本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
背景技术：
：骨质疏松是一种全身性的、代谢性的骨疾病，其特征是骨量减少和丢失，骨脆性和骨折危险性增加。随着人口的老龄化，骨质疏松的发病率也随着迅速增加，已经成为危害人类健康的重要疾病，并给全球带来了巨大的社会和经济负担。尽管国内外相关专家学者对此病的防治十分重视，但该病尚缺乏有效的治疗药物。目前临床上常用的防治骨质疏松的药物包括雌激素替代药物，双膦酸盐类，选择性雌激素受体调节剂，维生素D，甲状旁腺素和人重组甲状旁腺激素(1-34)等。双磷酸盐类药物虽然效果不错，但可导致颌骨坏死、肌肉骨骼痛和肾功能衰竭等严重不良反应；激素替代疗法虽然是防治绝经后骨质疏松的重要方法，但长期使用有导致乳腺癌、子宫内膜癌的潜在危险且发生血栓的风险也增加；而选择性雌激素受体调节剂可以使血栓性事件明显增加。其他药物或价格昂贵，或远期疗效不确切，均不够理想。由于骨质疏松是一种慢性病，需要长期服药，因此价格便宜，毒副作用小的中草药已成为研究治疗骨质疏松的热点之一。骨质疏松的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物有重要价值。本发明涉及的化合物I是一个2009年发表(ShengYinetal.,2009.HarrisotonesA–E,fivenovelprenylatedpolyketideswithararespirocyclicskeletonfromHarrisoniaperforata.Tetrahedron65(2009)1147–1152)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗骨质疏松活性进行了评价，其具有抗骨质疏松活性。技术实现要素：本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为65％和35％。本发明公开的组合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。本发明提供组合物的抗骨质疏松新用途。本发明通过体内实验发现组合物在制备抗骨质疏松药物中的应用。进一步，所述的骨质疏松是由于雌激素缺乏导致。本发明通过体内试验发现组合物有显著的预防骨质疏松的作用。组合物能够抑制去卵巢引起的骨转化率增强和骨质破坏，同时可以提高血钙浓度，有利于骨的沉积。是一种理想的防治骨质疏松的药物。以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。具体实施方式实施例1化合物HarrisotoneA的制备化合物HarrisotoneA(I)的制备方法参照ShengYin等人发表的文献(ShengYinetal.,2009.HarrisotonesA–E,fivenovelprenylatedpolyketideswithararespirocyclicskeletonfromHarrisoniaperforata.Tetrahedron65(2009)1147–1152)的方法。实施例2HarrisotoneA的O-溴乙基衍生物(II)的合成将化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氢氧化钠溶液。混合物在35摄氏度搅拌3h。3h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤2次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的黄色粉末(602mg，76％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC34H50Br3O6:793.1137；found793.1134.实施例3HarrisotoneA的O-(吗啉基)乙基衍生物(III)的合成将化合物II(396mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和吗啉(3484mg，40mmol)，混合物加热回流2h。反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，收集浅棕色集中洗脱带，浓缩即得到化合物III的黄色固体(312.2mg,77％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.14(s,2H),4.20(s,2H),3.58–3.49(m,16H),3.10(d,J＝70.7Hz,2H),3.03(s,2H),2.88(s,1H),2.55(d,J＝5.4Hz,4H),2.46(d,J＝9.0Hz,13H),2.38(d,J＝17.5Hz,5H),1.87(s,1H),1.83–1.72(m,8H),1.67(s,6H),1.64(s,1H),1.53(s,1H),1.48(d,J＝6.5Hz,2H),1.10(d,J＝9.0Hz,7H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.22(s),197.98(s),195.20(s),190.01(s),135.03(s),119.83(s),114.78(s),84.19(s),76.34(s),66.67(d,J＝6.0Hz),62.50(s),60.12(s),59.89(s),54.29(s),53.60(s),52.84(s),50.70(s),44.98(s),39.43(s),36.37(s),30.55(d,J＝8.9Hz),28.53(s),25.04(s),23.85(d,J＝19.2Hz),22.51(s),17.96(s).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC46H74N3O9:812.5425；found:812.5422。实施例4HarrisotoneA的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物的合成将化合物II(396mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(690mg，5.0mmol)，碘化钾(252mg，1.5mmol)和1H-四氮唑(2802mg，40mmol)，混合物加热回流1h。反应结束后将反应液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。因为互变异构作用，在反应条件下会生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基两种取代产物。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.8，v/v)，收集黄色集中洗脱带，再将洗脱带浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.2，v/v)，依次收集两个淡黄色的洗脱带，浓缩前1个洗脱带即得到化合物IV的淡黄色固体(83.6mg,22％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),10.25(s,1H),10.16(s,1H),5.08(s,2H),4.56–4.27(m,8H),3.85(d,J＝8.1Hz,4H),3.18(s,2H),2.67(s,1H),2.40(d,J＝69.7Hz,2H),2.30–2.31(m,3H),2.21(s,1H),1.83(d,J＝8.5Hz,2H),1.77(d,J＝5.0Hz,7H),1.65(d,J＝15.5Hz,7H),1.61(s,1H),1.54(s,1H),1.52(s,1H),1.42(s,1H),1.10(s,6H).13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.21(s),197.97(s),195.19(s),190.00(s),145.03(s),135.02(s),119.82(s),114.77(s),84.18(s),76.33(s),62.46(d,J＝8.0Hz),60.11(s),58.40(s),50.69(s),46.77(s),46.61(s),44.97(s),39.42(s),36.36(s),30.54(d,J＝8.9Hz),28.54(s),25.03(s),23.84(d,J＝19.2Hz),22.50(s),17.95(s).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC37H53N12O6:761.4211；found:761.4207。实施例5组合物抗骨质疏松作用的检测1、材料与方法组合物的制备：将研磨之后过200目网的65mg化合物III的粉末和研磨之后过200目网的35mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组合物，使用时用水溶解这100mg的组合物即得到组合物的溶液。将十周龄健康SD雌鼠(30只，江苏省动物中心)随机分成5组，每组6只：假手术组(Sham)、卵巢切除模型组(OVX)、组合物组、化合物III组和化合物IV组。饲养条件：温度为(23±2)℃，光照:黑暗为12∶12。让各组大鼠适应环境2周后开始骨质疏松造模手术：各组大鼠均经腹腔注射20％乌拉坦麻醉(6ml/kg体重)，Sham组开腹后关腹，其余两组行双侧卵巢切除术。术后第4周起，Sham组和OVX组每天进食标准饲料和去离子水，组合物组、化合物III组和化合物IV组每天进食标准饲料和去离子水，同时分别灌胃给与组合物、化合物III和化合物IV10mg/kg，连续3个月，每周称一次体重。实验结束后，用乌拉坦麻醉，摘取眼球采血，2000r/min离心，吸取上清(即血清)。摘除大鼠子宫，迅速称重。取出大鼠双侧股骨和双侧胫骨，剔除软组织。两胫骨经800℃高温炉(由南京大学化学化工学院提供)中灰化8h，冷却后称灰重。用研钵碾碎成灰状，取0.1g骨灰溶于1ml,6mol/l盐酸中，测骨钙和骨磷时取0.2ml用超纯水稀释至1ml，用全自动生化分析仪检测骨钙和骨磷含量。左股骨用骨密度仪测量骨密度(BMD)。血清生化指标测定：取血清0.5ml，用全自动生化分析仪检测血清碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)和磷(P)。2、结果(1)组合物对双侧卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的的影响表1可以看出去卵巢后，模型组大鼠血清碱性磷酸酶活性增加。去卵巢后，体内雌激素缺乏，导致骨转化率增加，与绝经后妇女的高转化型骨质疏松症一致。给予组合物3个月后，碱性磷酸酶活性显著下降，可见组合物可以抑制去卵巢引起的骨转化率的增加，减少骨质的破坏。表中还显示与假手术组相比，模型组大鼠血清钙明显下降，而组合物可显著提升血清钙浓度。血清钙是骨形成的重要标记物，说明组合物可以有效逆转由于卵巢切除导致的血清钙的降低，有利于骨的形成。而化合物III和化合物IV没有组合物的作用。表1组合物对双侧卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的影响*P<0.05vsOVX组(2)组合物对双侧卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影响表2可以看出去卵巢后模型组大鼠左股骨骨密度较假手术组显著下降，给予组合物3个月后，骨密度显著增加。而化合物III和化合物IV没有此作用。表2组合物对双侧卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影响实验组别左股骨BMD(g/cm2)sham0.316OVX0.218组合物0.301*化合物III0.243化合物IV0.237*P<0.05vsOVX组(3)组合物对双侧卵巢切除大鼠双侧胫骨参数的影响表3可以看出与假手术组相比，模型组大鼠双胫骨灰重显著降低，而组合物组较模型组显著升高。组合物也能显著升高骨钙和骨磷含量。而化合物III和化合物IV没有此作用。表3组合物对双侧卵巢切除大鼠双侧胫骨参数的影响实验组别双胫骨骨钙(g/g)双胫骨骨磷(g/g)双胫骨灰重(g)Sham0.2530.2770.89OVX0.2180.2120.44组合物0.249*0.261*0.86*化合物III0.2150.2250.63化合物IV0.2240.2380.65*P<0.05vsOVX组结论：组合物能够抑制去卵巢引起的骨转化率增强和骨质破坏，同时可以提高血钙浓度，有利于骨的沉积。对于由于雌激素缺乏导致的骨质疏松具有防治作用，并且无雌激素样副作用。组合物可以用于骨质疏松的防治。化合物III和化合物IV不能够抑制去卵巢引起的骨转化率增强和骨质破坏，不可以提高血钙浓度，不利于骨的沉积，对于由于雌激素缺乏导致的骨质疏松不具有防治作用，不可以用于骨质疏松的防治。实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。当前第1页1 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