含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品。按重量百分比组成如下：稠李花色苷30％-50％，稠李多糖10％-30％，高粱米多肽5％-15％，板栗多肽5％-15％，山药提取物5％-10％、茯苓提取物5％-10％、川芎提取物5％-10％、麦门冬提取物5％-10％。对其所具有的预防老年痴呆功能进行体外实验和动物实验研究，发现该保健品具有预防老年痴呆的活性与功能，可以代替化学合成药物，避免过多的化学合成药物毒副作用，使得稠李花色苷组合物具有更广阔的发展前景，并且成为可以应用于保健品中的新兴成分。
【专利说明】含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品
【技术领域】
[0001] 本发明属于保健品领域，具体的涉及一种具有预防老年痴呆功能的含有稠李花色 苷的保健品。
【背景技术】
[0002] 老年痴呆症，又称阿尔茨海默病（Alzheimer' s disease, AD)，是以认知功能缺失 为核心的综合征，是一种神经退行性疾病，主要表现为渐进性记忆力丧失和认知障碍。老 年痴呆的发病集中于60岁以上的老年人，而中国作为一个即将进入老龄化的国家，其老年 痴呆患者的数目有持续增长的趋势，又由于该病病程长，确诊检验复杂，因此未来一段时间 内，老年性痴呆病的诊断和治疗将是一大挑战。
[0003] 目前，研宄发现，老年痴呆的病因有很多，归根结底与大脑海马区的神经元损伤有 关，患者大脑中与记忆和认知有关的区域产生神经性病变斑块，斑块中主要成分为多肽， 淀粉样肽（Αβ)聚合而成的淀粉样物质和受累于其中的营养不良或变性的神经树突和 轴突，以及一些炎症反应性神经胶质细胞。由于其发病因素涉及很多方面，譬如：乙酰胆碱 前体物，但是存在临床试验效果不佳，或者毒副作用较大等问题。因此，老年痴呆症重在预 防，及时合理补充脑细胞生理所需要的营养物质，能增强大脑的生理功能，从而预防老年痴 呆的发生。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是以东北地区观赏性植物稠李属稠李出发，制备稠李花色苷、稠李 多糖，和其他活性物质混合，提供一种预防老年痴呆的天然保健品。
[0005] 以稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、茯苓提取物、山药提取物、川芎 提取物、麦门冬提取物混合使用作为一种预防老年痴呆的天然保健品，按重量百分比各组 成如下：
[0006] 稠李花色苷30%-50%，稠李多糖 10%-30%，高粱米多肽5%-15%，
[0007] 板栗多肽 5%-15%，山药提取物 5%-10%，茯苓提取物5%-10%，
[0008] 川芎提取物5%-10%，麦门冬提取物5%-10%。
[0009] 本发明涉及的稠李花色苷是由稠李提取的，采用超声波-微波-复合酶酶解分步 法的工艺组合提取稠李花色苷。稠李多糖也是由稠李提取的，采用超声波-微波-复合酶 酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖。高粱米多肽、板栗多肽是酶解高粱米蛋白、板栗蛋白 制备的。
[0010] 采用复合酶酶解-微波-超声波分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用ΑΒ-8大 孔树脂进行静态纯化的步骤如下：
[0011] 1)复合酶酶解提取：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷冻过夜， 在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干 粉溶于水，复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1. 〇% -5. 0%，进行热水浸提，控制温度 为30-70°C，pH范围值3. 0-6. O酶解时间为30min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物 继续进行微波提取；所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0. 5?2的混合；
[0012] 2)微波辅助提取：料液比按质量比1:10-1:15,将酶解后的沉淀物溶于水，微波功 率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超声浸 提；
[0013] 3)超声浸提：料液比按质量比1:10-1:15,将微波后的沉淀物溶于乙醇中，超声波 功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，pH值为2. 0-6. 0,抽滤，提取液备用；
[0014] 4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋 转蒸发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉；
[0015] 5)大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件 是：温度20°C，树脂的添加量为0. 16g/ml ;解析条件是：解吸剂70%乙醇，pH值为3.0,温度 为60 °C，得稠李花色苷干粉。
[0016] 采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下：
[0017] 1)超声浸提：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷冻过夜，在冷 冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中，料液比按质量比 1:10-1:50,控制温度为50-90 °C，pH值5. 0-9. 0,超声波功率为100W-500W，超声时间为 10min-50min，离心，收集提取液继续进行微波提取；
[0018] 2)微波辅助提取：取提取液，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离 心，收集提取液继续进行复合酶酶解；
[0019] 3)复合酶酶解提取：取提取液，加入提取液重量1. 0% -5. 0 %的复合酶，控制温 度为30-60°C，pH 3. 0-6. 0,酶解时间为30min-60min，离心，抽滤，取滤液，滤液旋转蒸发浓 缩，加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖，3000r/min离心后去除上清液，沉淀冷冻干燥，得稠 李粗多糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0. 5?2的混合；
[0020] 4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解，S印hadex G-200层析进行 分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为lml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至 无糖，收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h，冷冻干燥，进行后续实验。用DEAE-32 进一步纯化，磷酸盐缓冲液-水作为流动相，梯度模式进行洗脱，流速为0. 8ml/min，每2ml 收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分。
[0021] 本发明具开创性的技术是将稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、茯苓 提取物、山药提取物、川芎提取物和麦门冬提取物作为一个整体的组合物预防老年痴呆，根 据现代营养学模型合理搭配、科学组合应用，形成具有显著预防老年痴呆混合保健品。
【专利附图】
【附图说明】
[0022] 图1实施例1的组合物对H2O2诱导N 2A细胞损伤保护的荧光显微照片；
[0023] 其中，A :正常组；B :模型组；C :组合物处理1组；D :组合物处理2组。
[0024] 图2实施例1的组合物对H2O2诱导N 2A细胞损伤保护；
[0025] 其中，A :正常组；B :模型组；C :组合物处理1组；D :组合物处理2组。
[0026] 图3实施例1的组合物对H2O2损伤的N 2A细胞内活性氧的影响的荧光显微照片；
[0027] 其中，A:正常神经细胞；B:0. 5mmol/l H2O2处理神经细胞；C:0. 05mg/ml组合物处 理神经细胞。
【具体实施方式】
[0028] 实施例1含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品
[0029] (一）稠李花色苷的制备
[0030] 本实施例采用超声波-微波-混合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用 AB-8大孔树脂进行静态纯化，步骤如下：
[0031] 1)复合酶酶解提取：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷冻过夜， 在冷冻干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水，料液比按质量 比1:30,所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合，复合酶加入量为稠李冻 干粉的总重量的3. 0%，进行热水浸提，控制温度为50°C，pH值为5. 0酶解时间为50min， 6000r/min进行离心lOmin，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行微波提取；
[0032] 2)微波辅助提取：料液比按质量比1:10,将酶解后的沉淀物溶于水中，微波功率 400W，微波时间为40min，6000r/min进行离心lOmin，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超 声浸提；
[0033] 3)超声浸提：料液比按质量比1:10,将微波后的沉淀物溶于60%乙醇中，超声波 功率为400W，超声时间为30min，pH值为4. 0,抽滤，提取液备用；
[0034] 4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋 转蒸发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉；
[0035] 5)大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件 是：温度20°C，树脂的添加量为0. 16g/ml ;解析条件是：解吸剂70%乙醇，pH值为3.0,温度 为60 °C，得稠李花色苷干粉。
[0036] (二）稠李多糖的制备
[0037] 采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过S^hadex G-200层析纯化的步骤如下：
[0038] 1)超声浸提：将稠李果实去柄，破碎，去核，放入零下80°C冰箱冷冻过夜，在冷冻 干燥机中干燥，待干燥之后取出，研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中，料液比按质量比1:30， 控制温度为60°C，pH值7. 0,超声波功率为400W，超声时间为40min，3000r/min进行离心 15min，收集提取液继续进行微波提取；
[0039] 2)微波辅助提取：取超声后的提取液，微波功率400W，微波时间为40min，3000r/ min进行离心15min，收集提取液继续进行复合酶酶解；
[0040] 3)复合酶酶解提取：取微波后的提取液，加入其总重量4. 0%的复合酶，控制温度 为50°C，pH 4. 0,酶解时间为40min，3000r/min进行离心15min，抽滤，滤液旋转蒸发浓缩， 加入4倍体积的95 %乙醇沉淀多糖，3000r/min离心后去除上清液，冷冻干燥，得稠李粗多 糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合；
[0041] 4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解，S印hadex G-200层析进行 分离纯化，用蒸馏水洗脱，流速为lml/min，每2ml收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至 无糖，收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h，冷冻干燥，进行后续实验。用DEAE-32 进一步纯化，磷酸盐缓冲液-水作为流动相，梯度模式进行洗脱，流速为0. 8ml/min，每2ml 收集一试管，用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖，收集含量最多的多糖组分。
[0042](三）高粱米多肽的制备
[0043] 木瓜蛋白酶提取尚梁米多狀步骤如下：
[0044] 1)将高粱米粉碎，按料液比为1:15,在pH为10. 0的氢氧化钠溶液中浸泡3h，提取 温度为50°C，5000r/min离心20min，取上清液，用90%硫酸按进行沉淀，再次离心，分离得 到沉淀，进行冷冻干燥得到高粱米蛋白；
[0045] 2)将高粱米蛋白配成8%的水溶液，pH调节为6. 5,酶活添加量为6000u/g料，温 度为60°C，提取时间为3h，然后沸水浴IOmin灭酶，3500r/min离心15min，取上清，纯净水 透析、采用截留分子量为IOkDa超滤板超滤后进行冷冻干燥，得到高粱米多肽粉末。
[0046] (四）板栗多肽的制备
[0047] 1)板栗去皮干燥后，用粉碎机粉碎，按料液比为1:10,加入pH 11的NaOH，提取温 度为50°C，时间为3h，离心收集沉淀，冷冻干燥制备板栗蛋白。
[0048] 2)复合酶分步水解：首先，以复合风味蛋白酶水解，然后再以碱性蛋白酶水解，制 备板栗多肽，复合风味蛋白酶酶解条件为：pH 6. 0,酶活添加量为6000u/g料，时间lh，温度 55°C，碱性蛋白酶酶解条件为：pH 8. 0,酶活添加量为6000u/g料，时间3h，温度50°C ;将水 解液加热到100°C，保持10分钟杀灭酶的活力；采用截留分子量为IOkDa超滤板超滤得到 的酶解液，收集分子量为IOkDa以下的酶解液；将酶解液用低温冷冻干燥机制得板栗多肽 粉末。
[0049] (五）山药提取物的制备
[0050] 在室温条件下，称量粉碎成200目的山药固体粉末；按质量比1:10比例称取山药 固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌 冷冻干燥，得山药提取物。
[0051] (六）茯苓提取物的制备
[0052] 在室温条件下，称量粉碎成200目的茯苓固体粉末；按质量比1:10比例称取茯苓 固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌 冷冻干燥，得茯苓提取物。
[0053] (七）川；提取物的制备
[0054] 在室温条件下，称量粉碎成200目的川芎固体粉末；按质量比1:10比例称取川芎 固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液无菌 冷冻干燥，得川芎提取物。
[0055] (八）麦门冬提取物的制备
[0056] 在室温条件下，称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末；按质量比1:10比例称取麦 门冬固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超滤，超滤液 无菌冷冻干燥，得麦冬门提取物。
[0057] (九）含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品组合物
[0058] 由以下原料按重量百分比组成：
[0059]
【权利要求】
1. 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于由以下原料按重量百分比组 成： 稠李花色苷30%-50%，稠李多糖 10%-30%，高粱米多肽5%-15%， 板栗多肽 5%-15%，山药提取物 5%-10%，茯苓提取物5%-10%， 川芎提取物 5%-10%，麦门冬提取物 5%-10%。
2. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：稠李花 色苷的制备方法如下： 1) 复合酶酶解提取：料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干粉溶于水，复合酶加入 量为稠李冻干粉的总重量的1. 〇% -5. 0%，进行热水浸提，控制温度为30-70°C，pH范围值 3. 0-6. 0,酶解时间为30min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行微波提取； 2) 微波辅助提取：料液比按质量比1:10-1:15,将沉淀物溶于水，微波功率300W-500W， 微波时间为20min-60min，离心，过滤，提取液备用，沉淀物继续进行超声浸提； 3) 超声浸提：料液比按质量比1:10-1:15,将沉淀物溶于乙醇中，超声波功率为 100W-500W，超声时间为10min-50min，pH值为2. 0-6. 0,抽滤，提取液备用； 4) 合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液，提取液旋转蒸 发浓缩，冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉； 5) 大孔树脂静态纯化：粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液，静态吸附条件是：温 度20°C，树脂的添加量为0. 16g/ml ;解析条件是：解吸剂70%乙醇，？11值为3，温度为60°〇， 得稠李花色苷干粉。
3. 如权利要求2所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0. 5?2的混合。
4. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 稠李多糖的制备方法如下： 1) 超声浸提：料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干粉溶于水中，控制温度为 50-90°C，pH值5. 0-9. 0,超声波功率为100W-500W，超声时间为10min-50min，离心，取提取 液继续进行微波提取； 2) 微波辅助提取：取提取液，微波功率300W-500W，微波时间为20min-60min，离心，取 提取液继续进行复合酶酶解； 3) 复合酶酶解提取：取提取液，复合酶加入量为提取液重量的1. 0% -5. 0%，控制温度 为30-60°C，pH 3. 0-6. 0,酶解时间为30min-60min ;抽滤，滤液旋转蒸发浓缩，加入4倍体积 的95%乙醇沉淀多糖，离心，去除上清液，冷冻干燥。
5. 按照权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质 量比1:0. 5?2的混合。
6. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 山药提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的山药固体粉末；按质量比1:10 比例称取山药固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超 滤，超滤液无菌冷冻干燥，得山药提取物。
7. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 茯苓提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的茯苓固体粉末；按质量比1:10 比例称取茯苓固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超 滤，超滤液无菌冷冻干燥，得茯苓提取物。
8. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 川考提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的川芎固体粉末；按质量比1:10 比例称取川芎固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超滤膜超 滤，超滤液无菌冷冻干燥，得川芎提取物。
9. 如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品，其特征在于：所述的 麦门冬提取物的制备方法：在室温条件下，称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末；按质量比 1:10比例称取麦门冬固体粉末和去离子水，超声破碎30min，室温浸提3h，滤纸初过滤、超 滤膜超滤，超滤液无菌冷冻干燥，得麦门冬提取物。
【文档编号】A61K36/8968GK104491836SQ201410675649
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】刘剑利, 于慧, 曹向宇, 杨思敏, 孙宇航, 杨威, 刘晓 申请人:辽宁大学