本发明涉及一种治疗中风的中药脑血疏制剂的制备方法，属中药制剂技术领域。
背景技术：
脑血管病是当今世界危害人类健康的三大疾病之一，是中老年人的多发病，死亡率很高，在我国脑血管病占死因的第二位。国内报道脑出血死亡率为38％～43％，幸存者约有50％～70％患者留有严重的后遗症，生活不能自理，不仅病人遭受极大痛苦，也给家庭和社会造成负担。
中药治疗脑血管病有其独特的优势，如已经上市的中药脑血疏口服液，其配方和工艺描述在中国专利200810100200.9(授权公告号CN 101279018 B)，“一种中药脑血疏制剂”中，该专利描述了一种由中药黄芪、水蛭、石菖蒲、牛膝、牡丹皮、大黄、川芎等制成中药制剂，经过实验发现，该制剂具有益气、活血、化瘀作用，主治中风急性期及恢复早期，属气虚血瘀证。专利201310002166.2(授权公告号CN 102988643 B)则描述了一种稳定，安全，无刺激性，可以满足临床需求的脑血疏注射剂。
由于现有技术中的脑血疏制剂的制备工艺为部分药材提取挥发油，部分药材进行水提、醇沉的粗制品，存在有效成分含量低、服用量大、吸收不完全、生物利用度低等不足之处。随着科学技术的不断发展和新药研发水平的不断提高，新理论、新技术、新工艺、新设备的不断应用，其传统制备工艺已不完全符合中药现代化的要求。
技术实现要素：
针对上述现有技术，本发明在现有技术的基础上进行了多重改进，特别是在提取工艺上进行了大量的筛选，提供了一种脑血疏的制备方法，通过该方法制备得到的脑血疏制剂，具有有效成分含量高、生物利用度高、更适合人体吸收等优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种脑血疏的制备方法，所述脑血疏是由以下重量份的原料药制成的：黄芪233g～932g，水蛭150g～600g，石菖蒲84g～334g，牛膝84g～334g，牡丹皮84g～334g，大黄33g～132g，川芎84g～334g。
制备方法包括以下步骤：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加药材重量2～8倍的水，加热回流1～3h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏0.5～1.5h；提取挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取黄芪、牛膝、川芎和大黄，粉碎，与步骤(1)中的药渣合并，加入pH值为1.5～2.5的水(向水中加入盐酸或磷酸调节至pH值为1.5～2.5)，加热提取1～3小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加入水的量为药材重量(指步骤(1)中药渣与黄芪等4种原料药的总重量)的2～4倍；
(3)步骤(2)所得药渣加pH值为6.5～7.0的水，加热提取1～3小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量(指步骤(2)中药渣的重量)的1～3倍；
(4)步骤(3)所得药渣加pH值为7.8～8.5的水，加热提取1～3小时，滤过，滤液备用；
优选的，所述加水量为药材重量(指步骤(3)中药渣的重量)的1～3倍；
(5)取水蛭，粉碎后加入0.5～1.5倍量(重量倍数)的生理盐水，浸泡12～36h后过滤，滤渣、滤液备用；
(6)步骤(5)所得滤渣加入pH值1.5～2.5的水(向水中加入盐酸或磷酸调节至pH值为1.5～2.5)，加热至40～60℃提取0.5～1.5小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量(指步骤(5)中滤渣的重量)的1～3倍；
(7)步骤(6)所得滤渣加入pH值为6.5～7.0的水，加热至40～60℃提取0.5～1.5小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量(指步骤(6)中滤渣的重量)的1～3倍；
(8)步骤(7)所得药渣加pH值为7.8～8.5的水，加热至40～60℃提取0.5～1.5小时，滤过，滤液备用；
优选的，所述加水量为药材重量(指步骤(7)中滤渣的重量)的1～3倍；
所述pH值为6.5～7.0的水，为自然界自然存在的水，无需进行特殊处理即可常规途径得到；所述pH值为7.8～8.5的水，可采用0.1mol/L的NaOH溶液调节得到；
(9)合并步骤(5)(6)(7)(8)中所得滤液，低温浓缩至相对密度为1.05～1.10的清膏，加入95％(体积百分数)以上乙醇溶液或无水乙醇至含醇量为85％(体积百分数)，-30℃下静置12～36小时，离心，取上清液，低温(25～35℃)干燥，得水蛭素；
(10)合并步骤(2)(3)(4)中所得滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25的清膏，加入步骤(1)中所得挥发油及步骤(9)所得水蛭素，混匀，加入药剂学上可接受的载体或辅料，制备成药物制剂。
优选的，所述脑血疏是由以下重量份的原料药制成的：黄芪466g，水蛭300g，石菖蒲167g，牛膝167g，牡丹皮167g，大黄66g，川芎167g。
所述药物制剂的剂型可以为口服液、片剂、胶囊、滴丸、颗粒等剂型。
优选的，所述制备工艺步骤如下：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加药材重量5倍的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取黄芪、牛膝、川芎和大黄，粉碎，与步骤(1)中的药渣合并，加入pH值为2.0的水，加热提取2小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加入水的量为药材重量的3倍；
(3)步骤(2)所得药渣加pH值为6.8的水，加热提取2小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量的2倍；
(4)步骤(3)所得药渣加pH值为8.2的水，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
优选的，所述加水量为药材重量的2倍；
(5)取水蛭，粉碎后加入等质量的生理盐水浸泡24h后过滤，滤渣、滤液备用；
(6)步骤(5)所得滤渣加入pH值2.0的水，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量的2倍；
(7)步骤(6)所得滤渣加入pH值为6.8的水，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液、滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量的2倍；
(8)步骤(7)所得药渣加pH值为8.2的水，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液备用；
优选的，所述加水量为药材重量的2倍；
(9)合并步骤(5)(6)(7)(8)中所得滤液，低温浓缩至相对密度为1.05～1.10的清膏，加入95％以上乙醇至含醇量为85％，-30℃静置24小时，离心，取上清液低温干燥得水蛭素；
(10)合并步骤(2)(3)(4)中所得滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25的清膏，加入步骤(1)中所得挥发油及步骤(9)所得水蛭素，混匀，加入药剂学上可接受的载体或辅料，制备成药物制剂。
本发明的脑血疏制剂的半仿生制备方法，本着使制剂达到“三小(剂量小、毒性小、副作用小)、三效(高效、速效、长效)、五方便(生产、运输、服用、携带、贮藏)”的目的，在处方确定的基础上，对药材的提取纯化工艺进行了全新摸索，综合考虑了药材物理性质、有效成分特性及生产成本等因素，并结合现代生物药剂学的新技术，采用半仿生提取法，创造性的对其进行了提取纯化，有效地保留了活性成分。半仿生法是模仿口服药物在胃肠道的转运过程而提出的一种中药提取新技术，其采用选定pH值的酸性水和碱性水依次连续提取，其目的是提取含指标成分高的“活性混合物”。该法在提取工艺的设计中坚持“有成分论，不惟成分论，重在机体药效学反应”的观点，以一种或几种有效成分、总浸出物及不同极性部分或主要药理作用做指标，综合评判，优选提取工艺的理论原则，这样既能充分发挥混合物成分的综合作用特点，又有利于用单体成分控制制剂质量，最终得到适合人体吸收的药效成分。在本发明中，申请人通过大量的实验研究，筛选得到了本发明的技术方案，去掉了药材中大部分不被人体吸收的杂质并最大限度保留各药味的有效成分，使得本发明所得精制脑血疏口服液较原工艺的产品载药量提高了接近100％(以生药量计)，同时有效成分含量相对提高，以该有效成分制成口服液、片剂、胶囊、滴丸、颗粒等剂型，能够更好地满足心脑血管疾病患者的用药需求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1制备脑血疏口服液
配方为：黄芪466g，水蛭300g，石菖蒲167g，牛膝167g，牡丹皮167g大黄66g，川芎167g。
制备方法如下：
(1)取石菖蒲和牡丹皮，粉碎，加药材重量5倍的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取黄芪、牛膝、川芎和大黄，粉碎，与步骤(1)中的药渣合并，加入pH值为2.0的水(向水中加入盐酸调节至pH值为2.0)，加入水的量为药材重量的3倍，加热提取2小时，滤过，滤液、滤渣备用；
(3)步骤(2)所得药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤液、滤渣备用；
(4)步骤(3)所得药渣加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(5)水蛭粉碎后加入等质量的生理盐水浸泡24h后过滤，滤渣、滤液备用；
(6)步骤(5)所得滤渣加入pH值2.0的水(向水中加入盐酸调节至pH值为2.0)，加水量为药材重量的2倍，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液、滤渣备用；
(7)步骤(6)所得滤渣加入pH值为6.8的水，加水量为药材重量的2倍，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液、滤渣备用；
(8)步骤(7)所得药渣加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的2倍，加热至50℃提取1小时，滤过，滤液备用；
所述pH值为6.8的水，为自然界自然存在的水，无需进行特殊处理即可常规途径得到；所述pH值为8.2的水，采用0.1mol/L的NaOH溶液调节得到；
(9)合并步骤(5)(6)(7)(8)中所得滤液，低温浓缩至相对密度为1.05～1.10的清膏，加入95％乙醇溶液至含醇量为85％，-30℃静置24小时，离心，取上清液低温干燥得水蛭素；
(10)合并步骤(2)(3)(4)中所得滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25的清膏，加入步骤(1)中所得挥发油及步骤(9)所得水蛭素，混匀，加水调整总量至1000ml，搅匀，灌封，灭菌，即得。
实验1药效成分含量的检测及比较
取实施例1制得的精制脑血疏口服液，与现有工艺生产的脑血疏口服液(山东沃华医药科技股份有限公司生产，批号150210，按照专利号为200810100200.9的专利说明书中实施例1的方法制备得到；下同)、脑血疏注射液(山东沃华医药科技股份有限公司生产，批号150451，按照专利号为201310002166.2的专利说明书中实施例1的方法制备得到)比较，采用高效液相色谱法及滴定法测定主要药效成分含量，结果如表1所示(表1中各百分数指质量百分数)。
表1
通过表1中的比较可以看出，利用本发明的方法制备的精制脑血疏口服液，在各药效成分的含量上，明显优于现有技术中的脑血疏口服液与注射液，尤其是水蛭素的含量有较大提升，差异极其显著。
实验2生物利用度的检测及比较
通过人体试验测定精制脑血疏口服液和脑血疏口服液在不同时刻血浆中党参总碱的浓度，绘制血药浓度-时间曲线，计算精制脑血疏口服液和脑血疏口服液主要药动学参数及相对生物利用度。
(一)材料与方法
(1)仪器与药品
岛津高效液相色谱仪(SPD检测器)，HC2518高速离心机(科大创新股份有限公司)，XW-80A型混合器；精制脑血疏口服液(按照本专利实施例1制备)、脑血疏口服液(批号150731)、去离子水均为本公司自制，四氢呋喃和乙腈为色谱纯，其他化学试剂均为分析纯。
(2)受试者
健康男性志愿者12名，平均年龄21.4±1.9岁(20-24岁)，64.9±11.3kg，平均身高171.8±10.5cm，试验前进行体格检查，心、肝肾功能均为正常。试验前两周内未服用其它任何药物，试验期间禁止服用其它药物及烟、酒等。
(二)试验方案
(1)试验设计
采用单剂量自身对照交叉试验方法，每个受试者均随机先后接受精制脑血疏口服液或脑血疏口服液2次试验。每次试验间隔为7d。受试前禁食12h，服用药物4h后给予统一标准餐。
(2)给药与采血
12名志愿者随机分成两组，每组6人，经12h禁食后，一组于当日清晨空腹口服精制脑血疏口服液10ml，二组口服脑血疏口服液10ml，用药4h后统一进标准餐。服药前及服药后0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、16h、20h、24h、30h、36h、48h静脉取血。
(三)结果与讨论
(1)血药浓度测定结果
18名健康受试者口服精制脑血疏口服液或脑血疏口服液后在不同时间的血药浓度数据分别经数学平均，绘制血药浓度-时间曲线。
(2)主要药动学参数
利用软件求算药动学参数，用梯形法以实测浓度计算药时曲线下面积AUC，相对生物利用度F＝AUC精制脑血疏/AUC脑血疏。
计算结果显示：精制脑血疏口服液和脑血疏口服液、脑血疏注射液达峰时间tmax分别为(2.11±0.28)h、(2.87±0.35)h，P<0.05，有显著性差异。峰值血药浓度cmax分别为(248.35±43.61)ng·L-1及(189.45±35.27)ng·L-1，P<0.05，有显著性差异。主要药动学参数结果见表2。
表2
(3)相对生物利用度
精制脑血疏口服液和脑血疏口服液的AUC0h～48h分别为(2974.53±118.44)ng·h·L-1与(2158±108.52)ng·h·L-1，经t检验，P<0.05，有显著差别。精制脑血疏口服液对脑血疏口服液的相对生物利用度为137.82％。
(4)讨论
本试验结果显示精制脑血疏口服液血药浓度及药-时曲线下面积明显大于脑血疏口服液，且经软件计算得出，精制脑血疏口服液对脑血疏口服液的相对生物利用度为137.82％，精制脑血疏口服液生物利用度明显大于脑血疏口服液。表明精制脑血疏口服液更利于机体吸收。