一种具有心肌保护作用的杜仲组分组合物及其制剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗心血管疾病的杜仲组分组合物。该组合物的成分均来自中药杜仲，其具体由重量百分比为10～80％的杜仲总黄酮，10～80％的杜仲环烯醚萜和10～80％的杜仲木脂素组成。所述组合物的重量百分比优选为20～40％的杜仲总黄酮，40～60％的杜仲环烯醚萜和20～50％的杜仲木脂素组成。本发明通过对杜仲的单一有效部位进行组合，通过调整相关重量配比，得到了一种疗效明确、具有临床开发前景的杜仲组分组合物。
【专利说明】-种具有心肌保护作用的杜仲组分组合物及其制剂
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗心血管疾病的杜仲组分组合物。
【背景技术】
[0002] 杜仲为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮，别名思仙、木棉 等，始载于《神农本草经》，列为中药上品，具有补肝肾、强筋骨、安胎等功效，在临床上应用 于治疗肝肾不足、腰膝酸痛、妊娠的习惯性流产、高血压等，常与补骨脂、续断等配伍。
[0003] 心血管疾病，又称为循环系统疾病，循环系统指人体内运送血液的器官和组织，主 要包括心脏和血管，可细分为急性和慢性，一般都与动脉硬化有关。心肌缺血是指心脏的血 液灌注减少，导致心脏的供氧量减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种 病理状态。冠状动脉粥样硬化导致的冠脉狭窄是引起心肌缺血最主要、最常见的病因，进而 导致心肌缺血缺氧，因此冠心病是心肌缺血的主要原因。心肌缺血主要分为隐匿性冠心病、 心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病和猝死性5类。
[0004] 心肌缺血常见的原因是冠状动脉硬化，其次还有炎症（风湿性、梅毒性、川崎病和 血管闭塞性脉管炎等）、痉挛、栓塞、结缔组织疾病、创伤和先天性畸形等多种。流行病学研 究发现，与动脉粥样硬化相关的重要危险因子为高脂血症、高血压病、糖尿病、吸烟、肥胖、 同型半胱氨酸增高、体力活动少、高龄和男性等。缺血心肌的损伤机制包括能量缺乏、钙超 载、自由基生成增多、酸中毒引起的心肌损害、细胞膜通透性增加等方面。
[0005] 研究表明杜仲水提物能够显著降低脂肪酸的合成，降低3 -羟基一 3 -甲基戊二 酰辅酶A(HMG - CoA)还原酶活性，提高高密度脂蛋白（HDL)胆固醇的水平，降低血浆胆固 醇和甘油三酯浓度。另外，杜仲水提物还可以抑制Cu 2+介导的低密度脂蛋白（LDL)的氧化 修饰。众所周知，HMG - CoA还原酶的活化、血浆胆固醇和甘油三酯水平升高会促进动脉粥 样硬化斑块的形成；HDL或HDL胆固醇具有很强的抗动脉粥样硬化的作用，而另一类脂蛋白 LDL的氧化修饰则推进着动脉粥样硬化（AS)的病变形成，所以杜仲水提物通过降低血浆胆 固醇和LDL的氧化修饰水平，提高HDL胆固醇水平，抑制AS的发生发展。杜仲水提物还能 够通过舒张血管产生降压作用，且具有内皮依赖性。此外，另有研究表明，杜仲中的活性单 体也表现出在降压、降血脂、抗氧化、抗动脉粥样硬化等药理活性。例如，杜仲中环烯醚萜类 单体京尼平及京尼平苷，苯丙酸类化合物阿魏酸和咖啡酸，黄酮类化合物槲皮素、芦丁和黄 芩素，三萜类化合物白桦脂酸和熊果酸。
[0006] 虽然目前的研究表明杜仲具有一定的对心血管疾病的治疗作用，但是杜仲目前主 要上市的产品主要集中在降压领域，其他领域的应用较少。CN200710035744公开了一种杜 仲木脂素提取物在抗心血管重塑方面的应用，其机理仍然是与杜仲的降压作用相关（通过 调节肾素-血管紧张素 RAS系统），并且采用杜仲单一有效部位（木脂素），活性成分较为 单一，对于心血管疾病的治疗效果也极其有限。
【发明内容】
[0007] 本发明通过研究发现杜仲的单一有效部位，例如，环烯醚萜、木脂素或黄酮类成 分，在心肌缺血的疗效方面，具有作用，但疗效不明显，无法作为药物上市用于心血管疾病 患者的治疗。本发明通过对杜仲的单一有效部位进行组合，通过调整相关重量配比，得到了 一种疗效明确、具有临床开发前景的杜仲组分组合物。
[0008] 本发明的一个目的是提供一种具有心肌保护作用的杜仲组分组合物，该组合物的 成分均来自中药杜仲，其具体由重量百分比为10?80%的杜仲总黄酮，10?80%的杜仲环 烯醚萜和10?80 %的杜仲木脂素组成。
[0009] 在本发明的一个实施方案中，所述组合物的重量百分比优选为20?40 %的杜仲 总黄酮，40?60 %的杜仲环烯醚廠和20?50 %的杜仲木脂素组成。在本发明进一步地实施 方案中，所述组合物的重量百分比可以为30%的杜仲总黄酮，50%的杜仲环烯醚萜和20% 的杜仲木脂素组成；所述组合物的重量百分比也可以为25%的杜仲总黄酮，45%的杜仲环 烯醚萜和30 %的杜仲木脂素组成。
[0010] 本发明的中药有效部位提取物可用现有技术自制或通过商业渠道获得，也可本发 明列出的方法进行制备。
[0011] 杜仲总黄酮的制备：称取杜仲叶粗粉5. 0kg，配制45%的乙醇40L，用浓盐酸调pH 为4,在60?70°C下进行搅拌提取两次（第一次用25L乙醇溶液提取2小时，第二次用15L 乙醇溶液提取1小时），滤过，合并提取液，浓缩至4L后静置I. 0小时离心。取上清液加入 处理好的大孔树脂柱中进行饱和吸附，依次用水、45%乙醇、65%乙醇进行洗脱，吸附提取 液的流速为〇. 5个保留体积/小时，解吸时的流速为2个保留体积/小时，弃去水洗液，收 集65%乙醇溶液洗脱液，浓缩成稠膏、干燥得到杜仲叶总黄酮含量为80%的干粉0.31kg， 收率为4. 96%。
[0012] 杜仲环烯醚萜的制备：杜仲皮烘干、粉碎、过筛，以杜仲鲜皮为佳。称取处理后的杜 仲皮20千克，采用常规浸提，以15倍的液固比加入70%。乙醇-水溶液为提取剂，在60°C 条件下提取2小时，重复3次。将提取液过滤、浓所，用盐酸调至pH2. 5 ;采用正丁醇萃取， 收集萃取液，浓缩液冷却到-10?_20°C，再置于冷冻干燥器中冷却到-45?-65°C，真空度 <20Pa，时间24?48小时低温真空干燥，得到环烯醚萜活性部位675. 3克，总环烯醚萜化合 物含量为78.5%。
[0013] 杜仲木脂素的制备：取杜仲树皮（去外皮）2Kg，用8L 65 %乙醇回流提取两次，每 次lh，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用DlOl大孔树脂拌样上样（大孔树脂柱体积 3L)，水洗3倍柱体积，1 %氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20%乙醇洗脱2倍柱 体积，用45%乙醇洗2. 5倍柱体积。45%乙醇洗脱液浓缩至600ml。洗脱液浓缩后干燥成 粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为85 %，经HPLC 检测松脂醇二葡萄糖苷含量为12. 5%。
[0014] 本发明还提供杜仲组分组合物经过加工制备的适合服用的任何单位剂量形式的 药物制剂，这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊 齐?、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、粉剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬 膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂，需要时可以制成缓释制剂、肠溶制剂。
[0015] 本发明的杜仲组分组合物，在制备成药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述 药物可接受的载体选自：抗氧剂、螯合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、分散剂、润 滑剂、矫昧剂、色素等，常用的载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、 木糖醇、氧化纳、硅衍生物、纤维素及纤维素衍生物、亚硫酸纳、焦亚硫酸纳、藻酸盐、明胶、 甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、环糊精、环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑 石粉、硬脂酸钙、硬脂酸馍等。
【具体实施方式】
[0016] 下面将进一步通过举例来说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明 要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以 所附权利要求书记载的内容为准。
[0017] 实施例1杜仲各有效部位的制备
[0018] 杜仲总黄酮的制备：称取杜仲叶粗粉5. 0kg，配制45%的乙醇40L，用浓盐酸调pH 为4,在60?70°C下进行搅拌提取两次（第一次用25L乙醇溶液提取2小时，第二次用15L 乙醇溶液提取1小时），滤过，合并提取液，浓缩至4L后静置I. 0小时离心。取上清液加入 处理好的大孔树脂柱中进行饱和吸附，依次用水、45%乙醇、65%乙醇进行洗脱，吸附提取 液的流速为〇. 5个保留体积/小时，解吸时的流速为2个保留体积/小时，弃去水洗液，收 集65%乙醇溶液洗脱液，浓缩成稠膏、干燥得到杜仲叶总黄酮含量为87%的干粉0. 34kg。
[0019] 杜仲环烯醚萜的制备：杜仲皮烘干、粉碎、过筛，以杜仲鲜皮为佳。称取处理后的杜 仲皮20千克，采用常规浸提，以15倍的液固比加入70%。乙醇-水溶液为提取剂，在60°C 条件下提取2小时，重复3次。将提取液过滤、浓所，用盐酸调至pH2. 5 ;采用正丁醇萃取， 收集萃取液，浓缩液冷却到-10?_20°C，再置于冷冻干燥器中冷却到-45?-65°C，真空度 <20Pa，时间24?48小时低温真空干燥，得到环烯醚萜活性部位675. 3克，总环烯醚萜化合 物含量为78.5%。
[0020] 杜仲木脂素的制备：取杜仲树皮（去外皮）2Kg，用8L 65 %乙醇回流提取两次，每 次lh，过滤，合并两次提取液浓缩至800ml。用DlOl大孔树脂拌样上样（大孔树脂柱体积 3L)，水洗3倍柱体积，1 %氨水继续洗3倍柱体积，再水洗至中性。用20%乙醇洗脱2倍柱 体积，用45%乙醇洗2. 5倍柱体积。45%乙醇洗脱液浓缩至600ml。洗脱液浓缩后干燥成 粉末。用松脂醇二葡萄糖苷作为对照，提取物经紫外检测木脂素成分含量为87. 3%。
[0021] 实施例2杜仲组分组合物的实验研究
[0022] 动物心肌缺血模型的复制及给药方法
[0023] 雄性SD大鼠，体重220±50g，每组12只。假手术组：灌服等量的水溶液；模型组： 灌服等量的水溶液；各组动物均按体重灌胃给予受试药物（5ml/kg)。每天1次，共给药7 次。在末次给药后30分钟，1 %戊巴比妥钠（50mg/kg)腹腔注射麻醉，持续监测心电图变化。 将心电图电极针埋在左下肢及右上肢皮下，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到与左冠状动脉 伴行的心大静脉，在左心耳下方2_处用眼科针6-0丝线穿线，进针深度约1-1. 5_，宽约 2-3_，连同心大静脉一起结扎冠状动脉左前降支（假手术组只穿线不结扎）。心电图显示 ST段显著抬高或异常Q波时；即表明急性心肌缺血造模成功。
[0024] 心肌缺血梗死面积百分比的测定：术后24h，将麻醉后的大鼠打开胸腔，迅速取 下心脏在结扎线以下将左心室切成厚度为2mm的4-5片，放入1 % TTC溶液中，在37°C 水浴、避光条件下染色15min，梗死区不着色（白色），非梗死区染成红色，按照公式1用 Image-J(NIH)软件计算梗死区面积百分比。心肌梗死面积百分比（S) %=梗死区面积/左 心室总面积X 100%。
[0025] 左室血流动力学指标测定：术后24h，再次将大鼠腹腔注射1 %戊巴比妥钠（50mg/ kg)麻醉，然后静脉推注肝素全身抗凝，手术分离右颈总动脉后应用生理记录仪检测心脏 血流动力学参数。插管至左心室记录压力曲线，记录左室最大收缩（+)和舒张（一）速率 (土 dp/dtmax) 〇
[0026] 血清心肌酶水平的测定：术后24h，将麻醉后的大鼠打开腹腔，从腹主动脉取血 5?8ml，放置1?2h，离心IOmin (3000rpm)，测定血清LDH和CK-MB的水平。
[0027] 各给药组的给药剂量均为100mg/kg，各给药组组成如下：
[0028]
【权利要求】
1. 一种具有心肌保护作用的杜仲组分组合物，其特征在于，该组合物的成分均来自 中药杜仲，其具体由重量百分比为10?80 %的杜仲总黄酮，10?80 %的杜仲环烯醚萜和 10?80 %的杜仲木脂素组成。
2. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的重量百分比优选为20? 40%的杜仲总黄酮，40?60%的杜仲环烯醚萜和20?50%的杜仲木脂素组成。
3. 根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的重量百分比为30%的杜 仲总黄酮，50%的杜仲环烯醚萜和20%的杜仲木脂素组成。
4. 根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物的重量百分比为25%的杜 仲总黄酮，45%的杜仲环烯醚萜和30%的杜仲木脂素组成。
5. -种包含权利要求1所述的杜仲木脂素提取物的药物制剂，所述杜仲组分组合物 经过加工制备的适合服用的任何单位剂量形式的药物制剂，所述药物制剂选自以下剂型： 片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、颗粒剂、冲 齐IJ、丸剂、散剂、丹剂、粉剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
【文档编号】A61P9/00GK104435067SQ201410706095
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】肖军平, 吴永忠, 陈梁, 康兴东, 毛金娣 申请人:普正药业股份有限公司