径为1?IOOnm的热力学稳定、各向同性，透明或半透明的均相 分散体系。一般来说，纳米乳分为三种类型，即水包油型纳米乳（0/W)、油包水型纳米乳（W/ 〇)以及双连续型纳米乳（B.C)。纳米乳具有许多其它制剂无可比拟的优点：①为各向同性 的透明液体，属热力学稳定系统，经热压灭菌或离心也不能使之分层；②工艺简单，制备过 程不需特殊设备，可自发形成，纳米乳粒径一般为1?IOOnm ;③黏度低，可减少注射时的疼 痛；④具有缓释和靶向作用；⑤提高药物的溶解度，减少药物在体内的酶解，可形成对药物 的保护作用并提高胃肠道对药物的吸收，提高药物的生物利用度。
[0024] 本发明在药物中加入刺激性小的助表面活性剂如乙醇、1，2-丙二醇、丙三醇或聚 乙二醇400,除了助溶作用外，助表面活性剂主要是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值 (HLB)，使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界 面膜中，促进曲率半径很小膜的形成，扩大纳米乳的乳区面积。
[0025] 本发明的纳米乳通过口服给药，极大的提高了泰拉菌素的溶解度，减少药物在体 内的首过效应，促进泰拉菌素的的胃肠道吸收，并创新性的将水溶性药物和脂溶性药物有 机的结合起来，提高了药物的治疗能力。泰拉菌素为脂溶性植物油，人体对药物的转运及吸 收极其困难，纳米乳基质为泰拉菌素提供良好的溶解环境，口服时可经淋巴吸收，克服首过 效应和分子通过胃肠道时的屏障。通过加入泰拉菌素，另一方面还提高了生地榆水提物的 抗菌能力，使抗菌更稳定、效果更好。
[0026] 本发明具有以下优点： 1.本发明的纳米乳的药物粒径在17. 1?56. 4nm之间，平均粒径为33. 8nm，是将泰拉 菌素中加入表面活性剂和助表面活性剂，用溶解有生地榆水提物的水溶液滴定到均匀、透 明的纳米乳体系。
[0027] 2.本发明的纳米乳分布均匀、体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，具有良好 的流动性，服用方便。
[0028] 3.本发明的纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒 定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，增强药效、减少药物的用量和使用次 数。
[0029] 4.本发明的纳米乳制备方法简单，药效稳定，耗能低。
【专利附图】
【附图说明】
[0030] 图1为本发明实施例1的纳米乳透射电镜照片； 图2为本发明实施例1的纳米乳粒径分析。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明： 实施例1 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 8. 7份、EL40 (表面活性齐[J)28份、乙醇(助表面活性剂)4份、泰拉菌素9. 4份、肉桂醛14份、 蒸馏水35. 9份。
[0032] 精确称取泰拉菌素9.4g、肉桂醛14g、EL40 28g和乙醇4g在室温（25°C)条件下 搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入溶解有生地榆水提物的蒸馏水。随着水溶液量的增加，体 系黏稠度增大，当加入水溶液的量使体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从 最粘稠的状态变稀，此时产生的即是无色透明的复方泰拉菌素纳米乳，此时加入水的量为 35. 9g、生地榆水提物为8. 7g。
[0033] 实施例2 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为1.6份、EL40 32份、1，2_丙二醇3份、泰拉菌素7. 9份、大豆油13份、蒸馏水42. 5份。 [0034] 其制备方法参照实施例1。
[0035] 实施例3 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为5. 3份、RH40 20份、丙三醇14份、泰拉菌素7. 7份、脂肪酸甘油脂14份、蒸馏水39份。
[0036] 其制备方法参照实施例1。
[0037] 实施例4 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为7. 1份、RH40 27份、乙醇3份、泰拉菌素7. 1份、乙酸乙酯12份、蒸馏水43. 8份。
[0038] 其制备方法参照实施例1。
[0039] 实施例5 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为4. 7份、吐温80 27份、丙三醇9份、泰拉菌素5. 5份、丁酸乙酯10份、蒸馏水45. 8份。
[0040] 其制备方法参照实施例1。
[0041] 实施例6 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为4. 7份、泊洛沙姆188 26份、PEG400 10份、泰拉菌素6. 4份、亚油酸16份、蒸馏水36. 9 份。
[0042] 其制备方法参照实施例1。
[0043] 实施例7 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为1份、吐温80 22份、PEG400 1份、泰拉菌素5份、肉豆蘧酸异丙酯1份、蒸馏水70份。
[0044] 其制备方法参照实施例1。
[0045] 实施例8 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为12份、泊洛沙姆188 35份、丙三醇4份、泰拉菌素15份、菜籽油6份、蒸馏水28份。 [0046] 其制备方法参照实施例1。
[0047] 实施例9 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为18份、RH40 35份、1，2-丙二醇2份、泰拉菌素16份、油酸5份、蒸馏水24份。
[0048] 其制备方法参照实施例1。
[0049] 实施例10 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其剂型为纳米乳，纳米乳的重量份组成为：生地榆水提物 为6. 2份、EL40 16份、乙醇1份、泰拉菌素20份、大豆油5. 3份、蒸馏水51. 5份。
[0050] 其制备方法参照实施例1。
[0051] 实施例11试验例 11. 1粒径分析 在透射电子显微镜下对实施例1-10进行观察，发现液滴呈类球形，分散性好，无粘连。 图1是对实施例1的复方泰拉菌素抗菌药物纳米乳的投射电镜照片，实施例1经马尔文粒 度分析仪检测（图2)，检测结果如图2,从图中可以看出，纳米乳粒径主要分布在17. 1? 56. 4nm之间，平均粒径为33. 8nm。
[0052] 稳定性分析 取实施例1-10的纳米乳产品分别进行离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观 察本发明复方泰拉菌素抗菌药物纳米乳的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析 出等不稳定现象。
[0053] 高速离心试验 取适量制备好的各实施例样品于离心管中，以15000r/min的转速离心10 min，离心 试验后，对各实施例样品进行观察，发现各实施例样品依然保持离心前的澄清透明，未见分 层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
[0054] 光稳定性试验 将适量制备好的各实施例样品装入无色、透明小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件 下l〇d，分别于1(1、2(1、4(1、6(1、8(1、10(1取样观察。结果表明，在10(1观察期间内，各实施例样 品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。
[0055] 温度稳定性试验 取各实施例样品，每个实施例样品分三份，装入无色透明玻璃瓶中，密封，将各分样品 放置于4°C、室温（25°C )和40°C三种温度条件下，留样考察30d，每隔5d取样观察。结果表 明，各实施例样品在三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定 现象。
[0056] 长期稳定性试验 取各实施例样品，每个实施例样品分三份，装入棕色玻璃瓶内，密封，置于（25±2) °C、 相对湿度（60±5)%条件下12个月，分别于0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状 及含量变化，基于回归分析的药品有效期测算方法，计算复方泰拉菌素抗菌药物纳米乳的 有效期。试验结果表明，在长期试验条件下，复方泰拉菌素抗菌药物纳米乳的外观一直保持 澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的生地榆水提物和泰拉菌素含量 随时间延长而逐渐降低，其含量一时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方泰拉菌 素抗菌药物纳米乳的有效期为39. 15个月（以时间短者为标准)。
[0057] 毒性试验 毒理研究项目及结论： 以市售泰拉菌素片剂为对比药剂，按照新药非临床安全性评价方法进行急性毒性试 验，重复给药毒性试验、遗传毒性试验(包括Ames试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳 动物细胞染色体突变试验)、生殖毒性试验(一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产 期毒性试验)、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下： 本品对小鼠急性毒性实验结论：与市售泰拉菌素片剂对比，复方泰拉菌素抗菌药物纳 米乳未出现计量内不良反应及死亡。
[0058] 本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性 试验的结果均为阴性。
[0059] 大鼠 30d喂养本发明产品的结果表明：与市售泰拉菌素片剂对比，在试验期内， 复方泰拉菌素抗菌药物纳米乳计量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、 血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。
[0060] 本品长期毒性实验结论：与市售泰拉菌素片剂对比，在试验期内，复方泰拉菌素 抗菌药物纳米乳计量内，本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标 均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。
[0061] 药效对比 11.4. 1体外抑菌试验 对实施例1所制得的纳米乳进行抑菌圈试验，同时，以泰拉菌素片组、生地榆水提物和 简单混合组做对比试验，泰拉菌素片组、生地榆水提物和简单混合组的有效含量与纳米乳 组的有效含量均相同。
[0062] 抑菌圈试验具体步骤：在分别涂有不同来源的大肠杆菌（A-D)的琼脂平板上，将 含有各组抗菌药物的药敏片贴在不同的平板上，置37°C恒温培养箱中培养24h，观察抑菌 情况并测定抑菌圈大小，结果见表1所示。
【权利要求】
1. 一种复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，其有效成分为生地榆水提物和泰拉菌素。
2. 根据权利要求1所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述抗菌药物剂型为 水包油型纳米乳。
3. 根据权利要求2所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述纳米乳的重量份 组成为：生地榆水提物1?18份、表面活性剂15?40份、助表面活性剂0?20份、泰拉菌 素1?20份、油1?20份、蒸馈水20?70份。
4. 根据权利要求3所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述纳米乳的重量份 组成为：生地榆水提物1?12份、表面活性剂20?35份、助表面活性剂1?12份、泰拉菌 素5?15份、油5?20份、蒸馈水25?65份。
5. 根据权利要求4所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述纳米乳的重量份 组成为：生地榆水提物8. 7份、表面活性剂28份、助表面活性剂4份、泰拉菌素9. 4份、油14 份、蒸馏水35. 9份。
6. 根据权利要求3-5任一所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述表面活性 剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种 或与span80的混合物。
7. 根据权利要求3-5任一所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述助表面活 性剂选自乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400和丙三醇。
8. 根据权利要求3-5任一所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述油选自大 豆油、肉桂醛、甲酸乙酯、油酸乙酯、脂肪酸甘油脂、蓖麻油、菜籽油、亚油酸、丁酸乙酯、肉豆 蘧酸异丙酯、乙酸乙酯和油酸。
9. 根据权利要求8所述的复方泰拉菌素抗菌药物，其特征在于，所述油为肉桂醛。
【文档编号】A61K47/10GK104288280SQ201410560971
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月21日 优先权日:2014年10月21日
【发明者】孙江宏, 阮心洁, 高贵超 申请人:河南牧翔动物药业有限公司