本发明属于中药领域，具体涉及一种具有保肝作用的中药组合物及其制备方法与用途。
背景技术：
肝脏在机体生命活动中发挥重要作用，是物质代谢和能量代谢的中心，是人体重要的解毒器官，不仅参与蛋白质、脂类和糖类等物质的代谢，也参与药物、酒精及毒物等的体内代谢过程，是各种致病因子或疾病常侵袭的器官。现在大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为“亲肝毒物”，这类物质与现代人类常食用的酒精、药物都能对肝脏造成化学性损伤。
肝病在人类疾病谱中的重要性日益凸显，脂肪性肝病(简称脂肪肝)已成为临床常见的慢性病之一。研究表明，脂肪肝可以导致胰岛素抵抗，并进一步发展为肝纤维化、肝硬化、甚至肝功能衰竭，严重威胁着人类的健康，已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。
硕士学位论文《龙胆泻肝汤护肝保肝抗炎作用及其机理研究》公开了龙胆泻肝汤的经典配伍由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木通、车前子、当归、柴胡、甘草、生地黄组成；其具有明显降低血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的作用，并可以减轻四氯化碳对肝脏造成的病理伤害。然而，上述中药组合物存在组成复杂、成本较高等缺点，从而限制了其应用。
因此，研究新型的治疗效果好、毒副作用小、组成简单、成本较低的保肝作用的药物具有重要意义。
技术实现要素：
因此，本发明提供一种治疗效果好、毒副作用小、组成简单、成本较低的具有保肝作用的中药组合物，进而提供其制备方法与用途。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供一种具有保肝作用的中药组合物，所述中药组合物的原料药组成为：
白凤菜15-30重量份，龙胆草1-14重量份，黄花倒水莲15-30重量份，当归2-12重量份，甘草1-10重量份。
优选地，本发明上述具有保肝作用的中药组合物，所述中药组合物的原料药组成为：
白凤菜18-27重量份，龙胆草4-11重量份，黄花倒水莲18-27重量份，当归5-9重量份，甘草4-7重量份。
进一步优选地，本发明上述具有保肝作用的中药组合物，所述中药组合物的原料药组成为：
白凤菜20重量份，龙胆草10重量份，黄花倒水莲20重量份，当归5重量份，甘草7重量份；或者
白凤菜25重量份，龙胆草6重量份，黄花倒水莲25重量份，当归9重量份，甘草4重量份；或者
白凤菜23重量份，龙胆草8重量份，黄花倒水莲22重量份，当归8重量份，甘草5重量份；或者
白凤菜21重量份，龙胆草7重量份，黄花倒水莲24重量份，当归6重量份，甘草6重量份。
本发明还提供上述具有保肝作用的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量份的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入2-6重量倍量的60％-80％乙醇混匀，浸泡至少6h，回流提取1-5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.00-1.30g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量份的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入6-10重量倍量的水混匀，回流提取1-3次，每次提取0.5-2h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.05-1.30g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为95％以上的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为60％-80％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.15-1.40g/ml。
优选地，本发明上述具有保肝作用的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量份的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入3-5重量倍量的65％-75％乙醇混匀，浸泡至少8h，回流提取2-3h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.05-1.25g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量份的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入7-9重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取0.5-1.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.10-1.30g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为95％以上的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为65％-75％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.20-1.35g/ml。
进一步优选地，本发明上述具有保肝作用的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量份的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入4重量倍量的70％乙醇混匀，浸泡至少10h，回流提取2.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.10-1.20g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量份的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入8重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取1h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.15-1.25g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为95％以上的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为70％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.26-1.30g/ml。
本发明还提供上述具有保肝作用的中药组合物的制剂、或者包括上述制备方法制备得到的中药组合物的制剂，
所述中药组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、糖浆剂或膏剂。
所述常规辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000、peg4000、虫蜡等。
本发明还提供上述中药组合物、上述制备方法制备得到的中药组合物、或上述中药组合物的制剂在制备具有保肝作用的药物中的应用。
本发明的技术方案具有如下优点：
【白凤菜】性凉，味甘、淡，归肺经、肝经、肾经，全草具有解热退火，清热利尿，凉血，止血，解毒消肿，舒筋活络，活血化瘀的功效。
【龙胆草】性寒，味苦，归肝经、胆经，具有清热燥湿、泻肝胆火的功效。
【黄花倒水莲】性平，味甘、微苦，归肝经、肾经、脾经，具有益气养血、健脾利湿、活血调经的功效。
【当归】性温，味甘、辛，归肝经、心经、脾经，具有活血止痛、补血调经、润肠通便的功效。
【甘草】性平、味甘，归心经、脾经、肺经、胃经，具有补脾益气、润肺止咳、清热解毒、缓解止痛、缓和药性的功效。
本发明具有保肝作用的中药组合物，各中药按照“君、臣、佐、使”的配伍关系相互配合、共同作用，从而作用于病灶，进而发挥保肝的疗效。实验表明，该中药组合物各剂量组均可明显抑制ccl4引起的肝脏指数升高；可以明显抑制ccl4所致大鼠急性肝损伤alt和ast的升高，但剂量未有明显依赖，具有明显的降酶保肝作用；能够升高ccl4所致大鼠急性肝损伤sod水平，降低mda水平，对ccl4所致大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用，具有抗氧化损伤活性。
具体实施方式
下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中，各原料药白凤菜、龙胆草、黄花倒水莲、当归、甘草和溶剂乙醇均为市售品；乙醇的浓度或含量表示的均为体积百分数，通过酒精计在20℃测定。
实施例1
本实施例具有保肝作用的中药组合物的原料药组成为：
白凤菜20g，龙胆草10g，黄花倒水莲20g，当归5g，甘草7g；
其制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入4重量倍量的70％乙醇混匀，浸泡至少10h，回流提取2.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.10-1.20g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入8重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取1h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.15-1.25g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为98％的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为70％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.26-1.30g/ml。
本实施例具有保肝作用的中药组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成颗粒剂。
实施例2
本实施例具有保肝作用的中药组合物的原料药组成为：
白凤菜25g，龙胆草6g，黄花倒水莲25g，当归9g，甘草4g；
其制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入3重量倍量的75％乙醇混匀，浸泡至少8h，回流提取2h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.05g-1.10/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入7重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取1.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.25-1.30g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为96％的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为75％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.20-1.25g/ml。
本实施例具有保肝作用的中药组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。
实施例3
本实施例具有保肝作用的中药组合物的原料药组成为：
白凤菜23g，龙胆草8g，黄花倒水莲22g，当归8g，甘草5g；
其制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入5重量倍量的65％乙醇混匀，浸泡至少10h，回流提取3h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.20-1.25g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入9重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取0.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.10-1.15g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为95％的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为65％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.30-1.35g/ml。
本实施例具有保肝作用的中药组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂。
实施例4
本实施例具有保肝作用的中药组合物的原料药组成为：
白凤菜21g，龙胆草7g，黄花倒水莲24g，当归6g，甘草6g；
其制备方法，包括以下步骤：
(1)取选定重量的当归和龙胆草混匀，以当归和龙胆草的混合物的总重量为基准，加入4.5重量倍量的72％乙醇混匀，浸泡至少9h，回流提取2-3h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.10-1.15g/ml，得浓缩液a；
(2)取选定重量的白凤菜、甘草和黄花倒水莲，以白凤菜、甘草和黄花倒水莲的混合物的总重量为基准，加入7.5重量倍量的水混匀，回流提取2次，每次提取0.5-1.5h，将提取液浓缩至70-80℃相对密度为1.15-1.20g/ml，得浓缩液b；
(3)搅拌下，将浓度为97％的乙醇加入至所述浓缩液b中形成混合液，至所述混合液中乙醇的含量为72％，静置至少12h，取上清液，真空浓缩至不含乙醇，得浓缩液c；
(4)将所述浓缩液a和所述浓缩液c合并，浓缩至70-80℃相对密度为1.30-1.35g/ml。
本实施例具有保肝作用的中药组合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成散剂。
实验例本发明中药组合物保肝作用的研究
1材料与方法
1.1材料
清洁级大鼠84只，雄性，体质量200±20g，购自吴氏动物中心，饲养于空调室内，室温(22±2)℃，湿度(60±5)％，喂标准颗粒饲料，自由饮水和摄食。
1.2药物
以实施例1制备的中药组合物的颗粒剂作为供试药，四氯化碳(国药集团化学试剂有限公司，批号：20130514)，联苯双酯滴丸(浙江万邦药业股份有限公司，批号：a02130131)、谷丙转氨酶(alt)测试盒、谷草转氨酶(ast)测试盒、总超氧化物歧化酶测试盒(t-sod)、丙二醛(mda)测试盒均购于南京建成生物工程研究所。
1.2仪器
匀浆机，离心机，电子称，鼠笼、灌胃针，分析天平
1.3试验内容
1.3.1分组与给药
雄性昆明大鼠84只，体重为200±20g，分为实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组、模型组、肝苏颗粒阳性对照组、联苯双酯阳性对照组和空白对照组。
除空白对照组和模型组每只给予2ml生理盐水外，实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组分别按照供试药0.1g、供试药0.2g、供试药0.4g(加0.5ml水溶解)灌服，联苯双酯阳性对照组(0.00225g/kg)按灌服相应的药液，连续10天，末次给药2h后除空白对照组腹腔注射生理盐水外，其余6组腹腔注射ccl41ml/kg建立肝损伤模型，禁食不禁水。16h后取材，处死。
1.3.2肝脏指数的测定
大鼠称重后处死，取肝脏，用天平称取其质量，按当日体重计算肝脏指数(mg/g)。
1.3.3肝脏病理组织学观察
取出肝脏，用冷的生理盐水漂洗，拭干。取肝左叶固定部位取材后，立即用4％多聚甲醛固定液固定。经乙醇脱水、二甲苯透明，石蜡包埋切片后，摄片。
1.3.4血清alt、ast活性的测定
采用腹腔主动脉取血，室温静置20min，然后置4℃3000r/min离心20min，分离血清，置-20℃保存待测。按试剂盒方法分别测定大鼠血清alt、ast的活性。
1.3.5肝脏mda、sod的活性测定
取肝右叶1g放入生理盐水中漂洗，吸干，称重，制备10％的组织肝匀浆。按试剂盒方法分别测定大鼠肝组织mda、sod的活性。
1.3.6数据统计分析
所有实验结果的数据以均数±标准差
2结果
2.1对ccl4引起肝损伤大鼠肝脏指数的影响
实验结果如表1所示。
表1对ccl4所致大鼠急性肝损伤肝脏指数的影响(x±s)
注：与空白组相比，*p<0.01；与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01
由表1可以得出：模型组肝脏指数较空白组显著升高(p<0.01)，表明ccl4诱导后大鼠肝细胞造成严重损伤，动物模型建立成功。实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组肝脏指数均有一定程度降低；与模型组相比，实验组高剂量组和实验组中剂量组差异显著(p<0.01)，实验组低剂量组差异较明显(p<0.05)。
这表明，实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组均可明显抑制ccl4引起的肝脏指数升高。
2.2对大鼠肝组织病理学的损伤的影响
大鼠肝组织经病理形态学观察，模型组大鼠经ccl4诱导后肝细胞呈现弥漫性损伤，细胞呈明显而广泛的脂肪变，并伴有大量炎症细胞浸润；与模型组相比，实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组肝脏损伤程度减轻，炎症细胞浸润减少，呈剂量依赖关系。
这表明，实施例1制备的中药组合物具有减轻ccl4引起的肝损伤，保护肝细胞的作用。
2.3对ccl4所致大鼠急性肝损伤血清alt和ast的影响
实验结果如表2所示。
表2对ccl4所致大鼠急性肝损伤alt和ast的影响(x±s)
注：与空白组相比，*p<0.05；与模型组相比，
#p<0.05，##p<0.01。
1卡门氏单位＝0.482iu/l，25℃
由表2可以得出：模型组alt和ast较空白组均显著升高，表明ccl4诱导后对大鼠造成严重的肝脏损伤，动物模型建立成功。与模型组相比，实验组低剂量组、实验组高剂量组均能使肝脏alt水平显著降低(p<0.05)，但实验组中剂量组无明显降低；实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组能使肝脏ast水平显著降低(p<0.05)。
这表明，实施例1制备的中药组合物可以明显抑制ccl4所致大鼠急性肝损伤alt和ast的升高。
2.4对ccl4所致大鼠急性肝损伤肝脏中sod和mda的影响
实验结果如表3所示。
表3对ccl4所致大鼠急性肝损伤sod和mda的影响(x±s)
注：与空白组相比，*p<0.05，**p<0.01；与模型组相比，#p<0.05，##p<0.01。
由表3可以得出：模型组大鼠肝脏中sod含量明显低于空白组(p<0.05)，各组均不同程度升高了sod的活性；其中，实验组高剂量组和实验组中剂量组升高尤为显著(p<0.01)；模型组大鼠肝脏mda水平较空白组明显降低(p<0.05)，说明模型组损伤较为明显，实验组低剂量组、实验组中剂量组、实验组高剂量组较模型组均有一定程度的降低(p<0.05)，但无明显的剂量依赖。
这表明，实施例1制备的中药组合物能够升高ccl4所致大鼠急性肝损伤sod水平，降低mda水平，对ccl4所致大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
3结论
综上所述，可以得到以下结论：(1)实验组各剂量组均可明显抑制ccl4引起的肝脏指数升高；(2)实施例1制备的中药组合物可以明显抑制ccl4所致大鼠急性肝损伤alt和ast的升高，但剂量未有明显依赖，表明其具有明显的降酶保肝作用；(3)实施例1制备的中药组合物能够升高ccl4所致大鼠急性肝损伤sod水平，降低mda水平，对ccl4所致大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用，表明其具有抗氧化损伤活性。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。