本发明涉及由人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，hpv)感染引起的宫颈肿瘤的治疗。特别地，本发明提供了用于改善宫颈肿瘤治疗的方法和用于治疗由hpv感染引起的宫颈肿瘤的方法。持续性病毒感染通常诱导病毒特异性cd8t细胞的功能性失活，损害其增殖能力，产生免疫刺激性细胞因子，并裂解被病毒感染细胞(wherry，e.j.和ahmed，r.，journalofvirology78：5535-5545，2004)。宫颈癌是全世界女性癌症死亡的首要原因之一(einstein，m.h.，等thelancetinfectiousdiseases9：347-356(2009)；parkin，d.m.和bray，f.，vaccine24(3s)：11-25，2007)，并且其中约75％的病例是由最常见的高风险人乳头瘤病毒(hpv)类型(即hpv16和hpv18)的持续感染引起的(schiffman，m.，等，lancet370：890-907，2007；forman，d.，等，vaccine30(5s)：f12-23，2012)。hpv持续性通常与缺乏可证实的hpv特异性t细胞免疫相关，并且据报道在见于恶化前和恶性患者中的病毒特异性t细胞通常是功能障碍的，且有时甚至是抑制性的(devosvansteenwijk，p.j.，等，clinicalcancerresearch：anofficialjournaloftheamericanassociationforcancerresearch14：7188-7195，2008；trimble，c.l.，cancerimmunology，immunotherapy：cii59：799-803，2010)。这些研究结果表明病毒特异性t细胞的功能损伤可能与hpv诱导的宫颈癌的出现相关。宫颈癌通过高危hpv感染、病毒持续、克隆扩增和持续感染的细胞分化为恶化前病变，并逐渐转化为侵袭性癌症的过程而产生(schiffman，m.，等，lancet370：890-907，2007)。恶化前宫颈上皮内瘤变2和3(cervicalintraepithelialneoplasia，cin2和3)，特别是对hpv16阳性的那些，被认为是具有约30％的机会发展成侵袭性癌的高等级病变(moscicki，a.b.，等，vaccine30(5s)：f24-33，2012)。因此，迫切需要一种有效的治疗性疫苗，其可以预防持续性hpv感染的严重并发症并根除hpv相关的瘤变。hpve6和e7通过分别结合并促进肿瘤抑制蛋白p53和视网膜母细胞瘤(prb)的降解而起到病毒癌蛋白的作用(yugawa，t.和kiyono，t.，reviewsinmedicalvirology19：97-113，2009)。这些病毒癌蛋白是用于针对cin2/3和宫颈癌的治疗性疫苗的理想靶标组，不仅因为这些蛋白质诱导肿瘤发生，而且还因为它们在hpv感染的恶化前和恶性细胞中组成型表达(yugawa，t.和kiyono，t.，reviewsinmedicalvirology19：97-113，2009)。由于宫颈病变的消退与细胞(而不是体液)免疫应答的存在相关(deligeoroglou，e.，等，infectiousdiseasesinobstetricsandgynecology2013：540850，2013；woo，y.l.，等，internationaljournalofcancerjournalinternationalducancer126：133-141，2010)，因此非常需要能够选择性诱导稳健的e6/e7特异性t细胞免疫的治疗性疫苗。发明简述本发明涉及鉴定不需要手术摘除宫颈肿瘤的对象的方法，其包括向所述对象施用有效量的编码融合蛋白的多核苷酸，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在一些具体实施方案中，本文中所述的方法还包括测量对象在施用后的提高的细胞免疫应答。在一些实施方案中，本文中所述的方法还包括指导护理提供者测量对象在施用后的提高的细胞免疫应答。还公开了在不进行手术的情况下治疗宫颈肿瘤的方法，其包括施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答在施用后提高为至少2倍，并且其中在不进行手术的情况下从所述对象中摘除所述宫颈肿瘤。还公开了治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码融合蛋白的多核苷酸之后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)确定所述对象适于手术摘除宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码融合蛋白的多核苷酸之后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)指导护理提供者对对象进行手术以摘除宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还提供了在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，(b)鉴定在施用融合蛋白后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(c)确定所述对象适于手术摘除宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在一些实施方案中，鉴定对象的操作包括测量提高的细胞免疫应答。还公开了在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括向对象群体施用编码融合蛋白的多核苷酸，其中每个对象均携带人白细胞抗原(humanleucocyteantigen，hla)-a02，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了在对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)向对象群体施用编码融合蛋白的多核苷酸，每个对象均携带人白细胞抗原(hla)-a02，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)向所述对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含两个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。一些实施方案公开了改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)提供从有此需要的对象获得的血液样品以鉴定hla类型，和(b)向携带hla-a02的对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在一些实施方案中，对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答。还公开了治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，和(b)如果所述对象在施用所述第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答，则进一步向所述对象施用第二剂量的所述多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，(b)测量施用后的细胞免疫应答，和(c)将第二剂量的多核苷酸施用于在施用第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了本文中所述的方法，其还包括在施用第二剂量后测量细胞免疫应答。还公开了本文中所述的方法，其还包括施用第三剂量的多核苷酸。某些实施方案公开了治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，和(b)如果所述对象在施用所述第一剂量或所述第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答，则进一步向所述对象施用第三剂量的所述多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，(b)在施用第一剂量或第二剂量后测量细胞免疫应答，和(c)如果对象在施用第一或第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答，则向对象施用第三剂量的多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了在有此需要的对象中提高全身性hpv特异性多功能cd8t细胞应答的方法，其包括施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述多功能cd8t细胞应答包括ifn-γ、il-2、tnf-α或其任意组合的提高的表达。还公开了包含药物组合物的药盒(pharmaceuticalkit)，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果在施用有效量的药物组合物后的细胞免疫应答没有提高则进行手术以摘除宫颈肿瘤的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及将有效量的药物组合物施用于在施用初始量的多核苷酸后显示提高数目的多功能t细胞的对象的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及向携带hla-a02的对象施用有效量的药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及将有效量的药物组合物施用于在施用初始量的多核苷酸后显示数目提高的多功能t细胞的对象的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。还公开了包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果单一剂量或两个剂量的药物组合物不使对象表现出提高的细胞免疫应答则停止进一步施用所述药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。实施方案实施方案(e)1.鉴定不需要手术摘除宫颈肿瘤的对象的方法，其包括向所述对象施用有效量的编码融合蛋白的多核苷酸，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e2.实施方案e1所述的方法，其还包括测量施用后所述对象的提高的细胞免疫应答。e3.实施方案e1所述的方法，其还包括指导护理提供者测量施用后对象的提高的细胞免疫应答。e4.在不进行手术的情况下治疗宫颈肿瘤的方法，其包括施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答在施用后提高为至少2倍，并且其中在不进行手术的情况下从所述对象中摘除所述宫颈肿瘤。e5.治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码融合蛋白的多核苷酸后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)确定所述对象适于手术摘除宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e6.在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码融合蛋白的多核苷酸后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)指导护理提供者对所述对象进行手术摘除子宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e7.治疗有此需要的对象中的宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，(b)鉴定在施用融合蛋白后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(c)确定所述对象适于手术摘除宫颈肿瘤，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e8.实施方案e5至e7中任一项所述的方法，其中鉴定对象的操作包括测量提高的细胞免疫应答。e9.在有此需要的对象群体中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括向所述对象群体施用编码融合蛋白的多核苷酸，其中每个对象均携带人白细胞抗原(hla)-a02，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e10.在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)向所述对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e11.改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括向对象群体施用编码融合蛋白的多核苷酸，其中每个对象均携带人白细胞抗原(hla)-a02，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e12.改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)向所述对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含两个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e13.改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括：(a)提供从有此需要的对象获得的血液样品以鉴定hla类型，和(b)向携带hla-a02的对象施用编码融合蛋白的多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e14.实施方案e9至e13中任一项所述的方法，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答。e15.治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，和(b)进一步向在施用所述第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象施用第二剂量的所述多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e16.治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，(b)测量施用后的细胞免疫应答，和(c)将第二剂量的多核苷酸施用于在施用第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e17.实施方案e15或e16所述的方法，其还包括在施用所述第二剂量后测量细胞免疫应答。e18.实施方案e15至e17中任一项所述的方法，其还包括施用第三剂量的多核苷酸。e19.治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，和(b)进一步向在施用所述第一剂量或所述第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象施用第三剂量的所述对象的多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e20.治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，(b)在施用第一剂量或第二剂量后测量细胞免疫应答，和(c)如果对象在施用第一或第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答，则向对象施用第三剂量的多核苷酸，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e21.实施方案e15至e20中任一项所述的方法，其中所述第一剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。e22.实施方案e15至e21中任一项所述的方法，其中所述第二剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。e23.实施方案e15至e22中任一项所述的方法，其中所述第一剂量和所述第二剂量相同或不同。e24.实施方案e18至e23中任一项所述的方法，其中所述第三剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。e25.实施方案e18至e24中任一项所述的方法，其中所述第一剂量、所述第二剂量和所述第三剂量相同。e26.实施方案e18至e24中任一项所述的方法，其中所述第一剂量、所述第二剂量和所述第三剂量不同。e27.实施方案e15至e26中任一项所述的方法，其中所述第一剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg，并且第二剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。e28.实施方案e18至e27中任一项所述的方法，其中所述第三剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。e29.实施方案e15至e28中任一项所述的方法，其中所述第一剂量为约1mg至约4mg，并且所述第二剂量为约1mg至约4mg。e30.实施方案e18至e29中任一项所述的方法，其中所述第三剂量为约1mg至约4mg。e31.实施方案e30所述的方法，其中所述第一剂量为约1mg，所述第二剂量为约1mg，并且所述第三剂量为约1mg。e32.实施方案e30所述的方法，其中所述第一剂量为约2mg，所述第二剂量为约2mg，并且所述第三剂量为约2mg。e33.实施方案e30所述的方法，其中所述第一剂量为约4mg，所述第二剂量为约4mg，并且所述第三剂量为约4mg。e34.实施方案e1至e8和e14至e33中任一项所述的方法，其中所述提高的细胞免疫应答是提高的cd8t细胞应答、提高的cd4t细胞应答、提高的细胞因子分泌或其任意组合。e35.实施方案e1至e8和e14至e34中任一项所述的方法，其中所述提高的细胞免疫应答是多功能t细胞的数目提高。e36.实施方案e1至e8和e14至e35中任一项所述的方法，其中当通过流式细胞术测量时，所述多功能t细胞表现出选自ifn-γ、il-2、tnf-α、mip-β和cd107a/b的至少三种、至少四种或至少五种标志物。e37.实施方案e35或e36所述的方法，其中所述多功能t细胞的数目比施用多核苷酸之前多功能t细胞的数目提高了至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％或至少约30％。e38.实施方案e34所述的方法，其中所述提高的cd8t细胞应答包括1fn-γ、il-2、tnf-α、mip-β、cd107a/b或其任意组合的提高的表达。e39.实施方案e34所述的方法，其中所述提高的cd8t细胞应答包括提高的cd38+ki67+cd8t细胞。e40.实施方案e39所述的方法，其中所述提高的cd8t细胞应答是cd38+ki67+cd8t细胞数目的至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍提高。e41.实施方案e34至e40中任一项所述的方法，其中通过流式细胞术测量所述提高的cd8t细胞应答。e42.实施方案e34至e41中任一项所述的方法，其中所述提高的cd4t细胞应答包括提高的ifn-γ+cd4细胞。e43.实施方案e34至e42中任一项所述的方法，其中所述提高的cd4t细胞应答是ifn-γ+cd4细胞数目至少约1.5、2.0、2.5、3.0、3.5或4.0倍提高。e44.实施方案e34至e43中任一项所述的方法，其中所述提高的细胞免疫应答包括提高的hpv16和hpv18e6和e7特异性ifn-γ应答。e45.实施方案e44所述的方法，其中通过ifn-γelispot测定来测量ifn-γ应答。e46.实施方案e34至e45中任一项所述的方法，其中所述提高的细胞因子表达包括ifn-γ、il-2、tnf-α或其任意组合的提高的表达。e47.实施方案e46所述的方法，其中所述ifn-γ表达相对于施用前的水平提高为至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍。e48.实施方案e46所述的方法，其中所述il-2表达相对于施用前的水平提高为至少2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍或至少约15倍。e49.实施方案e46所述的方法，其中所述tnf-α表达相对于施用前的水平提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍。e50.实施方案e1至e49中任一项所述的方法，其中il-4或il-17a表达在施用后不提高。e51.实施方案e15至e50中任一项所述的方法，其中所述第二剂量在第一剂量至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周后施用。e52.实施方案e18至e51中任一项所述的方法，其中所述第三剂量在第二剂量至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周后施用。e53.实施方案e1至e52中任一项所述的方法，其中所述多核苷酸通过电穿孔施用。e54.实施方案e1至e53中任一项所述的方法，其中所述宫颈肿瘤是良性肿瘤或恶性肿瘤。e55.实施方案e1至e54中任一项所述的方法，其中所述宫颈肿瘤是鳞状细胞癌(squamouscellcarcinoma，scc)、腺癌(adenocarcinoma)、腺鳞癌(adenosquamouscarcinoma)、小细胞癌(smallcellcarcinoma)、神经内分泌肿瘤(neuroendocrinetumor，net)，玻璃样细胞癌(glassycellcarcinoma)、绒毛腺癌(villoglandularadenocarcinoma，vga)、非癌恶性肿瘤(non-carcinomamalignancy)、黑素瘤(melanoma)、淋巴瘤(lymphoma)或宫颈上皮内瘤变(cin)。e56.实施方案e1至e55中任一项所述的方法，其中所述宫颈肿瘤是cin1、cin2、cin3或宫颈癌。e57.在有此需要的对象中提高全身性hpv特异性多功能cd8t细胞应答的方法，其包括施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述多功能cd8t细胞应答包括ifn-γ、il-2、tnf-α或其任意组合的提高的表达。e58.实施方案e57所述的方法，其中所述施用包括至少两个剂量或三个剂量。e59.实施方案e57或e58所述的方法，其中所述ifn-γ表达相对于施用前水平提高为至少5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍。e60.实施方案e57至e59中任一项所述的方法，其中所述il-2表达相对于施用前水平提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍或至少约15倍。e61.实施方案e57至e60中任一项所述的方法，其中所述tnf-α表达相对于施用前水平提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍。e62.实施方案e57至e61中任一项所述的方法，其中il-4或il-17a表达在施用后不提高。e63.包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果在施用有效量的药物组合物后的细胞免疫应答没有提高则进行手术以摘除宫颈肿瘤的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e64.包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及将有效量的药物组合物施用于在施用初始量的多核苷酸后显示提高数目的多功能t细胞的对象的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e65.包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及向携带hla-a02的对象施用有效量的所述药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e66.实施方案e63至e65中任一项所述的药盒，其中所述有效量为至少1mg、2mg、3mg、4mg、5mg或6mg。e67.包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果单一剂量或两个剂量的药物组合物不使对象表现出提高的细胞免疫应答则停止进一步施用所述药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。e68.实施方案e67所述的药盒，其中所述单一剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg。e69.实施方案e67或e68所述的药盒，其中所述两个剂量包含第一剂量和第二剂量，其中所述第一剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg；并且所述第二剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg。e70.实施方案e67至e69中任一项所述的药盒，其中所述第一剂量和所述第二剂量相同。e71.实施方案e67至e69中任一项所述的药盒，其中所述第一剂量和所述第二剂量不同。e72.实施方案e67至e71中任一项所述的药盒，其中所述第一剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg；并且所述第二剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。e73.实施方案e67至e71中任一项所述的药盒，其中所述第一剂量为约1mg至4mg，并且所述第二剂量为约1mg至约4mg。e74.实施方案e73所述的药盒，其中所述第一剂量为约1mg，并且所述第二剂量为约1mg。e75.实施方案e73所述的药盒，其中所述第一剂量为约2mg，并且所述第二剂量为约2mg。e76.实施方案e73所述的药盒，其中所述第一剂量为约4mg，并且所述第二剂量为约4mg。e77.实施方案e1至e62中任一项所述的方法或实施方案e63至e76中任一项所述的药盒，其中所述融合蛋白包含至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或八个氨基酸序列，所述氨基酸序列选自：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分。e78.实施方案e1至e62和77中任一项所述的方法或实施方案e63至e77中任一项所述的药盒，其中所述融合蛋白包含与hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e7蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的相同数目的表位，或比hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e7蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的表位更多的表位。e79.实施方案e1至e62和e77和e78中任一项所述的方法或实施方案e63至e78中任一项所述的药盒，其中hpv16的e6蛋白的n末端部分、hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分和hpv18的e6蛋白的c末端部分各自不包含完整的e6相关蛋白(e6-associatedprotein，e6ap)结合位点。e80.实施方案e79所述的方法或药盒，其中所述完整的e6ap结合位点包含对应于seqidno：2(e6hpv16)的第35至136位氨基酸或对应于seqidno：4(e6hpv18)的第30至131位氨基酸。e81.实施方案e1至e62和e77至e80中任一项所述的方法或实施方案e63至e76和e77至e80中任一项所述的药盒，其中hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分、hpv18的e7蛋白的n末端部分和hpv18的e7蛋白的c端部分各自不包含完整的cr2结构域或完整的cr3结构域。e82.实施方案e81所述的方法或药盒，其中所述完整的cr2结构域和cr3结构域是对应于seqidno：6(e7hpv16)的第18至98位氨基酸或对应于seqidno：8(e7hpv18)的第21至105位氨基酸。e83.实施方案e1至e62和e77至e82中任一项所述的方法，以及实施方案e63至e76和e77至e82中任一项所述的药盒，其中hpv16的e6蛋白的n末端部分包含与seqidno：2(16e6na-b)的n末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中a是选自对应于seqidno：2的氨基酸残基1或2的氨基酸，并且b是选自对应于seqidno：2的第35至135位氨基酸残基的氨基酸，并且其中hpv16的e6蛋白的c末端部分包含与seqidno：2(16e6cc-d)的c末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第36位氨基酸残基和等于或低于第b+1位氨基酸的氨基酸残基的氨基酸，并且d是选自对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸残基的氨基酸。e84.实施方案e83所述的方法或药盒，其中b是选自对应于seqidno：2的第35至39、57至62、69至85、87至88、98至99、107、109、114和135位氨基酸残基的氨基酸。e85.实施方案e83或e84所述的方法或药盒，其中对应于seqidno：2，b是第35位氨基酸残基，并且c是第36位氨基酸残基；b是第36位氨基酸残基，并且c是第36或37位氨基酸残基；b是第37位氨基酸残基，并且c是第36、37或38位氨基酸残基；b是第38位氨基酸残基，并且c是第36、37、38或39位氨基酸残基；b是第39位氨基酸残基，并且c是第36、37、38、39或40位氨基酸残基；b是第57位氨基酸残基，并且c是选自第36至58位氨基酸残基的氨基酸；b是第58位氨基酸残基，并且c是选自第36至59位氨基酸残基的氨基酸；b是第59位氨基酸残基，并且c是选自第36至60的氨基酸位氨基酸残基；b是第60位氨基酸残基，并且c是选自第36至61位氨基酸残基的氨基酸；b是第61位氨基酸残基，并且c是选自第36至62位氨基酸残基的氨基酸；b是第62位氨基酸残基，并且c是选自第36至63的氨基酸位氨基酸残基；b是第69位氨基酸残基，并且c是选自第36至70的氨基酸位氨基酸残基；b是第70位氨基酸残基，并且c是选自第36至71位氨基酸残基的氨基酸；b是第71位氨基酸残基，并且c是选自第36至72位氨基酸残基的氨基酸；b是第72位氨基酸残基，并且c是选自第36至73位氨基酸残基的氨基酸；b是第73位氨基酸残基，并且c是选自第36至74位氨基酸残基的氨基酸；b是第74位氨基酸残基，并且c是选自第36至75位氨基酸残基的氨基酸；b是第75位氨基酸残基，并且c是选自第36至76位氨基酸残基的氨基酸；b是第76位氨基酸残基，并且c是选自第36至77位氨基酸残基的氨基酸；b是第77位氨基酸残基，并且c是选自第36至78的氨基酸位氨基酸残基；b是第78位氨基酸残基，并且c是选自第36至79位氨基酸残基的氨基酸；b是第79位氨基酸残基，并且c是选自第36至80位氨基酸残基的氨基酸；b是第80位氨基酸残基，并且c是选自第36至81位氨基酸残基的氨基酸；b是第81位氨基酸残基，并且c是选自第36至82位氨基酸残基的氨基酸；b是第82位氨基酸残基，并且c是选自第36至83位氨基酸残基的氨基酸；b是第83位氨基酸残基，并且c是选自第36至84位氨基酸残基的氨基酸；b是第84位氨基酸残基，并且c是选自第36至85位氨基酸残基的氨基酸；b是第85位氨基酸残基，并且c是选自第36至86位氨基酸残基的氨基酸；b是第87位氨基酸残基，并且c是选自第36至88位氨基酸残基的氨基酸；b是第88位氨基酸残基，并且c是选自第36至89位氨基酸残基的氨基酸；b是第98位氨基酸残基，并且c是选自第36至99位氨基酸残基的氨基酸；b是第99位氨基酸残基，并且c是选自第36至100的氨基酸位氨基酸残基；b是第107位氨基酸残基，并且c是选自第36至108位氨基酸残基的氨基酸；b是第109位氨基酸残基，并且c是选自第36至110的氨基酸位氨基酸残基；b是第114位氨基酸残基，并且c是选自第36至115位氨基酸残基的氨基酸；或者b是第135位氨基酸残基，并且c是选自第36至136位氨基酸残基的氨基酸。e86.实施方案e1至e62和e77至e85中任一项所述的方法和实施方案e63至e85中任一项所述的药盒，其中hpv18的e6蛋白的n末端部分包含与seqidno：4(18e6ni-j)的n末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中i是选自对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且j是选自对应于seqidno：4的第30至130位氨基酸残基的氨基酸，并且其中hpv18的e6蛋白的c末端部分包含与seqidno：4(18e6ck-1)的c末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中k是选自对应于seqidno：4的等于或高于第31位氨基酸残基和等于或低于第j+1位氨基酸残基的氨基酸，并且l是选自对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸残基的氨基酸。e87.实施方案e85所述的方法或药盒，其中j是选自对应于seqidno：4的第30至34、52至57、64至80、82至83、93、94、102、104、109和130位氨基酸残基的氨基酸。e88.实施方案e86或e87所述的方法或药盒，其中对应于seqidno：4，j是第30位氨基酸残基，并且k是第31位氨基酸残基；j是第31位氨基酸残基，并且k是第31或32位氨基酸残基；j是第32位氨基酸残基，并且k是第31、32或33位氨基酸残基；j是第33位氨基酸残基，并且k是第31、32、33或34位氨基酸残基；j是第34位氨基酸残基，并且k是第31、32、33、34或35位氨基酸残基；j是第52位氨基酸残基，并且k是选自第31至53位氨基酸残基的氨基酸；j是第53位氨基酸残基，并且k是选自第31至54位氨基酸残基的氨基酸；j是第54位氨基酸残基，并且k是选自第31至55位氨基酸残基的氨基酸；j是第55位氨基酸残基，并且k是选自第31至56位氨基酸残基的氨基酸；j是第56位氨基酸残基，并且k是选自第31至57位氨基酸残基的氨基酸；j是第57位氨基酸残基，并且k是选自第31至58位氨基酸残基；j是第64位氨基酸残基，并且k是选自第31至65位氨基酸残基的氨基酸；j是第65位氨基酸残基，并且k是选自第31至66位氨基酸残基的氨基酸；j是第66位氨基酸残基，并且k是选自第31至67位氨基酸残基的氨基酸；j是第67位氨基酸残基，并且k是选自第31至68位氨基酸残基的氨基酸；j是第68位氨基酸残基，并且k是选自第31至69位氨基酸残基的氨基酸；j是第69位氨基酸残基，并且k是选自第31至70位氨基酸残基的氨基酸；j是第70位氨基酸残基，并且k是选自第31至71位氨基酸残基的氨基酸；j是第71位氨基酸残基，并且k是选自第31至72位氨基酸残基的氨基酸；j是第72位氨基酸残基，并且k是选自第31至73位氨基酸残基的氨基酸；j是第73位氨基酸残基，并且k是选自第31至74位氨基酸残基的氨基酸；j是第74位氨基酸残基，并且k是选自第31至75位氨基酸残基的氨基酸；j是第75位氨基酸残基，并且k是选自第31至76的氨基酸位氨基酸残基；j是第76位氨基酸残基，并且k是选自第31至77的氨基酸位氨基酸残基；j是第77位氨基酸残基，并且k是选自第31至78位氨基酸残基的氨基酸；j是第78位氨基酸残基，并且k是选自第31至79位氨基酸残基的氨基酸；j是第79位氨基酸残基，并且k是选自第31至80位氨基酸残基的氨基酸；j是第80位氨基酸残基，并且k是选自第31至81位氨基酸残基的氨基酸；j是第82位氨基酸残基，并且k是选自第31至83位氨基酸残基的氨基酸；j是第83位氨基酸残基，并且k是选自第31至84位氨基酸残基的氨基酸；j是第93位氨基酸残基，并且k是选自第31至94位氨基酸残基的氨基酸；j是第94位氨基酸残基，并且k是选自第31至95位氨基酸残基的氨基酸；j是第102位氨基酸残基，并且k是选自第31至103位氨基酸残基的氨基酸；j是第104位氨基酸残基，并且k是选自第31至105位氨基酸残基的氨基酸；j是第109位氨基酸残基，并且k是选自第31至110位氨基酸残基的氨基酸；或者j是第130位氨基酸残基，并且k是选自第31至131位氨基酸残基的氨基酸。e89.实施方案e1至e62和e77至e88中任一项所述的方法和em63至88中任一项所述的药盒，其中hpv16的e7蛋白的n末端部分包含与seqidno：6(16e7ne-f)的n末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中e是选自对应于seqidno：6的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且f是选自对应于seqidno：6的第18至97位氨基酸残基的氨基酸，并且其中hpv16的e7蛋白的c末端部分包含与seqidno：6(16e7cg-h)的c末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位的氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸残基的氨基酸，并且h是选自对应于seqidno：6的第97或98位氨基酸残基的氨基酸。e90.实施方案e89所述的方法或药盒，其中f为选自对应于seqidno：6的第18至39和44至97位氨基酸残基的氨基酸。e91.实施方案e89或e90所述的方法或药盒，其中f是选自对应于seqidno：6的第18至39位的氨基酸残基，并且g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位的氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸残基的氨基酸，或者其中f是选自对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸残基的氨基酸残基，并且g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第45位氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸的氨基酸残基的氨基酸。e92.实施方案e1至e62和e77至e91中任一项所述的方法和实施方案e63至e91中任一项所述的药盒，其中hpv18的e7蛋白的n-末端部分包含与seqidno：8(18e7nm-n)的n末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中m是选自对应于seqidno：8的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且n是选自对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸残基的氨基酸，并且其中hpv18的e7蛋白的c末端部分包含与seqidno：8(18e7co-p)的c末端序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中o是选自对应于seqidno：8的等于或高于第22位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸，并且p是选自对应于seqidno：8的第104或105位氨基酸残基的氨基酸。e93.实施方案e92所述的方法或药盒，其中n为选自对应于seqidno：8的第21至42和47至104位氨基酸残基的氨基酸。e94.实施方案e92或e93所述的方法或药盒，其中对应于seqidno：8，n是选自第21至41位的氨基酸残基，并且o是选自等于或高于第22位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸，或其中n是选自氨基酸残基47至104的氨基酸残基，并且o是选自等于或高于第48位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸。e95.实施方案e1至e62和e77至e94中任一项所述的方法或实施方案e63至e94中任一项所述的药盒，其中所述融合蛋白不包含hpv16的天然存在的全长e6蛋白、hpv16的天然存在的全长e7蛋白、hpv18的天然存在的全长e6蛋白和hpv18的天然存在的全长e7蛋白。e96.实施方案e95所述的方法或药盒，其中所述融合蛋白包含：从n末端至c末端，(i)16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h-18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-l-18e7co-p；(ii)18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-1-18e7co-p-16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h；(iii)16e7ne-f-16e6na-b-16e7cg-h-16e6cc-d-18e7nm-n-18e6ni-j-18e7co-p-18e6ck-l；(iv)18e7nm-n-18e6ni-j-18e7co-p-18e6ck-l-16e7ne-f-16e6na-b-16e7cg-h-16e6cc-d；(v)18e6ni-j-16e7ne-f-16e6cc-d-18e6ck-l-18e7nm-n-16e6na-b-18e7co-p-16e7cg-h；(vi)16e6na-b-18e6ni-j-18e7co-p-16e6cc-d-16e7ne-f-18e7nm-n-16e7cg-h-18e6ck-l；(vii)18e7nm-n-16e6na-b-18e7co-p-16e7cg-h-16e7ne-f-18e6ni-j-16e6cc-d-18e6ck-l；或(viii)16e7ne-f-18e6ni-j-16e7cg-h-18e7co-p-18e7nm-n-16e6na-b-18e6ck-l-16e6cc-d。e97.实施方案e96所述的方法或药盒，其中所述融合蛋白包含：从n末端至c末端，16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h-18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-l-18e7co-p，a是seqidno：2的第1位氨基酸残基，b是seqidno：2的第85位氨基酸残基，c是seqidno：2的第71位氨基酸残基，d为seqidno：2的第158位氨基酸残基，e是seqidno：6的第1位氨基酸残基，f是seqidno：6的第65位氨基酸残基，g是seqidno：6的第51位氨基酸残基，h为seqidno：6的第98位氨基酸残基，i是seqidno：4的第1位氨基酸残基，j是seqidno：4的第85位氨基酸残基，k是seqidno：4的第71位氨基酸残基，l是seqidno：4的第158位氨基酸残基，m是seqidno：8的第1位氨基酸残基，n是seqidno：8的第65位氨基酸残基，o是seqidno：8的第51位氨基酸残基，且p是seqidno：8的第105位氨基酸残基。e98.实施方案e95所述的方法和药盒，其中所述融合蛋白包含与seqidno：10具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。e99.实施方案e95至e98中任一项所述的方法或药盒，其中所述多核苷酸对于人表达是密码子优化的。e100.实施方案e95至e99中任一项所述的方法或药盒，其中所述多核苷酸包含与seqidno：9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。e101.实施方案e1至e62和e77至e100中任一项所述的方法或实施方案e63至e100中任一项所述的药盒，其中所述多核苷酸还包含编码异源多肽的核酸序列。e102.实施方案e101所述的方法或药盒，其中所述异源多肽包含fms相关酪氨酸激酶3配体(“flt3l”)或其一部分。e103.实施方案e102所述的方法或药盒，其中所述flt3l或其一部分包含flt3l的细胞外结构域。e104.实施方案e102或e103所述的方法或药盒，其中所述flt3l或其一部分包含与seqidno：12具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。e105.实施方案e101至e104中任一项所述的方法或药盒，其中所述编码异源多肽的核酸序列包含与seqidno：11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。e106.实施方案e1至e62和e77至e105中任一项所述的方法或实施方案e63至e105中任一项所述的药盒，其中所述多核苷酸还包含编码信号肽的核苷酸序列。e107.实施方案e106所述的方法或药盒，其中所述信号肽选自：组织纤溶酶原激活物(tissueplasminogenactivator，tpa)的信号肽、单纯疱疹病毒糖蛋白d(herpessimplexvirusglycoproteind，hsvgd)的信号肽、生长激素的信号肽及其任意组合。e108.实施方案e106所述的方法或药盒，其中所述信号肽是tpa的信号肽。e109.实施方案e108所述的方法或药盒，其中所述信号肽包含与seqidno：14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。e110.实施方案e109所述的方法或药盒，其中所述编码信号肽的核苷酸序列包含与seqidno：13具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。e111.实施方案e1至e62和e77至e110中任一项所述的方法或实施方案e77至e110中任一项所述的药盒，其中所述多核苷酸是载体。e112.实施方案e111所述的方法或药盒，其中所述载体是质粒。e113.实施方案e112所述的方法或药盒，其中所述质粒还包含sv40polya序列、sv40增强子、pcmv启动子、givs或其任意组合。e114.实施方案e113所述的方法或药盒，其中所述质粒还包含sv40polya序列、sv40增强子、cole1、pcmv启动子和givs。e115.实施方案e1至e62和e77至e114中任一项所述的方法或实施方案e77至e114中任一项所述的药盒，其中所述多核苷酸是dna或rna。e116.实施方案e1至e62和e77至e115中任一项所述的方法或实施方案e77至e115中任一项所述的药盒，其中所述多核苷酸是dna疫苗。e117.制备编码融合蛋白的多核苷酸的方法，所述融合蛋白有效治疗或预防由人乳头瘤病毒感染引起的宫颈肿瘤，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含选自以下的至少三个氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，以及(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。e118.实施方案e117所述的方法，其中所述融合蛋白不包含完整的e6相关蛋白(ap)结合位点。e119.制备编码融合蛋白的多核苷酸的方法，所述融合蛋白有效治疗或预防由人乳头瘤病毒感染引起的宫颈肿瘤，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，其包含：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白包含hpv16和hpv18的天然存在的e6蛋白以及hpv16和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的至少所有免疫原性表位，和(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中，其中所述融合蛋白被表达。e120.去除融合蛋白中的p53结合位点和prb结合位点的方法，所述融合蛋白包含hpv16的e6蛋白的序列、hpv16的e7蛋白的序列、hpv18的e6蛋白的序列和hpv18的e7蛋白的序列，同时也包含hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv16的天然存在的e7蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的至少所有免疫原性表位，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中(a)hpv16的e6蛋白在对应于seqidno：2的第35至135位氨基酸的c末端被分割成hpv16的e6蛋白的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c-末端部分(16e6cc-d)，当将其在一起比对时，包含hpv16的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(b)hpv16的e7蛋白在对应于seqidno：6的第18至97位氨基酸的c末端被分割成hpv16的e7蛋白的n末端部分(16e7ne-f)和hpv16的e7蛋白的c-末端部分(16e7g-h)，当将其在一起比对时，包含hpv16的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(c)hpv18的e6蛋白在对应于seqidno：6的第30至130位氨基酸的c末端被分割成hpv18的e6蛋白的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c-末端部分(18e6nk-l)，当将其在一起比对时，包含hpv18的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(d)hpv18的e7蛋白在对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸的c末端被分割成hpv18的e7蛋白的n末端部分(18e7nm-n)和hpv18的e7蛋白的c-末端部分(18e7co-p)，当将其在一起比对时，包含hpv18的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列。(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。e121.实施方案e120所述的方法，其中(a)中hpv16的e6蛋白的所述重叠序列包含至少一个氨基酸、至少两个氨基酸、至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少10个氨基酸、至少15个氨基酸或至少20个氨基酸；(b)中hpv16的e7蛋白的所述重叠序列包含至少一个氨基酸、至少两个氨基酸、至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少10个氨基酸、至少15个氨基酸或至少20个氨基酸；(c)中hpv18的e6蛋白的所述重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；或(d)中hpv18的e7蛋白的所述重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸。e122.防止融合蛋白中hpv16和/或hpv18的e6蛋白和/或hpv16和/或hpv18的e7蛋白的同源二聚体形成的方法，所述融合蛋白包含hpv16的e6蛋白的序列、hpv16的e7蛋白的序列、hpv18的e6蛋白的序列和hpv18的e7蛋白的序列，同时也包含hpv16的e6蛋白、hpv16的e7蛋白、hpv18的e6蛋白和hpv18的e7蛋白的所有免疫原性表位，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中(a)hpv16的e6蛋白在对应于seqidno：2的第37至72位氨基酸的c末端被分割成hpv16的e6蛋白的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c-末端部分(16e6cc-d)，当将其在一起比对时，包含hpv16的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(b)hpv16的e7蛋白在对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸的c末端被分割成hpv16的e7蛋白的n末端部分(16e7ne-f)和hpv16的e7蛋白的c-末端部分(16e7g-h)，当将其在一起比对时，包含hpv16的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(c)hpv18的e6蛋白在对应于seqidno：4的第32至67位氨基酸的c末端被分割成hpv18的e6蛋白的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c-末端部分(18e6nk-l)，当将其在一起比对时，包含hpv18的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(d)hpv18的e7蛋白在对应于seqidno：8的第47至104位氨基酸的c末端被分割成hpv18的e7蛋白的n末端部分(18e7nm-n)和hpv18的e7蛋白的c-末端部分(18e7co-p)，当将其在一起比对时，包含hpv18的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列。(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。e123.实施方案122所述的方法，其中(a)中hpv16的e6蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；(b)中hpv16的e7蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；(c)中hpv18的e6蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；或(d)中hpv18的e7蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸。e124.实施方案117至123中任一项所述的方法，其中所述融合蛋白不是seqidno：10。附图说明图1a示出了治疗分子(例如，hpve6/e7dna治疗性疫苗，命名为gx-188)的图。图1a显示了通过将混编的hpv16和hpv18类型的e6和e7基因的重叠n-和c-末端结构域插入pgx27载体中构建的gx-188疫苗。在e6和e7结构域之前是组织纤溶酶原激活物(tpa)的分泌信号序列和fms样酪氨酸激酶-3配体(flt3l)的胞外结构域。插入的病毒结构域根据hpv株、基因和结构域而缩写；例如，16e6n代表hpv16e6的n末端结构域。使用的其他缩写：mcs，多克隆位点(multi-cloningsite)；sv40polya，猿猴病毒40晚期多腺苷酸化序列(simianvirus40latepolyadenylationsequence)；sv40增强子，猿猴病毒40增强子(simianvirus40enhancer)；kanr，卡那霉素抗性基因(kanamycinresistancegene)；cole1，cole1型细菌复制起点(cole1-typebacterialoriginofreplication)；pcmv，巨细胞病毒早期增强子/启动子(cytomegalovirusearlyenhancer/promoter)；givs，兔β-珠蛋白介入序列(rabbitβ-globininterveningsequence)。每个基因区段上方的数字表示相应的氨基酸序列。图1b显示了临床试验的示意图。临床试验有三个阶段：筛选所招募的患者，通过3次注射疫苗进行治疗，并对患者进行随访监测。在要检查的指定时间点和/或接受疫苗接种的这三个时期期间患者对诊所进行了筛查访问(vs，visitsforscreening)、治疗访问(vt，visitsfortreatment)和随访监测访问(vf，visitsforfollow-upmonitoring)。图2a-2c显示了gx-188e6/e7融合蛋白的亚细胞定位及其对细胞p53和prb蛋白降解的影响。用pgx27对照载体、插入有野生型e6或e7基因的pgx27或gx-188转染293t细胞。转染后24小时，制备细胞裂解物，并通过免疫印迹分析蛋白质表达。图2a显示重悬于裂解缓冲液a(10mmhepes，ph7.9，10mmkcl，0.2mmedta，1mmdtt，0.25mmpmsf和蛋白酶抑制剂混合物)中的细胞，并收集提取物的上清液作为细胞质提取物。将沉淀重悬于缓冲液b(20mmhepes，ph7.9，420mmnacl，2mmedta，1mmdtt，10.25mmpmsf和pic)中，并且收集其沉淀后的上清液作为核提取物。通过针对微管蛋白和核纤层蛋白进行western印迹检测级分的纯度，以分别确定细胞质和核级分。图2b和2c显示重悬于裂解缓冲液(20mmhepes，ph7.4，150mmnacl，5mmedta，10％甘油，0.5％tritonx-100，1mmdtt，1mmpmsf，1mmnaf，1mmna3vo4和pic)中的细胞。收集上清液作为全细胞裂解物。图2b显示对细胞p53蛋白的表达水平的分析。图2c显示对细胞prb蛋白表达水平的分析。图3a-3i显示通过电穿孔接种gx-188诱导显著的hpvl6和hpv18e6/e7特异性ifn-γ应答。在以gx-188向所有患者接种前(vs)、接种期间(vt2，vt4)和接种后(vf1，vf2)收获患者的外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，pbmc)，并冷冻保存。在指定时间点用hpv16或hpv18e6和e7肽库刺激48小时后，通过本文中所述的ifn-γelispot测定，单独测定pbmc中hpv16/18e6-和e7-特异性ifn-γ分泌细胞的数目。显示了在减去背景值的斑点后，每个抗原的一式三份孔中每106个pbmc的平均斑点形成单位(sfu)，其为5.7±2.2(平均值±s.d.)。图3a显示在患者a01中施用1mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a01的斑点总数中的百分比为76.6％。图3b显示在a02中施用1mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a02的斑点总数中的百分比为69.3％。图3c显示在患者a03中施用1mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a03的斑点总数中的百分比为88.9％。图3d显示在患者a04中施用2mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a04的斑点总数中的百分比为89.2％。图3e显示在a05中施用2mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a05的斑点总数中的百分比为69.1％。图3f显示在a06中施用2mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a06的斑点总数中的百分比为89.4％。图3g显示在患者a07中施用4mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a07的斑点总数中的百分比为84.2％。图3h显示在患者a08中施用4mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a08的斑点总数中的百分比为75.1％。图3i显示在患者a09中施用4mggx-188的结果。在vf1处，e6特异性应答在患者a09的斑点总数中的百分比为70.1％。在见于每个患者中的hpv类型表示在括号中。n.d；未确定(notdetermined)。图4a-4e显示gx-188疫苗接种引起hpv16特异性ifn-γ+cd4和/或cd8t细胞的频率的显著提高。对以gx-188疫苗接种之前(vs)和之后(vf1)所收获的患者的冷冻保存的pbmc以hpv16e6和e7肽库的组合混合物刺激13小时。通过细胞内细胞因子染色，然后通过多色流式细胞术分析来测定hpv16特异性ifn-γ+cd4和cd8t细胞的频率。图4a显示了通过流式细胞术确定产生ifn-γ的cd4和cd8t细胞的设门策略(gatingstrategy)。图4b显示了在接种疫苗之前(vs)和之后(vf1)的cd4产生ifn-γ之频率的代表性图。图4b显示了图4b图的汇总图。图4d显示了在疫苗接种前(vs)和接种后(vf1)cd8产生ifn-γ的频率的代表性图。图4e显示了图4d图的汇总图。图4c和4e的图中所示的数据表示两次独立实验的平均值，每次实验重复两次，误差条表示s.d.。背景值由仅作为对照的培养基的应答确定，对于cd4为0.004±0.002％，并且对于cd8t细胞为0.003±0.002％(平均值±s.d.)。图5a-5f显示gx-188免疫接种产生hpv16特异性th1，而不是th2或th17应答。对在接种之前(vs)和之后(vf1+vf2)来自患者的冷冻保存的pbmc以hpv16e6和e7肽库的混合物刺激48小时。将合并的vf1和vf2的pbmc用于所有患者，除了对其使用vf1细胞的患者a04之外，因为她在vf2之前接受了手术。使用th1/th2/th17细胞计数珠阵列试剂盒对培养物上清液中指定的细胞因子进行定量。所显示的是经过重复的平均值±s.d.。水平虚线表示由每种细胞因子的标准曲线确定的截断水平。图5a显示了在gx-188免疫接种后测量的ifn-γ水平。作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为4.19±0.41。图5b显示了在gx-188免疫接种后测量的il-2水平。作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为5.11±0.63。图5c显示了在gx-188免疫接种后测量的tnf-α的水平。作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为5.58±0.88。图5d显示了在gx-188免疫接种后测量的il-4水平。作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为3.3±0.24。图5e显示了在gx-188免疫接种后测量的il-10水平。对于il-10(e)，作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为5.01±0.64。图5e显示了在gx-188免疫接种后测量的il-17a水平。作为背景的单独培养基的平均值(平均值±s.d.，pgml-1)为5.45±0.28。图6a-6f显示gx-188疫苗接种诱导hpv16特异性cd8t细胞的多功能性。如图4a-4e所示在接种前(vs)和接种(vf1)后刺激患者的pbmc，然后用多色流式细胞术分析以检测il-2、ifn-γ、tnf-α、mip-1β和细胞毒性脱颗粒标记物cd107a/b的hpv16特异性表达。图6a显示在设门cd8t细胞上共表达il-2的ifn-γ+cd8t细胞之频率的总结图；图6b显示共表达tnf-α的ifn-γ+cd8t细胞之频率的总结图；图6c显示共表达mip-1β的ifn-γ+cd8t细胞之频率的总结图；图6d显示共表达cd107a/b的ifn-γ+cd8t细胞之频率的总结图。图6e显示a08患者在接种疫苗后(vf1)的布尔设门(booleangating)之后对hpv16e6/e7肽的多功能应答的代表图。沿x轴列出了5个函数，cd107a/b、ifn-γ、il-2、mip-1β和tnf-α，以及它们各自的31种可能组合。x轴下方的五个横条表示五个、四个、三个、两个或一个功能应答的群体。图6f显示了表示hpv16e6/e7特异性cd8t细胞与接种后(vf1)5种功能应答的每种组合的相对频率的每个饼状图。每个饼形图右下角的数字表示产生3个或更多个功能分子的hpv16特异性cd8t细胞的百分比。a04患者的多功能谱不可用，因为用于分析的应答cd8t细胞的频率太低。图中所示的数据表示两次独立实验的平均值，每次实验重复两次，误差条表示s.d.。背景值由仅培养基的应答确定，对于ifn-γ+il-2+为0.0008±0.001％，对于ifn-γ+tnf-α+为0.0016±0.0014％，对于ifn-γ+mip-1β+，0.0015±0.0019％，对于ifn-γ+il-2+cd8t细胞为0.0009±0.0012％(平均值±s.d.)。图7a-7e示出gx-188接种强烈诱导hpv16特异性cd8t细胞的多功能性。将在gx-188疫苗接种之前(vs)和之后(vf1)后收获的患者的冷冻保存的pbmc以hpv16e6和e7肽库的组合混合物刺激13小时，然后用多色流式细胞术分析以检测il-2、ifn-γ、tnf-α、mip-1β和cd107a/b的hpv16特异性表达。图7a显示了通过流式细胞术确定产生功能性分子的cd8t细胞的设门策略。图7b显示在设门cd8t细胞上共表达il-2的ifn-γ+cd8t细胞的频率的代表性图；图7c显示共表达tnf-α的ifn-γ+cd8t细胞的频率的代表性图；图7d显示共表达mip-1β的ifn-γ+cd8t细胞的频率的代表性图；并且图7e显示共表达cd107a/b的ifn-γ+cd8t细胞的频率的代表性图。图中的数字表示在设门cd8t细胞上的应答群体的频率。图8a-8c显示gx-188疫苗接种诱导hpv16特异性cd8t细胞的增殖。在接种前(vs)和接种(vf1)后刺激患者的pbmc，并通过如下所述的流式细胞术分析以检查cd38和ki67在病毒特异性cd8t细胞上的表达。图8a显示了通过流式细胞术确定cd8t细胞上的ki67和cd38表达的设门策略。图8b显示增殖性cd38+ki67+cd8t细胞的频率的代表性图。图8c中所示的数据代表重复的平均值，误差条表示s.d.。对图8b所示的细胞在cd8t细胞上设门。图8c中的数字表示疫苗接种后的倍数提高。背景值由仅培养基对照的应答确定，其对于cd38+ki67+cd8t细胞为0.011±0.015％(平均值±s.d.)。图9a-9l显示了在gx-188疫苗接种后hpv16/18e6和e7蛋白的igg滴度。通过elisa在稀释范围内测量每个患者的针对hpv16和hpv18的重组e6和e7蛋白的血浆igg抗体滴度。图9a显示了在免疫接种前(vs)和免疫接种后(vt2、vt4和vf)施用1mggx-188后，每个疫苗剂量组的hpv16e6igg滴度结果；图9b显示了hpv16e7igg滴度结果；图9c显示了hpv18e6igg滴度结果；且图9d显示hpv18e7igg滴度结果。图9e显示了在免疫接种前(vs)和免疫接种后(vt2、vt4和vf)施用2mggx188之后每个疫苗剂量组的hpv16e6igg滴度结果；图9f显示了hpv16e7igg滴度结果；图9g显示了hpv18e6igg滴度结果；图9h显示了hpv18e7igg滴度结果。图9i显示在免疫接种前(vs)和免疫接种后(vt2、vt4和vf)施用4mggx-188后，每个疫苗剂量组的hpv16e6igg滴度结果；图9j显示了hpv16e7igg滴度结果；图9k显示了hpv18e6igg滴度结果；并且图9l显示了hpv18e7igg滴度结果。数据表示为样品的稀释倍数，其显示如果样品的平均光密度大于阴性截断值则认为其是阳性(hpv16e6为0.173，hpv16e7为0.213，hpv18e6为0.214，并且hpv18e7为0.227)。由于在包被有不相关的重组促红细胞生成素(erythropoietin，epo)的孔中测试患者的血浆，所有样品的光密度低于阴性截断值。图10a-10c示出，通过阴道镜检查、细胞学和组织学确定，gx-188接种导致宫颈病变的清除。图10a显示来自代表性应答者(a05)和无应答者(a09)患者在gx-188免疫接种之前(vs)和之后(vf2)的宫颈阴道镜检查照片。在图10a中，在vs处，患者a05在转化区中显示致密的醋酸白色(acetowhite)上皮，具有粗糙的点，但是在vf2处显示减少的中间醋酸白色上皮而没有点；在vs和vf2处，患者a09在转化区中显示密集的醋酸白色上皮与翻卷的边缘和粗糙的点。图10b显示来自代表性应答者(a05)和无应答者(a09)患者在gx-188免疫接种之前(vs)和之后(vf2)的宫颈内细胞学照片。在图10b中，vs处的患者a05表现出具有扩大的核尺寸和增色的高度鳞状上皮内病变(high-gradesquamousintraepitheliallesion，hsil)(×400)；但在vf2只显示没有上皮内病变(nointraepitheliallesion，nil)的正常色素上皮(×400)；患者a09在vs和vf2显示hsil可变核尺寸和增色(×400)。图10c显示来自gx-188免疫接种前(vs)和之后(vf2)的代表性应答者(a05)和无应答者(a09)患者的组织学照片。在图10c中，在vs处的患者a05被诊断为具有完整上皮厚度的cin3，并且在上层中具有可见的有丝分裂(×400)；但在vf2显示正常鳞状上皮而没有非典型的肿瘤细胞(×200)；在vs和vf2处，患者a09被诊断为具有厚且异常上皮的cin3，并且在上层具有非典型核的角质化细胞的存在(×200)。图11a-11b显示了gx-188疫苗接种的无应答者和应答者中的hpv特异性t细胞的多功能测定。使用布尔设门在接种后20周(vf1)测量hpv16特异性il-2、ifn-γ、tnf-α、mip-1β或cd107a/b产生性cd8t细胞的频率。根据临床和病毒学结果，将患者分组为无应答者(a04和a09)和应答者(a01、a02、a03、a05、a06、a07和a08)。图11a显示gx-188疫苗接种后对hpv16e6/e7肽的无应答者的多功能cd8t细胞应答，如图所示。在图中，黑色条表示平均应答，点对应于来自单个对象的应答。沿着x轴列出了细胞因子的每种可能的功能组合。在x轴下方的不同颜色的五个水平条描述了五、四、三、二或一个功能应答的群体。图11b显示gx-188疫苗接种后对hpv16e6/e7肽的应答者的多功能cd8t细胞应答，如饼状图所示。饼状图表示hpv16e6/e7特异性cd8t细胞与五种功能应答的每种组合的相对频率。图12a-12f示出了由细胞计数珠阵列产生的th1/th2/th17细胞因子标准。为了确保有效分析低于10pgml-1(默认用于定量的限值)的蛋白质，将人th1/th2/th17细胞因子标准品在50μl测定稀释液中重构，并且标准品构建为从5至5,000pgml-1(稀释率；1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512和1∶1028)。获得样品后使用幂拟合产生细胞因子标准曲线，对于所有细胞因子，r2＞0.96。通过从相应的标准曲线进行插值来确定细胞上清液中每种细胞因子的浓度。图12a显示ifn-γ测量；图12b显示il-2测量；图12c显示tnf-α测量；图12d显示il-4测量；图12e显示il-10测量；并且图12f显示il-17a测量。图13a-13d显示了hpv16或hpv18的e6或e7蛋白的天然存在的变体。图13a显示了hpv16的e6蛋白的天然存在的变体的序列比较：genbank登录号：aaa91670.1(seqidno：19)；aaa91673.1(seqidno：20)；aaa91669.1(seqidno：21)；aaa91674.1(eqidno：22)；aaa91680.1(seqidno：23)；aaa91681.1(seqidno：24)；aaa91668.1(seqidno：25)；aaa91658.1(seqidno：26)；aaa91662.1(seqidno：27)；aaa91667.1(seqidno：28)；aaa91676.1(seqidno：29)；aaa91671.1(seqidno：30)；aaa91656.1(seqidno：31)；aaa91682.1(seqidno：32)；aaa91657.1(seqidno：33)；aaa91660.1(seqidno：34)；aaa91677.1(seqidno：35)；aaa91678.1(seqidno：36)；aaa91672.1(seqidno：37)；aaa91661.1(seqidno：38)；aaa91664.1(seqidno：39)；aaa91675.1(seqidno：40)；aaa91665.1(seqidno：41)；aaa91663.1(seqidno：42)；aaa91659.1(seqidno：43)；aaa91654.1(seqidno：44)；aaa91666.1(seqidno：45)；aaa91679.1(seqidno：46)；和aaa91655.1(seqidno：47)。图13b显示了hpv18的e6蛋白的天然存在的变体的序列比较：genbank登录号：ahz96678.1(seqidno：48)；abp99784.1(seqidno：49)；cab53096.1(seqidno：50)；agu90327.1(seqidno：51)；adc35660.1(seqidno：52)；ahz96677.1(seqidno：53)；abp99736.1(seqidno：54)；abp99704.1(seqidno：55)，agm34425.1(seqidno：103)，和agm34423.1(seqidno：104)。图13c显示hpv16的e7蛋白的天然存在的变体的序列比较：genbank登录号：abl96587.1(seqidno：56)；abl96591.1(seqidno：57)；afj19726.1(seqidno：58)；afj19722.1(seqidno：59)；afj19752.1(seqidno：60)；afj19732.1(seqidno：61)；afj19762.1(seqidno：62)；afj19668.1(seqidno：63)；afj19664.1(seqidno：64)；afj19766.1(seqidno：65)；afj19756.1(seqidno：66)；afj19680.1(seqidno：67)；afj19772.1(seqidno：68)；afj19696.1(seqidno：69)；afj19690.1(seqidno：70)；afj19712.1(byseqidno：71)；ago04504.1(seqidno：72)；afj19770.1(seqidno：73)；afj19520.2(seqidno：74)；afj19708.1(seqidno：75)；afj19674.1(seqidno：76)；ago04498.1(seqidno：77)；ago04496.1(seqidno：78)；afj19684.1(seqidno：79)；afj19678.1(seqidno：80)；afj19698.1(seqidno：81)；afj19746.1(seqidno：82)；aaf13395.1(seqidno：83)；afu06654.1(seqidno：84)；afu06650.1(seqidno：85)；aab70738.1(seqidno：86)；acn22555.1(seqidno：87)；abk32510.1(seqidno：88)；abc54573.1(seqidno：89)；acn22554.1(seqidno：90)；abk32511.1(seqidno：91)；acq90216.1(seqidno：92)；ady75576.1(seqidno：93)；aam03025.1(seqidno：94)；和aal96634.1(seqidno：95)。图13d显示了hpv18的e7蛋白的天然存在的变体的序列比较：genbank登录号：abp99785.1(seqidno：96)；agu90416.1(seqidno：97)；agu90384.1(seqidno：98)；cab53097.1(seqidno：99)；p06788.2.1(seqidno：100)；cab53098.1(seqidno：101)；和cab53099.1(seqidno：102)。图14显示了gx-188dna疫苗变体的图。泳道1(a)代表阴性对照：仅pgx27载体；泳道2(b)代表gx-188阳性对照：如图1a所示的gx-188dna疫苗；泳道3(c-1)代表hpv16e6突变体：c-1构建体，与gx-188相比，其在hpv16e6的组氨酸(h)21、酪氨酸(y)85和缬氨酸(v)90处分别含有谷氨酰胺(q)、组氨酸(h)和亮氨酸(l)突变/替换；泳道4(c-2)代表hpv16e7突变体；与gx-188相比，c-2构建体在hpv16e7的甲硫氨酸(m)12处含有赖氨酸(k)突变/替换，并且在hpv16e7的天冬酰胺(n)29、精氨酸(r)77和甘氨酸(g)85处含有丝氨酸(s)突变/替换；泳道5(d-1)代表dna疫苗变体，其中有hpv16e7的第1至78位氨基酸、hpv16e7的第1至58位氨基酸、hpv16e6的第79至158位氨基酸、hpv16e7的第59至98位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第71至158位和hpv18e7的第51至105位氨基酸的序列；泳道6(d-2)代表dna疫苗变体，其中有hpv16e7的第1至130位氨基酸、hpv16e7的第1至第85位氨基酸、hpv16e6的第45至158位氨基酸、hpv16e7的第44至第98位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第71至158位和hpv18e7的第51至105位氨基酸；泳道7(e-1)代表具有不同混编顺序的dna疫苗变体(即ncncncnc)：e-1构建体从n末端到c末端含有hpv16e6的第1至85位氨基酸、hpv16e7的第51至第98位氨基酸、hpv16e7的第1至第65位氨基酸和hpv16e6的第71至158位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第71至158位和hpv18e7的第51至105位氨基酸。e-2代表具有不同混编顺序的dna疫苗变体(即ccnnccnn)：e-2构建体从n末端到c末端含有hpv16e7的第71至158位氨基酸、hpv16e7的第51至第98位氨基酸、hpv16e6的第1至第85位氨基酸、hpv16e7的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第71至158位和hpv18e7的第51至105位氨基酸。图15显示了gx-188疫苗变体的疫苗接种计划的示意图。对c57/bl/6小鼠用每种疫苗变体以电穿孔递送：a(阴性对照)、b(阳性对照)、c-1、c-2、d-1、d-2、e-1和e-2。在单次免疫接种2周后分析小鼠或在初次免疫2周后给予加强注射。然后对接受加强注射的小鼠在最后一次免疫接种的2周后进行分析。图16a显示了如图15所示的单次接种后疫苗诱导的免疫应答的结果。y轴显示sfc/1×106个脾细胞，而x轴显示gx-188疫苗变体。图16b显示如图15所示的加强免疫接种后疫苗诱导的免疫应答的结果。y轴显示sfc/1×106个脾细胞，而x轴显示gx-188疫苗变体。发明详述i.定义除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。在冲突的情况下，将以包含定义的本发明为准。除非上下文中另有要求，没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种。对于所有目的而言，本文中提及的所有出版物、专利和其他参考文献通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利申请被具体且单独地指示通过引用并入。尽管与本文中所述的方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于本发明的实践或测试，但是下面描述了合适的方法和材料。材料、方法和实施例仅是举例说明性的，而不旨在是限制性的。从详细描述和权利要求书中，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。为了进一步限定本发明，提供以下术语和定义。应当注意，未指明数目之实体的术语是指该实体中的一个或多个；例如“多肽”应理解为表示一种或更多种多肽。因此，未指明数目的术语、术语“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。术语“约”在本文中用于表示大概、大致、大约或在...的区域中。当术语“约”与数值范围结合使用时，其通过将边界扩展至高于和低于所列出数值的来修饰该范围。一般来说，本文中使用的术语“约”用于将数值修饰为以10％上下(更高或更低)的差异高于或低于所述值。应当理解，对于在本文中用语言“包括/包含”描述的任何方面，也提供以“由...组成”和/或“基本上由......组成”描述的其他类似方面。还应理解，对于在本文中描述为治疗方法形式的任何实施方案，也提供描述为瑞士型医药用途形式和/或药物组合物用于形式的其他类似形式。术语“多核苷酸”或“核苷酸”旨在包括单个核酸以及多个核酸，并且是指分离的核酸分子或构建体，例如信使rna(messengerrna，mrna)或质粒dna(plasmiddna，pdna)。在某些实施方案中，多核苷酸包含常规磷酸二酯键或非常规键(例如，酰胺键，例如见于肽核酸(peptidenucleicacid，pna)中)。术语“核酸”是指存在于多核苷酸中的任何一个或更多个核酸区段，例如dna或rna片段。“分离的”核酸或多核苷酸意指已从其天然环境中移出的核酸分子、dna或rna。分离的多核苷酸的实例包括保持在异源宿主细胞中的或从溶液中其他多核苷酸中纯化(部分或基本上)的重组多核苷酸。分离的rna分子包括本发明的多核苷酸的体内或体外rna转录物。根据本发明的分离的多核苷酸或核酸还包括合成产生的此类分子。此外，多核苷酸或核酸可以包括调节元件，例如启动子、增强子、核糖体结合位点或转录终止信号。本文中使用的“编码区”或“编码序列”是由可翻译成氨基酸的密码子组成的多核苷酸的一部分。虽然“终止密码子”(tag、tga或taa)通常不翻译成氨基酸，但可以认为它是编码区的一部分，但是任何侧翼序列(例如启动子、核糖体结合位点、转录终止子、内含子等)不是编码区的一部分。编码区的边界通常由5’末端的起始密码子、编码所得多肽的氨基末端的起始密码子和编码所得多肽的羧基末端的3’末端的翻译终止密码子确定。本发明的两个或多个编码区可以存在于单个多核苷酸构建体中，例如在单个载体上；或在分离的多核苷酸构建体中，例如在分离的(不同的)载体上。因此，单个载体可以仅包含单个编码区，或包含两个或更多个编码区，例如单个载体可以分别编码如下所述的嵌合分子的第一多肽链和第二多肽链。此外，本发明的载体、多核苷酸或核酸可以编码与编码本发明的嵌合分子的核酸融合或非融合的异源编码区。异源编码区包括但不限于专门的元件或基序，例如分泌信号肽或异源功能结构域。本文中使用的关于核苷酸序列的术语“优化的”是指编码多肽的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列已经突变以增强该多核苷酸序列的性质。在一些实施方案中，进行优化以提高转录水平，提高翻译水平，提高稳态mrna水平，提高或降低调节蛋白(例如通用转录因子)的结合，提高或降低剪接，或提高由多核苷酸序列产生的多肽的产量。可以对多核苷酸序列进行改变以对其进行优化的实例包括密码子优化，g/c含量优化，去除重复序列，去除富含at的元件，去除隐蔽剪接位点，去除抑制转录或翻译的顺式作用元件，添加或去除poly-t或polya序列，添加转录起始位点周围的增强转录的序列(例如kozak共有序列)，去除可形成茎环结构的序列，去除去稳定序列及其两种或更多种组合。哺乳动物细胞分泌的某些蛋白质与分泌信号肽相关，一旦生长的蛋白质链已经开始穿过粗面内质网运出，所述信号肽即被从成熟蛋白质上切割下来。本领域普通技术人员清楚的是，信号肽通常融合到多肽的n末端，并被从完整或“全长”多肽上切割以产生多肽的分泌型或“成熟”形式。在某些实施方案中，天然信号肽或该序列的保留指导与其可操作地缔合的多肽之分泌能力的功能性衍生物。或者，可以使用异源信号肽，例如组织纤溶酶原激活物(tpa)、单纯疱疹病毒糖蛋白d(hsvgd)的信号肽、生长激素的信号肽及其任意组合。在一些实施方案中，本文中所述的多核苷酸还包含编码tpa的信号肽的核酸序列。在某些实施方案中，本文中所述的多核苷酸还包含编码包含fms相关酪氨酸激酶3配体(“flt3l”)或其一部分的异源多肽的核酸序列。flt3l是诱导树突细胞(dendriticcell，dc)的增殖和成熟的因子，其可以增强针对抗原的免疫应答，并且当与肿瘤抗原融合时显示出优良的缓解肿瘤的效果。术语“下游”是指位于参考核苷酸序列3’端的核苷酸序列。在某些实施方案中，下游核苷酸序列涉及在转录起始位点之后的序列。例如，基因的翻译起始密码子位于转录起始位点的下游。术语“上游”是指位于参考核苷酸序列5’端的核苷酸序列。在某些实施方案中，上游核苷酸序列涉及位于编码区或转录起始位点的5’侧的序列。例如，大多数启动子位于转录起始位点的上游。本文中使用的术语“调节区”是指位于编码区上游(5’非编码序列)、内部或下游(3’非编码序列)，并且其影响相关编码区的转录、rna加工、稳定性或翻译的核苷酸序列。调节区可以包括启动子、翻译前导序列、内含子、聚腺苷酸化识别序列、rna加工位点、效应物结合位点和茎-环结构。如果意在将编码区用于在真核细胞中表达，则多聚腺苷酸化信号和转录终止序列将通常位于编码序列的3’端。编码基因产物(例如多肽)的多核苷酸可以包括与一个或更多个编码区可操作地缔合的启动子和/或其他转录或翻译控制元件。在可操作的缔合中，基因产物(例如多肽)的编码区以这种方式与一个或更多个调节区相缔合，以便在调节区的影响或控制下进行基因产物的表达。例如，如果启动子功能的诱导导致编码由编码区编码的基因产物的mrna的转录，并且如果启动子与编码区之间的连接的性质不干扰启动子指导基因产物的表达的能力或干扰dna模板被转录的能力，则编码区与启动子是“可操作地缔合的”。除了启动子之外的其他转录控制元件(例如增强子、操纵子、阻遏子和转录终止信号)也可以与编码区可操作地相缔合以指导基因产物表达。多种转录控制区是本领域技术人员已知的。这些包括但不限于在脊椎动物细胞中起作用的转录控制区，例如但不限于来自巨细胞病毒(cmv)(立即早期启动子，连同内含子-a)、猿猴病毒40(sv40)(早期启动子)和逆转录病毒(例如劳氏肉瘤病毒)的启动子和增强子区段。其他转录控制区包括来自脊椎动物基因(例如肌动蛋白、热休克蛋白、牛生长激素和兔β-球蛋白的那些)，以及能够控制真核细胞中基因表达的其他序列。其他合适的转录控制区包括组织特异性启动子和增强子以及淋巴因子诱导型启动子(例如，可由干扰素或白介素诱导的启动子)。在某些实施方案中，转录控制区可以是sv40polya、sv40增强子、pcmv早期增强子/启动子、兔β-珠蛋白介入序列(givs)或其任意组合。类似地，多种翻译控制元件对于本领域普通技术人员是已知的。这些包括但不限于核糖体结合位点、翻译起始和终止密码子，以及衍生自小rna病毒(picornavirus)(特别是内部核糖体进入位点，或ires(internalribosomeentrysite)，也称为cite序列)的元件。本文中使用的术语“表达”是指多核苷酸产生基因产物(例如rna或多肽)的过程。其包括但不限于多核苷酸转录成信使rna(mrna)、转移rna(transferrna，trna)、小发夹rna(smallhairpinrna，shrna)、小干扰rna(smallinterferingrna，sirna)或任何其他rna产物，以及将mrna翻译成多肽。表达产生“基因产物”。本文中使用的基因产物可以是核酸(例如通过基因转录产生的信使rna)，或从转录物翻译的多肽。本文中所述的基因产物还包括具有转录后修饰(例如多聚腺苷酸化或剪接)的核酸，或具有翻译后修饰(例如甲基化、糖基化、添加脂质、与其他蛋白质亚基缔合或蛋白水解切割)的多肽。“载体”是指用于将核酸克隆和/或转移到宿主细胞中的任何载体。载体可以是复制子，另一个核酸区段可以连接到该复制子上，以引起所连接的区段的复制。“复制子”是指在体内充当自主复制单位(即能够在其自身控制下复制)的任何遗传元件(例如质粒、噬菌体、黏粒、染色体、病毒)。术语“载体”包括用于在体外、离体或体内将核酸引入细胞的病毒和非病毒载体。大量载体是已知的并且在本领域中使用，包括例如质粒、经修饰的真核病毒或经修饰的细菌病毒。将多核苷酸插入到合适的载体中可以通过将合适的多核苷酸片段连接到选择为具有互补黏性末端的载体中来实现。可以将载体改造以编码选择性标志或报道分子，其为已经并入载体的细胞提供了选择或鉴定。选择性标志或报道分子的表达允许鉴定和/或选择并入并表达载体上所包含的其他编码区的宿主细胞。本领域已知和使用的选择性标志基因的实例包括：提供对氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、潮霉素、双丙氨膦除草剂(bialaphosherbicide)、磺酰胺等的抗性的基因；和用作表型标记的基因，即花色苷调节基因、异戊烯基转移酶基因等。本领域已知和使用的报道分子的实例包括：萤光素酶(luciferase，luc)、绿色萤光蛋白(greenfluorescentprotein，gfp)、氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicolacetyltransferase，cat)、半乳糖苷酶(galactosidase，lacz)、葡糖醛酸糖苷酶(glucuronidase，gus)等。选择性标志也可以被认为是报道分子。术语“质粒”是指通常携带非细胞中心代谢的一部分基因的染色体外元件，并且通常是环状双链dna分子的形式。这样的元件可以是来自于任何来源的自主复制序列、基因组整合序列、噬菌体或核苷酸序列、线性、环状或超螺旋的单链或双链dna或rna，其中许多核苷酸序列已经连接或重组到独特的构建体中，其能够将所选择基因产物的启动子片段和dna序列连同合适的3’非翻译序列一起导入细胞中。可以使用的真核病毒载体包括但不限于腺病毒载体、逆转录病毒载体、腺相关病毒载体、痘病毒载体(例如痘苗病毒载体)、杆状病毒载体或疱疹病毒载体。非病毒载体包括质粒、脂质体、带电脂质(细胞抑制素)、dna-蛋白复合物和生物聚合物。“克隆载体”是指“复制子”，其是连续复制的核酸的单位长度并且包含复制起点，例如质粒、噬菌体或黏粒，另一个核酸区段可与其连接，以便引起所连接的区段的复制。某些克隆载体能够在一种细胞类型(例如细菌)中复制，并在另一种细胞(例如真核细胞)中表达。克隆载体通常包含一个或更多个可用于选择包含载体的细胞和/或用于插入目的核酸序列的一个或更多个多克隆位点的序列。术语“表达载体”是指被设计为使所插入的核酸序列在插入宿主细胞后表达的载体。将所插入的核酸序列置于与如上所述的调节区可操作地连接。通过本领域中公知的方法将载体引入宿主细胞中，例如转染、电穿孔、显微注射、转导、细胞融合、deae葡聚糖、磷酸钙沉淀、脂质转染(溶酶体融合)、使用基因枪或dna载体转运分子。本文中使用的“培养”意指在允许细胞生长或分裂或维持细胞处于活体状态的体外条件下孵育细胞。本文中使用的“培养的细胞”意指在体外繁殖的细胞。本文中使用的术语“多肽”旨在包括单个/种“多肽”以及多个/种“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)构成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何链，并且不是指特定长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指两个或多个氨基酸的链的任何其他术语均包括在“多肽”的定义中，并且术语“多肽”可以用于代替这些术语中的任何一个或与这些术语中的任何术语互换。术语“多肽”还意指多肽的表达后修饰的产物，其包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割或通过非天然存在的氨基酸的修饰。多肽可以来源于天然生物来源或由重组技术产生，但不一定从指定的核酸序列翻译。它可以以任何方式产生，包括通过化学合成。“分离的”多肽或其片段、变体或衍生物是指不在其天然环境中的多肽。不需要特别水平的纯化。例如，可以简单地从其本身或天然环境中取出分离的多肽。出于本发明的目的，重组产生的多肽和在宿主细胞中表达的蛋白质被认为是分离的，已经通过任何合适的技术分离、分级或部分或基本纯化的天然或重组多肽也是如此。本发明还包括多肽的片段或变体及其任意组合。当提及本发明的多肽结合结构域或结合分子时，术语“片段”或“变体”包括保留参考多肽的至少一些性质的任何多肽。除了本文中别处讨论的特异性抗体片段外，多肽片段包括蛋白水解片段以及缺失片段，但不包括天然存在的全长多肽(或成熟多肽)。本发明的多肽结合结构域或结合分子的变体包括如上所述的片段，以及由于氨基酸替换、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的多肽。变体可以是天然或非天然存在的。非天然存在的变体可以使用本领域已知的诱变技术产生。变体多肽可包含保守或非保守氨基酸替换、缺失或添加。“保守性氨基酸替换”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的替换。具有相似侧链的氨基酸残基家族在本领域中已经定义，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，如果多肽中的氨基酸被来自相同侧链家族的另一个氨基酸替代，则认为替换是保守的。在另一个实施方案中，氨基酸串可以保守地替换为在侧链家族成员的顺序和/或组成方面不同的结构相似的串。如本领域已知的，通过比较一个多肽的氨基酸序列与第二多肽的序列来确定两个多肽之间的“序列同一性”。当在本文中讨论时，任何特定多肽与另一种多肽是否具有至少约50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性可以用本领域已知的方法和计算机程序/软件来确定，例如但不限于bestfit程序(wisconsin序列分析包，用于unix的第8版，geneticscomputergroup，universityresearchpark，575sciencedrive，madison，wi53711)。bestfit使用smith和waterman，advancesinappliedmathematics2：482-489(1981)的局部同源性算法来找到两个序列之间的最佳同源性区段。当使用bestfit或任何其他序列比对程序来确定特定序列是否例如与根据本发明的参考序列具有95％同一性时，当然如此设置参数，使得可以在参考多肽序列的全长上计算同一性百分比，并且允许在参考序列中存在氨基酸总数的多至5％的同源性缺口。术语“gx-188变体”、“gx-188类似物”、“gx-188变体构建体”、“gx-188类似物构建体”或本文中使用的任何类似术语表示，在施用至少一个剂量的构建体后，该构建体在体内诱导与在施用gx-188(图1a或seqidno：9)后诱导之细胞免疫应答类似的细胞免疫应答。如果变体构建体可以诱导与由gx-188诱导的细胞免疫应答相同或更高的细胞免疫应答，则细胞免疫应答可以是相似的。在另一些实施方案中，如果变体构建体诱导细胞免疫应答比由gx-188诱导的免疫应答高至少约0.9倍(例如90％)、约0.8倍、约0.7倍、约0.6倍、约0.5倍或约0.4倍，则细胞免疫应答可以是相似的。在一个实施方案中，细胞免疫应答是cd8t细胞应答、cd4t细胞应答、细胞因子分泌或其任意组合。在另一个实施方案中，细胞免疫应答包含数目提高的多功能t细胞。在某些实施方案中，当通过流式细胞术测量时，多功能t细胞表现出选自ifn-γ、il-2、tnf-α、mip-β、cd107a/b及其任意组合的至少三种、至少四种或至少五种标志物。“融合”或“嵌合”分子包含与第二氨基酸序列连接的第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列在自然界中不与所述第二氨基酸序列天然连接。通常存在于不同蛋白质中的氨基酸序列可以在融合多肽中组合在一起，或者通常存在于相同蛋白质中的氨基酸序列可以以融合多肽中的新排列进行布置。例如通过化学合成或通过产生和翻译其中肽区以期望的关系编码的多核苷酸来产生融合蛋白。嵌合蛋白还可以包含通过共价、非肽键或非共价键与第一氨基酸序列缔合的第二氨基酸序列。本文中使用的术语“分(split)”或任何类似术语是概念术语，并且是指将氨基酸序列在序列内氨基酸的c末端处分割成两个氨基酸序列。例如，hpv16的e6蛋白可以分割成两部分，即n末端部分和c末端部分。当hpv16的e6蛋白在氨基酸85处分割成两部分时，n末端部分可以包含对应于seqidno：2的第1位氨基酸至第85位氨基酸，而c末端部分可包含对应于seqidno：2的第86至158位氨基酸。然而，术语“分”不限制n末端部分(即n末端部分的c末端)和c末端部分(c末端部分的n末端)的边界与将蛋白质分割成两部分的精确的氨基酸位点。例如，在一个实施方案中，当hpv16的e6蛋白在氨基酸85处分割成两个部分时，n末端部分可包含对应于seqidno：2的第1位氨基酸至第85位氨基酸，并且c末端部分可以包含对应于seqidno：2的第71至158位氨基酸。第71至85位氨基酸可以是n末端部分与c末端部分之间的重叠序列。在另一个实施方案中，当hpv16的e6蛋白在氨基酸70处分割成两个部分时，n末端部分包含对应于seqidno：2的第1位氨基酸至第70位氨基酸，而c末端部分包含对应于seqidno：2的第71至158位氨基酸。在另一些实施方案中，n末端部分含有重叠序列，因此n末端部分可以包含对应于seqidno：2的第1位氨基酸至第85位氨基酸，而c末端部分包含对应于seqidno：2的第71至158位氨基酸。本发明的融合蛋白可以通过基于序列构建融合蛋白并随后合成地、重组地或通过本领域已知的任何其他方法制备编码融合蛋白的核苷酸序列来产生。术语“癌症”和“癌性的”是指或描述哺乳动物中的生理状况，其中细胞群的特征在于不受调节的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。这样的癌症的更特别的实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和多种类型的头颈癌。“肿瘤”和“赘生物”是指由过度细胞生长或增殖(良性(非癌性)或恶性(癌性)(包括癌前病变)引起的任何组织块。肿瘤可以是宫颈肿瘤。在一些具体实施方案中，宫颈肿瘤是良性肿瘤或恶性肿瘤。在某些实施方案中，宫颈肿瘤是鳞状细胞癌(scc)、腺癌、腺鳞癌、小细胞癌、神经内分泌肿瘤(net)、玻璃样细胞癌、血管内腺癌(vga)、非癌恶性肿瘤、黑素瘤、淋巴瘤或宫颈上皮内瘤变(cin)。在一些实施方案中，宫颈肿瘤是cin1、cin2、cin3或宫颈癌。术语“癌细胞”、“肿瘤细胞”和语法等价形式是指来自于肿瘤或癌前病变的总细胞群，其包括非致瘤性细胞(包含大部分肿瘤细胞群体)和致瘤性干细胞(癌干细胞)。编码本文中公开的融合蛋白的多核苷酸的“有效量”是足以进行特定说明的目的的量。“有效量”可以根据所述目的凭经验和以常规方式确定。本文中使用的“治疗有效量”是指在必需的剂量和时间段内有效达到期望治疗结果的量。治疗结果可以是例如减轻症状、延长存活等。治疗结果不需要是“治愈”。例如“治疗”或“缓解”的术语是指治愈、减缓、减轻所诊断的病理性病症或疾病的症状和/或停止其进展的治疗措施。因此，需要治疗的对象包括已经诊断患有或疑似患有所述疾病的对象。“对象”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”意指希望诊断、预后或治疗的任何对象，特别是哺乳动物对象。哺乳动物对象包括但不限于：人、家畜、农场动物、动物园动物、体育动物、宠物动物，例如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛；灵长类动物，例如猿、猴、猩猩和黑猩猩；犬科动物，例如狗和狼；猫科动物，例如猫、狮子和老虎；马科动物，例如马、驴和斑马；熊，食用动物，如牛、猪和绵羊；有蹄类动物，例如鹿和长颈鹿；啮齿动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠；等。在某些实施方案中，所述哺乳动物是人对象。ii.治疗分子本发明涉及治疗分子或所述治疗分子在与人乳头瘤病毒相关的疾病或病症中的用途。如本文中别处所示，治疗分子也可用作诊断剂。在一个方面，本发明治疗分子通过以这样的方式融合多于一种蛋白质来构建，使得每种蛋白质分割成两部分(n末端部分和c末端部分)，但仍包含每种蛋白质的至少所有表位。可用于本发明的蛋白质包含至少两种蛋白质、至少三种蛋白质、至少四种蛋白质或更多。在一个特定的实施方案中，治疗分子包含至少四种蛋白质或编码所述蛋白质的一种或更多种核苷酸序列。如果治疗分子利用了四种蛋白质，则治疗分子包含其八个多肽部分或八个核苷酸序列。来自于四种蛋白质(每种蛋白质分割成两部分)的八个部分可以以任何顺序放置，从而使得蛋白质不结合全长蛋白质所结合的一种或更多种肿瘤抑制物或不与四种蛋白质中的任一种形成二聚体。用于本发明的治疗分子的四种蛋白质可以是人乳头瘤病毒16型(hpv16)的e6蛋白、人乳头瘤病毒18型(hpv18)的e6蛋白和hpv16的e7蛋白和hpv18的e7蛋白。然而，来自hpv血清型的一种或更多种e6蛋白和一种或更多种e7蛋白的任何其他组合是可能的，例如对于高风险血清型的hpv血清型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和82，对于低风险血清型的hpv血清型6、11、40、42、43、44、54、61、72、73和81及其任意组合。因此，当四种蛋白质中的每一种被分割或切割成两部分时，治疗分子可包含hpv16的e6蛋白的n末端部分、hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分和hpv18的e6蛋白的c末端部分、hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分、hpv18的e7蛋白的n末端部分或其任意组合。在一个具体实施方案中，用于本发明的蛋白质仅来自于hpv16和/或hpv18。ii.a.hpv16和hpv18的e6蛋白hpv16或hpv18的e6蛋白在细胞转化的诱导和维持中起主要作用。e6蛋白主要通过刺激许多宿主细胞关键调节蛋白的破坏而作为癌蛋白发挥作用。e6蛋白与宿主e6-ap泛素-蛋白质连接酶结合，并通过将其靶向26s蛋白酶体进行降解来灭活肿瘤抑制物p53和p73。继而，dna损伤和染色体不稳定性提高，并导致细胞增殖和癌症发生。hpv16和hpv18的天然存在的e6蛋白的许多序列已被报道。例如，hpv16和hpv18的e6蛋白的氨基酸序列分别被报道为genbank登录号aal96630.1和abp99784.1。编码hpv16和hpv18的e6蛋白的野生型核苷酸序列分别报道为genbank登录号af486325.1和ef202153.1。其序列在表1中重现。表1.hpv16和hpv18的e6蛋白的序列如本文中使用的术语“hpv16或hpv18的e6蛋白”包括其任何天然存在的变体或功能变体。hpv16的e6蛋白的天然存在的变体的实例包括但不限于图13a中列出的序列：genbank登录号ags42365.1，ags42372.1，abo15571.1，ags42373.1，abk32509.1，ahz96692.1，aal01368.1，afs64243.1，ags42377.1，ags42352.1，aad33252.1，ags42313.1，ban15947.1，ack57853.1，np_041325.1，ags42269.1，aev66122.1，ags42267.1，acl12310.1，abo61749.1，aal01351.1，aav91676.1，ags42341.1，ags42314.1，ban15937.1，acs92692.1，aam29170.1，aaq10712.1，aal96621.1，aal96623.1，ags42353.1，ady75574.1，aal96604.1，aev66140.1，ack57870.1，acj66712.1，afs64227.1，aal96619.1，aal96620.1，abo61747.1，ack57855.1，adh94042.1，afs64252.1，aal96612.1，afs64257.1，aal96614.1，acj66716.1，ban15946.1，ady75573.1，ags42315.1，aaa91673.1，aaa91669.1，aaa91674.1，aaa91680.1，aaa91681.1，aaa91668.1，aaa91658.1，aaa91662.1，aaa91667.1，aaa91676.1，aaa91671.1，aaa91656.1，aaa91682.1，aaa91657.1，aaa91660.1，aaa91677.1，aaa91678.1，aaa91672.1，aaa91661.1aaa91664.1，aaa91675.1，aaa91665.1，aaa91663.1，aaa91659.1，aaa91654.1，aaa91666.1，aaa91679.1和aaa91655.1。在某些实施方案中，hpv16的e6蛋白包括一个或更多个选自以下的替换：d11e，e14d，r15p，r17i，r17t，r17g，l19v，h21q，h21d，h21e，d32n，d32e，i34r，i34l，i34t，l35v，e36q，v49l，r54w，i59v，r62k，n65s，a68g，d71e，i80v，y85h，v90l，p102l，i108f，i108x，e120d，k122r，q123e，r131t，1135m，q157l，及其任意组合。hpv18的h6蛋白的实例包括但不限于图13b中列出的序列：genbank登录号cab53096.1，agu90327.1，adc35660.1，ahz96677.1，abp99736.1，abp99704.1，ahz96678.1，agm34425.1，agm34424.1，和abp99784.1。在某些实施方案中，hpv16的e6蛋白包括一个或多个选自以下的替换：l14v，e43g，y80h，k129n，h133r，r144q，r153h，及其任意组合。ii.a.1.hpv16的e6蛋白在一个实施方案中，可用于融合蛋白的hpv16的e6蛋白不与p53结合或不与hpv16的e6蛋白形成二聚体。为了防止hpv16的e6蛋白与p53的结合，将e6蛋白分割成两部分，即e6蛋白的n末端部分和e6蛋白的c末端部分，其中每个部分不包含一个或更多个e6相关蛋白结合位点。所得到的构建体虽然包含e6蛋白的所有表位，但不包含完整的e6ap结合位点，因此不能与e6-ap形成复合物。在一个实施方案中，hpv16的e6蛋白的e6-ap结合位点包含对应于seqidno：2的l35至y39、l57至r62、v69至y85、c87、y88、q98、y99、l107、r109、q114和r136。在另一个实施方案中，hpv16的e6蛋白的e6-ap结合位点包含对应于seqidno：2的l35至r136。因此，在某些实施方案中，hpv16的e6蛋白的n末端部分具有从a到b的氨基酸序列(16e6na-b)，并且hpv16的e6蛋白的c末端部分具有c至d的氨基酸序列(16e6cc-d)，其中a是对应于seqidno：2的第1或2位氨基酸，b是选自对应于seqidno：2的第35至135位氨基酸的氨基酸，c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第36位氨基酸的氨基酸和等于或低于第b+1位氨基酸的氨基酸，并且d是对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸。hpv16的e6蛋白可以在对应于seqidno：2的氨基酸22leu、23cys、41lys、42gln、43gln、45leu、46arg、47arg、49val、50tyr、51asp、53ala、54phe、57leu、71asp、74leu、75lys、76phe、78ser、79lys、80ile、82glu、83tyr、84arg、85tyr、86tyr或99tyr处与p53相互作用。p53上相应的相互作用位点可以包括p53的110arg、111leu112gly、113phe、114leu、115his、116ser、124cys、126tyr、128pro、131asn、142pro、144gln146trp、229cys和231thr。因此，在某些实施方案中，可以通过将e6蛋白在选自对应于seqidno：2的第22至98位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分而产生e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一些实施方案中，本发明的融合蛋白通过防止与另一种e6蛋白的相互作用而不与hpv16的e6蛋白形成二聚体。e6蛋白降解p53需要与另一种e6蛋白形成二聚体。因此，通过破坏e6蛋白上的二聚体形成位点，则e6蛋白不再能降解p53。hpv16的e6蛋白通过在对应于seqidno：2的q42、k72、f76和y77处直接相互作用而与另一种e6蛋白形成二聚体。在一个实施方案中，可以通过将e6蛋白在选自对应于seqidno：2的氨基酸42至76的氨基酸的c末端分割成两个部分来产生hpv16的e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv16的e6的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c末端部分，其中a是对应于seqidno：2的第1或2位氨基酸，b是选自对应于seqidno：2的第42至76位氨基酸的氨基酸，c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第43位氨基酸和等于或低于第b+1位氨基酸的氨基酸，并且d是对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸。为了使hpv16的e6蛋白与另一种e6蛋白形成二聚体，e6蛋白必须在其锌指基序1中并入锌。当锌指基序1不能并入锌时，hpv16的e6蛋白不再能形成二聚体。特别地，锌指基序1的四个半胱氨酸(其位于对应于seqidno：2的第37、40、70和73位氨基酸)直接与锌相互作用。在一个实施方案中，hpv16的e6蛋白的n-末端部分在锌指基序1内仅含有一个半胱氨酸、两个半胱氨酸或三个半胱氨酸，而hpv16的e6蛋白的c端部分分别在锌指基序1内含有三个半胱氨酸、两个半胱氨酸或一个半胱氨酸。在另一个实施方案中，可以通过将e6蛋白在选自对应于seqidno：2的第37至72位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两个部分而产生e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv16的e6的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c末端部分，其中a是对应于seqidno：2的第1或2位氨基酸，b是选自对应于seqidno：2的第37至72位氨基酸的氨基酸，c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第38位氨基酸的氨基酸和等于或低于第b+1位氨基酸的氨基酸，并且d是对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸。在一些实施方案中，融合蛋白包含16e6na-b和16e6cc-d，其中对应于seqidno：2，a是第1或2位氨基酸，d是第157或158位氨基酸，并且b和c如下：b是第35位氨基酸残基，c是第36位氨基酸残基；b是第36位氨基酸残基，c是第36或37位氨基酸残基；b是第37位氨基酸残基，c是第36、37或38位氨基酸残基；b是第38位氨基酸残基，c是第36、37、38或39位氨基酸残基；b是第39位氨基酸残基，c是第36、37、38、39或40位氨基酸残基；b是第40位氨基酸残基，c是选自第36至41位氨基酸残基的氨基酸；b是第41位氨基酸残基，c是选自第36至42位氨基酸残基的氨基酸；b是第42位氨基酸残基，c是选自第36至43位氨基酸残基的氨基酸；b是第43位氨基酸残基，c是选自第36至44位氨基酸残基的氨基酸；b是第44位氨基酸残基，c是选自第36至45位氨基酸残基的氨基酸；b是第45位氨基酸残基，c是选自第36至46位氨基酸残基的氨基酸；b是第46位氨基酸残基，c是选自第36至47位氨基酸残基的氨基酸；b是第47位氨基酸残基，c是选自第36至48位氨基酸残基的氨基酸；b是第48位氨基酸残基，c是选自第36至49位氨基酸残基的氨基酸；b是第49位氨基酸残基，c是选自第36至50位氨基酸残基的氨基酸；b是第50位氨基酸残基，c是选自第36至51位氨基酸残基的氨基酸；b是第51位氨基酸残基，c是选自第36至52位氨基酸残基的氨基酸；b是第52位氨基酸残基，c是选自第36至53位氨基酸残基的氨基酸；b是第53位氨基酸残基，c是选自第36至54位氨基酸残基的氨基酸；b是第54位氨基酸残基，c是选自第36至55位氨基酸残基的氨基酸；b是第55位氨基酸残基，c是选自第36至56位氨基酸残基的氨基酸；b是第56位氨基酸残基，c是选自第36至57位氨基酸残基的氨基酸；b是第57位氨基酸残基，c是选自第36至58位氨基酸残基的氨基酸；b是第58位氨基酸残基，c是选自第36至59位氨基酸残基的氨基酸；b是第59位氨基酸残基，c是选自第36至60位氨基酸残基的氨基酸；b是第60位氨基酸残基，c是选自第36至61位氨基酸残基的氨基酸；b是第61位氨基酸残基，c是选自第36至62位氨基酸残基的氨基酸；b是第62位氨基酸残基，c是选自第36至63位氨基酸残基的氨基酸；b是第63位氨基酸残基，c是选自第36至64位氨基酸残基的氨基酸；b是第64位氨基酸残基，c是选自第36至65位氨基酸残基的氨基酸；b是第65位氨基酸残基，c是选自第36至66位氨基酸残基的氨基酸；b是第66位氨基酸残基，c是选自第36至67位氨基酸残基的氨基酸；b是第67位氨基酸残基，c是选自第36至68位氨基酸残基的氨基酸；b是第68位氨基酸残基，c是选自第36至69位氨基酸残基的氨基酸；b是第69位氨基酸残基，c是选自第36至70位氨基酸残基的氨基酸；b是第70位氨基酸残基，c是选自第36至71位氨基酸残基的氨基酸；b是第71位氨基酸残基，c是选自第36至72位氨基酸残基的氨基酸；b是第72位氨基酸残基，c是选自第36至73位氨基酸残基的氨基酸；b是第73位氨基酸残基，c是选自第36至74位氨基酸残基的氨基酸；b是第74位氨基酸残基，c是选自第36至75位氨基酸残基的氨基酸；b是第75位氨基酸残基，c是选自第36至76位氨基酸残基的氨基酸；b是第76位氨基酸残基，c是选自第36至77位氨基酸残基的氨基酸；b是第77位氨基酸残基，c是选自第36至78位氨基酸残基的氨基酸；b是第78位氨基酸残基，c是选自第36至79位氨基酸残基的氨基酸；b是第79位氨基酸残基，c是选自第36至80位氨基酸残基的氨基酸；b是第80位氨基酸残基，c是选自第36至81位氨基酸残基的氨基酸；b是第81位氨基酸残基，c是选自第36至82位氨基酸残基的氨基酸；b是第82位氨基酸残基，c是选自第36至83位氨基酸残基的氨基酸；b是第83位氨基酸残基，c是选自第36至84位氨基酸残基的氨基酸；b是第84位氨基酸残基，c是选自第36至85位氨基酸残基的氨基酸；b是第85位氨基酸残基，c是选自第36至86位氨基酸残基的氨基酸；b是第86位氨基酸残基，c是选自第36至87位氨基酸残基的氨基酸；b是第87位氨基酸残基，c是选自第36至88位氨基酸残基的氨基酸；b是第88位氨基酸残基，c是选自第36至89位氨基酸残基的氨基酸；b是第89位氨基酸残基，c是选自第36至90位氨基酸残基的氨基酸；b是第90位氨基酸残基，c是选自第36至91位氨基酸残基的氨基酸；b是第91位氨基酸残基，c是选自第36至92位氨基酸残基的氨基酸；b是第92位氨基酸残基，c是选自第36至93位氨基酸残基的氨基酸；b是第93位氨基酸残基，c是选自第36至94位氨基酸残基的氨基酸；b是第94位氨基酸残基，c是选自第36至95位氨基酸残基的氨基酸；b是第95位氨基酸残基，c是选自第36至96位氨基酸残基的氨基酸；b是第96位氨基酸残基，c是选自第36至97位氨基酸残基的氨基酸；b是第97位氨基酸残基，c是选自第36至98位氨基酸残基的氨基酸；b是第98位氨基酸残基，c是选自第36至99位氨基酸残基的氨基酸；b是第99位氨基酸残基，c是选自第36至100位氨基酸残基的氨基酸；b是第100位氨基酸残基，c是选自第36至101位氨基酸残基的氨基酸；b是第101位氨基酸残基，c是选自第36至102位氨基酸残基的氨基酸；b是第102位氨基酸残基，c是选自第36至103位氨基酸残基的氨基酸；b是第103位氨基酸残基，c是选自第36至104位氨基酸残基的氨基酸；b是第104位氨基酸残基，c是选自第36至105位氨基酸残基的氨基酸；b是第105位氨基酸残基，c是选自第36至106位氨基酸残基的氨基酸；b是第106位氨基酸残基，c是选自第36至107位氨基酸残基的氨基酸；b是第107位氨基酸残基，c是选自第36至108位氨基酸残基的氨基酸；b是第108位氨基酸残基，c是选自第36至109位氨基酸残基的氨基酸；b是第109位氨基酸残基，c是选自第36至110位氨基酸残基的氨基酸；b是第110位氨基酸残基，c是选自第36至111位氨基酸残基的氨基酸；b是第111位氨基酸残基，c是选自第36至112位氨基酸残基的氨基酸；b是第112位氨基酸残基，c是选自第36至113位氨基酸残基的氨基酸；b是第113位氨基酸残基，c是选自第36至114位氨基酸残基的氨基酸；b是第114位氨基酸残基，c是选自第36至115位氨基酸残基的氨基酸；b是第115位氨基酸残基，c是选自第36至116位氨基酸残基的氨基酸；b是第116位氨基酸残基，c是选自第36至117位氨基酸残基的氨基酸；b是第117位氨基酸残基，c是选自第36至118位氨基酸残基的氨基酸；b是第118位氨基酸残基，c是选自第36至119位氨基酸残基的氨基酸；b是第119位氨基酸残基，c是选自第36至120位氨基酸残基的氨基酸；b是第120位氨基酸残基，c是选自第36至121位氨基酸残基的氨基酸；b是第121位氨基酸残基，c是选自第36至122位氨基酸残基的氨基酸；b是第122位氨基酸残基，c是选自第36至123位氨基酸残基的氨基酸；b是第123位氨基酸残基，c是选自第36至124位氨基酸残基的氨基酸；b是第124位氨基酸残基，c是选自第36至125位氨基酸残基的氨基酸；b是第125位氨基酸残基，c是选自第36至126位氨基酸残基的氨基酸；b是第126位氨基酸残基，c是选自第36至127位氨基酸残基的氨基酸；b是第127位氨基酸残基，c是选自第36至128位氨基酸残基的氨基酸；b是第128位氨基酸残基，c是选自第36至129位氨基酸残基的氨基酸；b是第129位氨基酸残基，c是选自第36至130位氨基酸残基的氨基酸；b是第130位氨基酸残基，c是选自第36至131位氨基酸残基的氨基酸；b是第131位氨基酸残基，c是选自第36至132位氨基酸残基的氨基酸；b是第132位氨基酸残基，c是选自第36至133位氨基酸残基的氨基酸；b是第133位氨基酸残基，c是选自第36至134位氨基酸残基的氨基酸；b是第134位氨基酸残基，c是选自第36至135位氨基酸残基的氨基酸；或者b是第135位氨基酸残基，c是选自第36至136位氨基酸残基的氨基酸。在某些实施方案中，当hpv16的e6蛋白的n末端部分和hpv16的e6蛋白的c末端部分一起比对时，含有重叠序列。重叠序列可以是至少1个、5个、7个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、105个、110个、115个或120个氨基酸。虽然n末端部分或c末端部分可以含有重叠序列，然而，n末端部分或c末端部分都不包含完整的e6ap结合结构域，例如对应于seqidno：2的氨基酸35至136。复合物e6/e6-ap靶向几种其他底物以通过包括宿主nfx1-91(人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase，htert)的阻遏物)的蛋白酶体进行降解。所导致的htert的提高的表达阻止端粒长度的缩短，并导致细胞永生化。另一些细胞靶标(包括bak、fas相关死亡结构域蛋白(fas-associateddeathdomain-containingprotein，fadd)和胱天蛋白酶原8)被e6/e6-ap降解，引起细胞凋亡的抑制。e6蛋白还通过与宿主irf3和tyk2相互作用来抑制免疫应答。这些相互作用阻止irf3转录活性并抑制干扰素α引起的tyk2介导的jak-stat激活，导致对干扰素信号传导途径的抑制。因此，hpv16的e6蛋白可以分割成hpv16的e6蛋白的n末端部分和hpv16的e6蛋白的c末端部分，从而使得融合蛋白不能结合除p53之外的一种或更多种底物，例如htert、bak、fadd、胱天蛋白酶原8的阻遏物或不能与宿主irf3和tyk2相互作用。ii.a.2.hpv18的e6蛋白可用于融合蛋白的hpv18的e6蛋白不与p53结合或不与hpv18的e6蛋白形成二聚体。为了防止hpv18的e6蛋白与p53的结合，将e6蛋白分割成e6蛋白的n末端部分和e6蛋白的c末端部分两部分，其中每个部分不包含一个或更多个e6相关蛋白结合位点。在一个实施方案中，hpv18的e6蛋白的e6-ap结合位点包含对应于seqidno：4的i30至y34、l52至r57、a64至y80、s82、d83、l93、t94、l102、r104、q109和a131。在另一个实施方案中，hpv18的e6蛋白的e6-ap结合位点包含对应于seqidno：4的i30至a131。因此，在某些实施方案中，hpv18的e6蛋白的n末端部分具有a至b的氨基酸序列(18e6ni-j)，并且hpv16的e6蛋白的c末端部分具有c至d的氨基酸序列(16e6ck-1)，其中i是对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸，j是选自对应于seqidno：4的选自第30至130位氨基酸的氨基酸，k是选自对应于seqidno：4等于或高于第31位氨基酸和等于或低于第j+1位氨基酸的氨基酸，并且i是对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸。hpv18的e6蛋白可以在对应于seqidno：4的氨基酸17leu、18cys、36lys、44val、45phe、46glu、48ala、49phe、52leu、66his、69ile、70asp、71phe、73ser、74arg、75ile、77glu、78leu、79arg、80tyr或81tyr处与p53相互作用。p53上相应的相互作用位点包括p53的110arg、111leu112gly、113phe、114leu、115his、116ser、124cys、126tyr、128pro、131asn、142pro、144gln、146trp、229cys和231thr。因此，在某些实施方案中，可以通过将e6蛋白在选自对应于seqidno：4的第17至80位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分来产生hpv18的e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一些实施方案中，本发明的融合蛋白通过防止与另一种e6蛋白的相互作用而不与hpv18的e6蛋白形成二聚体。hpv18的e6蛋白通过在对应于seqidno：4的t37、k67、f71和y72处直接相互作用而与另一种e6蛋白形成二聚体。因此，可以通过将hpv18的e6蛋白在选自对应于seqidno：4的第37至71位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分来产生hpv18的e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv18的e6的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c末端部分(18e6ck-1)，其中i是对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸，j是选自对应于seqidno：4的第37至71位氨基酸的氨基酸，k是选自对应于seqidno：4的等于或高于氨基酸第38位氨基酸和等于或低于第j+1位氨基酸的氨基酸，并且l是对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸。为了使hpv18的e6蛋白与另一种e6蛋白形成二聚体以降解p53，e6蛋白必须在其锌指基序1中并入锌。因此，当锌指基序1无法并入锌时，hpv18的e6蛋白不再能形成二聚体。特别地，锌指基序1的四个半胱氨酸(其位于对应于seqidno：4的第32、35、65和68位氨基酸)直接与锌相互作用。在一个实施方案中，hpv18的e6蛋白的n-末端部分在锌指基序1内仅含有一个半胱氨酸、两个半胱氨酸或三个半胱氨酸，而hpv18的e6蛋白的c端部分分别在锌指基序1内含有三个半胱氨酸、两个半胱氨酸或一个半胱氨酸。在另一个实施方案中，可以通过将e6蛋白在选自对应于seqidno：4的第32至67位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分来产生hpv18的e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv18的e6蛋白的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c末端部分，其中i是对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸，j是选自对应于seqidno：4的第32至67位氨基酸的氨基酸，k是选自对应于seqidno：4的等于或高于第33位氨基酸和等于或低于第j+1位氨基酸的氨基酸，并且l是对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸。在一些实施方案中，融合蛋白包含18e6ni-j和18e6ck-1，其中对应于seqidno：4，i是第1或2位氨基酸，i是第157或158位氨基酸，j和k如下：j是第30位氨基酸残基，k是第31位氨基酸残基；j是第31位氨基酸残基，k是第31或32位氨基酸残基；j是第32位氨基酸残基，k是第31、32或33位氨基酸残基；j是第33位氨基酸残基，k是第31、32、33或34位氨基酸残基；j是第34位氨基酸残基，k是第31、32、33、34或35位氨基酸残基；j是第35位氨基酸残基，k是选自第31至36位氨基酸残基的氨基酸；j是第36位氨基酸残基，k是选自第31至37位氨基酸残基的氨基酸；j是第37位氨基酸残基，k是选自第31至38位氨基酸残基的氨基酸；j是第38位氨基酸残基，k是选自第31至39位氨基酸残基的氨基酸；j是第39位氨基酸残基，k是选自第31至40位氨基酸残基的氨基酸；j是第40位氨基酸残基，k是选自第31至41位氨基酸残基的氨基酸；j是第41位氨基酸残基，k是选自第31至42位氨基酸残基的氨基酸；j是第42位氨基酸残基，k是选自第31至43位氨基酸残基的氨基酸；j是第43位氨基酸残基，k是选自第31至44位氨基酸残基的氨基酸；j是第44位氨基酸残基，k是选自第31至45位氨基酸残基的氨基酸；j是第45位氨基酸残基，k是选自第31至46位氨基酸残基的氨基酸；j是第46位氨基酸残基，k是选自第31至47位氨基酸残基的氨基酸；j是第47位氨基酸残基，k是选自第31至48位氨基酸残基的氨基酸；j是第48位氨基酸残基，k是选自第31至49位氨基酸残基的氨基酸；j是第49位氨基酸残基，k是选自第31至50位氨基酸残基的氨基酸；j是第50位氨基酸残基，k是选自第31至51位氨基酸残基的氨基酸；j是第51位氨基酸残基，k是选自第31至52位氨基酸残基的氨基酸；j是第52位氨基酸残基，k是选自第31至53位氨基酸残基的氨基酸；j是第53位氨基酸残基，k是选自第31至54位氨基酸残基的氨基酸；j是第54位氨基酸残基，k是选自第31至55位氨基酸残基的氨基酸；j是第55位氨基酸残基，k是选自第31至56位氨基酸残基的氨基酸；j是第56位氨基酸残基，k是选自第31至57位氨基酸残基的氨基酸；j是第57位氨基酸残基，k是选自第31至58位氨基酸残基的氨基酸；j是第58位氨基酸残基，k是选自第31至59位氨基酸残基的氨基酸；j是第59位氨基酸残基，k是选自第31至60位氨基酸残基的氨基酸；j是第60位氨基酸残基，k是选自第31至61位氨基酸残基的氨基酸；j是第61位氨基酸残基，k是选自第31至62位氨基酸残基的氨基酸；j是第62位氨基酸残基，k是选自第31至63位氨基酸残基的氨基酸；j是第63位氨基酸残基，k是选自第31至64位氨基酸残基的氨基酸；j是第64位氨基酸残基，k是选自第31至65位氨基酸残基的氨基酸；j是第65位氨基酸残基，k是选自第31至66位氨基酸残基的氨基酸；j是第66位氨基酸残基，k是选自第31至67位氨基酸残基的氨基酸；j是第67位氨基酸残基，k是选自第31至68位氨基酸残基的氨基酸；j是第68位氨基酸残基，k是选自第31至69位氨基酸残基的氨基酸；j是第69位氨基酸残基，k是选自第31至70位氨基酸残基的氨基酸；j是第70位氨基酸残基，k是选自第31至71位氨基酸残基的氨基酸；j是第71位氨基酸残基，k是选自第31至72位氨基酸残基的氨基酸；j是第72位氨基酸残基，k是选自第31至73位氨基酸残基的氨基酸；j是第73位氨基酸残基，k是选自第31至74位氨基酸残基的氨基酸；j是第74位氨基酸残基，k是选自第31至75位氨基酸残基的氨基酸；j是第75位氨基酸残基，k是选自第31至76位氨基酸残基的氨基酸；j是第76位氨基酸残基，k是选自第31至77位氨基酸残基的氨基酸；j是第77位氨基酸残基，k是选自第31至78位氨基酸残基的氨基酸；j是第78位氨基酸残基，k是选自第31至79位氨基酸残基的氨基酸；j是第79位氨基酸残基，k是选自第31至80位氨基酸残基的氨基酸；j是第80位氨基酸残基，k是选自第31至81位氨基酸残基的氨基酸；j是第81位氨基酸残基，k是选自第31至82位氨基酸残基的氨基酸；j是第82位氨基酸残基，k是选自第31至83位氨基酸残基的氨基酸；j是第83位氨基酸残基，k是选自第31至84位氨基酸残基的氨基酸；j是第84位氨基酸残基，k是选自第31至85位氨基酸残基的氨基酸；j是第85位氨基酸残基，k是选自第31至86位氨基酸残基的氨基酸；j是第86位氨基酸残基，k是选自第31至87位氨基酸残基的氨基酸；j是第87位氨基酸残基，k是选自第31至88位氨基酸残基的氨基酸；j是第88位氨基酸残基，k是选自第31至89位氨基酸残基的氨基酸；j是第89位氨基酸残基，k是选自第31至90位氨基酸残基的氨基酸；j是第90位氨基酸残基，k是选自第31至91位氨基酸残基的氨基酸；j是第91位氨基酸残基，k是选自第31至92的氨基酸位氨基酸残基；j是第92位氨基酸残基，k是选自第31至93位氨基酸残基的氨基酸；j是第93位氨基酸残基，k是选自第31至94位氨基酸残基的氨基酸；j是第94位氨基酸残基，k是选自第31至95位氨基酸残基的氨基酸；j是第95位氨基酸残基，k是选自第31至96位氨基酸残基的氨基酸；j是第96位氨基酸残基，k是选自第31至97位氨基酸残基的氨基酸；j是第97位氨基酸残基，k是选自第31至98位氨基酸残基的氨基酸；j是第98位氨基酸残基，k是选自第31至99位氨基酸残基的氨基酸；j是第99位氨基酸残基，k是选自第31至100位氨基酸残基的氨基酸；j是第100位氨基酸残基，k是选自第31至101位氨基酸残基的氨基酸；j是第101位氨基酸残基，k是选自第31至102位氨基酸残基的氨基酸；j是第102位氨基酸残基，k是选自第31至103位氨基酸残基的氨基酸；j是第103位氨基酸残基，k是选自第31至104位氨基酸残基的氨基酸；j是第104位氨基酸残基，k是选自第31至105位氨基酸残基的氨基酸；j是第105位氨基酸残基，k是选自第31至106位氨基酸残基的氨基酸；j是第106位氨基酸残基，k是选自第31至107位氨基酸残基的氨基酸；j是第107位氨基酸残基，k是选自第31至108位氨基酸残基的氨基酸；j是第108位氨基酸残基，k是选自第31至109位氨基酸残基的氨基酸；j是第109位氨基酸残基，k是选自第31至110位氨基酸残基的氨基酸；j是第110位氨基酸残基，k是选自第31至111位氨基酸残基的氨基酸；j是第111位氨基酸残基，k是选自第31至112位氨基酸残基的氨基酸；j是第112位氨基酸残基，k是选自第31至113位氨基酸残基的氨基酸；j是第113位氨基酸残基，k是选自第31至114位氨基酸残基的氨基酸；j是第114位氨基酸残基，k是选自第31至115位氨基酸残基的氨基酸；j是第115位氨基酸残基，k是选自第31至116位氨基酸残基的氨基酸；j是第116位氨基酸残基，k是选自第31至117位氨基酸残基的氨基酸；j是第117位氨基酸残基，k是选自第31至118位氨基酸残基的氨基酸；j是第118位氨基酸残基，k是选自第31至119位氨基酸残基的氨基酸；j是第119位氨基酸残基，k是选自第31至120位氨基酸残基的氨基酸；j是第120位氨基酸残基，k是选自第31至121位氨基酸残基的氨基酸；j是第121位氨基酸残基，k是选自第31至122位氨基酸残基的氨基酸；j是第122位氨基酸残基，k是选自第31至123位氨基酸残基的氨基酸；j是第123位氨基酸残基，k是选自第31至124位氨基酸残基的氨基酸；j是第124位氨基酸残基，k是选自第31至125位氨基酸残基的氨基酸；j是第125位氨基酸残基，k是选自第31至126位氨基酸残基的氨基酸；j是第126位氨基酸残基，k是选自第31至127位氨基酸残基的氨基酸；j是第127位氨基酸残基，k是选自第31至128位氨基酸残基的氨基酸；j是第128位氨基酸残基，k是选自第31至129位氨基酸残基的氨基酸；j是第129位氨基酸残基，k是选自第31至130位氨基酸残基的氨基酸；或者j是第130位氨基酸残基，k是选自第31至131位氨基酸残基的氨基酸。在某些实施方案中，当hpv18的e6蛋白的n末端部分和hpv18的e6蛋白的c末端部分一起比对时，含有重叠序列。重叠序列可以是hpv18的e6蛋白的至少1个、5个、7个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、105个、110个、115个或120个氨基酸。虽然n末端部分或c末端部分可以含有重叠序列，然而，n末端部分和c末端部分都不包含完整的e6ap结合结构域，例如对应于seqidno：4的第30至131位氨基酸。另外，hpv18的e6蛋白可以分割成hpv18的e6蛋白的n末端部分以及hpv18的e6蛋白的c末端部分，从而使得融合蛋白不能结合除p53之外的一种或更多种底物，例如htert、bak、fadd、胱天蛋白酶原8的阻遏物或不能与宿主irf3和tyk2相互作用。ii.b.hpv16和hpv18的e7蛋白hpv16或hpv18的e7蛋白具有转化和反式激活活性。它破坏宿主视网膜母细胞瘤蛋白rb1/prb的功能，这是细胞周期的关键调节器。hpv16或hpv18的e7蛋白诱导e2f1转录因子从rb1解组装，随后转录激活e2f1调节的s期基因。rb1阻滞细胞周期能力的失活对于由病毒感染诱导的细胞转化、不受控制的细胞生长和增殖是关键的。从g1到s期之进展的刺激允许病毒高效地使用细胞dna复制机制来实现病毒基因组复制。hpv16或hpv18的e7蛋白干扰由hdac1和hdac2介导的组蛋白脱乙酰化，导致转录的激活。报道了hpv16和hpv18的天然存在的e7蛋白的许多序列。例如，hpv16和hpv18的e7蛋白的氨基酸序列分别作为genbank登录号np_041326.1(seqidno：6)和abp99785.1(seqidno：8)报道。编码hpv16和hpv18的e7蛋白的野生型核苷酸序列分别作为genbank登录号nc_001526.2(seqidno：5)和ef202153.1(seqidno：7)报道。所述序列在表2中再现。表2.hpv16和hpv18的e7蛋白序列本文中使用的术语“hpv16或hpv18的e7蛋白”包括其任何天然存在的变体或功能变体。hpv16的e7蛋白的天然存在的变体的实例包括但不限于图13c-d中列出的蛋白：genbank登录号：aab70738.1，acn22555.1，abk32510.1，aal96649.1，abc54573.1，acn22554.1，aal96631.1，abk32512.1，acj66713.1，aal96650.1，abk32511.1，ady75576.1，aam03025.1，aal96634.1，aal66736.1，afu06654.1，afu06650.1，abl96585.1，adh94043.1，afu06662.1，aao15692.1，afu06676.1，afu06594.1，aaf13395.1，afj19516.1，afj19720.1，afj19712.1，ago04504.1，afj19770.1，afj19520.2，afj19778.1，abl96586.1，afj19694.1，afj19686.1，afj19774.1，afj19708.1，abl96587.1，afj19674.1，afj19704.1，ago04488.1，abl96591.1，afj19748.1，ago04498.1，ago04496.1，afj19684.1，afj19678.1，ago04484.1，afj19698.1，afj19776.1，afj19746.1，afj19726.1，afj19722.1，afj19752.1，afj19732.1，afj19762.1，afj19668.1，afj19664.1，afj19766.1，afj19756.1，afj19680.1，afj19772.1，afj19696.1，afj19690.1，ago04496.1，和acq90216.1。在某些实施方案中，hpv16的e7蛋白包括一个或更多个选自以下的替换：p6s，t7k，e10k，m12k，d14g，l15v，t20i，t20s，y23h，y23c，y23n，c24s，y25d，e26v，q27h，l28s，l28f，n29s，n29y，n29h，n29p，d30h，d30f，s31n，s31r，e33d，e34d，e34g，e35d，d36h，e37g，i38k，d39e，d39n，g40c，p41q，a42d，a42t，g43e，e46k，d48v，r49g，a50v，h51l，n53k，n53t，i54n，v55i，t56i，c58y，k60r，k60m，c61r，s63c，s63f，l65p，r66w，l67m，l67f，l67s，q70r，h73l，h73r，v74l，r77c，r77q，r77s，t78a，e80y，d81g，l82p，l82m，m84t，m84i，g85d，g85s，g85a，t86a，t86i，v90m，c91s，q96r，及其任意组合。hpv18的e7蛋白的实例包括但不限于genbank登录号：agu90416.1，agu90384.1，cab53097.1，p06788.2，abp99745.1，cab53098.1，cab53099.1，adc35661.1，abp99785.1，和p06788.2.1。在一些实施方案中，hpv18的e7蛋白包括选自d10n、e20d、d24g、e35k、e73k、r84g、s92n、s92k及其任意组合的一个或更多个替换。ii.b.1.hpv16的e7蛋白在一个实施方案中，可用于融合蛋白的hpv16的e7蛋白不与prb结合或不与hpv16的e7蛋白形成二聚体。为了防止hpv16的e7蛋白与prb的结合，e7蛋白可以分割成两部分：e7蛋白的n末端部分和e7蛋白的c末端部分，其中每个不包含一个或更多个prb结合位点，而当比对时，n末端部分和c末端部分包含hpv16的e7蛋白的完整序列。hpv16的e7蛋白上的prb结合位点包含e7蛋白的cr2结构域和cr3结构域。在一个实施方案中，hpv16的e7蛋白的prb结合位点包含对应于seqidno：6的e18至d39、q44至p98或e18至p98。因此，在某些实施方案中，hpv16的e7蛋白的n末端部分具有从e到f的氨基酸序列(16e7ne-f)，并且hpv16的e7蛋白的c末端部分具有g至h的氨基酸序列(16e6cg-h)，其中e是对应于seqidno：6的第1或2位氨基酸，f是选自对应于seqidno：6的第18至97位氨基酸的氨基酸，g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位氨基酸的氨基酸和等于或低于第f+1位氨基酸的氨基酸，并且h是对应于seqidno：6的第97或98位氨基酸。hpv16的e7蛋白可以在对应于seqidno：6的氨基酸51his、52tyr、53asn、63ser、64thr、65leu、66arg、67leu、68cys、69val、70gln、80glu、82leu、83leu、87leu、89ile、90val、92pro、93ile、95ser、97lys或98pro处与prb相互作用。prb上的相应相互作用位点包括prb的378val、379met、380asn、381thr、382ile、383gln、384gln、387met、388ile、390asn、497thr、498tyr、499ser、500arg、501ser、503ser和531val。因此，在某些实施方案中，可以通过将e7蛋白在选自对应于seqidno：6的第51至97位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分来产生e7蛋白的n末端部分和c末端部分。在一些实施方案中，本发明的融合蛋白通过防止与另一种e7蛋白的相互作用而不与hpv16的e7蛋白形成二聚体。hpv16的e7蛋白通过在α1螺旋(73hvdirtledllm84)(seqidno：16)、β2片层(64tlrlcvqs71)(seqidno：17)和/或β1片层(48drahynivtfc58)(seqidno：18)处直接与另一种e7蛋白相互作用来形成二聚体。因此，e6蛋白的n末端部分和c末端部分可分割成两部分以破坏e7蛋白的α1螺旋、β2片层或β1片层。在一些实施方案中，通过在可破坏cr3结构域的氨基酸处，即在选自对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸的氨基酸的c末端分割e7蛋白来产生e6蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv16的e7蛋白的n末端部分(16e6ne-f)和hpv16的e7蛋白的c末端部分，其中e是对应于seqidno：6的第1或2位氨基酸，f是选自对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸的氨基酸，g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第45位氨基酸的氨基酸和等于或低于第f+1位氨基酸的氨基酸，并且h是对应于seqidno：6的第97或98位氨基酸。在一些实施方案中，融合蛋白包含16e7ne-f和16e7cg-h，其中对应于seqidno：6，e为第1或2位氨基酸，h为第97或98位氨基酸，且f和g如下：f是第18位氨基酸残基，g是第19位氨基酸残基；f是第19位氨基酸残基，g是第19或20位氨基酸残基；f是第20位氨基酸残基，g是第19、20或21位氨基酸残基；f是第21位氨基酸残基，g是第19、20、21或22位氨基酸残基；f是第22位氨基酸残基，g是第19、20、21、22或23位氨基酸残基；f是第23位氨基酸残基，g是选自第19至24位氨基酸残基的氨基酸；f是第24位氨基酸残基，g是选自第19至25位氨基酸残基的氨基酸；f是第25位氨基酸残基，g是选自第19至26位氨基酸残基的氨基酸；f是第26位氨基酸残基，g是选自第19至27位氨基酸残基的氨基酸；f是第27位氨基酸残基，g是选自第19至28位氨基酸残基的氨基酸；f是第28位氨基酸残基，g是选自第19至29位氨基酸残基的氨基酸；f是第29位氨基酸残基，g是选自第19至30位氨基酸残基的氨基酸；f是第30位氨基酸残基，g是选自第19至31位氨基酸残基的氨基酸；f是第31位氨基酸残基，g是选自第19至32位氨基酸残基的氨基酸；f是第32位氨基酸残基，g是选自第19至33位氨基酸残基的氨基酸；f是第33位氨基酸残基，g是选自第196至34位氨基酸残基的氨基酸；f是第34位氨基酸残基，g是选自第19至35位氨基酸残基的氨基酸；f是第35位氨基酸残基，g是选自第19至36位氨基酸残基的氨基酸；f是第36位氨基酸残基，g是选自第19至37位氨基酸残基的氨基酸；f是第37位氨基酸残基，g是选自第19至38位氨基酸残基的氨基酸；f是第38位氨基酸残基，g是选自第19至39位氨基酸残基的氨基酸；f是第39位氨基酸残基，g是选自第19至40位氨基酸残基的氨基酸；f是第40位氨基酸残基，g是选自第19至41位氨基酸残基的氨基酸；f是第41位氨基酸残基，g是选自第19至42位氨基酸残基的氨基酸；f是第42位氨基酸残基，g是选自第19至43位氨基酸残基的氨基酸；f是第43位氨基酸残基，g是选自第19至44位氨基酸残基的氨基酸；f是第44位氨基酸残基，g是选自第19至45位氨基酸残基的氨基酸；f是第45位氨基酸残基，g是选自第19至46位氨基酸残基的氨基酸；f是第46位氨基酸残基，g是选自第19至47位氨基酸残基的氨基酸；f是第47位氨基酸残基，g是选自第19至48位氨基酸残基的氨基酸；f是第48位氨基酸残基，g是选自第19至49位氨基酸残基的氨基酸；f是第49位氨基酸残基，g是选自第19至50位氨基酸残基的氨基酸；f是第50位氨基酸残基，g是选自第19至51位氨基酸残基的氨基酸；f是第51位氨基酸残基，g是选自第19至52位氨基酸残基的氨基酸；f是第52位氨基酸残基，g是选自第19至53位氨基酸残基的氨基酸；f是第53位氨基酸残基，g是选自第19至54位氨基酸残基的氨基酸；f是第54位氨基酸残基，g是选自第19至55位氨基酸残基的氨基酸；f是第55位氨基酸残基，g是选自第19至56位氨基酸残基的氨基酸；f是第56位氨基酸残基，g是选自第19至57位氨基酸残基的氨基酸；f是第57位氨基酸残基，g是选自第19至58位氨基酸残基的氨基酸；f是第58位氨基酸残基，g是选自第19至59位氨基酸残基的氨基酸；f是第59位氨基酸残基，g是选自第19至60位氨基酸残基的氨基酸；f是第60位氨基酸残基，g是选自第19至61位氨基酸残基的氨基酸；f是第61位氨基酸残基，g是选自第19至62位氨基酸残基的氨基酸；f是第62位氨基酸残基，g是选自第19至63位氨基酸残基的氨基酸；f是第63位氨基酸残基，g是选自第19至64位氨基酸残基的氨基酸；f是第64位氨基酸残基，g是选自第19至65位氨基酸残基的氨基酸；f是第65位氨基酸残基，g是选自第19至66位氨基酸残基的氨基酸；f是第66位氨基酸残基，g是选自第19至67位氨基酸残基的氨基酸；f是第67位氨基酸残基，g是选自第19至68位氨基酸残基的氨基酸；f是第68位氨基酸残基，g是选自第19至69位氨基酸残基的氨基酸；f是第69位氨基酸残基，g是选自第19至70位氨基酸残基的氨基酸；f是第70位氨基酸残基，g是选自第19至71位氨基酸残基的氨基酸；f是第71位氨基酸残基，g是选自第19至72位氨基酸残基的氨基酸；f是第72位氨基酸残基，g是选自第19至73位氨基酸残基的氨基酸；f是第73位氨基酸残基，g是选自第19至74位氨基酸残基的氨基酸；f是第74位氨基酸残基，g是选自第19至75位氨基酸残基的氨基酸；f是第75位氨基酸残基，g是选自第19至76位氨基酸残基的氨基酸；f是第76位氨基酸残基，g是选自第19至77位氨基酸残基的氨基酸；f是第77位氨基酸残基，g是选自第19至78位氨基酸残基的氨基酸；f是第78位氨基酸残基，g是选自第19至79位氨基酸残基的氨基酸；f是第79位氨基酸残基，g是选自第19至80位氨基酸残基的氨基酸；f是第80位氨基酸残基，g是选自第19至81位氨基酸残基的氨基酸；f是第81位氨基酸残基，g是选自第19至82位氨基酸残基的氨基酸；f是第82位氨基酸残基，g是选自第19至83位氨基酸残基的氨基酸；f是第83位氨基酸残基，g是选自第19至84位氨基酸残基的氨基酸；f是第84位氨基酸残基，g是选自第19至85位氨基酸残基的氨基酸；f是第85位氨基酸残基，g是选自第19至86位氨基酸残基的氨基酸；f是第86位氨基酸残基，g是选自第19至87位氨基酸残基的氨基酸；f是第87位氨基酸残基，g是选自第19至88位氨基酸残基的氨基酸；f是第88位氨基酸残基，g是选自第19至89位氨基酸残基的氨基酸；f是第89位氨基酸残基，g是选自第19至90位氨基酸残基的氨基酸；f是第90位氨基酸残基，g是选自第19至91位氨基酸残基的氨基酸；f是第91位氨基酸残基，g是选自第19至92位氨基酸残基的氨基酸；f是第92位氨基酸残基，g是选自第19至93位氨基酸残基的氨基酸；f是第93位氨基酸残基，g是选自第19至94位氨基酸残基的氨基酸；f是第94位氨基酸残基，g是选自第19至95位氨基酸残基的氨基酸；f是第95位氨基酸残基，g是选自第19至96位氨基酸残基的氨基酸；f是第96位氨基酸残基，g是选自第19至97位氨基酸残基的氨基酸；或f是第97位氨基酸残基，g是选自第19至98位氨基酸残基的氨基酸。在某个实施方案中，当hpv16的e7蛋白的n末端部分和hpv16的e7蛋白的c末端部分一起比对时，包含重叠序列。重叠序列可以是hpv16的e7蛋白的至少1、5、7、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80个氨基酸。虽然c末端部分的n末端部分可以含有重叠序列，然而，n末端部分和c末端部分都不包含完整的prb结合结构域，例如对应于seqidno：6的第18至98位氨基酸。ii.b.2.hpv18的e7蛋白在某些实施方案中，可用于融合蛋白的hpv18的e7蛋白不与prb结合或不与hpv18的e7蛋白形成二聚体。为了防止hpv18的e7蛋白与prb的结合，e7蛋白可分割成两部分：e7蛋白的n末端部分和e7蛋白的c末端部分，其中每个部分不包含一个或更多个prb结合位点，而当比对时，n末端部分和c末端部分包含hpv18的e7蛋白的完整序列。hpv18的e7蛋白上的prb结合位点包含e7蛋白的cr2结构域和cr3结构域。在一个实施方案中，hpv18的e7蛋白的prb结合位点包含对应于seqidno：8的i21至d42、q47至q105或i21至q105。因此，在某些实施方案中，hpv18的e7蛋白的n末端部分具有从m到n的氨基酸序列(16e7nm-n)，并且hpv18的e7蛋白的c末端部分具有从o到p的氨基酸序列(16e6co-p)，其中m是对应于seqidno：8的第1或2位氨基酸，n是选自对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸的氨基酸，o是选自对应于seqidno：8的等于或高于第22位氨基酸和等于或低于第n+1位氨基酸的氨基酸，并且p是对应于seqidno：8的第104或105位氨基酸。hpv18的e7蛋白可以在对应于seqidno：8的氨基酸58arg、59his、60thr、70ala、71arg、72ile、73glu、74leu、75val、76val、77glu、87gln、89leu、90phe、94leu、96phe、97val、99pro、100trp、102ala、104gln和105gln处与prb相互作用。prb上的相应相互作用位点包括prb的378val、379met、380asn、381thr、382ile、383gln、384gln、387met、388ile、390asn、497thr、498tyr、499ser、500arg、501ser、503ser和531val.因此，在某些实施方案中，通过将e7蛋白在选自对应于seqidno：8的第58至104位氨基酸的氨基酸的c末端分割成两部分来产生hpv18的e7蛋白的n末端部分和c末端部分。在一些实施方案中，本发明的融合蛋白通过防止与另一种e7蛋白的相互作用而不与hpv18的e7蛋白形成二聚体。hpv18的e7蛋白通过在α1螺旋(80addlrafqqlfl91)、β2片层(71rielvves78)和/或β1片层(55epqrhtmlcmc65)处与另一种e7蛋白直接相互作用来形成二聚体。因此，可以通过在破坏e7蛋白的α1螺旋、β2片层或β1片层的氨基酸处将e7蛋白分割成两部分而产生e7蛋白的n末端部分和c末端部分。在一些实施方案中，通过在破坏cr3结构域的氨基酸即在选自对应于seqidno：8的第47至104位氨基酸的氨基酸的c末端分割e7蛋白来产生e7蛋白的n末端部分和c末端部分。在一个实施方案中，本发明的融合蛋白包含hpv18的e7蛋白的n末端部分(18e7nm-n)和hpv18的e7蛋白的c末端部分(18e7co-p)，其中m是对应于seqidno：8的第1或2位氨基酸，n是选自对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸的氨基酸，o是选自对应于seqidno：8的等于或高于第22位氨基酸和等于或低于第n+1位氨基酸的氨基酸，并且p是对应于seqidno：8的第104或105位氨基酸。在一些实施方案中，融合蛋白包含18e7nm-n和18e7co-p，其中对应于seqidno：8，m是第1或2位氨基酸，p是第104或105位氨基酸，n和o如下：n是第21位氨基酸残基，o是第22位氨基酸残基；n是第22位氨基酸残基，o是第22或23位氨基酸残基；n是第23位氨基酸残基，o是第22、23或24位氨基酸残基；n是第24位氨基酸残基，o是第22、23、24或25位氨基酸残基；n是第25位氨基酸残基，o是第22、23、24、25或26位氨基酸残基；n是第26位氨基酸残基，o是选自第22至27位氨基酸残基的氨基酸；n是第27位氨基酸残基，o是选自第22至28位氨基酸残基的氨基酸；n是第28位氨基酸残基，o是选自第22至29位氨基酸残基的氨基酸；n是第29位氨基酸残基，o是选自第22至30位氨基酸残基的氨基酸；n是第30位氨基酸残基，o是选自第22至31位氨基酸残基的氨基酸；n是第31位氨基酸残基，o是选自第22至32位氨基酸残基的氨基酸；n是第32位氨基酸残基，o是选自第22至33位氨基酸残基的氨基酸；n是第33位氨基酸残基，o是选自第22至34位氨基酸残基的氨基酸；n是第34位氨基酸残基，o是选自第22至35位氨基酸残基的氨基酸；n是第35位氨基酸残基，o是选自第22至36位氨基酸残基的氨基酸；n是第36位氨基酸残基，o是选自第22至37位氨基酸残基的氨基酸；n是第37位氨基酸残基，o是选自第22至38位氨基酸残基的氨基酸；n是第38位氨基酸残基，o是选自第22至39位氨基酸残基的氨基酸；n是第39位氨基酸残基，o是选自第22至40位氨基酸残基的氨基酸；n是第40位氨基酸残基，o是选自第22至41位氨基酸残基的氨基酸；n是第41位氨基酸残基，o是选自第22至42位氨基酸残基的氨基酸；n是第42位氨基酸残基，o是选自第22至43位氨基酸残基的氨基酸；n是第43位氨基酸残基，o是选自第22至44位氨基酸残基的氨基酸；n是第44位氨基酸残基，o是选自第22至45位氨基酸残基的氨基酸；n是第45位氨基酸残基，o是选自第22至46位氨基酸残基的氨基酸；n是第46位氨基酸残基，o是选自第22至47位氨基酸残基的氨基酸；n是第47位氨基酸残基，o是选自第22至48位氨基酸残基的氨基酸；n是第48位氨基酸残基，o是选自第22至49位氨基酸残基的氨基酸；n是第49位氨基酸残基，o是选自第22至50位氨基酸残基的氨基酸；n是第50位氨基酸残基，o是选自第22至51位氨基酸残基的氨基酸；n是第51位氨基酸残基，o是选自第22至52位氨基酸残基的氨基酸；n是第52位氨基酸残基，o是选自第22至53位氨基酸残基的氨基酸；n是第53位氨基酸残基，o是选自第22至54位氨基酸残基的氨基酸；n是第54位氨基酸残基，o是选自第22至55位氨基酸残基的氨基酸；n是第55位氨基酸残基，o是选自第22至56位氨基酸残基的氨基酸；n是第56位氨基酸残基，o是选自第22至57位氨基酸残基的氨基酸；n是第57位氨基酸残基，o是选自第22至58位氨基酸残基的氨基酸；n是第58位氨基酸残基，o是选自第22至59位氨基酸残基的氨基酸；n是第59位氨基酸残基，o是选自第22至60位氨基酸残基的氨基酸；n是第60位氨基酸残基，o是选自第22至61位氨基酸残基的氨基酸；n是第61位氨基酸残基，o是选自第22至62位氨基酸残基的氨基酸；n是第62位氨基酸残基，o是选自第22至63位氨基酸残基的氨基酸；n是第63位氨基酸残基，o是选自第22至64位氨基酸残基的氨基酸；n是第64位氨基酸残基，o是选自第22至65位氨基酸残基的氨基酸；n是第65位氨基酸残基，o是选自第22至66位氨基酸残基的氨基酸；n是第66位氨基酸残基，o是选自第22至67位氨基酸残基的氨基酸；n是第67位氨基酸残基，o是选自第22至68位氨基酸残基的氨基酸；n是第68位氨基酸残基，o是选自第22至69位氨基酸残基的氨基酸；n是第69位氨基酸残基，o是选自第22至70位氨基酸残基的氨基酸；n是第70位氨基酸残基，o是选自第22至71位氨基酸残基的氨基酸；n是第71位氨基酸残基，o是选自第22至72位氨基酸残基的氨基酸；n是第72位氨基酸残基，o是选自第22至73位氨基酸残基的氨基酸；n是第73位氨基酸残基，o是选自第22至74位氨基酸残基的氨基酸；n是第74位氨基酸残基，o是选自第22至75位氨基酸残基的氨基酸；n是第75位氨基酸残基，o是选自第22至76位氨基酸残基的氨基酸；n是第76位氨基酸残基，o是选自第22至77位氨基酸残基的氨基酸；n是第77位氨基酸残基，o是选自第22至78位氨基酸残基的氨基酸；n是第78位氨基酸残基，o是选自第22至79位氨基酸残基的氨基酸；n是第79位氨基酸残基，o是选自第22至80位氨基酸残基的氨基酸；n是第80位氨基酸残基，o是选自第22至81位氨基酸残基的氨基酸；n是第81位氨基酸残基，o是选自第22至82位氨基酸残基的氨基酸；n是第82位氨基酸残基，o是选自第22至83位氨基酸残基的氨基酸；n是第83位氨基酸残基，o是选自第22至84位氨基酸残基的氨基酸；n是第84位氨基酸残基，o是选自第22至85位氨基酸残基的氨基酸；n是第85位氨基酸残基，o是选自第22至86位氨基酸残基的氨基酸；n是第86位氨基酸残基，o是选自第22至87位氨基酸残基的氨基酸；n是第87位氨基酸残基，o是选自第22至88位氨基酸残基的氨基酸；n是第88位氨基酸残基，o是选自第22至89位氨基酸残基的氨基酸；n是第89位氨基酸残基，o是选自第22至90位氨基酸残基的氨基酸；n是第90位氨基酸残基，o是选自第22至91位氨基酸残基的氨基酸；n是第91位氨基酸残基，o是选自第22至92位氨基酸残基的氨基酸；n是第92位氨基酸残基，o是选自第22至93位氨基酸残基的氨基酸；n是第93位氨基酸残基，o是选自第22至94位氨基酸残基的氨基酸；n是第94位氨基酸残基，o是选自第22至95位氨基酸残基的氨基酸；n是第95位氨基酸残基，o是选自第22至96位氨基酸残基的氨基酸；n是第96位氨基酸残基，o是选自第22至97位氨基酸残基的氨基酸；n是第97位氨基酸残基，o是选自第22至98位氨基酸残基的氨基酸；n是第98位氨基酸残基，o是选自第22至99位氨基酸残基的氨基酸；n是第99位氨基酸残基，o是选自第22至100位氨基酸残基的氨基酸；n是第100位氨基酸残基，o是选自第22至101位氨基酸残基的氨基酸；n是第101位氨基酸残基，o是选自第22至102位氨基酸残基的氨基酸；n是第102位氨基酸残基，o是选自第22至103位氨基酸残基的氨基酸；n是第103位氨基酸残基，o是选自第22至104位氨基酸残基的氨基酸；n是第104位氨基酸残基，o是选自第22至105位氨基酸残基的氨基酸。在某些实施方案中，当hpv18的e7蛋白的n末端部分和hpv18的e7蛋白的c末端部分一起比对时，含有重叠序列。重叠序列可以是hpv18的e7蛋白的至少1个、5个、7个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个或80个氨基酸。虽然n末端部分或c末端部分可以含有重叠序列，然而，n末端部分和c末端部分都不包含完整的prb结合结构域，例如对应于seqidno：8的第21至105位氨基酸。ii.c.融合蛋白在一个方面，本发明的治疗分子是包含hpv16的e6蛋白、hpv18的e6蛋白、hpv16的e7蛋白和hpv18的e7蛋白的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或至少8个部分的融合蛋白或编码该融合蛋白的核苷酸序列，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在另一方面，本发明的治疗分子包含多于一个氨基酸序列。例如，本发明的治疗分子包含八个氨基酸序列或编码八个氨基酸序列的八个核苷酸序列，其中所述8个氨基酸序列是hpv16的e6蛋白的n末端部分、hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分和hpv18的e6蛋白的c末端部分、hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分和hpv18的e7蛋白的n末端部分。在其他一些方面，本发明的治疗分子包含(i)七个氨基酸序列或编码七个氨基酸序列的七个核苷酸序列，其中七个氨基酸序列含有八个多肽部分；(ii)编码六个氨基酸序列的六个氨基酸序列或六个核苷酸序列，其中所述六个氨基酸序列包含八个多肽部分；(iii)五个氨基酸序列或编码五个氨基酸序列的五个核苷酸序列，其中所述五个氨基酸序列包含八个多肽部分；(iv)四个氨基酸序列或编码四个氨基酸序列的四个核苷酸序列，其中四个氨基酸序列包含八个多肽部分；(v)编码三个氨基酸序列的三个氨基酸序列或三个核苷酸序列，其中三个氨基酸序列包含八个多肽部分；(vi)编码三个氨基酸序列的两个氨基酸序列或三个核苷酸序列，其中所述两个氨基酸序列包含八个多肽部分；或(vii)一个氨基酸序列或编码所述氨基酸序列的核苷酸序列，其中所述一个氨基酸序列包含八个多肽部分，其中所述八个多肽部分是hpv16的e6蛋白的n末端部分，hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分、hpv18的e6蛋白的c末端部分、hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分和hpv18的e7蛋白的n末端部分。在一些实施方案中，融合蛋白包含至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或八个氨基酸序列，其选自：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。融合蛋白还可以包含与hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e7蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的相同数目的表位，或比hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白、hpv18的天然存在的e7蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的表位更多的表位。在另一些实施方案中，融合蛋白中的hpv16的e6蛋白的n末端部分、hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分和hpv18的e6蛋白的c末端部分各自不包含完整的e6相关蛋白(e6ap)结合位点。在另一些实施方案中，融合蛋白不包含完整的e6ap结合位点，所述结合位点包含对应于seqidno：2(e6hpv16)的第35至136位氨基酸或对应于seqidno：4(e6hpv18)的第30至131位氨基酸。例如，融合蛋白不包含对应于seqidno：2的第35至136位氨基酸或对应于seqidno：4的第30至131位氨基酸的连续序列。在另一些实施方案中，融合蛋白中的hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分、hpv18的e7蛋白的n末端部分和hpv18的e7蛋白的c末端部分各自不包含完整的cr2结构域或完整的cr3结构域或者包含cr2结构域或cr3结构域，但不同时包含两者。在一些实施方案中，融合蛋白不包含对应于seqidno：6的第18至98位氨基酸或对应于seqidno：8(e7hpv18)的第21至105位氨基酸的连续序列。在某些实施方案中，融合蛋白包含：(i)hpv16的e6蛋白的n末端部分，其包含具有与seqidno：2的n端的氨基酸序列(16e6na-b)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中a是选自对应于seqidno：2的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，b是选自对应于seqidno：2的第35至135位氨基酸残基的氨基酸，(ii)hpv16的e6蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：2的c端序列(16e6cc-d)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第36位氨基酸残基和等于或低于第b+1位氨基酸的氨基酸残基的氨基酸，并且d是选自对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸残基的氨基酸，(iii)hpv18的e6蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：4的n末端序列(18e6ni-i)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中i是选自对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且j是选自对应于seqidno：4的第30至130位氨基酸残基的氨基酸，(iv)hpv18的e6蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：4的c末端序列(18e6ck-1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中k是选自对应于seqidno：4的等于或高于第31位氨基酸残基和等于或低于第j+1位氨基酸残基的氨基酸，并且l是选自对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸残基的氨基酸；(v)hpv16的e7蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：6的n末端序列(16e7ne-f)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中e是选自对应于seqidno：6的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且f是选自对应于seqidno：6的第18至97位氨基酸残基的氨基酸；(vi)hpv16的e7蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：6的c末端序列(16e7cg-h)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸残基的氨基酸，并且h是选自对应于seqidno：6的第97或98位氨基酸残基的氨基酸；(vii)hpv18的e7蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：8的n末端序列(18e7nm-n)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中m是选自对应于seqidno：8的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且n是选自对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸残基的氨基酸，以及(viii)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：8的c末端序列(18e7co-p)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中o是选自对应于seqidno：8的等于或高于第22位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸，并且l是选自对应于seqidno：8的第104或105位氨基酸残基的氨基酸，其中所述融合蛋白不与p53结合或形成具有hpv16或hpv18的e6蛋白的二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白至少含有hpv16和hpv18的天然存在的e6蛋白以及hpv16和hpv18的天然存在的e7蛋白的所有表位。在另一些实施方案中，融合蛋白包含：(i)hpv16的e6蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：2的n末端序列(16e6na-b)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中a是选自对应于seqidno：2的氨基酸残基1或2的氨基酸，且b是选自对应于seqidno：2的第35至39、57至62、69至85、87至88、98至99、107、109、114和135位氨基酸残基的氨基酸，(ii)hpv16的e6蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：2的c端序列(16e6cc-d)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中c是选自对应于seqidno：2的等于或高于第36位氨基酸残基和等于或低于第b+1位氨基酸氨基酸残基的氨基酸，并且d是选自对应于seqidno：2的第157或158位氨基酸残基的氨基酸，(iii)hpv18的e6蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：4的n末端序列(18e6ni-j)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中i是选自对应于seqidno：4的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且j是选自对应于seqidno：4的第30至34、52至57、64至80、82至83、93、94、102、104、109和130位氨基酸残基的氨基酸，(iv)hpv18的e6蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：4的c末端序列(18e6ck-1)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中k是选自对应于seqidno：4的等于或高于第31位氨基酸残基和等于或低于第j+1位氨基酸残基的氨基酸，并且l是选自对应于seqidno：4的第157或158位氨基酸残基的氨基酸；(v)hpv16的e7蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：6的n末端序列(16e7ne-f)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中e是选自对应于seqidno：6的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且f是选自对应于seqidno：6的第18至39和44至97位氨基酸残基的氨基酸；(vi)hpv16的e7蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：6的c末端序列(16e7cg-h)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸残基的氨基酸，并且h是选自对应于seqidno：6的第97或98位氨基酸残基的氨基酸；(vii)hpv18的e7蛋白的n末端部分，其包含与seqidno：8的n末端序列(18e7nm-n)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中m是选自对应于seqidno：8的第1或2位氨基酸残基的氨基酸，并且n是选自对应于seqidno：8的第21至42和47至104位氨基酸残基的氨基酸，以及(viii)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其包含与seqidno：8的c末端序列(18e7co-p)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中o是选自对应于seqidno：8的等于或高于第22位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸，并且p是选自对应于seqidno：8的第104或105位氨基酸残基的氨基酸，其中所述融合蛋白不与p53结合或形成具有hpv16或hpv18的e6蛋白的二聚体，其中所述融合蛋白不与prb结合或与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白至少含有hpv16和hpv18的天然存在的e6蛋白以及hpv16和hpv18的天然存在的e7蛋白的所有表位。在另一些实施方案中，f是选自对应于seqidno：6的第18至39位的氨基酸残基，并且g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第19位氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸残基的氨基酸，或其中f是选自对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸残基的氨基酸残基，并且g是选自对应于seqidno：6的等于或高于第45位氨基酸残基和等于或低于第f+1位氨基酸的氨基酸残基的氨基酸。在另一些实施方案中，对应于seqidno：8，n是选自第21至41位的氨基酸残基，并且o是选自等于或高于第22位氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸，或其中n是选自第47至104位氨基酸残基的氨基酸残基，并且o是选自等于或高于第48位的氨基酸残基和等于或低于第n+1位氨基酸残基的氨基酸。在另一些实施方案中，融合蛋白不包含hpv16的天然存在的全长e6蛋白、hpv16的天然存在的全长e7蛋白、hpv18的天然存在的全长e6蛋白和hpv18的天然存在的全长e7蛋白。融合蛋白可以以任何顺序包含蛋白质的八个部分。八个部分的所有可能的组合包括33,600种可能性，这是本申请的一部分。在一些实施方案中，如此构建融合蛋白，使得来自相同蛋白质的n末端和c末端部分不直接彼此相邻放置。在另一些实施方案中，如此构建融合蛋白，使得来自相同hpv血清型的n末端或c末端部分彼此相邻放置。在另一些实施方案中，将来自不同蛋白质(相同的hpv血清型)的n末端部分彼此相邻放置，并将来自不同蛋白质(相同的hpv血清型)的c末端部分彼此相邻放置。在某些实施方案中，融合蛋白从n末端到c末端包含：(i)16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h-18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-l-18e7co-p；(ii)18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-l-18e7co-p-16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h；(iii)16e7ne-f-16e6na-b-16e7cg-h-16e6cc-d-18e7nm-n-18e6ni-j-18e7co-p-18e6ck-l；(iv)18e7nm-n-18e6ni-j-18e7co-p-18e6ck-l-16e7ne-f-16e6na-b-16e7cg-h-16e6cc-d；(v)18e6ni-j-16e7ne-f-16e6cc-d-18e6ck-l-18e7nm-n-16e6na-b-18e7co-p-16e7cg-h；(vi)16e6na-b-18e6ni-j-18e7co-p-16e6cc-d-16e7ne-f-18e7nm-n-16e7cg-h-18e6ck-l；(vii)18e7nm-n-16e6na-b-18e7co-p-16e7cg-h-16e7ne-f-18e6ni-j-16e6cc-d-18e6ck-l；或(viii)16e7ne-f-18e6ni-j-16e7cg-h-18e7co-p-18e7nm-n-16e6na-b-18e6ck-l-16e6cc-d。在一些实施方案中，(-)是肽键。在某些实施方案中，(-)是一个或更多个氨基酸。在一个特别的实施方案中，融合蛋白包含：从n末端到c末端16e6na-b-16e7ne-f-16e6cc-d-16e7cg-h-18e6ni-j-18e7nm-n-18e6ck-l-18e7co-p，a是seqidno：2的第1位氨基酸残基，b是seqidno：2的第85位氨基酸残基，c使seqidno：2的第71位氨基酸残基，d使seqidno：2的第158位氨基酸残基，e是seqidno：6的第1位氨基酸残基，f是seqidno：6的第65位氨基酸残基，g是seqidno：6的第51位氨基酸残基，h使seqidno：6的第98位氨基酸残基，i是seqidno：4的第1位氨基酸残基，j是seqidno：4的第85位氨基酸残基，k是seqidno：4的第71位氨基酸残基，l是seqidno：4的第158位氨基酸残基，m是seqidno：8的第1位氨基酸残基，n是seqidno：8的第65位氨基酸残基，o是seqidno：8的第51位氨基酸残基，且p是seqidno：8的第105位氨基酸残基。在一些实施方案中，融合蛋白包含与seqidno：10具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一些实施方案中，融合蛋白包含异源部分。异源部分可以是异源多肽或非多肽部分。异源多肽的实例包括但不限于信号肽、免疫增强子肽或增强融合蛋白性质的任何其他肽。在一个实施方案中，与融合蛋白融合的信号肽包括但不限于组织纤溶酶原激活物(tpa)的信号肽、单纯疱疹病毒糖蛋白d(hsvgd)的信号肽、生长激素的信号肽及其任意组合。在一个特别的实施方案中，与融合蛋白融合的信号肽包含与seqidno：14具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫增强子肽包括但不限于cd40配体、fms样酪氨酸激酶-3配体(flt3l)、鞭毛蛋白、ox40或其任意组合。在一个具体实施方案中，免疫增强肽是flt3l。在另一个实施方案中，融合蛋白与免疫增强子肽融合，其包含与seqidno：12具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。2013年8月1日公开的us2013/0195905中的多核苷酸或融合蛋白的所有描述被通过引用整体并入本文。融合蛋白、信号肽和免疫增强肽的实例示于表3中。表3.融合蛋白和核苷酸序列ii.d.编码融合蛋白的多核苷酸本发明的治疗分子可以是本文中所述的一种或更多种蛋白质分子或编码该蛋白质分子的多核苷酸序列。在一个方面，本发明的治疗分子可以包括一个或更多个dna序列、rna序列或pna序列。在另一方面，编码治疗分子(例如，融合蛋白)的多核苷酸序列是密码子优化的。术语“密码子优化的”当其指用于转化多种宿主的核酸分子的基因或编码区时，是指改变核酸分子的基因或编码区中的密码子，以反映宿主生物体的典型密码子使用，而不改变由dna编码的多肽。这样的优化包括用在该生物体的基因中更频繁使用的一种或更多种密码子替代至少一种或多于一种或显著数目的密码子。包含编码任何多肽链之氨基酸的密码子的核苷酸序列中的偏差允许在编码基因的序列中的变异。由于每个密码子由三个核苷酸组成，并且包含dna的核苷酸限于四种特异性碱基，所以存在64种可能的核苷酸组合，其中61种编码氨基酸(其余的三种密码子编码终止翻译的信号)。显示哪些密码子编码哪些氨基酸的“遗传密码”在本文中再现为表4.结果，许多氨基酸由多于一种密码子决定。例如，氨基酸丙氨酸和脯氨酸由四种三联体编码，丝氨酸和精氨酸由六种编码，而色氨酸和甲硫氨酸仅由一种三联体编码。这种简并性允许dna碱基组成在宽的范围内变化，而不改变由dna编码的蛋白质的氨基酸序列。表4.标准遗传密码许多生物体显示出使用特定密码子来编码在生长的肽链中插入特定氨基酸的偏倚。密码子偏好或密码子偏倚(生物体之间密码子使用的差异)由遗传密码的简并性提供，并且在许多生物体中有良好的记载。密码子偏倚通常与信使rna(mrna)的翻译效率相关联，其继而被认为尤其取决于被翻译的密码子的性质和特定转移rna(trna)分子的可用性。所选择的trna在细胞中的优势一般是肽合成中最常使用的密码子的反映。因此，基于密码子优化，可以定制基因以用于给定生物体中的最佳基因表达。考虑到可用于多种动物、植物和微生物物种中的大量基因序列，已经计算了密码子使用的相对频率。密码子使用表可在例如可获得自http：//www.kazusa.or.jp/codon/(访问于2012年6月18日)的“密码子使用数据库”中获得。见nakamura，y.，等nucl.acidsres.28：292(2000)。以优化的频率随机分配密码子以编码给定的多肽序列可以通过计算每种氨基酸的密码子频率，然后随机地将密码子分配给多肽序列来手动完成。另外，可以使用多种算法和计算机软件程序来计算最优序列。在一个实施方案中，编码治疗分子(例如，融合蛋白)的核苷酸序列对于人表达是密码子优化的。在另一个实施方案中，编码治疗分子(例如，融合蛋白)的核苷酸序列对于原核或真核表达是密码子优化的。在另一些实施方案中，编码本发明的融合蛋白的多核苷酸序列包含hpv16的e6蛋白的n末端部分、hpv16的e6蛋白的c末端部分、hpv16的e7蛋白的n末端部分、hpv16的e7蛋白的c末端部分、hpv18的e6蛋白的n末端部分、hpv18的e6蛋白的c末端部分、hpv18的e7蛋白的n末端部分和hpv18的e7蛋白的c末端部分的密码子优化的序列，其在本文中别处描述。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含与seqidno：9具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列。在另一些实施方案中，多核苷酸还包含编码如上所述的异源部分(例如，异源多肽或非肽部分)的核苷酸序列。在一些实施方案中，异源多肽包含fms相关酪氨酸激酶3配体(“flt3l”)或其一部分、tpa的信号肽或两者。在另一些实施方案中，异源多核苷酸是密码子优化的。在另一些实施方案中，编码异源多肽的核苷酸序列编码信号肽，其中所述核苷酸序列包含与seqidno：13具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。在另一些实施方案中，编码异源多肽的核苷酸序列编码免疫增强肽，其中所述核苷酸序列包含与seqidno：11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸序列。ii.d.1.转录控制序列在一些实施方案中，本发明的多核苷酸分子有效地与至少一个转录控制序列连接。本文中使用的转录控制序列是任何调节性核苷酸序列，例如启动子序列或启动子-增强子组合，其有助于与其可操作地连接的编码核酸的高效转录和翻译。基因表达控制序列可以是例如哺乳动物或病毒启动子，例如组成型或诱导型启动子。组成型哺乳动物启动子包括但不限于以下基因的启动子：次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt)、腺苷脱氨酶、丙酮酸激酶、β-肌动蛋白启动子和其他组成型启动子。在真核细胞中组成型地起作用的示例性病毒启动子包括例如来自巨细胞病毒(cmv)、猿猴病毒(例如sv40)、乳头瘤病毒、腺病毒、人类免疫缺陷病毒(hiv)、劳斯肉瘤病毒、巨细胞病毒、莫洛尼白血病病毒(moloneyleukemiavirus)的长末端重复序列(ltr)和其他逆转录病毒的启动子，以及单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子。其他组成型启动子是本领域普通技术人员已知的。可用作本发明的基因表达序列的启动子也包括诱导型启动子。诱导型启动子在诱导剂的存在下表达。例如，在某些金属离子存在下，金属硫蛋白启动子被诱导以促进转录和翻译。其他诱导型启动子是本领域普通技术人员已知的。一般而言，转录控制序列必要时应包括分别涉及转录和翻译起始的5’非转录和5’非翻译序列，例如tata盒、加帽序列、caat序列等。尤其是，这样的5’非转录序列将包括启动子区，其包括用于可操作地连接的编码核酸的转录控制的启动子序列。基因表达序列任选地包含期望的增强子序列或上游激活子序列。ii.d.2.载体本发明还提供了包含编码本发明的治疗分子(例如，融合蛋白)的多核苷酸分子的载体。合适的载体包括表达载体、病毒载体和质粒载体。本文中使用的表达载体是指当引入适当的宿主细胞中时含有用于被插入之编码序列的转录和翻译的必要元件的任何核酸构建体，或者在rna病毒载体的情况下，是用于复制和翻译的必要元件。表达载体可以包括质粒、噬菌粒、病毒及其衍生物。本发明的表达载体将包括编码本文中所述融合蛋白的优化的多核苷酸。在一个实施方案中，融合蛋白的经优化编码序列可操作地与表达控制序列相连接。如本文中使用的，当两个核酸序列以允许每个组分核酸序列保持其功能性的方式共价连接时，它们是可操作地连接的。当它们以这种方式共价连接时，编码序列和基因表达控制序列被认为是可操作地连接的，以将编码序列的表达或转录和/或翻译置于基因表达控制序列的影响或控制下。如果在5’基因表达序列中启动子的诱导导致编码序列的转录并且如果两个dna序列之间的连接的性质不会(1)导致引入移码突变、(2)干扰启动子区指导编码序列转录的能力或(3)干扰相应的rna转录物被翻译成蛋白质的能力，则称两条dna序列可操作地连接。因此，如果基因表达序列能够实现该编码核酸序列的转录，使得所得的转录物翻译成期望的蛋白质或多肽，则基因表达序列将与编码核酸序列可操作地连接。病毒载体包括但不限于来自以下病毒的核酸序列：逆转录病毒，例如莫洛尼鼠白血病病毒、哈维鼠肉瘤病毒、鼠乳腺肿瘤病毒和劳斯肉瘤病毒；腺病毒、腺相关病毒；sv40型病毒；多瘤病毒；eb病毒；乳头瘤病毒；疱疹病毒；痘苗病毒；脊髓灰质炎病毒；和rna病毒，例如逆转录病毒。可以容易地使用本领域公知的其他载体。某些病毒载体基于非致细胞病变真核病毒，其中非必需基因已被目的基因替代。非细胞病变病毒包括逆转录病毒，其生命周期涉及将基因组病毒rna逆转录成dna，随后将其原病毒整合到宿主细胞dna中。逆转录病毒已被批准用于人基因治疗试验。最有用的是那些复制缺陷型(即，能够指导合成期望蛋白质，但不能制造感染性颗粒)的逆转录病毒。这样的遗传改变的逆转录病毒表达载体对于体内基因的高效转导具有一般效用。用于产生复制缺陷型逆转录病毒的标准方案(包括以下步骤：将外源遗传物质并入质粒，用质粒转染包装细胞系，通过包装细胞系产生重组逆转录病毒，从组织培养基中收集病毒颗粒，并用病毒颗粒感染靶细胞)提供于kriegler，m.，genetransferandexpression，alaboratorymanual，w.h.freemanco.，newyork(1990)和murry，e.j.，methodsinmolecularbiology，vol.7，humanapress，inc.，cliffton，n.j.(1991)。在一个实施方案中，所述病毒是腺相关病毒，一种双链dna病毒。腺相关病毒可以被工程化为复制缺陷型，并且能够感染广泛的细胞类型和物种。它还具有例如热和脂质溶剂稳定性、在包括造血细胞在内的不同谱系的细胞中的高转导频率、和缺乏重叠感染抑制，从而允许多系列转导的优点。据报道，腺相关病毒可以以位点特异性方式整合到人细胞dna中，从而使逆转录病毒感染的插入基因表达特征的插入诱变和可变性的可能性最小化。此外，在没有选择压力的情况下，已经在组织培养中传代野生型腺相关病毒感染超过100代，这意味着腺相关病毒基因组整合是相对稳定的事件。腺相关病毒也可以以染色体外方式起作用。其他载体包括质粒载体。质粒载体已经在本领域中广泛描述，并且是本领域技术人员公知的。见例如sambrook等，molecularcloning：alaboratorymanual，第二版，coldspringharborlaboratorypress，1989。在最近几年中，已经发现质粒载体特别有利于在体内将基因递送至细胞，因为它们不能在宿主基因组内复制并整合入宿主基因组。然而，这些质粒具有与宿主细胞相容的启动子，可以从在质粒内可操作地编码的基因中表达肽。可从商业供应商获得的一些常用质粒，包括pbr322、puc18、puc19、多种pcdna质粒、prc/cmv、多种pcmv质粒、psv40和pbluescript。特定质粒的其他实例包括pcdna3.1，目录号v79020；pcdna3.1/hygro，目录号v87020；pcdna4/myc-his，目录号v86320；和pbudce4.1，目录号v53220，均来自invitrogen(carlsbad，ca)。其他质粒是本领域中普通技术人员公知的。另外，可以使用标准分子生物学技术定制设计质粒以去除和/或添加dna的特定片段。在一些实施方案中，编码本发明融合蛋白的质粒与seqidno：15具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。ii.d.3.药物组合物含有本发明的融合蛋白或本发明的分离的多核苷酸的组合物可以含有合适的药学上可接受的载体。例如，它们可以含有赋形剂和/或助剂，其有助于将活性化合物加工成设计用于递送至作用部位的制剂。药物组合物可以配制成用于通过推注注射的肠胃外施用(即静脉内、皮下、皮内或肌内)。用于注射的制剂可以以单位剂型存在，例如在安瓿或具有添加的防腐剂的多剂量容器中。组合物可以采取例如在油性或水性载剂中的混悬液、溶液或乳液的形式，并且含有配方剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，用于与合适的载体(例如无热原水)构建。用于胃肠外施用的合适制剂还包括水溶性形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性盐。此外，可以施用活性化合物的混悬液作为适当的油性注射悬浮剂。合适的亲脂性溶剂或载剂包括脂肪油，例如芝麻油或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯。水性注射悬浮剂可以含有提高悬浮剂黏度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和葡聚糖。任选地，混悬剂也可以含有稳定剂。脂质体也可以用于包封本发明的分子以递送到细胞或间质空间中。示例性的药学上可接受的载体是生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂、水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等。在一些实施方案中，组合物包含等渗剂，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。在另一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的物质，例如润湿剂或少量辅助物质，例如增强活性成分的保质期或有效性的润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂。本发明的组合物可以是多种形式，包括例如液体(例如可注射和可输注溶液)、分散体、混悬剂、半固体和固体剂型。优选的形式取决于施用方式和治疗应用。组合物可以配制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或适合于高药物浓度的其他有序结构。无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性成分并入合适的溶剂中，根据需要与上面列举的成分之一或组合，然后过滤灭菌来制备。一般而言，通过将活性成分并入含有碱性分散介质和来自上面所列举的那些所需的其他成分的无菌载剂中来制备分散体。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分加上来自先前无菌过滤的溶液的任何额外的期望成分的粉末。可以例如通过使用包衣例如卵磷脂，通过在分散体的情况下维持所需的粒度和通过使用表面活性剂来维持溶液的适当的流动性。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现。活性成分可以用释放控制制剂或装置来配制。此类制剂和装置的实例包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备此类制剂和装置的方法是本领域已知的。见例如sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems，j.r.robinson编，marceldekker，inc.，newyork，1978。可注射的储库型制剂(depotformulation)可以通过在可生物降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成药物的微囊化基质来制备。根据药物与聚合物的比例和所用聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。另一些示例性生物可降解聚合物是聚原酸酯和聚酸酐。储库型可注射制剂也可以通过将药物包埋在脂质体或微乳液中来制备。补充的活性化合物可以并入组合物中。在一个实施方案中，将本发明的融合蛋白或编码蛋白质的多核苷酸与另一种hpv治疗剂一起配制。在一个实施方案中，将编码融合蛋白的多核苷酸以注射用储存溶液配制(0.2mg/ml氯化钾，1.44mg/ml无水磷酸二氢钠，0.24mg/ml无水结晶磷酸二氢钾和8mg/ml氯化钠，ph7.5～7.9)。可以调整剂量方案以提供最佳的期望反应。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以按照治疗情况的紧急性所指示的那样按比例降低或提高剂量。有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便于施用和剂量的均匀性。见例如remington’spharmaceuticalsciences(mackpub.co.，easton，pa.1980)。合适的药物载体的非限制性实例也描述于e.w.martin的remington’spharmaceuticalsciences。赋形剂的一些实例包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。组合物还可以含有ph缓冲试剂和润湿剂或乳化剂。对于经口施用，药物组合物可以采取通过常规方式制备的片剂或胶囊剂的形式。组合物也可以制备为液体，例如糖浆或混悬液。所述液体可以包括助悬剂(例如山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)、乳化剂(卵磷脂或阿拉伯胶)、非水性载剂(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏的植物油)和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或者山梨酸)。制剂还可以包括矫味剂、着色剂和甜味剂。或者，组合物可以作为干产品存在，用于与水或其他合适的载剂配制。对于含服施用，根据常规方案，组合物可以采取片剂或锭剂的形式。对于通过吸入给药，用于根据本发明之用途的化合物方便地以具有或不具有赋形剂的雾化气雾剂的形式或以来自加压包装或雾化器的气雾剂喷雾的形式递送，并任选地具有抛射剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气雾剂的情况下，可以通过提供阀门来递送计量的量来确定剂量单位。可以配制用于吸入器或吹入器中的例如明胶的胶囊和药筒，其含有化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。药物组合物还可以配制成栓剂或保留灌肠剂(retentionenema)以用于直肠给药，例如其含有常规栓剂基质如可可豆脂或其他甘油酯。在一个实施方案中，药物组合物包含融合蛋白、编码融合蛋白的优化的多核苷酸、包含多核苷酸的载体或包含载体的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。在一些实施方案中，通过选自表面施用、眼内施用、肠胃外施用、鞘内施用、硬膜下施用和经口施用的途径施用组合物。肠胃外施用可以是静脉内或皮下施用。在某些实施方案中，将药物组合物配制成用于电穿孔。iii.诊断和治疗方法本发明涉及鉴定本文中所述的治疗分子的应答者和无应答者的方法。本发明还涉及鉴定将对本发明的治疗分子更好应答的患者群体的方法或改善本发明的治疗分子的治疗方案的方法。在一个实施方案中，本申请涉及用于鉴定不需要摘除宫颈肿瘤之手术的对象的方法，其包括向对象施用有效量的如本文中所述的治疗分子(例如，编码融合蛋白的多核苷酸)，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答。本文中使用的术语“细胞免疫应答”或“细胞介导的免疫应答”旨在包括这样的免疫应答：其不涉及抗体(体液免疫)，而是涉及吞噬细胞、抗原特异性细胞毒性t淋巴细胞(t细胞)的活化以及响应于抗原的多种细胞因子的释放。细胞免疫通过如下方式保护身体：(i)活化抗原特异性细胞毒性t淋巴细胞，其能够诱导在其表面上展示外来抗原的表位的体细胞的凋亡，例如病毒感染的细胞、具有细胞内细菌的细胞和展示肿瘤抗原的癌细胞；(ii)活化巨噬细胞和自然杀伤细胞，使它们能够破坏病原体；或(iii)刺激细胞分泌多种细胞因子，其影响其他细胞参与适应性免疫应答和固有免疫应答的功能。当在宿主中建立病毒感染时，启动一系列活化细胞介导之免疫应答的分子和细胞信号。除了动员局部树突细胞之外，这些信号包括产生干扰素、其他细胞因子和炎症介质。树突细胞被认为提供了致敏初始cd4和cd8t细胞的关键细胞连接。tcr对于初始t细胞与树突细胞呈递的病毒肽mhc复合物的接合导致t细胞的隔离(sequestration)，并发动抗病毒t细胞应答。病毒特异性t细胞的随后的增殖和分化也与炎性介质例如干扰素和其他危险信号相结合地发生(zajaca.j.和harringtonl.e.，encyclopediaofvirology3(3)：70-77，2008)。因为cd8t细胞产生炎性介质以及细胞毒效应分子的能力，它们是强大的抗病毒效应细胞。因为它们杀死病毒感染的靶细胞的能力，cd8t细胞通常被称为细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxictlymphocyte，ctl)。随着效应t细胞在与展示合适的肽-mhc复合物的病毒感染的靶细胞接合后变得活化，这些杀伤功能通过t细胞随后释放穿孔素和颗粒酶分子而被触发，其确保破坏被感染的细胞。除了直接杀伤被感染的细胞之外，cd8t细胞还产生一系列细胞因子和趋化因子(例如ifn-γ和tnf-α)，其可以帮助清除病毒感染而不引起被感染细胞的死亡(zajaca.j.和harringtonl.e.，encyclopediaofvirology3(3)：70-77，2008)。cd4t细胞也是细胞介导的针对病毒感染的免疫应答的关键组成，因为它们通过ifn-γ产生，并且在一些情况下通过诱导病毒感染细胞的裂解，能够直接产生抗病毒功能。在mhcii类的情况中，识别抗原后，在cd4t细胞内启动信号事件级联，其导致活化、增殖和分化成效应cd4+t细胞，其基于它们的细胞因子产生谱被分割成两个极化子集。t辅助细胞1(thelper1，th1)细胞主要产生ifn-γ，并且对于针对多种病毒感染和细胞内细菌的感染的免疫反应至关重要。这种效应细胞亚类通常与抗病毒细胞介导的免疫相关。相反，t辅助2(th2)细胞主要分泌与抗体的产生和体液免疫应答相关的细胞因子il-4、il-5和il-13。cd4t细胞亚群的定义已扩展超过th1和th2细胞，其中调节性cd4t细胞(其分泌il-10)的独特群体以及产生il-17的“th17”细胞(其分泌il-17a)的重要性变得明显(zajaca.j.和harringtonl.e.，encyclopediaofvirology3(3)：70-77，2008)。在一些实施方案中，本文中所述的方法还包括测量施用后对象的细胞免疫应答的提高。在某些实施方案中，本文中所述的方法还包括指导护理提供者测量施用后对象的细胞免疫应答的提高。本文中使用的术语“护理提供者”是指与活的对象(例如人类患者)直接相互作用和/或施用治疗分子的个体或机构。护理提供者的非限制性实例包括医生、护士、技术人员、治疗师、药剂师、咨询辅导员、替代医学从业者、医疗设施、医生办公室、医院、急诊室、诊所、紧急护理中心、替代医疗诊所/设施，和提供一般和/或专门处理、评估、维护、治疗、药物治疗的任何其他实体，和/或与患者的健康状况的所有或任何部分相关的建议，包括但不限于一般医疗、专门医疗、手术和/或任何其他类型的处理、评估、维护、治疗、药物治疗和/或建议。本文中使用的术语“指导护理提供者”包括口头指导护理提供者，或者通过使用书面命令指导护理提供者，或以上两者。在一些实施方案中，本申请涉及在不进行手术的情况下治疗宫颈肿瘤的方法，其包括施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸，其中所述对象在施用后表现出提高的细胞免疫应答，其中所述细胞免疫应答在施用后提高为至少约2倍，并且其中在不进行手术的情况下从所述对象中摘除所述宫颈肿瘤。本文中使用的术语“提高的细胞应答”是指在施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸后提高为至少约2倍提高的cd8t细胞应答、提高的cd4t细胞应答、提高的细胞因子分泌或其任意组合。例如，与在接种前的常见th1效应细胞因子(例如ifn-γ、il-2和tnf-α)的基线产生相比，以编码融合蛋白的多核苷酸(例如，hpve6/e7dna治疗性疫苗(gx-188))进行至少一次免疫接种(即施用至少一个剂量)后，常见th1效应细胞因子(例如ifn-γ、il-2和tnf-α或其任意组合)的产生/表达提高。在一些实施方案中，提高的cd4t细胞应答包括提高的ifn-γ+cd4细胞。在一些具体实施方案中，提高的cd4t细胞应答是ifn-γ+cd4细胞数目提高为至少约1.5、2.0、2.5、3.0、3.5或4.0倍。在某些实施方案中，提高的cd8t细胞应答包括ifn-γ、il-2、tnf-α、mip-β、cd107a/b或其任意组合的提高的表达。在一些实施方案中，提高的cd8t细胞应答包括提高的cd38+ki67+cd8t细胞。在一些具体实施方案中，提高的cd8t细胞应答是至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍的cd38+ki67+cd8t细胞数目的提高。在某些实施方案中，通过流式细胞术测量提高的cd8t细胞应答。在一些具体的实施方案中，相对于施用前的水平，ifn-γ表达提高为至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍。在一些实施方案中，相对于施用前的水平，il-2表达提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍或至少约15倍。在一些具体实施方案中，相对于施用前水平，tnf-α表达提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍。在某些实施方案中，提高的细胞免疫应答包括提高的hpv16和hpv18e6和e7特异性ifn-γ应答。在一些实施方案中，通过ifn-γelispot测定来测量ifn-γ应答。在某些实施方案中，提高的细胞免疫应答是多功能t细胞的数目提高。本文中使用的术语“多功能t细胞”是指显示细胞裂解活性、增殖能力和效应分子分泌提高的多功能hpv特异性cd8t细胞。在一些实施方案中，多功能t细胞显示至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种或至少七种标志物。在某些实施方案中，多功能t细胞分泌至少ifn-γ和il-2以及至少一种另外的标志物。在一些具体实施方案中，当通过流式细胞术测量时，多功能t细胞表现出选自ifn-γ、il-2、tnf-α、mip-β和cd107a/b的至少三种、至少四种或至少五种标志物。在一些实施方案中，本申请涉及本文中所述的方法，其中所述多功能t细胞的数目比施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸之前多功能t细胞的数目提高了至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％或至少约30％。在一些实施方案中，本申请涉及在有此需要的对象中提高全身性hpv特异性多功能cd8t细胞应答的方法，其包括施用编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸，其中所述多功能cd8t细胞应答包括ifn-γ、il-2、tnf-α或其任意组合的提高的表达。在一些具体实施方案中，施用包含至少两个剂量或三个剂量。在某些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)确定所述对象适于手术以摘除宫颈肿瘤。本文中使用的术语“确定对象适于手术以摘除宫颈肿瘤”是指提供与患者的健康状况的所有或任何部分相关的一般和/或专门的评估，和/或建议，以断定患者需要进行手术以摘除宫颈肿瘤。在一些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定在施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(b)指导护理提供者对该对象进行手术以摘除宫颈肿瘤。在某些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸，(b)鉴定在施用融合蛋白后不表现出提高的细胞免疫应答的对象，和(c)确定所述对象适于手术以摘除宫颈肿瘤。在某些实施方案中，本申请涉及在有此需要的对象群体中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括向所述对象群体施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸，其中每个对象均携带人白细胞抗原(hla)-a02。在一些实施方案中，本申请涉及在有此需要的对象中治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)向所述对象施用编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸。在某些实施方案中，本申请涉及改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括向对象群体施用编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸，其中每个对象均携带人白细胞抗原(hla)-a02。在一些实施方案中，本申请涉及改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)鉴定携带hla-a02的对象，和(b)向所述对象施用编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸。在某些实施方案中，本申请涉及改善宫颈肿瘤治疗的方法，其包括(a)提供从有此需要的对象获得的血液样品以鉴定hla类型，和(b)向携带hla-a02的对象施用编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸。hla-a是由hla-a基因座编码的一组人白细胞抗原(hla)，所述hla-a基因座位于人染色体6p21.3(hlanomenclature@hla.alleles.org-anthonynolanresearchinstitute.2013年11月10日。检索于2013年12月8日)。hla是对人特异的主要组织相容性复合体(mhc)。hla-a是三种主要类型的人mhci类细胞表面受体之一。另外几种是hla-b和hla-c。截至2013年12月，已有编码1740种活性蛋白和117种无效蛋白的2432个已知的hla-a等位基因(allelesearchtool-europeanmolecularbiologylaboratory.2013。检索于2013年12月20日)。(hla)-a02是hla-a血清型组内的人白细胞抗原血清型。(hla)-a02也称为hla-a＊02(a＊02)、hla-a2、hla-a02和hla-a＊2。在某些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码融合蛋白的多核苷酸，和(b)进一步将第二剂量的多核苷酸施用于在施用第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象。在某些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量的编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸，(b)测量施用后的细胞免疫应答，和(c)对在施用所述第一剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象施用第二剂量的多核苷酸。在一些实施方案中，本文中所述的方法还包括在施用第二剂量后测量细胞免疫应答。在某些实施方案中，本文中所述的方法包括施用第三剂量的本文中所述的多核苷酸。在一些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸，和(b)对于在施用所述第一剂量或所述第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答的对象，进一步向所述对象施用第三剂量的多核苷酸。在某些实施方案中，本申请涉及治疗宫颈肿瘤的方法，其包括(a)向有此需要的对象施用第一剂量和第二剂量的编码本文中所述融合蛋白的多核苷酸，(b)在施用第一剂量或第二剂量后测量细胞免疫应答，和(c)如果对象在施用第一或第二剂量后表现出提高的细胞免疫应答，则向所述对象施用第三剂量的多核苷酸。根据本文中所述的方法，编码本文中所述的融合蛋白的多核苷酸可以以特定剂量施用。例如，在一些实施方案中，第一剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。在某些实施方案中，第一剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg，并且第二剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。在某些实施方案中，第二剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。在某些实施方案中，第三剂量为至少约0.5mg、至少约1mg、至少约1.5mg、至少约2mg、至少约2.5mg、至少约3mg、至少约3.5mg、至少约4mg、至少约4.5mg或至少约5mg。在一些实施方案中，第三剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。在一些实施方案中，第二剂量在第一剂量后至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周施用。在某些实施方案中，第三剂量在第二剂量后至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周施用。本发明的一些实施方案包括在有此需要的对象中诱导全身hpv特异性多功能cd8t细胞应答的方法，其包括施用编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或不与hpv16和hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合并且不与hpv16和hpv18的e7蛋白形成二聚体，并且其中所述多功能cd8t细胞应答包括ifn-γ和il-2以及至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或至少五种任选标志物的表达提高。在另一些实施方案中，所述任选的标志物是tnf-α。在另外的一些实施方案中，所述方法的施用包括至少两个剂量或三个剂量。在另一些实施方案中，ifn-γ表达相对于施用前的水平提高为至少5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约45倍、至少约50倍。在另一些实施方案中，il-2表达相对于施用前的水平提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍、至少约13倍、至少约14倍或至少约15倍。在另一些实施方案中，tnf-α表达相对于施用前的水平提高为至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约16倍、至少约17倍、至少约18倍、至少约19倍、至少约20倍、至少约21倍、至少约22倍、至少约23倍、至少约24倍或至少约25倍。在另一些实施方案中，所述施用不提高il-4和il17a表达。在某些实施方案中，出于诊断方法的目的的治疗分子包括其他类型的hpv疫苗。例如，可用于所述方法的hpv疫苗的实例包括但不限于。iv.药盒本发明还包括药盒，其包含含有治疗分子的药物组合物和使用所述组合物的说明书。在一个实施方案中，本发明涉及包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果在施用有效量的药物组合物后细胞免疫应答没有提高则进行手术以摘除宫颈肿瘤的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在另一个实施方案中，药盒包含含有编码融合蛋白的多核苷酸的药物组合物，以及向在施用初始量的多核苷酸后显示提高数目的多功能t细胞的对象施用有效量的药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在另一些实施方案中，药盒包含含有编码融合蛋白的多核苷酸的药物组合物，以及向在施用初始量的多核苷酸后显示提高数目的多功能t细胞的对象施用有效量的药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在一个实施方案中，多功能t细胞分泌ifn-γ和il-2。在一些实施方案中，包含药物组合物的药盒，其包含编码融合蛋白的多核苷酸和向携带hla-a02的对象施用有效量的药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在另一些实施方案中，药盒包含有效量的治疗分子，其为至少1mg、2mg、3mg、4mg、5mg或6mg。在一些实施方案中，药盒包含药物组合物，其包含编码融合蛋白的多核苷酸以及如果向对象施用的单剂量或两剂量的药物组合物不显示提高的细胞免疫应答，则中断进一步施用所述药物组合物的说明书，其中所述融合蛋白包含三个或更多个选自以下的氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体。在某些实施方案中，单一剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg。在另一些实施方案中，两个剂量包含第一剂量和第二剂量，其中第一剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg，并且第二剂量为至少约0.5mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg或5mg。在另一些实施方案中，第一剂量和第二剂量相同。在另一些实施方案中，第一剂量和第二剂量不同。在某些实施方案中，药盒中的第一剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg，并且药盒中的第二剂量为约1mg至约5mg、约2mg至约4mg、约1mg至约4mg、约1mg至约10mg、约1mg至约9mg、约1mg至约8mg、约1mg至约7mg、约1mg至约6mg。在一个特定的实施方案中，药盒中的第一剂量为约1mg至4mg，药盒中的第二剂量为约1mg至约4mg。在一些实施方案中，第一剂量为约1mg并且第二剂量为约1mg。在另一些实施方案中，第一剂量为约2mg并且第二剂量为约2mg。在另一些实施方案中，第一剂量为约4mg并且第二剂量为约4mg。v.制备方法本发明还涉及制备用于治疗与人乳头瘤病毒相关的疾病或病症的治疗分子的方法。特别地，治疗分子被构建为含有来自hpv的几种蛋白质的所有表位，但不包含p53结合结构域和prb结合结构域或不与来自hpv的蛋白质形成二聚体。本发明的一个实施方案包括制备编码融合蛋白的多核苷酸的方法，其有效治疗或预防由人乳头瘤病毒感染引起的宫颈肿瘤，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含选自以下的至少三个氨基酸序列：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中所述融合蛋白不与p53结合或者不与hpv16或hpv18的e6蛋白形成二聚体，并且其中所述融合蛋白不与prb结合或者不与hpv16或hpv18的e7蛋白形成二聚体，以及(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。在另一个实施方案中，融合蛋白不包含完整的e6相关蛋白(ap)结合位点。在另一些实施方案中，融合蛋白包含hpv16和hpv17的天然存在的e6蛋白与hpv16和hpv17的天然存在的e7蛋白中所包含的至少所有免疫原性的表位。本发明的一些实施方案包括去除融合蛋白中的p53结合位点和prb结合位点的方法，所述融合蛋白包含hpv16的e6蛋白的序列、hpv16的e7蛋白的序列、hpv18的e6蛋白的序列和hpv18的e7蛋白的序列，同时还包含hpv16的天然存在的e6蛋白、hpv16的天然存在的e7蛋白、hpv18的天然存在的e6蛋白和hpv18的天然存在的e7蛋白中所包含的至少所有免疫原性表位，所述方法包括(i)构建编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白包含：(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中(a)hpv16的e6蛋白在对应于seqidno：2的第35至135位氨基酸的c末端分割成hpv16的e6蛋白的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c末端部分(16e6cc-d)，当将其在一起比对时包含hpv16的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(b)hpv16的e7蛋白在对应于seqidno：6的第18至97位氨基酸的c末端分割成hpv16的e7蛋白的n末端部分(16e7ne-f)和hpv16的e7蛋白的c末端部分(16e7g-h)，当将其在一起比对时包含hpv16的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(c)hpv18的e6蛋白在对应于seqidno：6的第30至130位氨基酸的c末端分割成hpv18的e6蛋白的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c末端部分(18e6nk-l)，当将其在一起比对时包含hpv18的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(d)hpv18的e7蛋白在对应于seqidno：8的第21至104位氨基酸的c末端分割成hpv18的e7蛋白的n末端部分(18e7nm-n)和hpv18的e7蛋白的c末端部分(18e7co-p)，当将其在一起比对时包含hpv18的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。在某些实施方案中，(a)中hpv16的e6蛋白的重叠序列包含至少一个氨基酸、至少两个氨基酸、至少两个氨基酸、至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少10个氨基酸、至少15个氨基酸或至少20个氨基酸；(b)中hpv16的e7蛋白的重叠序列包含至少一个氨基酸、至少两个氨基酸、至少两个氨基酸、至少三个氨基酸、至少四个氨基酸、至少五个氨基酸、至少10个氨基酸、至少15个氨基酸或至少20个氨基酸；(c)中hpv18的e6蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；或(d)中hpv18的e7蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸，其中所述重叠序列足以添加或补充由于e6蛋白或e7蛋白切割成n末端部分和c末端部分而被破坏或缺失的任何表位。在另一些实施方案中，提供了防止在融合蛋白中形成hpv16和/或hpv18的e6蛋白和/或hpv16和/或hpv18的e7蛋白的二聚体的方法，所述融合蛋白包含hpv16的e6蛋白的序列、hpv16的e7蛋白的序列、hpv18的e6蛋白的序列和hpv18的e7蛋白的序列，同时还包含hpv16的e6蛋白、hpv16的e7蛋白、hpv18的e6蛋白和hpv18的e7蛋白的所有免疫原性表位，所述方法包括(i)构建编码包含以下的融合蛋白的多核苷酸，(1)hpv16的e6蛋白的n末端部分，(2)hpv16的e6蛋白的c末端部分，(3)hpv16的e7蛋白的n末端部分，(4)hpv16的e7蛋白的c末端部分，(5)hpv18的e6蛋白的n末端部分，(6)hpv18的e6蛋白的c末端部分，(7)hpv18的e7蛋白的n末端部分，和(8)hpv18的e7蛋白的c末端部分，其中(a)hpv16的e6蛋白在对应于seqidno：2的第37至72位氨基酸的c末端分割成hpv16的e6蛋白的n末端部分(16e6na-b)和hpv16的e6蛋白的c末端部分(16e6cc-d)，当将其在一起比对时包含hpv16的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(b)hpv16的e7蛋白在对应于seqidno：6的第44至97位氨基酸的c末端分割成hpv16的e7蛋白的n末端部分(16e7ne-f)和hpv16的e7蛋白的c末端部分(16e7g-h)，当将其在一起比对时包含hpv16的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；(c)hpv18的e6蛋白在对应于seqidno：4的第32至67位氨基酸的c末端分割成hpv18的e6蛋白的n末端部分(18e6ni-j)和hpv18的e6蛋白的c末端部分(18e6nk-l)，当将其在一起比对时包含hpv18的e6蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(d)hpv18的e7蛋白在对应于seqidno：8的氨基酸47至104的c末端分割成hpv18的e7蛋白的n末端部分(18e7nm-n)和hpv18的e7蛋白的c末端部分(18e7co-p)，当将其在一起比对时包含hpv18的e7蛋白的所有序列和任选的重叠序列；和(ii)将所述多核苷酸转染到宿主细胞中。在另一些实施方案中，(a)中hpv16的e6蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；(b)中hpv16的e7蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；(c)中hpv18的e6蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸；或(d)中hpv18的e7蛋白的重叠序列包含至少1、2、5、10、15、20、25、30、35或40个氨基酸。在一些实施方案中，制备编码融合蛋白的多核苷酸的方法可以产生本文中所述的任何治疗分子。在另一些实施方案中，所述方法产生本文中所述的任何多核苷酸，但不包括seqidno：9。v.a.1.宿主细胞本发明还提供了包含本发明的多核苷酸分子的宿主细胞。本文中使用的术语“转化”应广义地用于指将dna引入受体宿主细胞，其改变基因型并因此导致受体细胞的改变。“宿主细胞”是指已使用重组dna技术构建并编码至少一个异源基因的载体转化的细胞。本发明的宿主细胞优选地是哺乳动物来源的；最优选人或小鼠来源的。本领域技术人员具有优先确定最适合于其目的的特定宿主细胞系的能力。示例性宿主细胞系包括但不限于cho、capti、dg44和duxb11(中国仓鼠卵巢系，dhfr-)、hela(人宫颈癌)、cvi(猴肾系)、cos(带有sv40t抗原的cvi衍生物)、r1610(中国仓鼠成纤维细胞)、balbc/3t3(小鼠成纤维细胞)、hak(仓鼠肾系)、sp2/o(小鼠骨髓瘤)、p3x63-ag3.653(小鼠骨髓瘤)、bfa-1c1bpt(牛内皮细胞)、raji(人淋巴细胞)、、ns0、cap、bhk21和hek293(人肾)。宿主细胞系通常可从商业服务、美国组织培养物保藏中心或从公开的文献获得。将本发明的分离的核酸分子引入宿主细胞可以通过本领域技术人员公知的多种技术完成。这些包括但不限于转染(包括电泳和电穿孔)、原生质体融合、磷酸钙沉淀、具有包膜dna的细胞融合、显微注射和用完整病毒感染。见ridgway，a.a.g.“mammalianexpressionvectors”24章2，470-472页，vectors，rodriguezanddenhardt，编(butterworths，boston，mass.1988)。最优选地，通过电穿孔将质粒导入宿主中。经转化的细胞在适于产生轻链和重链的条件下培养，并测定重链和/或轻链蛋白质合成。示例性测定技术包括酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，elisa)、放射免疫测定(radioimmunoassay，ria)或荧光激活细胞分选仪分析(flourescence-activatedcellsorteranalysis，facs)、免疫组织化学等。在某些实施方案中，本发明的核酸分子通过电穿孔施用于对象。体内电穿孔(electroporation，ep)是通过共同施用小的局部电场显著提高dna疫苗的免疫原性，以提高注射的dna的转染效率和免疫细胞(例如树突细胞、t和b淋巴细胞)向免疫接种部位募集的技术。动物中的动物研究已经显示，体内ep提高了编码许多抗原的dna疫苗的免疫原性。在人中，体内ep已经成功地将化疗剂直接递送至肿瘤。最近，已经通过ep向癌症患者施用编码肿瘤抗原的dna疫苗作为潜在免疫治疗(vasan等，plosone6(5)：1-10，2011)。包含本发明的分离的核酸分子的宿主细胞在合适的生长培养基中培养。本文中使用的术语“合适的生长培养基”是指含有细胞生长所需的营养物的培养基。细胞生长所需的营养物可包括碳源、氮源、必需氨基酸、维生素、矿物质和生长因子。任选地，培养基可以包含一种或更多种选择因子。任选地，培养基可以含有小牛血清或胎牛血清(fcs)。在一个实施方案中，培养基基本上不含igg。生长培养基通常通过例如药物选择或必需营养物的缺乏来选择含有dna构建体的细胞，所述必需营养物由在dna构建体上或与dna构建体共转染的选择性标志补充。培养的哺乳动物细胞一般在市售的含血清或无血清培养基(例如mem、dmem、dmem/f12)中培养。在一个实施方案中，培养基是cdopticho(invitrogen，carlsbad，ca.)。在另一个实施方案中，培养基是cd17(invitrogen，carlsbad，ca.)。选择适合于所用的特定细胞系的培养基在本领域普通技术人员的水平内。v.a.2.多肽的制备本发明还提供了多核苷酸分子或由多核苷酸分子编码的多肽。对于重组蛋白质生产，将本发明的编码融合蛋白的多核苷酸序列插入合适的表达载体，即含有用于插入的编码序列的转录和翻译的必需元件的载体，或在rna病毒载体的情况下，含有用于复制和翻译的必要元件的载体。将本发明的多核苷酸序列以合适的阅读框插入载体中。然后将表达载体转染到将表达多肽的合适的靶细胞中。本领域中已知的转染技术包括但不限于磷酸钙沉淀(wigler等1978，cell14：725)和电穿孔(neumann等1982，embo，j.1：841)。多种宿主表达载体系统可用于在真核细胞中表达本文中所述的融合蛋白。在一个实施方案中，真核细胞是动物细胞，包括哺乳动物细胞(例如，hek293细胞、capti、、cho、bhk、cos、hela细胞)。本发明的融合蛋白可以在转基因动物(例如啮齿动物、山羊、绵羊、猪或牛)中合成。术语“转基因动物”是指已将外源基因并入其基因组中的非人动物。因为该基因存在于种系组织中，所以它会从亲代传递给后代。将外源基因引入单细胞胚胎(brinster等1985，proc.natl.acad.sci.usa82：4438)。产生转基因动物的方法是本领域已知的，包括产生免疫球蛋白分子的转基因(wagner等1981，proc.natl.acad.sci.usa78：6376；mcknight等1983，cell34：335；brinster等1983，nature306：332；ritchie等1984，nature312：517；baldassarre等2003，theriogenology59：831；robl等2003，theriogenology59：107；malassagne等2003，xenotransplantation10(3)：267)。表达载体可以编码允许容易地纯化或鉴定重组产生的蛋白质的标签。实例包括但不限于载体pur278(ruther等，1983，emboj.2：1791)，其中本文中所述的融合蛋白编码序列可以与lacz编码区一起经框内连接到载体中，使得产生杂合蛋白质；pgex载体可用于表达具有谷胱甘肽s-转移酶(glutathiones-transferase，gst)标签的蛋白质。这些蛋白质通常是可溶的，并且可以容易地通过吸附到谷胱甘肽-琼脂糖珠上并随后在游离谷胱甘肽存在下洗脱，以从细胞中纯化。载体包括用于在纯化后容易地除去标签的切割位点(例如precissionprotease(pharmacia，peapack，n.j.))。为了本发明的目的，可以使用许多表达载体系统。这些表达载体通常在宿主生物体中作为附加体或作为宿主染色体dna的组成部分而可复制。表达载体可以包括表达控制序列，其包括但不限于启动子(例如天然相关或异源启动子)、增强子、信号序列、剪接信号、增强子元件和转录终止序列。优选地，表达控制序列是在能够转化或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子系统。表达载体还可以利用来自于动物病毒(例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、杆状病毒、逆转录病毒(rsv、mmtv或momlv)、巨细胞病毒(cmv)或sv40病毒)的dna元件。其他载体涉及使用具有内部核糖体结合位点的多顺反子系统。通常来说，表达载体含有选择标记(例如氨苄青霉素抗性、潮霉素抗性、四环素抗性或新霉素抗性)以允许检测用期望dna序列转化的那些细胞(见例如itakura等，美国专利4,704,362)。已经将dna整合到其染色体中的细胞可以通过引入允许选择经转染的宿主细胞的一种或更多种标志物来选择。标志物可以为营养缺陷型宿主提供原养型、杀生物剂抗性(例如抗生素)或对重金属(例如铜)的抗性。选择性标志基因可以直接连接到待表达的dna序列，或通过共转化导入相同的细胞中。更一般地，一旦制备了编码多肽的载体或dna序列，就可以将表达载体引入合适的宿主细胞中。也就是说，宿主细胞可以被转化。如上所述，将质粒导入宿主细胞可以通过本领域技术人员公知的多种技术来实现。在从重组宿主分离多肽的过程的描述中，除非另有明确说明，术语“细胞”和“细胞培养物”可互换使用以表示多肽来源。换句话说，从“细胞”回收多肽可以意指从旋转下的全细胞，或从包含培养基和悬浮细胞的细胞培养物中回收。编码本发明多肽的基因也可以在非哺乳动物细胞(例如细菌或酵母或植物细胞)中增殖以提高基因数目。在这方面，应当理解，多种单细胞非哺乳动物微生物(例如细菌)也可以被转化；即能够在培养物或发酵中培养的那些。对转化敏感的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(escherichiacoli)或沙门菌(salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(bacillaceae)，例如枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)；肺炎球菌(pneumococcus)；链球菌(streptococcus)和流感嗜血杆菌(haemophilusinfluenzae)。还应当理解，当在细菌中表达时，多肽通常成为包涵体的一部分。多肽必须被分离、纯化，然后装配成功能分子。或者，本发明的优化的核苷酸序列可以并入转基因中以引入转基因动物的基因组中，随后在转基因动物的乳中表达(见例如deboer等，us5,741,957，rosen，us5,304,489，和meade等，us5,849,992)。合适的转基因包括与来自乳腺特异性基因(例如酪蛋白或β乳球蛋白)的启动子和增强子可操作地连接的多肽的编码序列。体外生产允许按比例扩大以产生大量的期望多肽或多核苷酸。实施例实施例1hpve6/e7dna治疗性疫苗(gx-188)如本文中所述的pgx-188治疗性hpvdna疫苗(gx-188)含有编码与flt3l的胞外结构域融合的hpv血清型16和18(hpv16和hpv18)的e6和e7蛋白以及tpa信号序列的质粒dna。(图1a)。将合成的经密码子优化的e6或e7基因片段化成具有小重叠序列(编码16个氨基酸)的两部分(c末端和n末端区域)，并如图1a所示进行混编。将包括tpa、flt3l和混编的e6/e7基因的融合dna序列插入pgx27载体(parkk.s.，等，vaccine.29：5481-5487，2011)中以产生pgx27-tfe6e7。在cgmp条件下在大肠杆菌dh5α中产生gx-188dna疫苗。用仅pgx27对照载体、用插入了野生型e6或e7基因的pgx27或gx-188转染293t细胞。转染后24小时，制备细胞裂解物，并通过免疫印迹分析蛋白质表达。细胞的核和细胞质部分如下制备：用冰冷的磷酸缓冲盐水(pbs)洗涤细胞一次，并以3,000rpm收集5分钟。将细胞重悬于缓冲液a(10mmhepes，ph7.9，10mmkcl，0.2mmedta，1mmdtt，0.25mmpmsf和蛋白酶抑制剂混合物)中。在冰上孵育5分钟后，添加np-40至终浓度为0.25％。将混合物在高速下涡旋10秒。通过在13,000rpm离心30秒收集提取物。收集上清液作为细胞质提取物。将沉淀重悬于缓冲液b(20mmhepes，ph7.9，420mmnacl，2mmedta，1mmdtt，0.25mmpmsf和pic)中，然后在轻轻搅拌下在4℃下孵育30分钟。将混合物以13,000rpm离心15分钟，并收集上清液作为核提取物。对于全细胞蛋白裂解物，将细胞重悬浮于裂解缓冲液(20mmhepes，ph7.4，150mmnacl，5mmedta，10％甘油，0.5％tritonx-100，1mmdtt，1mmpmsf，1mmnaf，1mmna3vo4和pic)中。使用以下抗体：购自santacruzbiotechnology，inc.的抗hpv16e6(n-17)、抗hpv16e7(ed17)、抗p53(fl-393)、抗prb(c-15)和购自abcam的抗核纤层蛋白b1和抗β微管蛋白抗体。包含flt3l和tpa的目的是分别促进融合蛋白的抗原呈递和向分泌途径的运输。tpa的活性是明显的，因为gx-188诱导的e6/e7融合蛋白仅在转染细胞的细胞质区室中检出，而在没有tpa的相同载体中表达的e7蛋白在细胞质和核区室中都被发现，如图2a所示。进行基因混编以防止融合蛋白的e6和e7区域的同源二聚化，这对于它们结合和降解p53和prb肿瘤抑制蛋白是至关重要的(zanierk.，等，structure.20：604-617，2012；liux.，等，thejournalofbiologicalchemistry.281：578-586，2006)。虽然由gx-188dna疫苗产生的e6/e7融合蛋白不能降解p53和prb蛋白，但野生型e6和e7蛋白分别诱导其降解，如图2b和2c所示。研究设计和患者该1期临床研究作为开放标签、单中心、剂量递增研究在韩国首尔的cheilgeneralhospital&women’shealthcarecenter进行。主要终点是评价宫颈上皮内瘤变3(cin3)患者的安全性和耐受性。次要终点包括如本文中所述通过ifn-γelispot测量的hpve6-和e7-特异性t细胞免疫应答的全身性诱导，以及宫颈处涉及的损伤和hpv感染状态的变化。在研究中招募年龄为20至50岁的具有组织学和病毒学证实的hpv16-或hpv18-相关的cin3的女性。通过阴道镜引导的活检确认cin3，通过聚合酶链式反应确定hpv16或hpv18阳性。排除了具有乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒感染、包括心律失常的异常心电图(electrocardiography，ecg)、严重不良药物事件史或严重变应性疾病的对象。妊娠或计划妊娠的女性没有被招募在研究中。疫苗接种由一系列三次疫苗注射组成，在0、4和12周时肌内交替施用于三角肌。遵循标准的3+3剂量递增方案，并测试1mg、2mg和4mg的剂量水平。在最高剂量下，将4mg的gx-188分割成2mg+2mg并注射到左和右三角肌中。对于肌内注射器，使用ep装置(trigrid递送系统，ichormedicalsystems，inc.)以促进dna被摄取进入细胞中。根据本研究的包括和排除标准，招募了11个经筛选的仅患有cin3的患者中的9个(表1)。在试验开始前2周的筛选访视(vs)时间点，通过多种方法检查所筛选的患者，包括阴道镜检查、细胞学、组织学和hpv型试验。包括阴道镜检查、组织学、宫颈内细胞学和hpv基因分型测试的评估由当地实验室在试验地点进行。根据cheilgeneralhospital&women’shealthcarecenter的标准化方法或内部方案进行评估。在gx-188疫苗接种后第20和36周使用病毒学和组织学结果评价对治疗的应答。组织学和细胞学评价。为了进行组织学评价，在筛选期间和在第20和36周进行的两次随访中获取活检样品。用10％甲醛固定样品，用苏木精和伊红(h&e)对4-5μm切片染色。在阴道镜检查期间使用细胞刷(cytyccorp.，boxborough，ma)收集宫颈内样品。除了组织学以外，还使用该宫颈内细胞学测试来评估gx-188疫苗接种。来自组织学和细胞学分析的数据由至少两个病理学家独立地评审并且结果在与所有病理学家和研究者的会议讨论后确认。病毒学应答的pcr。进行hpv分型以确定对象是否被hpv16和/或hpv18感染。通过使用拭子型装置从宫颈收集样品，并使用基因组dna提取试剂盒(bioneercom.seoul，韩国)提取总dna。通过多重pcr系统使用ivdce标记的hpv4aace筛选试剂盒(seegeneinc.，seoul，韩国)根据制造商的方案进行hpv检测和基因分型。hpv4aace筛选试剂盒可同时鉴定hpv16、hpv18、其他高危型(常见高危型：26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和/或82)、hpv6和hpv11型。使用自动multina仪器(shimadzuco.，tokyo，日本)分析pcr产物。使用具有实时pcr的cheilhpvdna芯片在宫颈细胞中双重检查hpvdna基因分型以补偿如先前所述的hpv基因型的准确性(hahn，h.s.，等，europeanjournalofobstetrics，gynecology，andreproductivebiology169：202-206，2013)。通过杂合扩增随后对hla-a和-b的完整外显子2、3进行测序来进行hla的基于序列的分型(sequence-basedtyping，sbt)。将引物以内部方法用于基因座特异性扩增。pcr应用后，进行pcr产物的琼脂糖凝胶电泳以评估数目和质量。使用abiprismbigdye终止子试剂盒(appliedbiosystems，ca，美国)和自动化abi377dna测序仪(appliedbiosystems，ca，美国)进行循环测序反应。使用sbt分析程序(conexiogenomics，assignsbtv3.5.1)分析这些数据。gx-188疫苗在9位患者中的7位(78％)中实现完全应答。在7位应答者中，携带人白细胞抗原(hla)-a＊02的6位患者表现出高多功能cd8t细胞应答以及cin3的完全消退(表5)。所有参与的对象通过电穿孔接受3次gx-188dna疫苗的注射，在第一次注射后4和12周给予最后2次注射(图1b)。对所有对象在2天、4天、8天和16周间隔内完成总共6次治疗访视(vt)和随访(vf)，没有任何退出(图1b)。表5.患者的基线特征在所有访视期间记录总共49例不良事件(adverseevent，ae)。23例ae(包括湿疹、瘀斑、阴道瘙痒、嗜睡、厌食和头晕)被确定与疫苗接种无关。记录到19例ae(包括寒战、注射部位疼痛、肿胀和感觉迟钝)与gx-188疫苗接种相关(表2)。虽然其余的7例ae(包括头痛、鼻炎和疲劳)的原因是未知的，但它们被认为可能与gx-188疫苗接种相关。在更高的剂量下gx-188疫苗相关ae的发生率变得更频繁(对于1mg组群为3例，对于2mg组群为9例，对于4mg组群为14例)，这大概是由于注射量的提高导致的(对于1mg群组为0.5ml，对于2mg群组为1ml，对于4mg群组为2ml)。然而，所有这些ae被认为是轻度的(1级)并且所有患者在gx-188疫苗接种后3天内完全恢复。由于在任何给定剂量下均未观察到严重的ae和实验室异常(表6和表7)，因此将gx-188的剂量从1mg升高至2mg，然后升至4mg(每个剂量3位患者)而没有根据该临床试验方案的3+3剂量递增设计在每个剂量水平登记另外3位对象。表6.在临床研究期间由meddra系统器官2类(systemorgan2class，soc)分类的不良药物反应a数据表示为多个对象和多个发病率([])所有不良事件可能与dna疫苗加电穿孔相关，或未知(疲劳、鼻炎、头痛)。事件的ctcae等级为1(轻度)，并且所有事件在注射后3天内完全恢复。表7.血液学测试汇总数据表示为平均值±s.d.。由于据报道施用flt3l蛋白可以提高白细胞(whitebloodcell，wbc)(maraskovsky，e.，等，blood96：878-884，2000；evans，t.g.，等，vaccine21：322-329，2002)的频率，因此在血液中测量wbc的数目和flt3l的水平。未观察到wbc数目的变化(表6)，这可能是由于gx-188疫苗接种后血液中flt3l水平几乎没有上调(表8)。表8.血液中flt3l浓度的变化数据表示为平均值±s.d.(pgml-1)。为了确定本文中所述方法的免疫学安全性，研究了ep增强的gx-188dna疫苗的递送是否产生已知与自身免疫病相关的抗flt3l和抗dna抗体(saade，f.和petrovsky，n.，expertreviewofvaccines11：189-209，2012)。使用flt3lelisa试剂盒(dfk00，r&dsystems)根据制造商的说明书测量血液中flt3l的水平。简言之，将血浆样品和标准品添加到用对人flt3l特异的单克隆抗体包被的微孔板中。在洗去任何未结合的物质后，向孔中添加对人flt-3配体特异的酶联多克隆抗体。洗涤以除去任何未结合的抗体-酶试剂后，将底物溶液添加至孔中。通过添加2n硫酸终止显色，并使用微板读数器(moleculardevices，spectramaxplus384)测量颜色的强度。通过使用能够产生log/log曲线拟合的计算机软件(softmaxprosoftware，v5.4.1)创建标准曲线来计算血液中flt3l的水平(pg每ml)。数据表示为一式三份样品的平均值±s.d.。通过elisa(chorusdsdna-g，diesse，意大利)测定抗dsdna抗体的水平。简言之，将血浆(50μl)添加到用纯化的人dna包被的微孔板中，然后在洗涤后，用与辣根过氧化物酶缀合的抗人igg抗体进行孵育。除去未结合的缀合物，并添加tmb底物。为了检查结果的有效性，使用试剂盒提供的对照样品。如果对照样品的信号具有超出可接受范围的值，则应重复校准。校准范围为10.0-150.0iuml-1。测试样品可以如下解释：当结果为＞30.0iuml-1时为阳性，当结果为＜20.0iuml-1时为阴性，对于20.0至30.0iuml-1的所有值都是存疑的。在存疑结果的情况下，应重复测试。诊断灵敏度、交叉反应、特异性和测试的精确度在试剂盒手册中描述。检测限为10iuml-1。与对照血清(数据未显示)相比，疫苗接种后抗flt3l抗体水平没有被显著诱导，并且cin3患者血液中针对dna的抗体水平低于检测限(表9)，这与从没有ep的dna疫苗免疫的对象获得的先前结果相当(le，t.p.，等，vaccine18：1893-1901，2000；yang，s.h.，等，genetherapy13：1110-1117，2006)。总之，这些结果表明，ep和遗传佐剂的并入在dna疫苗的临床试验中是相对可容忍的，并且非常类似于在施用不含ep的基础dna疫苗时观察到的安全性特征。表9.在对象中抗dsdna抗体的不可检出水平检测限，10iuml-1实施例2gx-188疫苗接种对细胞免疫的作用为了研究gx-188诱导的细胞免疫应答，通过用覆盖hpv16或hpv18e6和e7蛋白的全长的重叠肽的混合物刺激患者的外周血单个核细胞(pbmc)来确实hpv特异性ifn-γ分泌性t细胞的数目。在gx-188疫苗接种之前的vs时间(-2周)，接种期间的vt2(2周)和vt4时间点(8周)，和接种后的在vf1(20周)和vf2时间点(36周)进行ifn-γelispot测定。在37℃，5％co2下，用optmizerttmctstm培养基(lifetechnologies)使冷冻保存和解冻的pbmc适应超过6小时，随后用2μgml-1的四个不同库的hpv16和hpv18e6或e7衍生肽(具有10个氨基酸重叠的20聚体)刺激pbmc持续48小时(每孔2×105个细胞)。分别将植物凝集素(pha)和仅培养基用作阳性和阴性对照。刺激后，根据制造商的说明书(bdbioscience)使指示分泌ifn-γ的细胞的斑点显色。用自动化分析仪(cellulartechnologyltd.)分析斑点的数目。通过从实验孔中的平均斑点数减去仅培养基对照中的平均斑点数来计算hpv特异性应答，其表示为sfc/106个pbmc(urbani，s.等，jexpmed.，201(5)：675-80，2005)。该测定一式三份进行，并且斑点的背景数为5.7±2.2(平均值±s.d.)。当抗原孔的平均数减去背景时，比培养基对照高3倍或大于55个sfc/106个pbmc，则抗原特异性t细胞应答被认为是阳性的(barnes，e.等，scitranslmed.4(115)：115ra1，2012；streeck，h.等，natprotoc.，4(4)：461-9，2009)。此外，将分析后疫苗诱导的应答定义为与疫苗接种前的结果相比，疫苗接种后t细胞频率提高为至少3倍(devosvansteenwijk，p.j.等，cancerimmunolimmunother.，61(9)：1485-92，2012)。在一个患者(a03)中检测到相对高的预先存在的ifn-γelispot应答，而其他8个患者在疫苗接种前显示弱的预先存在的hpv特异性细胞免疫。基于上述标准，与图3a-3i所示的接种前的背景水平相比，所有对象表现出疫苗诱导的e6-和e7-特异性ifn-γelispot应答的显著提高。9位患者中的两位(a06和a08)甚至在单次免疫接种(vt2)后产生显著增强的ifn-γ应答，且另外4位患者在两次疫苗接种后(vt4)表现出这样的升高的应答。1mg剂量组(图3a和3d)中的两个患者(a01和a03)在3次gx-188疫苗注射(vf1)后显示提高的ifn-γ反应，这表明疫苗诱导的细胞免疫应答在gx-188疫苗接种期间在所有患者中逐渐更强。特别地，患者a08(图3h)显示最高量级的ifn-γelispot应答，其具有每106个pbmc的高达3,500个斑点形成单位(spotformingunit，sfu)的反应性。在所有患者中，针对e6抗原的t细胞应答可能比针对e7抗原的t细胞反应更强烈，如图3a-3i中所示(在vf1，针对e6为69％至89％vs.针对e7为11％至31％)。记忆性t细胞的建立通常在免疫接种后约4周开始形成，通常是疫苗的保护功效的不可或缺因素之一(wherry，e.j.和ahmed，r.，journalofvirology78：5535-5545，2004；kaech，s.m.，等，naturereviewsimmunology2：251-262，2002)。在最后一次疫苗接种后24周(vf2)，在9位患者中的8位中观察到相对高水平的ifn-γelispot应答，当与接种疫苗后8周(vf1)时的反应相比，所述水平对于一位患者(a03)降低，对于三位患者(a01、a06和a09)相当，并且对于四位患者(a02，a05，a07和a08)提高(图3b、3e、3g和3h)。总的来说，该发现表明gx-188疫苗接种诱导的e6/e7特异性记忆t细胞应答可以在最后一次接种后保持至少24周。为了确定通过elispot测定测量的对e6/e7抗原的ifn-γ应答是否主要由t细胞产生并且确定哪个t细胞子集发挥主要作用，在疫苗接种前和疫苗接种后时间点(vs和vf1)对ifn-γ进行细胞内细胞因子染色(ics)测定。具体而言，将在gx-188疫苗接种之前(vs)和之后(vf1)收获的患者的冷冻保存和解冻的pbmc重悬浮于optimizertmctstm中，并在37℃，5％co2下静息超过6小时。将pbmc一式两份平板接种，并在1μg/ml的α-cd28(l293，bdbioscience)和α-cd49d(l25，bdbioscience)的存在下用浓度为2μg/ml的一个库中的hpv16e6和e7肽的组合混合物(15聚体，8个氨基酸重叠)、α-cd3mab(阳性对照)或单独的培养基(阴性对照)刺激13小时。在初始刺激后90分钟添加分泌抑制剂(莫能菌素(monensin)/布雷菲德菌素a(brefeldina)，bdbioscience)。刺激后，用pbs洗涤细胞以用于随后的免疫染色和多色流式细胞术分析。用于细胞染色的抗体为cd19-apccy7(hib19，biolegend)、cd4-percpcy5.5(rpa-t4，biolegend)、cd8-pecy7(rpa-t8，bdbioscience)、cd3-bv605(brightviolet605)(ucht1，biolegend)、cd3-bv500(ucht1，bdhorizon)、活/死-apccy7(lifetechnologies)、mip-1β-pe(d21-1351，bdbioscience)、ifn-γ-apc(4s.b3，biolegend)、tnf-α-bv421(mab11，biolegend)、il-2-bv711(5344.111，bdhorizon)、cd107a-fitc(h4a3，bdbioscience)和cd107b-fitc(h4b4，bdbioscience)。facs分析通过fortessa流式细胞仪(bdbioscience)完成，并使用flowjo软件(treestar)分析数据。将布尔设门用于确定从cd8t细胞同时产生细胞因子。用spice进行多功能性分析(roederer，m.等，cytometrya.，79(2)：167-74，2011)。阳性应答定义为相比于仅培养基对照，细胞因子产生性t细胞的百分比为至少两倍，并且应答应当可见为与非产生性细胞相分离的清楚可分辨的细胞因子产生性细胞群体。疫苗诱导的应答定义为基线样品(接种前)的抗原特异性细胞因子产生性t细胞的百分比提高为至少3倍(welters，m.j.等，clincancerres.，1；14(1)：178-87，2008)。如图4a-4e所示，用gx-188疫苗接种导致所有9位患者中hpv16特异性ifn-γ+cd4t细胞应答提高(图4b和4c)，而在9位患者中的8位中ifn-γ+cd8t细胞应答增强，除了患者a04以外(图4d和4e)。因此，除一位患者外，gx-188疫苗引起hpv16特异性cd4和cd8t细胞的激活。由于持续性hpv感染损害t辅助(th)1型细胞对hpv的应答，导致宫颈癌进展(deligeoroglou，e.，等，infectiousdiseasesinobstetricsandgynecology2013：540850，2013；bais，a.g.，等，journalofclinicalpathology58：1096-1100，2005；clerici，m.，等，journalofthenationalcancerinstitute89：245-250，1997；peghini，b.c.，等，humanimmunology73：920-926，2012)，因此研究了gx-188dna疫苗是否可以驱动hpv特异性cd4t细胞分化为th1效应细胞。将冷冻保存和解冻的pbmc(每孔2×105)重悬于optimizertmctstm中，并在37℃，5％co2下静息超过6小时，并随后将pbmc一式两份地平板接种，并在96孔板中，在含有10％fbs、100uml-1青霉素和100μgml-1链霉素的rpmi1640中以浓度为2μgml-1的一个库中的hpv16e6和e7肽的组合混合物(15聚体，8个氨基酸重叠)或仅作为阴性对照的培养基刺激。刺激后48小时收集培养物上清液，并通过th1/th2/th17细胞计数珠阵列(cba)试剂盒(bdbiosciences)对细胞因子进行定量。根据制造商的说明，建议的检测限为2.5至5pgml-1(il-2、il-4、il-10、tnf-α和ifn-γ)或19pgml-1(il-17a)，并将截断值设定为5pgml-1，因为如图12所示，每种细胞因子的标准曲线在5pgml-1的浓度开始显示出线性。阳性抗原特异性反应定义为高于截断值的细胞因子浓度，并且＞2×培养基对照的浓度(welters，m.j.等，clincancerres.，1；14(1)：178-87，2008)。疫苗诱导的应答定义为相对于基线样品提高为至少3倍的抗原特异性细胞因子产生(welters，m.j.等，clincancerres.，1；14(1)：178-87，2008)。在用e6/e7肽刺激后，疫苗接种前常见的th1效应细胞因子(例如ifn-γ、il-2和tnf-α)的基线产生显著低。然而，在大多数患者中这些细胞因子的量在接种后显著提高(对于ifn-γ、il-2和tnf-α的中值分别为49.9、13和22.9倍提高)，分别如图5a-c中所示。与ifn-γelispot和ics数据一致，a08患者还显示出th1细胞因子产生的最大提高。鉴于il-2产生水平在功能性记忆t细胞分化期间逐渐提高(wherry，e.j.，等，natureimmunology4：225-234，2003)，il-2产生的这种实质性提高可以表明在gx-188疫苗接种后高效地产生hpv特异性记忆性t细胞。另一方面，通过疫苗接种，th2(il-4和il-10)(分别为图5d-e)和th17(il-17a)(图5f)细胞因子没有显著提高，尽管患者a04在免疫抑制性细胞因子il-10的产生中具有略微提高的水平。综合以上ifn-γelispot和ics分析，这些结果表明gx-188疫苗接种导致诱导强烈的th1极化的hpv特异性细胞免疫应答。实施例3gx-188疫苗诱导的多功能cd8t细胞在持续性病毒感染期间，病毒特异性cd8t细胞变得对病毒抗原无应答并显示效应子功能的进行性丧失(wherry，e.j.，journalofvirology77：4911-4927，2003；wherry，e.j.，等，immunity27：670-684，2007)。为了确定gx-188疫苗接种是否诱导hpv特异性cd8t细胞功能性的多个方面，hpv特异性cd8t细胞共产生效应细胞因子的能力，因此评估了ifn-γ、il-2、tnf-α和mip-1β。类似于通过ics获得的ifn-γ的结果(图4a-4e)，相比于疫苗接种前(vs)，在疫苗接种后(vf1)除a04外，9位患者中的8位显示出共产生ifn-γ和il-2、tnf-α或mip-1β的hpv特异性cd8t细胞的比例提高(图6a-c和图7b-d)。病毒特异性cd8t细胞的细胞裂解活性是评价抵抗病毒感染的疫苗效力的另一个主要指标(pantaleo，g.和harari，a.，naturereviewsimmunology6：417-423，2006；seder，r.a.，naturereviewsimmunology8：247-258，2008)。由于cd107a/b的表达仅见于通过细胞毒性t细胞的脱颗粒期间(betts，m.r.，等，journalofimmunologicalmethods281：65-78，2003)，因此还评价了hpv特异性cd8t细胞同时产生ifn-γ和上调cd107a/b表达的能力。如图6d和图7e所示，疫苗接种后，除a04之外的所有患者中，ifn-γ+cd107a/b+cd8t细胞的频率逐步升高。为了确定在这8个患者中通过疫苗接种诱导的hpv16特异性cd8t细胞的多功能性，使用布尔设门同时评估ifn-γ、il-2、tnf-α、mip-1β和cd107a/b。患者a08表现出最高的多功能谱，其中87.6％的hpv16特异性cd8t细胞至少为三阳性，其中15％具有全部5种功能(图6e-f)。在其他6位患者(a01、a02、a03、a05、a06和a07)中，7.8％至46.3％的hpv特异性cd8t细胞具有3种或更多功能(图6f)。然而，来自患者a09的hpv16特异性cd8t细胞不是多功能的(图6f)。总的来说，这些结果表明，在大多数患者中，gx-188接种可以诱导具有多种多功能谱的抗原特异性cd8t细胞。已知抗原刺激后应答性t细胞的最佳扩增对于通过治疗性疫苗接种提供有效的保护性免疫是必需的(wherry，e.j.，journalofvirology77：4911-4927，2003；wherry，e.j.，等，journalofvirology79：8960-8968，2005)。因此，通过测量ki67和cd38表达的水平来检查疫苗接种前(vs)和后(vf1)对hpv16e6/e7肽应答的cd8t细胞的激活诱导的增殖，其分别用作增殖和激活的标志物(gerdes，j.，等，journalofimmunology133：1710-1715，1984；sandoval-montes，c.，和santos-argumedo，l.，journalofleukocytebiology77：513-521，2005)。ki-67被证明是用于离体测量抗原特异性细胞增殖的有效工具，并且可以用作标准增殖测定(例如羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceinsuccinimidylester，cfse)标记和5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxyuridine，brdu)并入)的替代方法(soares，a.等，jimmunolmethods.，362(1-2)：43-50，2010；shedlock，d.j.等，cytometrya.，77(3)：275-84，2010)。使用optmizertmctstm培养基(lifetechnologies)在37℃，5％co2下将冷冻保存和解冻的pbmc(每孔1×106个细胞)适应超过6小时。将pbmc一式两份地平板接种，并在含有10％fbs、100uml-1青霉素和100μgml-1链霉素的rpmi1640中，用浓度为2μgml-1的一个库的hpv16e6和e7肽的组合混合物(15聚物，具有8个氨基酸重叠)刺激5天。将α-cd3mab和单独的培养基分别作为阳性和阴性对照。3天后，用100μl新鲜r10培养基替换细胞培养物。在培养结束时，用pbs洗涤细胞以用于随后的免疫染色和多色流式细胞术分析。细胞用cd19-fitc、cd4-percpcy5.5、cd8-pecy7、cd38-bv421(hit2，bdbioscience)、cd3-bv605、ki-67-pe(b56，bdbioscience)和活/死apccy7染色。比培养基对照高至少3倍的应答被认为是阳性的。疫苗诱导的应答被定义为相比于基线样品的抗原特异性增殖性cd8t细胞以百分比计至少提高3倍。尽管一个患者(a01)显示相对高的预先存在的疫苗接种前水平(vs)，但是其余患者显示低水平的ki67+cd38+cd8t细胞，如图8所示。在疫苗接种后，所有患者在hpv特异性cd8t细胞的增殖活性方面均表现出有意义的改善。根据如图6所示的功能性cd8t细胞应答的模式，2位患者(a04和a09)在增殖性cd8t细胞群方面仅显示轻微提高，而其他7位患者显示ki67+cd38+cd8t细胞群体的大得多的提高，其提高的范围为3.1至21.2倍。本文中，来自未刺激细胞的ki67表达的背景水平相当低(0.011±0.015％)，并因此肽刺激的ki67+cd38+cd8t细胞可被认为是抗原特异性增殖性cd8t细胞，如图8所示。总的来说，这些结果表明，cin3患者中的gx-188疫苗接种显著增强了hpv特异性cd8t细胞的扩增和多功能性。实施例4gx-188疫苗接种后针对e7和e6蛋白的抗体应答的测量通过终点稀释酶联免疫吸附测定(elisa)评价血浆样品对于e6和e7的总igg抗体应答。具体而言，收集血浆样品并在-70℃冷冻。进行结合elisa以测量由gx-188疫苗接种诱导的抗hpv16/18e6或e7抗体应答。通过用hpv16/hpv18e6或e7蛋白(1μgml-1)包被96孔酶免疫测定板(thermoscientifictm)来测定抗体的终点滴度(重组hpv16e6、hpv16e7和hpv18e7购自proteinxlab；重组hpv18e6购自mybiosource)。在室温下用pbs，5％脱脂乳封闭平板1小时。将测试血浆在含有5％脱脂乳和0.1％吐温20的pbs中连续稀释，并一式三份添加至板孔。在室温下孵育1小时后，通过将板与hrp缀合的山羊抗人igg抗体(bethyl，a80-104p)孵育1小时来检测e6-或e7-特异性抗体。在最后一次洗涤(tablet，fluka)后，用tmb底物(surmodics)检测特异性结合。用0.5nh2so4(sigma-aldrich)终止反应，并在微板读数器(moleculardevices，spectramaxplus384)中在450nm读取吸光度。负截断(negativecut-off，nco)值定义为12个健康对照血浆(biochemed)的平均光密度加上1.645xs.d.(mire-sluis，a.r.等，jimmunolmethods.，289(1-2)：1-16，2004)。如果样品的平均光密度大于nco值，则认为其阳性(hpv16e6为0.173，hpv16e7为0.213，hpv18e6为0.214，并且hpv18e7为0.227)。为了说明样品与板的非特异性结合，在用不相关蛋白epo-brp(edqm，批次3，ph.eur.参考标准)包被的孔中测试每种血浆。如图9a-9l所示，所有患者在基线(vs)时对e6和e7蛋白均检测不到或几乎检测不到igg滴度，表明没有有意义的预先存在的e6和e7特异性igg抗体应答。有趣的是，在疫苗接种后的任何剂量群组中，e6的抗体滴度都完全没有产生或加强。在用范围为1∶8至1∶256的抗体滴度(图9a-9l)疫苗接种后，九位患者中的三位(a05、a07和a09)产生弱的抗e7抗体应答。值得注意的是，针对e7抗原的t细胞应答低于针对e6抗原的t细胞应答，并且针对e7蛋白的可测量的抗体滴度与pbmc中针对e7抗原的cd8t细胞应答不相关。实施例5gx-188疫苗接种对hpv感染和病变的作用通过评价患者在其36周的临床试验期间的hpv感染状态，以及其高度子宫颈病变的细胞学和组织学变化来确定gx-188诱导的临床应答(表10和图1b)。根据阴道镜检查导向的活检标本的组织学评价，在基线处(vs)，所有9位患者患有伴有严重不典型增生(a01、a02、a05、a06、a07和a08)或原位癌(a03、a04和a09)的cin3(表5和10)。在最后一次疫苗接种后8周(vf1)，9位患者中有6位(每个组群中有2位患者(来自1mg组群的a01和a03，来自2mg组群的a05和a06，来自4mg组群的a07和a08)没有病变)，这表明应答的剂量独立性可能是由于1mg的饱和剂量引起的(表10)。基于在第12周(vt4)第二次免疫接种后的细胞学分析，这些应答者患者中的三个(a03、a06和a08)对于上皮内损伤是阴性的；而另外3位患者(a01、a05和a07)在第20周(vf1)第三次疫苗接种后显示此类应答，并且最后一位应答患者(a02)在36周试验结束时(vf2)清除病变。值得注意的是，6个早期应答者中没有一个在试验的剩余持续时间期间显示任何复发性宫颈不典型增生。在2位无应答者的情况下，患者a04在第24周通过宫颈锥切术(cervicalconization)治疗，而根据患者的要求，对患者a09在没有手术的情况下进行监测，直到研究结束，并且在cin3方面保持稳定，而未发展成侵袭性癌。疫苗接种前(vs)和试验结束时(vf2)的阴道镜检查、细胞学和组织学图像分析更清楚地证明了应答者和无应答者之间对gx-188的临床反应的差异，如图10中来自代表性应答者a05和无应答者a09患者的照片所示。在宫颈的阴道镜检查评价中，患者a05在疫苗接种后显示致密醋酸白色上皮细胞的显著降低和转化区中的粗糙点的消失，而患者a09在子宫颈中仍然具有致密病变，如图10a所示。宫颈细胞学测试表明，gx-188疫苗接种诱导患者a05中具有蛛形细胞质过程和常染色体核的高度鳞状上皮内病变(high-gradesquamousintraepitheliallesion，hsil)的正常化，但在患者a09中细胞学外观没有变化，如图10b所示。在组织学特征中，疫苗接种后在患者a05中，活检显示具有明显的核变异的cin3的异常厚上皮回归到没有非典型上皮的正常鳞状上皮，但是其仍然存在于患者a09中，如图10c所示。在试验开始时，在所有9位对象的病变中鉴定出hpv16，并且发现一位患者(a05)还与hpv18共感染。在第12周(vt4)，4位患者(a01、a03、a06和a08)和患者a05分别显示hpv16和hpv18病毒的清除(表10)，表明在第二次免疫接种后病毒清除。在第20周(vf1)，在9位患者中的6例(a01、a03、a05、a06、a07和a08)中清除了宫颈病变中的hpvdna，并且另一位患者(a02)在第36周(vf2)清除了病毒。由于这7位患者也以相同的动力学清除了它们的损伤，所以在临床和病毒学应答之间存在完美的相关性(表10)。除了hpv16和hpv18以外，发现两位患者(a06和a07)在基线(vs)时还与其他高风险常见类型的hpv共感染。一位患者(a05)在试验中间(vt4)感染了常见的hpv类型。与a07患者相反，a05和a06患者分别在vf2和vt4清除共感染的常见类型的hpv，这可能是由于消除hpv16感染的上皮内瘤细胞引起的旁邻(bystander)效应。这些病毒清除的另一个原因是通过疫苗接种后产生的hpv16e6/e7特异性cd8t细胞的交叉反应性，因为在hpv16或hpv18和其他高风险型株之间的e6和e7氨基酸序列中存在约50-60％的同源性。值得注意的是，在早期时间点(vt4)清除其病变和hpv感染的3位患者(a03、a06和a08)迅速显示相对高量级的hpv特异性多功能cd8t细胞应答(表10，图6和8)。此外，具有有意义的多功能cd8t细胞应答的其他4位患者(a01、a02、a05和a07)在第20周(vf1)时或在试验结束时(在第36周时的vf2)在第三次疫苗接种后显示其病变和hpv感染的完全消退(表10，图6和8)。相比之下，2位无应答者患者(a04和a09)几乎没有多功能cd8t细胞应答。当将来自患者的个体数据分组为无应答者(a04和a09)和应答者(a01、a02、a03、a05、a06、a07和a08)以产生3个或更多功能的多功能谱时，多功能t细胞应答的诱导和临床结果之间的相关性是显而易见的(图11)。因此，本文中提供的结果表明gx-188疫苗的临床效力与全身性hpv特异性多功能cd8t细胞应答的程度密切相关。总体而言，gx-188疫苗接种导致78％的临床和病毒学上有意义的完全应答率(9位患者中的7位)(表10)。表10.通过电穿孔用gx-188dna疫苗免疫接种期间和之后的病毒学和临床应答ahpv检测的pcr结果(阴性，hpv16和18两者均阴性；16，hpv16阳性；常见，其他高危hpv26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、56、58、59、66、68、73和/或82阳性)b未完成。a04患者在第24周通过宫颈锥切术治疗ca07患者由于她的个人情况，在第42周而不是第36周进行了访视和阴道镜检查和宫颈活检的检查。cin3；宫颈上皮内瘤变iii级，asc-h；非典型鳞状细胞-不能排除高度鳞状上皮内病变，asc-us；未确定意义的非典型鳞状细胞，hsil；高度鳞状上皮内病变，nil；无上皮内病变本文中使用的统计分析：使用(v9.1)软件进行安全性、药效动力学和药代动力学结果的描述性统计。使用prism5.0软件(graphpad)进行标准和双尾配对t检验(student’sttest)以分析所有定量数据的统计学显著性。实施例6gx-188变体的构建及其免疫原性已经如所述构建了gx-188构建体的许多变体。构建的gx-188变体包括c-1、c-2、d-1、d-2、e-1和e-2。参见图14。一些构建体(c-1和c-2)在e6或e7蛋白部分中含有一个或更多个突变或替换(即，c-1的16e6n中的h21q和16e6c中的y85h和v90l，以及c-2的16e7n中的m12k和n29s以及16e7c中的r77s和g85s)；一些构建体(d-1和d-2)含有较短或较长的重叠序列(即，分别为0+0+0+0和86+42+15+15)；并且一些构建体(e-1和e2)含有e6和e7蛋白部分的不同抗原混编顺序(分别为ncncncnc和ccnnccnn)。突变/替换变体(c-1和c-2)基于如图13a-13d所示的天然存在的突变和/或替换。为了从gx-188构建变体，以化学方法合成在其末端带有bstxi(5’)和alei(3’)限制性位点的每个含有替换/突变、重叠序列中的变异和抗原混编的变化的基因片段，以有助于插入到gx-188中。用bstxi和alei限制酶消化gx-188和c-1、c-2、d-1、d-2、e-1和e-2片段，然后连接以分别产生c-1、c-2、d-1、d-2、e-1和e-2的各质粒。特别地，对于c-1构建体，分别将hpv16e6的组氨酸(h)21、酪氨酸(y)85和缬氨酸(v)90替换为谷氨酰胺(q)、组氨酸(h)和亮氨酸(l)。包含编码c-1构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：105。c-1构建体的氨基酸序列显示为seqidno：106。对于c-2构建体，hpv16e7的甲硫氨酸(m)12被赖氨酸(k)替换，并且hpv16e7的天冬酰胺(n)29、精氨酸(r)77和甘氨酸(g)85被丝氨酸(s)替换。包含编码c-2构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：107。c-2构建体的氨基酸序列显示为seqidno：108。d-1构建体含有hpv16e6的第1至78位氨基酸、hpv16e7的第1至58位氨基酸、hpv16e6的第79至158位氨基酸、hpv16e7的第59至98位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至65位、hpv18e6的第71位至第158位和hpv18e7的第51位至105位。包含编码d1构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：109。d-1构建体的氨基酸序列显示为seqidno：110。d-2构建体含有hpv16e6的第1至130位氨基酸、hpv16e7的第1至85位氨基酸、hpv16e6的第45至158位氨基酸和hpv16e7的第44至98位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至65位、hpv18e6的第71位至第158位和hpv18e7的第51位至105位。包含编码d-2构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：111。d-2构建体的氨基酸序列显示为seqidno：112。e-1构建体从n末端到c末端含有：hpv16e6的第1至85位氨基酸、hpv16e7的第51至98位氨基酸、hpv16e7的第1至65位氨基酸、hpv16e6的第71至158位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至65位、hpv18e6的第71位至第158位和hpv18e7的第51位至105位。包含编码e-1构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：113。e-1构建体的氨基酸序列显示为seqidno：114。e-2构建体从n末端到c末端含有：hpv16e6的第71至158位氨基酸、hpv16e7的第51至98位氨基酸、hpv16e6的第1至85位氨基酸、hpv16e6的第1至第65位氨基酸、hpv18e6的第1至85位氨基酸、hpv18e7的第1至65位、hpv18e6的第71位至第158位和hpv18e7的第51位至105位。包含编码e-2构建体的核苷酸序列的整个质粒序列显示为seqidno：115。e-2构建体的氨基酸序列显示为seqidno：116。为了研究由gx-188和gx-188变体诱导的细胞免疫应答，用8μggx-188和gx-188变体质粒dna以电穿孔递送，对小鼠进行一次或两次接种。图15总结了每种构建体的疫苗接种程序。在每次疫苗接种后2周对接种的小鼠进行分析。进行ifn-γelispot测定以测量疫苗诱导的t细胞应答。在单细胞水平制备脾细胞，并用2μgml-1的四种不同的肽库刺激24小时，如实施例2所述。将伴刀豆球蛋白a(cona)和仅培养基分别用作阳性和阴性对照。刺激后，根据制造商的说明书(bdbioscience)产生斑点形成细胞(sfc)。通过从存在刺激物的斑点数中减去不存在刺激物时诱导的斑点的平均数来计算应答细胞的数目。应答细胞的数目表示为sfc/106个脾细胞。与模拟载体疫苗接种的小鼠相比，用疫苗变体免疫接种的小鼠在单次和多次疫苗接种时显示出显著提高的ifn-γelispot应答(参见图16a和16b)。大多数gx-188变体在多次接种后表现出与gx-188相当的ifn-γelispot应答。这些结果表明疫苗gx-188变体也可以在疫苗接种后诱导足够的细胞介导的免疫应答，例如ifn-γelispot应答。尤其是，尽管在e1和e2的单次接种(抗原混编)后ifn-γelispot应答最低，但疫苗诱导的t细胞应答在加强免疫接种后增强，并且与其他gx-188变体相当。该结果表明，替换/突变和抗原混编将保留诱导经疫苗诱导的针对多次疫苗接种的t细胞应答的能力。本公开内容不限于所描述的旨在作为本公开内容的各个方面的单一说明的具体实施方案的范围，并且功能上等同的任何组合物或方法均在本公开内容的范围内。实际上，除了本文中所示和所述的那些之外，本公开的多种修改对于本领域技术人员来说，通过前面的描述和附图，将变得显而易见。这样的修改旨在落入所附权利要求的范围内。本说明书中提及的所有出版物和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指明通过引用并入。本申请要求于2014年8月15日提交的美国临时申请no.62/038,134和于2014年8月19日提交的美国临时申请no.62/039,270的权益，其通过引用整体并入本文。当前第1页12当前第1页12