本发明属于兽药技术领域，具体的，涉及一种防治水霉的复合纯露及其制备方法。
背景技术：
水霉病，又称为肤霉病或白毛病，在淡水水域中广泛存在，在国内外养殖地区都有流行，对温度的适应范围很广，5-240℃条件下均可生长繁殖，最适温度为10-200℃，此病一年四季都可发生，以早春、晚冬最为流行。水霉病对寄主无严格选择性，危害各种水生动物，从鱼卵至成鱼都可感染，并造成一定的经济损失，特别在鱼卵孵化阶段，引起胚胎死亡，损失惨重。水产动物真菌病是常见病、多发病，长期以来真菌病害的防治一直是人们十分关注的问题，治愈难，死亡率高。目前,水霉病主要以预防为主。通过改变养殖环境pH、用臭氧杀茵、食盐水浸泡等物理手段来进行简单防治。通过培养有益菌抑制水霉有害菌生长,芽孢杆菌等对水霉菌丝和抱子均有较强拮抗作用。孔雀石绿、制霉菌素等通过拌饲或浸泡的方式防治水霉被认为是有效的，但孔雀石绿在鱼体内残留时间太长，具有高毒、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，而且还带来环境污染等问题，美国食品与药品管理局自1991年起就已经禁止将其用于水产养殖，我国也于2002年在农业部发布的第193号公告中将其列为禁用药物。对于真菌类疾病，目前尚无理想的治疗方法。在繁殖季节沙塘成鱼及卵均受到水霉侵袭发病而导致死亡。
牛至(Origganum vulgare linn)主要分布于地中海地区至中亚、北非、北美及我国大部分地区,生于海拔500-3600m的山坡、路旁、灌丛、草地、林下及林缘。牛至味辛、性凉、无毒,全草可入药,具有清热解毒、理气化湿、利尿消肿之功效。临床用于预防流感、治疗黄疸、中暑、发热、呕吐、急性胃肠炎、腹痛等症,其散寒解毒功用胜于薄荷。美国农业部的“植物化学和植物物种学”背景资源表明,牛至含有30多种抗菌化合物,是一种潜在的天然抗生素和药物生长促进剂。
茶树（Tea tree），中文名称互叶白千层，最初在澳洲发现，身高大约3公尺，虽然叫茶树，但和茶一点关系也没有，枝条长长，花为白色，它的生命力旺盛，即使被砍断，也能维持生命一段时间。茶树精油是非常有用的精油，是萃取其枝条及叶片，呈透明无色，香味很像松油及尤加利。
纯露，又称水精油（Hydrolat），是指精油在蒸馏萃取过程中，在提炼精油时分离出来的一种100%饱和的蒸馏原液，是精油的一种副产品，成份天然纯净，香味清淡怡人。在蒸馏萃取过程中油水会分离，因密度不同，精油会漂浮在上面，水分则沉淀在下面，这些水分就叫纯露。纯露中除了含有少量精油成分之外，还含有全部植物体内的水溶性物质。拥有百分之百植物水溶性物质的纯露，其所含矿物养分（如单宁酸及类黄酮）是精油所缺乏的。
牛至与茶树纯露是精油生产过程中的副产品,虽然也通过商业广告的手段进行了部分销售，但都缺乏对其较系统的研究，也未获得国家的产品许可，研究开发纯露的应用将为其提高经济效益及实现变废为宝有重要的意义。
技术实现要素：
本发明的第一个目的是为了利用精油生产的副产品纯露，提供了一种防治水霉的复合纯露。
本发明的第二个目的是提供上述纯露的制备方法。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现的：
一种防治水霉的复合纯露，所述复合纯露由牛至地上部分和茶树地上部分制备得到，所述牛至地上部分和茶树地上部分的重量比为0～10:0～10。
进一步的，所述复合纯露由重量比6:4的牛至地上部分和茶树地上部分制备得到。
上述防治水霉的复合纯露的制备方法，包括如下步骤：
（1）将牛至地上部分和茶树地上部分混合后加入蒸馏釜内，再加入水和食盐；
（2）采用蒸汽盘管加热蒸馏釜, 加热过程中调节接入盘管的蒸汽压力，调节方法为：从开始加热至沸腾前,接入盘管的蒸汽压力为0.25～0.35MPa；沸腾后0.5h内，蒸汽压力为0.05～0.08MPa；沸腾后0.5～3h，蒸汽压力为0.08～0.1MPa；沸腾后3～5h，蒸汽压力为0.1～0.12MPa；沸腾后5h至结束,蒸汽压力为0.15～0.2MPa；
冷凝水的控制方法为：加热蒸馏釜至釜内温度为60℃时，打开冷凝器，接通冷却水，通过冷却水控制冷凝器冷却后的流出液温度，沸腾后0.5h内，流出液温度控制在20～25℃；沸腾后0.5h至结束，流出液温度控制在30～35℃，收集流出液得到油水混合物；
（3）将步骤（2）得到的油水混合物导入油水分离器，经油水分离后的水相即为复合纯露。
进一步的，所述步骤（1）中，水和牛至地上部分、茶树地上部分总重量之比为2～3：1，食盐和水的重量比为2.5～5:100。
本发明的有益效果为：
1、本发明由牛至和茶树制得的复合纯露，对革兰氏阳性菌、阴性菌及真菌有很好的抗菌作用；
2、能够有效预防水霉菌对鱼类的感染，大大降低鱼类水霉病的感染率，起到保护鱼类的作用；
3、纯露作为提取精油的副产物常常被作为废弃物，本发明为纯露的再利用，实现变废为宝提供了借鉴。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明以下实施例中的牛至地上部分由陕西浩洋生物科技有限公司提供；茶树地上部分由天津中澳嘉喜诺生物科技有限公司提供。
实施例1
一种复合纯露的制备方法，包括如下步骤：
（1）将新鲜采摘的牛至地上部分500kg加入蒸馏釜内，再加入1000kg去离子水和25kg食盐；
（2）采用蒸汽盘管加热蒸馏釜, 加热过程中调节接入盘管的蒸汽压力，调节方法为：从开始加热至沸腾前,接入盘管的蒸汽压力为0.25～0.35MPa；沸腾后0.5h内，蒸汽压力为0.05～0.08MPa；沸腾后0.5～3h，蒸汽压力为0.08～0.1MPa；沸腾后3～5h，蒸汽压力为0.1～0.12MPa；沸腾后5h至结束,蒸汽压力为0.15～0.2MPa；
冷凝水的控制方法为：加热蒸馏釜至釜内温度为60℃时，打开冷凝器，接通冷却水，通过冷却水控制冷凝器冷却后的流出液温度，沸腾后0.5h内，流出液温度控制在20～25℃；沸腾后0.5h至结束，流出液温度控制在30～35℃，收集流出液得到油水混合物；
（3）将步骤（2）得到的油水混合物导入油水分离器，经油水分离后的水相即为复合纯露。
实施例2
本实施例与实施例1的区别为：步骤（1）中，牛至地上部分的用量由500kg改为400kg，再加入100kg新鲜采摘的茶树地上部分，去离子水的用量由1000kg改为1100kg，食盐的用量由25kg改为33kg。
实施例3
本实施例与实施例1的区别为：步骤（1）中，牛至地上部分的用量由500kg改为300kg，再加入200kg新鲜采摘的茶树地上部分，去离子水的用量由1000kg改为1250kg，食盐的用量由25kg改为43.75kg。
实施例4
本实施例与实施例1的区别为：步骤（1）中，牛至地上部分的用量由500kg改为200kg，再加入300kg新鲜采摘的茶树地上部分，去离子水的用量由1000kg改为1300kg，食盐的用量由25kg改为52kg。
实施例5
本实施例与实施例1的区别为：步骤（1）中，牛至地上部分的用量由500kg改为100kg，再加入400kg新鲜采摘的茶树地上部分，去离子水的用量由1000kg改为1400kg，食盐的用量由25kg改为63kg。
实施例6
本实施例与实施例1的区别为：步骤（1）中，不添加牛至地上部分，加入500kg新鲜采摘的茶树地上部分，去离子水的用量由1000kg改为1500kg，食盐的用量由25kg改为75kg。
复合纯露抑菌性试验
贴片法,采用观察抑菌环大小试验方法,评价本发明实施例1-6得到的复合纯露的抑菌性。
方法为：直径6.0mm滤纸圆片干热灭菌（烘箱130℃、2h）,冷却备用。取经干热灭菌处理的培养皿（直径9cm）,无菌操作。用经过灭菌的微量进样器吸取稀释好的菌液0.1ml加到倒好培养基的培养皿中,菌液浓度为1.0×105CFU/ml,冷却凝固。灭菌的小圆纸片放到倒好培养基的培养皿上展平,用经过灭菌的微量进样器向培养皿中加0.02ml复合纯露液,倒置,做标记,细菌在37℃培养24h,真菌在26℃培养24h,观察菌落生长情况。每样品每菌种作三个平行。以蒸馏水为对照组。所选参考微生物为金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（8099）、白色念珠菌（ATCC10231）的抑菌实验。抑菌实验结果见表1。
表1 复合纯露抑菌试验结果
由表1可以看到，复合纯露对于常见微生物均有良好的抑制效果,通过以上试验，观察抑菌圈大小，可以得出，实施例3的复合纯露抑菌效果最好。通过对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌实验证明，复合纯露不但对革兰氏阳性、阴性有较好的作用，对真菌有很好的抗菌功能。
复合纯露对水霉的抑制作用
以下试验中的供试鱼种取自甘肃白银刘家峡草鱼养殖场；供试水霉病原真菌为两性绵霉FD07（由甘肃农业大学动科院分离保存），接种体准备方法：将供试真菌于无菌条件下接入PDF平板上，置于20℃条件下培养 4-5d 备用。
1、复合纯露对水霉菌的抑制试验
采用菌丝生长抑制法，以抑菌圈半径的大小表示样品的抗菌活性。将实施例3的复合纯露稀释成浓度分别为2.5、5、10、20、40、80、120、160、200 mL/L的稀释液，将稀释液加入已经融化的45℃的PDA培养基中，混匀后倒入培养皿中，冷凝后分别接入直径0.5cm的水霉菌的菌块，置于20℃条件下培养，以不加稀释液的PDA 平板作为对照。每个处理设置 3次重复，培养3d 后测定菌落直径。根据以下公式计算抑制效果，并获得药物对病菌的最小抑制浓度:
抑制效果（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-原来菌落直径）×%。
复合纯露对水霉菌的抑制效率结果见表2。
表2 复合纯露对水霉的抑制效率
2、复合纯露对鱼人工感染水霉菌的防治效果
（1）预防作用。将30尾鱼置于0.1 m3的水池中，加入水霉真菌，同时加入实施例3的复合纯露，复合纯露的浓度分别为40 mL/L和20 mL/L，以不加复合纯露的作为感染对照组，不加复合纯露与真菌的作为空白对照组，每天记录感染水霉的鱼数。
（2）治疗作用。治疗试验与预防试验的区别在于，加入真菌后24h再加入实施例3的复合纯露，其它操作相同。
药物的保护率的计算方法: 药物保护率=（对照组感染率 -试验组感染率）/对照组感染率×%。复合纯露对鱼人工感染水霉菌的预防和治疗试验结果见表3、表4。
表3 复合纯露的预防试验结果
表4 复合纯露的治疗试验结果
3、大田防治试验
甘肃白银刘家峡草鱼养殖场温室中的草鱼( 重量在 50g 左右) 发生白斑病，镜检由水霉菌感染引起。使用实施例3的复合纯露3号（浓度为40mL/L） 进行全池泼洒，连用2d，白斑慢慢消失，有效控制了水霉菌的蔓延。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。