包含24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的组合物及其在调血脂、制备HMG-CoA抑制剂上的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种由24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物，及其在调血脂和制备HMG-CoA还原酶抑制剂中的应用。24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B 组成的组合物的重量比为1:0.5~15，优选为1:3。此组合物比同等剂量下单一使用24-乙酰泽泻醇A或23-乙酰泽泻醇B或现有技术中披露的此两单体的组合物具更好的调血脂作用；且24-乙酰泽泻醇A或23-乙酰泽泻醇B均对脂代谢关键酶HMG-CoA还原酶具抑制作用，本发明首次披露此两者的组合物对该酶的抑制作用强于单体，故本发明同时提供包含此组合物的HMG-CoA还原酶抑制剂。
【专利说明】包含24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B的组合物及其 在调血脂、制备HMG-CoA抑制剂上的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药有效成分组合物，具体涉及23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽 泻醇A组合物在调血脂及制备三羟基三甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂上的应用。
【背景技术】
[0002] 脂质代谢紊乱包括胆固醇（TC)异常、富含甘油三脂（TG)的脂蛋白代谢异常、高密 度脂蛋白代谢（HDL-C)异常。研究表明，脂蛋白代谢酶生物活性的改变会引起脂质代谢的 变化，导致脂质代谢紊乱而引发高脂血症（HLP)。HLP与心脑血管疾病、肾脏疾病的发病率 及死亡率之间存在着明显的相关性。如不有效干预，高脂血症及其相关疾病将会成为影响 人们身体健康的一个重要危险因素。
[0003] 通过调控脂代谢酶的生物活性，已成为目前调脂治疗的主要手段。影响脂质代谢 的酶类主要有HMG-CoA (三羟基三甲基戊二酰辅酶A)还原酶等。HMG-CoA还原酶是体内催 化TC源头合成的关键酶，催化HMG-CoA生成MVA (甲羟戊酸），进一步经鲨烯生成胆固醇。 细胞内过高的FC(游离脂肪酸）水平，激发微粒体ACAT，促进胆固醇酯化，以胆固醇酯（CE) 形式贮存，反馈性抑制HMG-CoA还原酶合成，使胆固醇合成限速酶受抑，从而降低了细胞内 胆固醇合成。因此其活性大小直接影响体内胆固醇含量的高低。
[0004] 目前常用的调脂西药有他汀类药物，为HMG-CoA还原酶抑制剂，其调脂效果良好， 但在经肝脏代谢过程中，可引起胆汁淤积和转氨酶升高等肝脏毒性。中药中含有多种活性 成分作用于多个靶点经整合而产生综合疗效，作用温和而持久，且毒性相对要小。因此从传 统中药寻找低毒高效调脂药物一直是药学工作者长期的目标。中药泽泻为泽泻科植物泽泻 Alisma orientalis(Sam.)Juzep的干燥块莖，具利水、清湿热的功效。在临床和动物实验 中已确切证实具有良好的调脂效果，常用于治疗HLP。药材含量最高的为四环三萜及其衍 生物，即泽泻醇类化合物。大量研究证明，其为泽泻药材的调脂效应物质，24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B等为其主要成分。
[0005] 传统中医认为，中药中所含成分往往通过多种作用机制对疾病起到治疗作用，泽 泻中具有调血脂药理活性的成分有多种，系统研究泽泻中调脂效应物质的不同组合物在治 疗HLP的过程中产生的协同增效作用，寻找调脂作用显著、质量稳定可控的新型药物，具有 重大社会意义和经济价值。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种由23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A组成的组合物 及其在调血脂及其在制备HMG-CoA还原酶抑制剂中的应用，以满足临床应用的需要，具体 内容如下：
[0007] 本发明所述的24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物，重量比为：
[0008] 24-乙酰泽泻醇A :23-乙酰泽泻醇B = 1: 0· 5?15 ;
[0009] 最佳的重量比为：24-乙酰泽泻醇A :23-乙酰泽泻醇B = 1:3 ;
[0010] 同时本发明还提供一种含有上述24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组 合物HMG-CoA还原酶抑制剂。
[0011] 本发明还涉及含有上述24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物的混 合物在调血脂中的应用及在制备HMG-CoA还原酶抑制剂中的应用。
[0012] 本发明还涉及一种泽泻活性成分混合物，其中，包括上述24-乙酰泽泻醇A和 23- 乙酰泽泻醇B组成的组合物，其总含量大于70%，其余为除了 23-乙酰泽泻醇B和 24- 乙酰泽泻醇A外的其他泽泻提取物。
[0013] 本发明提供的药物组合物可与药学上可接受的载体制成汤剂、口服液、冲剂、糖浆 齐IJ、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、滴丸剂、膏剂等剂型的药物。
[0014] 在制成片剂时把该药物组合物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸 镁，混合均匀，然后压片制成片剂。在制成胶囊剂时，把该药物组合物和载体乳糖或玉米淀 粉，混合均匀，整理，然后装胶囊制成胶囊剂。在制成颗粒剂时，把该药物组合物和稀释剂乳 糖或玉米淀粉混合均匀，整理，干燥，制成颗粒剂。
[0015] 本发明中23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A可从泽泻属植物中提取得到，本 属植物在中国有6种，优选为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam. )Juzep.更优选为 泽泻科植物泽泻Alisma orientalis (Sam.) Juzep.的干燥块莖。
[0016] 有益效果
[0017] 本发明的23-乙酰泽泻醇B和24-乙酰泽泻醇A组成的组合物，具显著调理血脂 作用，且对HMG-CoA还原酶具显著抑制作用。该组合物比同等剂量下单一使用23-乙酰泽 泻醇B或24-乙酰泽泻醇A调血脂作用更好，对HMG-CoA还原酶抑制作用更强。
[0018] 具体实施方法
[0019] 下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形 式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0020] 实施例1 24-乙酰泽泻醇A的制备
[0021] 取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis (Sam. ) Juzep.的干燥块莖20kg，10倍量 甲醇冷浸提取4次，低压浓缩，得浸膏1600g。用水分散后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得乙酸乙酯部位785g，正丁醇部位531g。取乙酸乙酯部位450g，采用100-200目硅胶 (2500g)、石油醚-乙酸乙酯体系进行粗分，得25个组分（Frl-Fr25)。Fr20(2. 9g)通过甲 醇/二氯甲烷体系重结晶得到24-乙酰泽泻醇A 800mg，纯度为95% (重量）。
[0022] 实施例2 23-乙酰泽泻醇B的制备
[0023] 取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis (Sam. ) Juzep.的干燥块莖20kg，10倍量甲 醇冷浸提取4次，低压浓缩，得药材浸膏1600g。用水分散后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得乙酸乙酯部位785g，正丁醇部位531g。取乙酸乙酯部位450g，采用100-200目硅胶 (2500g)、石油醚-乙酸乙酯体系进行粗分，得25个组分（Frl-Fr25)。Frl2 (3g)通过C18 柱层析分离后，利用分析HPLC选择合适条件后，经半制备液相（95%甲醇溶液，等度洗脱） 制备得23-乙酰泽泻醇B 770mg，纯度为95% (重量）。
[0024] 实施例3 24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物的制备
[0025] 方法I :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:3混合，得到24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0026] 方法2 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:10混合，得到24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0027] 方法3 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:1混合，得到24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0028] 方法4 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:0. 5混合，得到24-乙酰泽泻醇 A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0029] 方法5 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:5混合，得到24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0030] 方法6 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:0. 05混合，得到24-乙酰泽泻 醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0031] 方法7 :将实施例1和实施例2得到的产品按照1:20混合，得到24-乙酰泽泻醇A 和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物；
[0032] 方法8 :将实施例1中的深褐色泽泻药材浸膏100g，上硅胶柱（500g)，以石油 醚-乙酸乙酯（5:1)洗脱，每150ml为1个流份，以HPLC检测，收集目标流份，回收溶剂，得 到固体2克。采用面积归一法计算含量，含24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B总重量 为78%，两者重量比例为1:3. 3。
[0033] 实施例4含有24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物的片剂、胶囊 剂或颗粒剂的制备
[0034] 称取实施例3的组合物20g，加淀粉20g，微晶纤维素5g，硬脂酸钠0. 5g，混合均 匀，采用本领域技术人员公知的方法，制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0035] 实施例5比较不同组合物对高脂血症小鼠的调血脂作用
[0036] 制备脂肪乳：取2g丙硫氧嘧啶于乳钵中研细，备用。取25g猪油于40°C水浴加热 融化，置乳钵中，加入15g胆固醇、2g丙硫氧嘧啶、Ig糖，充分搅拌，溶解。再徐徐加入浓度 为10 %的胆酸钠水溶液20ml，并不断搅拌，然后加入吐温-8010ml、丙二醇30ml，研磨乳化 均匀，最后加蒸馏水至l〇〇ml。装入密闭容器中，冷藏，使用时先于37°C水浴融化。取176 只ICR小鼠，全部雄性，体重18?22g，依体重随机分为16组，随机选取1组设为正常对 照组，正常喂养，每天上午蒸馏水（IOmL · kg，灌胃；其余动物均用于造模，灌胃脂肪乳剂 (IOmL · kg，，连续五周，灌胃期间均自由摄取常规饲料，末次灌胃后禁食12h(不禁水）， 小鼠眶静脉取血，分离血清，采用随机区组法按血清甘油三酯水平将造模动物均衡分为15 组，分别为：模型组，辛伐他汀组（哈药集团三精制药股份有限公司），23-乙酰泽泻醇B高、 中、低剂量组，24-乙酰泽泻醇A高、中、低剂量组，24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇混合 组：1:10组，1:3组、1:1组，1:0. 5组、1:5组、1:0. 05组、1:20组。混合物制备方法按专利 《泽泻活性成分组合物及其在医药上应用》（申请号：200510040387. 4)中实施例4进行。
[0037] 灌胃给药，阳性组辛伐他汀组每天灌饲0. 64mg · kg、24-乙酰泽泻醇A低剂量组 每天灌饲0. 64mg · kg4,中剂量组每天灌饲I. 28mg · kg4,高剂量组每天灌饲2. 56mg · kg4; 23-乙酰泽泻醇B低剂量组每天灌饲为0. 64mg ?kg'中剂量组每天灌饲为I. 28mg Ag4，高 剂量组每天灌饲为2. 56mg 混和组：1:10组每天灌饲24-乙酰泽泻醇A 0· 06mg *kg ' 23- 乙酰泽泻醇13 0.5811^*1^4，1:3组每天灌饲24-乙酰泽泻醇4 0.1511^*1^'23-乙酰泽 泻醇B 0· 49mg .kg-1，1:1组每天灌饲24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B各0· 32mg .kg-1， 1:0. 5组每天灌饲24-乙酰泽泻醇A 0· 42mg · kg'23-乙酰泽泻醇B 0· 22mg · kg4,1:5 组每天灌饲24-乙酰泽泻醇A 0· I Img · kg'23-乙酰泽泻醇B 0· 53mg · kg4，1: 0· 05组每 天灌饲24-乙酰泽泻醇A 0· 61mg · kg'23-乙酰泽泻醇B 0· 03mg · kg4,1:20组每天灌饲 24- 乙酰泽泻醇A 0· 03mg · kg'23-乙酰泽泻醇B 0· 61mg · kg'
[0038] 各造模组每日上午继续以IOmL · kg4灌胃给予脂肪乳剂，下午各给药组给予相应 药物治疗，连续给药3周。末次给药后禁食12h(不禁水），小鼠眼眶静脉取血，静置放置 20?30min，全血离心取血清，称取肝脏重量，试剂盒法测定TG、HDL-C、TC。
[0039] 造模五周后检测小鼠血清中TG，TC, HDL-C的浓度，比较模型组与空白组小鼠血脂 水平。结果见表1。
[0040] 实验进行了空白组，阳性组，模型组，23-乙酰泽泻醇B高、中、低剂量组，24-乙酰 泽泻醇A高、中、低剂量组，混合物组1:10组，1:3组、1:1组，15组、1:5组、105组、 1:20组的体重、肝重比较，称量数据见表2,结果表明，23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A 及两者混合物均能降低高脂小鼠肝重。
[0041] 空白组，阳性组，模型组，23-乙酰泽泻醇B高、中、低剂量组，24-乙酰泽泻醇A高、 中、低剂量组，混合物组1:10组，1:3组、1:1组，1:0. 5组、1:5组、1:0. 05组、1:20组的血脂 水平比较见表3。
[0042] 表1空白组与模型组血脂水平比较（X 土 S)
[00431
【权利要求】
1. 24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物，其特征在于，重量比为：24-乙 酰泽泻醇A :23-乙酰泽泻醇B =1:0. 5~15。
2. 如权利要求1所述的24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物，其特征 在于，重量比为：24-乙酰泽泻醇A :23-乙酰泽泻醇B =1:3。
3. -种HMG-CoA还原酶抑制剂，其特征在于：含有如权利要求1或2所述的24-乙酰 泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物。
4. 含有权利要求1或2所述的24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物的 混合物在调血脂中的应用。
5. 含有权利要求1或2所述的24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B组成的组合物的 混合物在制备HMG-CoA还原酶抑制剂中的应用。
6. -种泽泻活性成分混合物，包含权利要求1或2所述的24-乙酰泽泻醇A和23-乙 酰泽泻醇B组成的组合物，此组合物的总质量含量大于70%。
7. -种药物组合物，其特征在于：含有如权利要求1或2所述的24-乙酰泽泻醇A和 23-乙酰泽泻醇B组成的组合物或权利要求6所述的泽泻活性成分组合物与一种或多种 药学上可接受的载体或赋形剂制成的临床上任何可接受的剂型形式，包括片剂、胶囊、颗粒 齐U、滴丸剂。
【文档编号】A61K31/58GK104434930SQ201410650790
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】徐飞, 吴启南, 谷巍, 陈军, 顾薇, 房方, 吕翔 申请人:南京中医药大学