一种治疗股骨头坏死的药物及其制法与检测方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗股骨头坏死的药物组合物。发明名称为一种治疗股骨头坏死的药物及其制法与检测方法及其应用。该药物组合物是由以下重量份的原料制成的：取五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根，混合，药材加5～15倍量水微波提取1～5次，每次15～60min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒剂，即得。该药物组合物可用于制备治疗股骨头坏死的药物。
【专利说明】一种治疗股骨头坏死的药物及其制法与检测方法及其应用
[0001]
【技术领域】
[0002] 本发明属于中药领域，涉及一种由五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根组成的具有治疗股 骨头坏死的药物组合物。
【背景技术】
[0003] 股骨头坏死（ONFH)是由于不同病因引起的股骨头血液供应破坏或骨细胞死亡引 起的病理过程。临床上可分为创伤性和非创伤性两大类，前者发病机制已较清楚，后者常是 全身性疾病的一个合并症，发病机制至今仍未明了。激素性股骨头坏死（SANFH)，属非创伤 性股骨头坏死，多发生在长期或大剂量应用超过自身生理需要量的肾上腺皮质激素后引起 的股骨头坏死，是股骨头坏死中常见的类型。其主要临床表现为髋关节疼痛、活动受限，跛 行为主，后期致残率高，严重影响患者的健康水平和生活质量。临床上常见于自身免疫性疾 病、小儿肾病、类风湿性关节炎、器官移植必须长期服用激素者。据国内外统计资料显示有 激素原因引起的ONFH占0Μ?总数近一半，而在我国需要治疗的0Μ?患者为500?750万， 每年新发病例数为15?20万，且非创伤性0Μ?多发生在青壮年。目前，对于自身免疫性 疾病的治疗主要采取激素疗法，尤其在2003年抗击非典型性肺炎（SARS)期间，激素在发挥 重要作用的同时，也造成了更多的股骨头坏死患者，加之近年来激素的不规范应用，造成因 过服激素而引起股骨头坏死者呈明显上升趋势。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种治疗股骨头坏死的药物组合物。
[0005] 本发明的另一目的是提供药物组合物的制备方法。
[0006] 本发明的还提供该药物组合物在制备治疗股骨头坏死以及骨质增生、骨关节炎药 物中的应用。
[0007] 本发明的目的是通过以下方式实现的： 一种治疗股骨头坏死的药物组合物，是由以下重量份的原料制成的：五叶藤1?3,牛 耳岩白菜1?3,冬葵根1?3。
[0008] 所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：五叶藤1，牛耳岩白菜2,冬 葵根3。
[0009] 所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：五叶藤2,牛耳岩白菜3,冬 葵根2。
[0010] 所述药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：五叶藤1，牛耳岩白菜1，冬 葵根1。
[0011] 所述药物组合物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
[0012] 所述药物组合物制备成的口服制剂为片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
[0013] 所述药物组合物采用如下方法制备：取干燥的五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根，混合， 药材加5?15倍量水微波提取1?5次，每次15?60min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成 细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒剂，即得。
[0014] 所述药物组合物优选采用如下方法制备：取干燥的五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根， 混合，药材加10倍量水微波提取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，力口 入辅料，混匀，制成颗粒剂，即得。
[0015] 所述药物组合物的检测方法为： (1) 色谱条件：色谱柱：C18柱，流动相：甲醇-1 %冰乙酸比例为10:90,流速：1. OmL/ min,检测波长：280nm，理论塔板数按牛蒡苷元峰计算应不< 2500 ; (2) 溶液制备： ① 供试品溶液：取本发明药物l〇g，研细，取约〇. 8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入50%甲醇25mL，称定重量，超声处理（200W，40kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； ② 对照品溶液：精密称取牛蒡苷元对照品5. 95mg，置50mL容量瓶中，加50%甲醇溶解， 并稀释至刻度，摇匀；然后再从中精密量取5mL，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度， 摇匀，即得浓度为53. 55 μ g/mL的牛蒡苷元对照品溶液； ③ 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5 μ L，注入HPLC仪，进行检测。
[0016] 所述药物组合物可用于制备治疗激素性股骨头坏死的药物。
[0017] 所述药物组合物可用于制备治疗骨质增生的药物。
[0018] 所述药物组合物可用于制备治疗骨关节炎的药物。
[0019] 本发明所述的药物组合物中的五叶藤为柳叶菜旋花科番薯属植物五爪金龙 Ipomoea cairica (L. ) Sweet [Convolvulus cairicus L. ; I. palmata Forsk.] --ΚΙ?Ι ; 牛耳岩白菜为苦苣苔科唇柱苣苔属植物牛耳朵CXiri ia e/wraea /feflce ZiWjfflocarjDw1S 你 J的根茎及全草；冬葵根为锦葵科锦葵属植物冬葵Malva verticillata L.的根。
[0020] 通过如下实验研究验证本发明的技术效果： 实验例一：本发明药物组合物治疗激素性股骨头坏死的实验研究 本实验通过观测兔血清中的骨钙素（BGP)和降钙素（CT)的水平及股骨头病理表现，探 讨本发明药物组合物治疗SONHl的疗效。
[0021] 1实验材料与方法 1. 1实验动物 6月龄新西兰白兔60只，雌雄各半，体重（2. 0?2. 5)kg，由山东大学动物实验中心提 供。
[0022] 1. 2实验药品及试剂 本发明药物组合物：取干燥的五叶藤333g、牛耳岩白菜333g、冬葵根333g，混合，药材 加 IOOOOmL水微波提取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得。
[0023] 对比药物A :取干燥的五叶藤500g，牛耳岩白菜500g，混合，药材加 IOOOOmL水微 波提取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得。
[0024] 对比药物B :取干燥的牛耳岩白菜500g、冬葵根500g，混合，药材加 IOOOOmL水微 波提取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得。
[0025] 对比药物C :取干燥的冬葵根500g、五叶藤500g，混合，药材加 IOOOOmL水微波提 取3次，每次30min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，即得。
[0026] 醋酸泼尼松龙注射液，浙江仙琚制药有限公司生产，国药准字：H33020824。
[0027] 仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药有限公司生产，国药准字：Z20025337。兔BGP及 CT(ELISA)试剂盒：购自苏州卡尔文生物科技有限公司。
[0028] 1.3实验方法 60只新西兰白兔随机分成空白组（n=10)和造模组（n=50)。采用贺氏造模法(贺西京， 毛履真，王坤正，等.肾上腺皮质激素引起股骨头缺血坏死的机制实验研究[J].中华骨科 杂志，1992,12 (6) :440?443)，造模组肌注醋酸泼尼松龙注射液7. 5mg/kg，每周2次，共6 周；空白组肌注生理盐水0. 32mg/kg，每周2次，共6周，同时全部动物每周注射青霉素钠2 次以预防感染，每次5万U/只。在第7周分别随机处死两组动物各2只，每只动物分别取 两侧股骨头纵切面做He染色切片以观察造模情况。在第9周将造模组动物随机分为6组： 本发明药物组合物组（n=8)、仙灵骨德组（n=8)、对比药物A组（n=8)、对比药物B组（n=8)、 对比药物C组（n=8)及阳性对照组（n=8),空白组：剩余的动物为空白对照组（n=10)。自 第9周起本发明药物组合物组每天用本发明药物组合物（45g · kf1 · Cf1)分两次灌胃，对 比药物A组每天用对比药物A(45g · kg4 · (Γ1)分两次灌胃，对比药物B组每天用对比药物 B(45g · kg4 · (Γ1)分两次灌胃，对比药物C组每天用对比药物C(45g · kg4 · (Γ1)分两次灌 胃，仙灵骨葆组用仙灵骨葆胶囊（〇. Ig ?kg4 ^cT1)制成混悬液分两次灌胃，阳性对照组和空 白组都用生理盐水灌胃，每次15ml/只，每天2次，共治疗4周。分别在造模前、造模后及治 疗后抽取每只兔的耳中央动脉血，测定血清中BGP和CT的水平。
[0029] 1. 4检测项目 (1)肉眼观察：实验兔的一般情况如：精神、体重、体毛、进食及股骨头形态。
[0030] ⑵组织形态学观察：于第8周处死空白组和造模组各2只动物，每只动物取出双 侧股骨头沿冠状面正中锯开，10%的中性福尔马林缓冲液固定48小时，5%的硝酸液脱钙，流 水冲洗后石蜡包埋切片，He染色，5X40倍光镜下观察切片中骨小梁和骨细胞的形态结构， 以了解造模情况。治疗结束后处死全部动物，按上述方法制成股骨头病理切片，每张切片在 10X40倍视野下在负重区随机选取5个视野，计算骨陷窝总数和空虚骨陷窝数，取平均空 骨陷窝率作为股骨头病理改变程度的指标以观察本发明药物组合物的治疗效果。
[0031] (3)血清中BGP和CT的测定：造模前、造模后及治疗后每只动物均采取耳中央动 脉血4ml，将血液标本在常温下静置3小时后离心，3000r/分钟，10分钟，吸取上层血清， 在-40°C下保存。应用酶联免疫法（ELISA)测定标本中的BGP和CT的水平，操作程序按试 剂盒说明书进行。
[0032] 1. 5统计学处理方法 实验数据结果均以均数加减标准差（i±s)表示，采用英文SPSS软件进行单因素方 差分析，多组间两两比较选用LSD法和成组t检验，P < 0. 05为差异有统计学意义。
[0033] 2实验结果 2. 1动物一般情况及股骨头形态 造模2周后，造模组动物出现不同程度的精神差，体毛稀疏，光泽黯淡，食欲减少，体重 减轻，皮下脂肪减少，6周后最为明显，空白组动物一般情况无明显变化。经4周治疗后造模 动物上述一般情况较治疗前部分改善，但仍差于空白组。造模组和空白组动物的股骨头外 观形态无明显差异，但造模组较空白组股骨头颈部骨皮质脆，股骨头骨质疏松，易凿取。 [0034] 2. 2股骨头切片观察结果 (1)造模结果： 空白组：骨小梁整齐清晰，排列规则，致密饱满。骨小梁和骨皮质中骨细胞清晰可见，核 较大，居中，偶见骨细胞空虚，软骨下血管丰富，骨小梁周围成骨细胞较多。
[0035] 造模组：软骨下骨小梁萎缩，较多的细胞核固缩，核偏位，染色深，骨髓内大量脂肪 细胞堆积。骨小梁内正常骨细胞数量减少，部分骨陷窝内骨细胞消失，空骨陷窝数明显增 多，提示股骨头发生病理性坏死。
[0036] (2)治疗结果：治疗4周后全部动物处死，取股骨头制成He切片。光镜下： 空白组：呈正常组织形态学表现；阳性对照组：呈股骨头坏死表现，坏死程度较造模结 束时无明显改变，平均空骨陷窝率达29. 3±2. 60%，明显高于空白组（P < 0. 05);本发明药 物组合物组、对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组和仙灵骨葆组：部分骨细胞核边 聚，较大部分骨细胞正常，软骨下萎缩骨小梁和正常骨小梁并存，萎缩的仍占较大部分，部 分骨小梁得到恢复，骨髓内有部分脂肪细胞堆积。视野下空骨陷窝仍然明显，但较阳性对照 组明显减少，两组空骨陷窝率均低于空白组（P < 0.05)，本发明药物组合物组和仙灵骨葆 组对比空骨陷窝率无明显差异（P > 0. 05)。对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组和 仙灵骨葆组对比空骨陷窝率明显差异（P< 0.05)。说明，本发明药物组合物组的效果优于 对比药物A组、对比药物B组、对比药物C组。见表1。
[0037] 表1治疗4周后各组的空骨陷窝率^ ±s)
【权利要求】
1. 一种治疗股骨头坏死的药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的 原料制成的：五叶藤1?3,牛耳岩白菜1?3,冬葵根1?3。
2. 如权利要求1药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成 的：五叶藤1，牛耳岩白菜2,冬葵根3。
3. 如权利要求1药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成 的：五叶藤2,牛耳岩白菜3,冬葵根2。
4. 如权利要求1药物组合物，其特征在于，该药物组合物是由以下重量份的原料制成 的：五叶藤1，牛耳岩白菜1，冬葵根1。
5. 如权利要求1?4中任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用药 学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
6. 如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用如下方法制备： 取五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根，混合，药材加5?15倍量水微波提取1?5次，每次15? 60min，提取液合并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒剂，即得。
7. 如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物采用如下方法制备：取 五叶藤、牛耳岩白菜、冬葵根，混合，药材加10倍量水微波提取3次，每次30min，提取液合 并，浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒剂，即得。
8. 如权利要求1?4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的检测方 法为： (1) 色谱条件：色谱柱：C18柱，流动相：甲醇-1 %冰乙酸比例为10:90,流速：1. OmL/ min,检测波长：280nm，理论塔板数按牛蒡苷元峰计算应不< 2500 ; (2) 溶液制备： ① 供试品溶液：取本发明药物l〇g，研细，取约〇.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入50%甲醇25mL，称定重量，200W，40kHz超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； ② 对照品溶液：精密称取牛蒡苷元对照品5. 95mg，置50mL容量瓶中，加50%甲醇溶解， 并稀释至刻度，摇匀；然后再从中精密量取5mL，置10mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度， 摇匀，即得浓度为53. 55 y g/mL的牛蒡苷元对照品溶液； ③ 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5 y L，注入HPLC仪，进行检测。
9. 如权利要求1?4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物在制备治 疗激素性股骨头坏死的药物中的应用。
10. 如权利要求1?4任意一项所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物在制备 治疗骨质增生、骨关节炎药物中的应用。
【文档编号】A61P19/08GK104435055SQ201410770944
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月15日 优先权日:2014年12月15日
【发明者】陈志祥, 杨龙彪, 唐文 申请人:陈志祥