本申请要求申请日为的2015年6月19目的美国临时申请no.62/182,102的优先权。上述相关申请在此通过提述以其整体并入。
美国专利no.7,723,486、美国专利no.8,383,780、及美国专利no.8,591,901同样在此通过提述各自以其整体并入。
发明领域
本发明涉及治疗原发性局灶节段性肾小球硬化(原发性fsgs)和/或改善一个或多个原发性fsgs相关症状的方法，包括将tgfβ拮抗剂施用于对其有需要的患者。具体而言，所述方法涉及将包含治疗有效量的夫苏木单抗(fresolimumab)的药物配制物施用于原发性fsgs患者(例如具有遗传变体的患者，所述遗传变体与患有或患上原发性fsgs的风险升高相关)，以使患者可以从中获益。
发明背景
局灶节段性肾小球硬化(fsgs)是一种临床实体，其通过肾小球的逐步纤维化影响肾功能。fsgs不是单一疾病，而是在肾组织活检中鉴定出的异质性(heterogeneous)临床病理学过程，所述肾组织活检通常在蛋白尿或肾病综合征患者中进行。原发性(或特发性)局灶节段性肾小球硬化(下文称“原发性fsgs”)是一种基于临床病理学发现而诊断的肾脏疾病。原发性fsgs具有独特的组织病理学表现，其特征是部分肾小球丛的透明变性和硬化，免疫复合体的最小沉积、以及内脏上皮细胞(足细胞)足突过程(footprocesses)的消失(effacement)。大部分的fsgs病例特征为逐渐的肾纤维化和肾功能稳定退化。
局灶节段性肾小球硬化通常表现为肾病综合征：蛋白尿≥3.0g/24小时，伴有指征/症状包括低白蛋白血症、水肿和高脂血症。肾病综合征的具体致病原因有很多，包括肾脏疾病如微小病变型肾病、局灶肾小球硬化、和膜性肾病。肾病综合征还能由系统性疾病引起，所述系统性疾病除肾脏外还影响其他器官，如糖尿病、淀粉样变性、和红斑狼疮。值得注意的是，肾病综合征可以影响成人和儿童，影响两种性别及任何种族。
肾病综合征可以是原发性的，特定针对肾脏的疾病，或可以是继发性的，系统性一般疾病的肾脏发病表现。在所有情况下，肾小球损伤是基本特征。肾病综合征的原发性病因包括如下(大体按发病率顺序)：微小病变型肾病、局灶肾小球硬化、膜性肾病、和遗传性肾病。继发性病因包括如下(大体按发病率顺序)：糖尿病、红斑狼疮、淀粉样变性和病变蛋白血(paraproteinemias)、病毒感染(例如乙型肝炎、丙型肝炎、人类免疫缺陷病毒[hiv])、和先兆子痫(preeclampsia)。
原发性fsgs是一种进展性疾病，其对于生活质量、发病率和死亡率有重大影响。原发性fsgs通过肾脏活检确证，所述肾脏活检显示局灶(涉及一些但非全部肾小球)和节段性(涉及任何单个肾小球的部分)模式的肾小球瘢痕形成。患者可能具有深度水肿，其可能导致数公升流体的滞留，影响运动力和日常活动。如果放任不治疗的话，原发性fsgs仅在少数患者(＜5％)中自发缓解，而其通常导致肾功能的相对快速下降，引起终末期肾脏疾病(endstagerenaldisease，下文称“esrd”)并需要进行透析或移植。肾脏疾病进展随之引起副发病变(co-morbidities)，如高血压和心血管风险，其被肾病综合征患者中所见的高脂血症进一步放大。
快速进展至esrd的最重要的预后因子之一是蛋白尿程度。蛋白尿能以多种形式及不同的严重程度发生。例如，可以基于分泌的蛋白量(肾病的或非肾病的)、分泌的蛋白类型(白蛋白尿或低分子量蛋白尿)、或基础的病理学损害(肾小球的或非肾小球的)对蛋白尿进行分类。
在非肾病蛋白尿中，蛋白尿的量为＜3.0g/24h并且是持久的。这些患者需要密切的随访，并且如果其具有异常的尿显微镜检查结果和/或或肾功能损坏的话，可能需要进行肾脏活检。肾病范围的蛋白尿定义为＞3.0g/24h的蛋白尿排泄率或≥3.0g/gm肌酐现测尿蛋白对肌酐比率(onaspoturineprotein-to-creatinineratio)。这个发现指示了显著的肾小球疾病且需要肾脏活检以供诊断和管控。相比而言，正常的尿蛋白排泄通常认为是大约＜150mg/24小时。例如，关于白蛋白这种蛋白，正常人中的每日白蛋白排泄通常认为是大约＜30mg/24小时。
肾病范围的蛋白尿的存在与不良的结局是相关的，并且大约50％的患者在6至8年达到esrd，而20％的具有非肾病性蛋白尿的患者在约10年达到esrd。更严重的蛋白尿(＞10g/24小时)与更加恶性的进程是相关的，以致大多数患者3年进展至esrd(korbets.，“clinicalpictureandoutcomeofprimaryfocalsegmentalglomerulosclerosis”，nephroldialtransplant.，1999；14：68-73)。此外，进展至esrd并接受肾脏移植的患者在所移植的移植体中有患上复发的fsgs的高风险，其后果是大量蛋白尿和移植失败。
从治疗角度来看，肾病综合征可以分为类固醇敏感的、类固醇抗性的、类固醇依赖的、或频繁复发的。蛋白尿的缓解常用作预测向esrd进展延迟的因子(korbets.，nephroldialtransplant.，1999)。目前，尚未有类固醇抗性患者的疗法获得批准。在没有获批疗法的情况下，可以尝试多种疗法。例如，免疫抑制疗法(例如环磷酰胺和环孢霉素a)已用于尝试诱导缓解，其目的是减轻肾病和肾机能不全相关的肾功能下降及死亡率，尽管尚未有疗法显示出有利的益处-危险比。虽然不是标记的适应症，但高剂量皮质类固醇(例如强的松)已经同样经常用于此种目的，但是通常仅在相对低百分比率的部分患者中有效(korbetsm.，“angiotensinantagonistsandsteroidsinthetreatmentoffocalsegmentalglomerulosclerosis，”seminnephrol.，2003；23：219-28)。例如，虽然用高剂量糖皮质类固醇进行持久治疗与较高的缓解率有联系，但其也罹患了更多的并发症，包括高血压、高血糖、感染风险、肿胀和/或增重。经常施用利尿剂来降低相关的水肿。为了降低肾病范围的蛋白尿和非肾病性的蛋白尿患者二者中的蛋白尿水平，施用了血管紧张素转化酶(ace)抑制剂和血管紧张素ii受体阻断剂(arbs)，并使患者处于低盐饮食。
这些疗法的许多都已经在fsgs患者中尝试过，所述患者具有肾病范围的蛋白尿，且对类固醇疗法有抗性或是不耐受类固醇疗法。在肾病综合征患者(包括患有抗类固醇的fsgs的患者)中，已经尝试了免疫抑制疗法，如用环孢霉素a治疗(brandis，m等，“cyclosporineafortreatmentofnephroticsyndromes”，transplantationproc.1988；20(s4)：275-9；capodicasa，g.，等，“cyclosporinainnephroticsyndromeofchildhood-a14monthexperience”，intjpediatrnephrol.，1986；7：69-72；cattran，d.，等，“acontrolledtrialofcyclosporineinpatientswithprogressivemembranousnephropathy，”kidneyint.1995；47：1130-5；cattran，dc.，等，“arandomizedtrialofcyclosporineinpatientswithsteroid-resistantfocalsegmentalglomerulosclerosis，”kidneyint.，1999；56：2220-6；chishti，as.，等，“long-termtreatmentoffocalsegmentalglomerulosclerosisinchildrenwithcyclosporinegivenasasingledailydose，”amjkidneydis.，2001；38：754-60；gregory，mj.，等，“long-termcyclosporinetherapyforpediatricnephroticsyndrome：aclinicalandhistologicanalysis，”jamsocnephrol.，1996；7：543-9；hino，s.，等，“follow-upstudyofchildrenwithnephroticsyndrometreatedwithalong-termmoderatedoseofcyclosporine，”amjkidneydis.，1998；31(6)：932-9；meyrier，a.，等，“remissionofidiopathicnephroticsyndromeaftertreatmentwithcyclosporina，”brmedj.，1986；292：789-92；niaudet，p.，等，“cyclosporininthetreatmentofidiopathicnephroticsyndromeinchildren，”pediatrnephrol.，1987；1：566-73；niaudet，p.，“thefrenchclubofpediatricnephrology.steroid-resistantidiopathicnephroticsyndromeandciclosporin，”nephron.，1991；57：481；ponticelli，c等，“arandomizedtrialofcyclosporineinsteroid-resistantidiopathicnephroticsyndrome，”kidneyint.，1993；43：1377-84；tejani，a.，等，“cyclosporineainducedremissionofrelapsingnephroticsyndromeinchildren，”kidneyint.，1988；33：729-34；lieberman，kv.，等，“newyork-newjerseypediatricnephrologystudygroup.arandomizeddouble-blindplacebo-controlledtrialofcyclosporineinsteroid-resistantidiopathicfocalsegmentalglomerulosclerosisinchildren，”jamsocnephrol.，1996；7：56-63；walker，rg.，等，“theefiectoftreatmentofcorticosteroid-resistantidiopathic(primary)focalandsegmenthyalinosisandsclerosis(focalglomerulosclerosis)withciclosporin，”nephron.，1990；54：117-21)。然而，终止治疗后复发频繁，并且其毒性值得关注。当用于预防器官排斥时，严重副作用包括增加的感染易感性、瘤形成(特别是淋巴瘤以及皮肤癌)的发生/进展、肾毒性和高血压。过往或进行中的研究的其他治疗干预包括霉酚酸酯(mycophenolatemofetil)(briggs，wa.，等，“successfulmycophenolatemofetiltreatmentofglomerulardisease，”amjkidneydis.，1998；31：213-7；choi，mj.，等，“mycophenolatemofetiltreatmentforprimaryglomerulardiseases，”kidneyint.，2002；61：1098-114；cattran，dc.，等，“mycophenolatemofetilinthetreatmentoffocalsegmentalglomerulosclerosis，”clinnephrol.，2004；62(6)：405-11)、利妥昔单抗(fernandez-fernedo，g.，等，“rituximabtreatmentofadultpatientswithsteroid-resistantfocalsegmentalglomerulosclerosis，”clinjamsocnephrol.，2009；4(8)：1317-23)、罗格列酮(joy，ms.，等，“phaseitrialofrosiglitazoneinfsgs：i.reportofthefontstudygroup，”clinjamsocnephrol.，2009；4：39-47)、西罗莫司(雷帕霉素)(cho，me.，等，“sirolimustherapyoffocalsegmentalglomerulosclerosisisassociatedwithnephrotoxicity，”amjkidneydis.，2007；49(2)：310-17)和环磷酰胺(ponticelli，c.，等，“canprolongedtreatmentimprovetheprognosisinadultswithfocalsegmentalglomerulosclerosis？”amjkidneydis.，1999；34(4)：618-25)。这些制剂均未被批准用于原发性fsgs的治疗。
然而，在大多数原发性fsgs患者中，用类固醇治疗和其他治疗干预仅导致蛋白尿的瞬时改善而不改变疾病进程。在具有导致fsgs的基因突变的患者中尤其是这样。近来已经发现，载脂蛋白l1基因的基因座(下文称“apol1”)中的变异与患上fsgs及其他相关形式的进展性非糖尿病肾病的风险增加是相关的，其包含在近期的非洲血统人群中，相对于欧洲血统人而言(freedman，barryi.，等“gene-geneandgeneenvironmentinteractionsinapolipoproteinl1gene-associatednephropathy，”clin.j.am.soc.nephrol.，2014，doi：10.2215/cjn.01330214)。因为fsgs(例如抗类固醇fsgs)患者或具有fsgs相关基因突变的患者的不良肾脏预后且缺少得到证明的治疗，对于新的治疗的未满足的医学需求是很高的，所述新的治疗能降低蛋白尿或诱导蛋白尿缓解，并降低或终止这个人群中的肾损伤的进展以及进展至esrd。
发明概述
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性局灶节段性肾小球硬化(原发性fsgs)的方法，其包括对患者施用tgfβ拮抗剂，或包含治疗有效量的tgfβ拮抗剂的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者静脉内施用tgfβ拮抗剂，或包含治疗有效量的tgfβ拮抗剂的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者静脉内施用tgfβ拮抗剂，或包含治疗有效量的tgfβ拮抗剂的医药配制物，其中所述方法稳定患者的肾小球滤过率。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者施用夫苏木单抗或包含治疗有效量的夫苏木单抗的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者静脉内施用夫苏木单抗或包含治疗有效量的夫苏木单抗的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者静脉内施用夫苏木单抗或包含治疗有效量的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述方法还包括稳定患者的肾小球滤过率。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天对所述患者施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天以单次输注或在疗程期间的一段时间以系列输注的方式对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天，在1-50个疗程(例如1-10个疗程或1-4个疗程)对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中治疗的患者具有自基线下降50％或更多的up/c比率(毫克蛋白/毫克肌酐)。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中治疗的患者具有自基线下降50％或更多，降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平的up/c比率。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中治疗的患者具有自基线下降50％或更多，降至＜0.3毫克蛋白/毫克肌酐水平的up/c比率。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天以单次输注或在疗程期间的一段时间以系列输注的方式对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述apol1变体包括apol1g1单倍型(如g1/-或g1/g1)，apol-1g2单倍型(如g2/-或g2/g2)，或双倍型，如g1/g2。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天以单次输注或在疗程期间的一段时间以系列输注的方式对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述apol1变体是apol1g1单倍型纯合阳性的(即g1/g1.)，或是apol1g1单倍型的杂合携带体(例如g1/-或双倍型g1/g2)。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天以单次输注或在疗程期间的一段时间以系列输注的方式对所述患者静脉内施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述apol1变体是apol1g1单倍型纯合阳性的(即g1/g1)，或是apol1g1单倍型的杂合携带体(例如g1/-或双倍型g1/g2)，且其中所述方法还包括通过鉴定分离自患者的血液样品中apol1g1单倍型(例如g1/g1、g1/-、或g1/g2)的存在而对所述患者进行基因分型，其中所述基因分型在治疗之前、期间、或之后进行。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括基于每月、每28天、每21天、或每14天对所述患者施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述原发性fsgs是抗类固醇的原发性fsgs。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述原发性fsgs是抗类固醇的原发性fsgs，并且其中所述apol1变体是apol1风险变体，包括g1/g1、g1/-、g1/g2、g2/-、或g2/g2。
一些实施方案针对治疗具有apol1变体的患者中的原发性fsgs的方法，其包括对患者施用1-4mg/kg的夫苏木单抗，或包含1-4mg/kg的夫苏木单抗的医药配制物，其中所述原发性fsgs是抗类固醇的原发性fsgs，并且其中治疗的患者是非洲血统或西班牙血统。
附图简述
图1：通过治疗分配的均值egfr(ml/min每1.73m2)随时间的百分比变化。
发明详述
转化生长因子β(tgfβ)是一种多效细胞因子，属配体超家族，包括骨形成蛋白和激活素，所述tgfβ在细胞增殖和分化、胞外基质(ecm)产生、血管生成、伤口愈合、免疫调节、以及胚胎发育过程中起着重要的生理作用。由于tgfβ在肾纤维化中起着重要的生理作用，且fsgs临床前模型已经证明了通过抑制tgfβ来预防蛋白尿和肾小球病理学以及减少已有的蛋白尿，因此有理由相信夫苏木单抗可能是对于抗类固醇的原发性fsgs患者的有效疗法。
在人中，tgfβ存在3个同种型：tgfβ1、β2和β3。各同种型由不同的、高度保守的基因编码，并且是25千道尔顿的同型二聚体、结合有二硫化物的蛋白。tgfβ以生物学上非活性的“潜伏形式(latentform)”被细胞所分泌，这是由于其与潜伏相关蛋白相连。tgfβ/潜伏相关蛋白“前药”的许多贮存于胞外基质(ecm)中；其他值得注意的位点包括血小板颗粒和t-调节细胞的表面。活性tgfβ的释放机制可以在酸性条件下(例如在肿瘤内)发生或通过蛋白酶作用而发生，所述蛋白酶如血栓反应素-1(thrombospondin-1)、纤溶酶、或前列腺特异性抗原(daliassl，等，“preferentialproductionoflatenttransforminggrowthfactorβ-2byprimaryprostaticepithelialcellsanditsactivationbyprostate-specificantigen，”jcellphysiol.，2005；202：361-70)。
活性tgfβ首先是通过2个主要受体，tgfβrii和tgfβriii，结合至细胞，其可以导致smad途径激活、基因转录的诱导和对细胞分化和生长的作用。虽然tgfβ/tgfβr/smad是主要的信号传输途径，但tgfβ还结合至其他受体如内皮糖蛋白(endoglin)，而且还可涉及其他信号传输途径，如erk、jnk、mapk、pi3k、rho-激酶、akt以及gtp酶(gtpases)。这些途径的下游效应器导致生理学和病理学tgf-介导的过程，如下文所述(blobegc.，等，“roleoftransforminggrowthfactorβinhumandisease，”nengljmed.，2000；342：1350-8)。
在正常条件下，tgfβ家族成员维持许多器官系统的内稳态。在正常和非癌性细胞中，tgfβ通过抗增殖和雕亡响应来限制上皮细胞、内皮细胞、神经细胞、和造血细胞系的生长。此外，tgfβ发挥强力作用，其影响免疫功能、细胞增殖/功能性分化、细胞粘附、胞外基质(ecm)产生、细胞运动性、血管生成、和细胞因子产生(blobegc.，nengljmed.，2000)。
尽管在生理学上是重要的，但tgfβ的过表达可能是病态的且促进纤维化的，例如肾纤维化。例如，持续的tgfβ过度活性可能是病态的且导致过度ecm积累，这是纤维化疾病的特征。tgfβ也被认为是晚期癌症的生长、进展、和转移潜能中的重要因子，以及免疫功能的重要调节因子。对tgfβ的抑制、中和、及阻断可以改善病理状态中的疾病进展，所述病理状态的特征为过渡纤维化和异常细胞增殖，例如fsgs，如原发性fsgs，以及肿瘤学。具体而言，用tgfβ拮抗剂(如针对tgfβ的抗体)中和或阻断tgfβ，可以改变病理进程(所述病理进程的特征为不当的纤维化，例如fsgs，如原发性fsgs)，并且可以为治疗肾纤维化提供新的治疗机会。
来自数个动物模型的临床前数据显示，tgfβ的中和能抑制组织纤维化的进展。在肾纤维化的大鼠单侧输尿管结扎(uuo)模型中，施用1d11(一种人泛特异性抗体的小鼠类似物(起初命名为gc-1008)，其针对转化生长因子β的3个主要同种型(tgfβ；β1、2、和3))导致tgfβ表达和胶原沉积的显著降低(miyajimaa，等，“antibodytotransforminggrowthfactor-βamelioratestubularapoptosisinunilateralureteralobstruction，”kidneyint.，2000；58：2301-13)。在氨基核苷嘌呤霉素(puromycinaminonucleoside，pan)诱导的fsgs的单侧肾切除大鼠模型中，1d11和gc-1008都有效预防蛋白尿和肾小球病理进展；1d11还有效降低先前存在的蛋白尿。这些结果证明，tgfβ拮抗作用可有效预防和降低fsgs动物模型中先前存在的蛋白尿。
夫苏木单抗(gc-1008)(下文称“夫苏木单抗”，并且如美国专利no.7,723,486和美国专利no.8,383,780及美国专利no.8,591,901中所述，其各自在此通过提述以其整体并入)是一种工程改造的免疫球蛋白亚类γ4(igg4)人单克隆抗体，其针对转化生长因子β的3个主要同种型(tgfβ；β1、2、和3)。施用夫苏木单抗导致tgfβ的中和及tgfβ活性的抑制。tgfβ抑制可以减轻病理状态的疾病进展，所述病理状态特征为过渡纤维化和异常细胞增殖，例如psgs，如原发性fsgs。
apol1基因的某些单倍型和双倍型(本文称为apol1变体或apol1风险变体)与增加的发病率或增加的患上肾病的风险是相关的，所述肾病如非糖尿病肾病，例如原发性fsgs，其中所述apol1变体(或apol1风险变体)包括apol1g1单倍型(例如g1/g1和g1/-)、apol1g2单倍型(例如g2/g2和g2/-)、或apol1双倍型(即g1/g2)，相对于缺少g1和g2单倍型二者的(即-/-，或有时称为“野生型”；其与增加的发病率或增加的患上肾病、非糖尿病肾病、或原发性fsgs的风险无关)。(freedman，barryi.，等“gene-geneandgeneenvironmentinteractionsinapolipoproteinl1gene-associatednephropathy，”clin.j.am.soc.nephrol.，2014，doi：10.2215/cjn.01330214)。
如下表1所示的apol1g1单倍型，理解为意指在apol1基因中存在两种特定的遗传变体(即编码变体)。鉴定为具有apol1g1单倍型的人，例如非洲血统(或人种或种族)的人与增加的fsgs疾病(如原发性fsgs)风险强烈相关。纯合性中各个位置处“g”核苷酸的存在可以将个体(例如非洲血统的个体)鉴定为“apol1g1单倍型纯合阳性的(即g1/g1)”，并且该个体可具有增加的患上原发性fsgs的风险。如果在杂合性中发现变体位置的任一者或二者(即a/g和g/g；或g/g和t/g)，个体(例如非洲血统的个体)可以鉴定为“apol1g1单倍型的杂合携带体”(例如g1/-、或双倍型g1/g2)，或是(a/g和t/g)，该个体可以鉴定为“apol1g1单倍型的潜在杂合携带体”(例如g1/-、或双倍型g1/g2)，并且该个体具有患上原发性fsgs的潜在风险。虽然已知这两个编码变体之间有近乎完美的连锁不平衡，但存在变体互相不为顺式的可能。纯合性中各位置处缺乏“g”核苷酸，可以将个体(例如非洲血统的个体)鉴定为“apol1g1单倍型纯合阴性的(即-/-)”，并且可认为该个体没有增加的患上原发性fsgs的风险。
表1.apol1g1单倍型的编码变体
表注：术语“snp”在此处理解为意指“单核苷酸多态性”并限定给定基因的具体等位基因
如下表2所示的apol1g2单倍型，理解为意指在apol1基因中存在特定的遗传变体(即编码变体)。鉴定为具有apol1g2单倍型的人，例如非洲血统(或人种或种族)的人与增加的fsgs疾病(如原发性fsgs)风险强烈相关。在纯合性中的变体位置处6个碱基的删除，可以将个体(例如非洲血统的个体)鉴定为“apol1g2单倍型纯合阳性的(即g2/g2)”，并且该个体可具有增加的患上原发性fsgs的风险。如果在纯合性中发现变体位置，该个体可以鉴定为“apol1g2单倍型的潜在杂合携带体”(例如g2/-、或双倍型g1/g2)，并且该个体具有患上原发性fsgs的潜在风险。纯合性中变体位置处所述6个碱基的存在，可以将个体(例如非洲血统的个体)鉴定为“apol1g2单倍型纯合阴性的(即-/-)”，并且可以认为该个体没有增加的患上原发性fsgs的风险。
表2.apol1g2单倍型的编码变体
表注：如此处所用，术语“del6”理解为意指6个碱基的删除
还存在与单倍型不相关的apol1的snp变体(如表3所示)。例如，被鉴定为apol1基因的snp变体rs2239785的杂合携带体的患者，被认为具有患有或患上fsgs疾病的增加的潜在风险，并且鉴定为apol1基因的snp变体rs2239785的纯合携带体的患者，被认为具有患有或患上fsgs疾病的增加的风险。
表3.与apol1单倍型不相关的snp变体
在一些实施方案，所述治疗方法包括对患者施用tgfβ拮抗剂(如夫苏木单抗)，所述患者已诊断为患有非糖尿病肾病、肾病综合征、肾病蛋白尿、肾病范围的蛋白尿、fsgs、或原发性fsgs，例如所述患者已诊断为患有原发性fsgs。
在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法可以包括对所述患者施用tgfβ拮抗剂(如夫苏木单抗)，其中所述患者在治疗之前具有30ml/min/1.73m2或更多的egfr，在至少一个收集的尿样品中3毫克蛋白/毫克肌酐或更多的up/c比率，在至少两个收集的尿样品中2毫克蛋白/毫克肌酐或更多的up/c比率，或其组合。
在一些实施方案中，本发明涉及改善一个或多个原发性fsgs相关症状的方法，包括对患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)施用泛特异性tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述一个或多个症状的改善包括降低蛋白尿水平、降低up/c比率、稳定egfr、降低低白蛋白血症或高脂血症的严重程度、缓和水肿症状，或其组合。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者在治疗前患有抗类固醇的原发性fsgs(患者不响应于类固醇治疗)或是在治疗前不耐受类固醇疗法，例如所述抗类固醇的原发性fsgs患者在治疗前不耐受至少2周(如3周、4周或5周)的高剂量类固醇疗法。在一些实施方案中，要用tgfβ拮抗剂治疗的患者在用tgfβ拮抗剂治疗前已按稳定剂量用acei、arb、或二者治疗至少2周、如3周、4周或5周。在一些实施方案中，要用tgfβ拮抗剂治疗的患者在用tgfβ拮抗剂治疗之前、期间、或之后用免疫抑制疗法治疗。在一些实施方案中，要用tgfβ拮抗剂治疗的患者在用tgfβ拮抗剂治疗之前、期间、或之后用另一疗法治疗(例如钙调磷酸酶疗法、环孢素、他克莫司(tacrolimus)、环孢霉素a、霉酚酸酯、利妥昔单抗、罗格列酮、西罗莫司(雷帕霉素)、或环磷酰胺，或其组合)。在一些实施方案中，要用tgfβ拮抗剂治疗的患者在用tgfβ拮抗剂治疗之后用另一疗法治疗(如钙调磷酸酶疗法、环孢素、他克莫司、环孢霉素a、霉酚酸酯、利妥昔单抗、罗格列酮、西罗莫司(雷帕霉素)、或环磷酰胺，或其组合)。在一些实施方案中，要用tgfβ拮抗剂治疗的患者在用tgfβ拮抗剂治疗之前或期间用另一疗法治疗(如钙调磷酸酶疗法、环孢素、他克莫司、环孢霉素a、霉酚酸酯、利妥昔单抗、罗格列酮、西罗莫司(雷帕霉素)、或环磷酰胺，或其组合)。
在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者，或欧洲裔美国血统(或人种或种族)的患者，如高加索人/白人)中的原发性fsgs的方法可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者具有增加所述患者患上原发性fsgs的风险的遗传变体或apol1的遗传变体。在一些实施方案中，所述apol1的遗传变体可以是apol1g1单倍型纯合阳性的(即g1/g1)、apol1g1单倍型的杂合携带体(即g1/-或双倍型g1/g2)、或apol1g1单倍型纯合阴性的(即-/-)。在一些实施方案中，apol1的遗传变体可以是apol1g2单倍型纯合阳性的(即g2/g2)、apol1g2单倍型的潜在杂合携带体(即g2/-或双倍型g1/g2)、或apol1g2单倍型纯合阴性的(即-/-)。
在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者具有增加患者患上原发性fsgs的风险的apol1遗传变体。例如，所述增加患者患上原发性fsgs的风险的apol1遗传变体可以是apol1g1单倍型(例如g1/g1或g1/-)、apol1g2单倍型(例如g2/g2或g2/-)、或两种单倍型二者(即双倍型(g1/g2))。在一些实施方案中，所述增加患者患上原发性fsgs的风险的apol1遗传变体可以是apol1g1单倍型纯合阳性的(g1/g1)或apol1g1单倍型的杂合携带体(g1/-或双倍型g1/g2)，例如所述apol1遗传变体可以是apol1g1单倍型纯合阳性的(g1/g1)。在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者具有apol1g1单倍型变体，其包括snpidrs73885319或rs60910145。在一些实施方案中，增加患者患上原发性fsgs风险的apol1遗传变体可以是apol1g2单倍型纯合阳性的(g2/g2)或apol1g2单倍型的潜在杂合携带体(g2/-或双倍型g1/g2)，例如所述apol1遗传变体可以是apol1g2单倍型纯合阳性的(g2/g2)。在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者具有apol1g2单倍型变体为snpidrs71785313。在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述患者具有与apol1单倍型无关的遗传变体，例如具有snpidrs2239785的apol1遗传变体。在一些实施方案中，所述患者具有遗传变体，所述遗传变体具有选自下组的snpid：rs73885319、rs60910145、rs71785313、或rs2239785。
在一些实施方案中，所述患者可以基于具有apol1的至少一个指示性snp而选出，例如apol1snp变体rs2239785、rs73885319、rs60910145、或rs71785313。例如，在一些实施方案中，所述患者可以基于具有至少一个指示性的apol1snp而选出，所述指示性的apol1snp限定了apol1g1单倍型，如apol1snp变体rs73885319、或apol1snp变体rs60910145。在一些实施方案中，所述患者可以基于具有至少一个指示性的apol1snp而选出，所述指示性的apol1snp限定apol1g2单倍型，如apol1snp变体rs71785313。在一些实施方案中，所述患者可以基于具有至少一个指示性的apol1snp而选出，所述指示性的apol1snp能通过等位基因识别进行评估，如apol1snp变体rs2239785。
在一些实施方案中，治疗患者(例如非洲血统(或人种或种族)的患者，如来自非裔美国人群体的患者)中的原发性fsgs的方法，可以包括对患者施用tgfβ拮抗剂(例如夫苏木单抗)，其中所述方法还包括在治疗之前或期间对患者进行基因分型。例如，所述方法还包括对患者进行基因分型，包括：从所述患者获取生物样品，其中所述样品选自下组：血液、血液来源的产物(如血沉棕黄层(buffycoat)、血清和血浆)、淋巴、尿液、泪液、唾液、脑脊液、口腔拭子、痰、毛根、白细胞样品或组织样品或其任何组合，以及鉴定原发性fsgs相关遗传变体(如增加患有或患上原发性fsgs风险的遗传变体)的存在或不存在。在一些实施方案中，鉴定原发性fsgs相关遗传变体的存在或不存在包括使生物样品与能够检测所述原发性fsgs相关遗传变体的试剂接触，所述检测是通过特异性直接核苷酸测序、通过特异性等位基因识别snp基因分型(denotyping)测定，或其组合来进行的。在一些实施方案中，所述方法还包括在治疗之前或期间对患者进行基因分型，包括从所述患者获取生物样品，以及从获取自所述患者的生物样品鉴定原发性fsgs相关遗传变体的存在或不存在，如apol1遗传变体的存在或不存在，例如鉴定apol1g1单倍型或apol1g2单倍型的存在或不存在。例如，所述方法还可以包括通过在获取自所述患者的生物样品(如分离自所述患者的血液样品)中鉴定apol1g1纯合子(g1/g1)的存在、apol1g1杂合子(例如g1/-或双倍型g1/g2)的存在、或apol1g2杂合子(例如g2/-或双倍型g1/g2)的存在，来对患者进行基因分型。在一些实施方案中，所述基因分型在治疗之前进行。在一些实施方案中，所述基因分型在治疗期间进行。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括鉴定apol1基因的指示性snp，所述鉴定包括：a)选择一组蛋白尿水平≥3.0毫克蛋白/毫克肌酐的患者；b)获得所述患者在apol1基因的基因座处的基因型；c)对所述患者施用治疗有效量的tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，例如夫苏木单抗；d)测量治疗的患者的蛋白尿水平、egfr水平，或二者；e)通过鉴定显示出统计学相关提高的蛋白尿水平、egfr水平、或二者的患者，将步骤d)的患者细分为响应者亚组和未响应者亚组；及f)分析步骤e)中鉴定出的响应者和未响应者亚组人群的基因座的dna序列，并选择或查找仅存在于响应者的apol1基因的基因座处的snp；及g)通过将选出或查出的snp与步骤d)的蛋白尿、egfr或二者的水平结果相关联而鉴定杂合或纯合指示性snp变体。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括在治疗期之前、期间或之后对患者进行基因分型。进行基因分型(如snp的基因分型)的方法可以包括但不限于dna测序、杂交技术、基于pcr的测定、荧光染料和基于淬灭剂的pcr测定(taqmanpcr检测系统)、基于rflp的技术、单链构象多态性(sscp)、变性梯度凝胶电泳(dgge)、温度梯度凝胶电泳(tgge)、化学错配切割(cmc)、基于异源双链核酸分子分析的系统、基于质谱法的技术、侵入性切割(invasivecleavage)测定、多态性比率测序(prs)、微阵列、滚动循环延伸测定(rollingcircleextensionassay)、基于hplc的技术、基于dhplc的技术、寡核苷酸延伸测定(ola)、基于延伸的测定(难扩增型突变系统(arms，amplificationrefractorymutationsystem)，难扩增型突变线性延伸(alex，amplificationrefractorymutationlinearextension)、单碱基链延伸(sbce，singlebasechainextension))、分子信标测定、侵入物(invader)(第三波技术(thirdwavetechnologies))、连接酶链式反应测定、基于5’-核酸酶测定的技术、杂交毛细管阵列电泳(cae)、焦磷酸测序、蛋白截短测定(ptt)、免疫测定、单倍型分析、以及固相杂交(斑点印记、反向斑点印记、染色质免疫沉淀/芯片(chips))。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括施用tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，如夫苏木单抗，作为静脉内输注。例如，所述静脉内输注可以单次输注或以疗程期间一段时间的系列输注方式进行。在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括50-200ml(例如50-100ml、100-150ml、75-125ml、或150-200ml)的包含夫苏木单抗(例如基于患者的总体重1-4mg/kg的夫苏木单抗)的医药配制物的单次输注或疗程期间一段时间的系列输注，所述医药配制物在注射用无菌水(swfi)中重建。在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括单次输注100ml的基于患者总体重包含1-4mg/kg夫苏木单抗的医药配制物，其在swfi中重建。在一些实施方案中，所述静脉内输注可以花费约10分钟至1小时，例如约20分钟、约30分钟、约45分钟、或约1小时。例如，静脉内输注可以单次输注或以疗程期间一段时间的系列输注方式进行，其中疗程期间的系列输注的各次输注可以花费约10分钟至1小时，例如约20分钟、约30分钟、约45分钟、或约1小时。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括在一个或多个疗程处(例如在第一疗程处，或在各个疗程处)测量患者的总体重，以确定swfi中重建的冻干夫苏木单抗的量以基于所述患者的总体重达到给药1-4mg/kg的夫苏木单抗。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括施用tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，例如夫苏木单抗，作为基于每月、每两周、或定期的静脉内输注。例如，在一些实施方案中，可以将夫苏木单抗每月静脉内输注于患者，例如每28天、每21天、或每14天以基于患者总体重的1-4mg/kg的剂量静脉内施用于所述患者。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括将治疗有效量的夫苏木单抗作为静脉内输注基于每月、每两周、或定期(如每28天、每21天、或每14天)施用。在一些实施方案中，所述基于每月、每两周、或定期(如每28天、每21天、或每14天)静脉内施用的夫苏木单抗的治疗有效量，是基于所述患者总体重的1-4mg/kg的夫苏木单抗的剂量，例如所述治疗有效量是基于所述患者总体重的1mg/kg的夫苏木单抗的剂量，如2mg/kg、3mg/kg、或4mg/kg的夫苏木单抗的剂量。在一些实施方案中，将所述治疗有效量的夫苏木单抗作为医药配制物静脉内施用。
在一些实施方案中，包含1-4mg/kg患者总体重的夫苏木单抗的医药配制物可以单次输注或疗程期间一段时间的系列输注的方式每月静脉内施用于患者，例如每28天、每21天、或每14天以单次输注或疗程期间一段时间的系列输注的方式静脉内输注于患者。在一些实施方案中，所述治疗方法包括在数月或数年时间期以单个疗程或以一系列疗程静脉内施用tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，例如夫苏木单抗。在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括在治疗期间将夫苏木单抗静脉内施用于患者，随后是随访期，在随访期间不对所述患者施用夫苏木单抗并监测疾病相关症状缓和的进展，如降低蛋白尿水平、稳定egfr，或降低水肿症状，或其组合。例如，在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括在治疗期间基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天将夫苏木单抗静脉内施用于患者，所述治疗期包括时间进程为1个月至5年的一系列疗程，例如基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天在时间进程为1个月至4年、1个月至3年、1个月至2年、1个月至1年、1个月至12个月、1个月至11个月、1个月至10个月、1个月至9个月、1个月至8个月、1个月至7个月、1个月至6个月、1个月至5个月、1个月至4个月、1个月至3个月、1个月至2个月、2个月至3个月、2个月至4个月、2个月至5个月、2个月至6个月、2个月至7个月、2个月至8个月、3个月至4个月、3个月至5个月、3个月至6个月、4个月至7个月、4个月至9个月、或5个月至10个月的一系列疗程施用。例如，在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天在12个月的进程以一系列疗程将夫苏木单抗静脉内施用于患者，例如基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天在11个月，10个月，9个月，8个月，7个月，6个月，5个月，4个月，3个月，2个月，或1个月的进程以一系列疗程来施用。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天在一系列疗程将夫苏木单抗静脉内施用于患者，然后是治疗休息期，然后是进一步的一系列疗程，其基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天。在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括重复交替顺序的一系列疗程，然后是治疗休息期，时间进程为1-10年，例如1-7年，如1-5年或1-3年。例如，在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天在12个月的进程以一系列疗程将夫苏木单抗静脉内施用于患者，然后是3个月至5年的治疗休息期，随后是进一步的一系列疗程，其在12个月的进程基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天进行。例如，第一系列治疗和进一步的一系列治疗之间的治疗休息期可以是3个月至5年，例如3个月至4年，如3个月至3年、3个月至2年、3个月至1年、3个月至9个月、或3个月至6个月。
在一些实施方案中，所述方法可以包括以单个疗程或以一系列疗程在1个月至5年的进程基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天静脉内施用tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，例如夫苏木单抗，例如在1-50个疗程的系列，如1-40个疗程、1-30个疗程、1-20个疗程、1-15个疗程、1-10个疗程、1-9个疗程、1-8个疗程、1-7个疗程、1-6个疗程、1-5个疗程、1-4个疗程、1-3个疗程、1-2个疗程、2-10个疗程、2-8个疗程、2-6个疗程、2-5个疗程、2-4个疗程、3-10个疗程、3-8个疗程、3-6个疗程、3-5个疗程、3-4个疗程、4-10个疗程、4-8个疗程、4-7个疗程、4-6个疗程、4-5个疗程、5-10个疗程、7-15个疗程、或15-20个疗程在1个月至5年的进程中基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天进行施用。在一些实施方案中，所述方法包括以单个疗程或以一系列疗程静脉内施用夫苏木单抗，，例如在10个疗程、9个疗程、8个疗程、7个疗程、6个疗程、5个疗程、4个疗程、3个疗程、或2个疗程的系列在1个月至5年的进程中基于每月、基于每28天、基于每21天、或基于每14天施用。
在一些实施方案中，所述方法包括以充足剂量静脉内施用夫苏木单抗，以在自施用之时21至84天的范围内(例如自施用之时21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的范围内)达到10至51,500ng/ml的谷(trough)血清血浆夫苏木单抗水平，例如在自施用之时21至84天的范围内(例如自施用之时21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的范围内)达到200至51,500ng/ml、500至51,500ng/ml、1,000至51,500ng/ml、5,000至51,500ng/ml、10,000至51,500ng/ml、25,000至51,500ng/ml、100至30,000ng/ml、100至15,000ng/ml、103至51,209ng/ml、或10,000至40,000ng/ml。例如，在一些实施方案中，在自施用之时21至84天的范围内(例如自施用之时21至42天、28至49天、35至56天、或49至84天的范围内)，治疗的患者的谷血清血浆夫苏木单抗水平是1,000至51,500ng/ml、1,000至45,000ng/ml、1,000至35,000ng/ml、1,000至25,000ng/ml、1,000至15,000ng/ml、5,000至40,000ng/ml、10,000至51,500ng/ml、15,000至51,500ng/ml、1，813至51,209ng/ml或2,000至51,500ng/ml。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者的蛋白尿水平自基线降低。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者的尿总蛋白：肌酐比率(毫克蛋白/毫克肌酐)，也称为“up/c比率”自基线下降40％或更多，例如45％或更多，例如up/c比率在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)自基线下降50％或更多，55％或更多，60％或更多，65％或更多，或70％或更多。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，并且up/c比率在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平，例如在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)降至≥0.3至≤2.0、≥0.5至≤1.5、≥1.0至≤2.0、≥1.5至≤2.5、≥1.0至≤3.0、或≥2.0至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者的up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，并且up/c比率降至＜0.3毫克蛋白/毫克肌酐的水平。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者的up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，在随访期间(即发生在治疗期之后)降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者在2个疗程后(例如在3、4、5、6、7、8、9或10个疗程后)up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，降至＜0.3毫克蛋白/毫克肌酐的水平。在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者在随访期间(即发生在治疗期之后)up/c比率自基线下降40％或更多，如up/c比率自基线下降50％或更多，降至＜0.3毫克蛋白/毫克肌酐的水平。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者在治疗期和随访期间具有至少一个如下项：i)至少两次up/c比率50％或更大的下降，自基线降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平；或ii)至少一次up/c比率50％或更大的下降，自基线降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平且所述up/c比率在至少一个月保持在基线水平的至少50％或更少。例如，在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者具有至少两次up/c比率50％或更大的下降，自基线降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平，例如所述up/c比率自开始治疗112-224天内(如开始治疗112-196天、112-168天、或112-140天内)降至范围为≥0.3至≤1.0毫克蛋白/毫克肌酐，如≥0.3至≤2.0、≥0.5至≤1.5、≥1.0至≤2.0、≥1.5至≤2.5、≥1.0至≤3.0、或≥2.0至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平。
例如，在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者具有至少一次up/c比率50％或更大的下降，自基线降至范围为≥0.3至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐的水平，例如所述up/c比率自开始治疗112-224天内(如开始治疗112-196天、112-168天、或112-140天内)降至范围为≥0.3至≤1.0毫克蛋白/毫克肌酐，如≥0.3至≤2.0、≥0.5至≤1.5、≥1.0至≤2.0、≥1.5至≤2.5、≥1.0至≤3.0、或≥2.0至≤3.0毫克蛋白/毫克肌酐且所述up/c比率在至少2周(例如至少3周，如至少1个月、至少5周、至少6周、至少8周、至少12周)保持在基线水平的至少50％或更少。
在一些实施方案中，所述治疗方法可以导致治疗的患者肾功能得到稳定，例如评估的治疗的患者的肾小球滤过率(称为“egfr”)得到稳定。在一些实施方案中，当所述治疗的患者的中值egfr自基线水平下降15％或更少时，例如当所述治疗的患者的中值egfr自基线水平下降15％，如自基线水平下降少于12％、下降少于10％、下降少于9％、下降少于8％、下降少于7％、下降少于6％、下降少于5％、下降少于4％、或下降少于2％时，达到治疗的患者的egfr的稳定化。在一些实施方案中，治疗的患者的中值egfr稳定在自基线水平15％或更低，如10％或更低，且所述egfr稳定化发生在自开始治疗112-224天内，如开始治疗112-196天、112-168天、或112-140天内。
在一些实施方案中，所述治疗方法导致一个或多个肾病综合征(原发性fsgs)相关症状的严重程度减轻或减至最小，所述症状包括低白蛋白血症、水肿、或高脂血症。例如，所述治疗方法导致在具有肾病范围的蛋白尿(例如≥3.0g/24h或≥3.0毫克蛋白/毫克肌酐)或更严重蛋白尿(例如≥10g/24h)的患者中一个或多个原发性fsgs相关症状的严重程度减轻或减至最小。
在一些实施方案中，治疗的患者可以是非洲血统(或人种或种族)的患者如非裔美国人群体，欧洲裔美国血统(或人种或种族)的患者如高加索人/白人，或西班牙血统(或人种或种族)的患者。
医药配制物
在一些实施方案中，所述治疗方法可以包括将tgfβ拮抗剂，如泛特异性tgfβ拮抗剂，例如夫苏木单抗，作为医药配制物施用。在一些实施方案中，所述医药配制物可以包含冻干的tgfβ拮抗剂产品，如在swfi中重建的冻干的tgfβ拮抗剂产品。在一些实施方案中，所述医药配制物可以包含在swfi中重建的(例如在3.0-10.0mlswfi中重建的，如在4.0-8.0mlswfi中重建的、在4.0-6.0mlswfi中重建的、在4.5-5.5mlswfi中重建的、在4.0mlswfi中重建的、在5.0-5.5mlswfi中重建的、在5.0-5.3mlswfi中重建的、在5.0mlswfi中重建的、在5.1mlswfi中重建的、在5.2mlswfi中重建的、在5.3mlswfi中重建的、在5.4mlswfi中重建的、在5.5mlswfi中重建的、或在6.0mlswfi中重建的)冻干的夫苏木单抗。在一些实施方案中，冻干的夫苏木单抗可以储存于小瓶中，例如50mg/小瓶中，并在3.0-10.0mlswfi中重建，例如储存于50mg/小瓶中并在5.0-5.3mlswfi(如5.0mlswfi、5.1mlswfi、5.2mlswfi、或5.3mlswfi)中重建。在一些实施方案中，冻干的夫苏木单抗可以在50mg/小瓶、5.1mlswfi中重建。
实施例
测试产品指夫苏木单抗，是一种工程改造的人igg4κ单克隆抗体，其能中和所有的哺乳动物tgfβ同种型(即β1、2、和3)。
测试药物配制物指冻干的夫苏木单抗粉末以5.1ml(50mg/小瓶)的注射用无菌水(swfi)重建而成的静脉内配制物，其中冻干夫苏木单抗粉末的1mg/kg或4mg/kg的剂量强度是基于每次拜访时患者的总体重。冻干的夫苏木单抗的组合物列于表4中。
表4.冻干粉末的组合物
表注：usp：美国药典；ep：欧洲药典；nf：国家处方集
在施用前，用5.1ml(50mg小瓶)的swfi重建冻干的夫苏木单抗，以得到50mm磷酸钠缓冲液中约10mg/ml的浓度，所述磷酸钠缓冲液ph为7.1，含有25mm氯化钠、3％甘露糖、1％蔗糖、和0.01％聚山梨醇酯80。决不能使用针状滤器(filterneedles)来从小瓶去除药物产品。然而，由于蛋白质的性质及其沉淀能力，当施用这种产品(稀释为溶液用于输注)时需要使用0.22μm低蛋白结合内联滤器(inlinefilter)。由重建的夫苏木单抗制备的测试药物配制物的组合物列于表5中。
表5.重建的夫苏木单抗的组合物
含有夫苏木单抗的小瓶必须储存在2至8℃(35.6至46.4°f)直至制备用于输注。重建的夫苏木单抗在用swfi重建后是稳定的，例如，在用swfi重建后于室温或在冷却下(2至8℃或35.6至46.4°f)稳定多达24小时。虽然在这些条件下稳定了多达24小时，swfi中的夫苏木单抗仍应立即使用。在swfi中重建的夫苏木单抗进一步在室温以0.3mg/ml至7mg/ml的浓度稀释于5％右旋糖的水溶液中，其在室温稳定多达24小时。
安慰剂配制物意指用5.1ml(50mg/小瓶)的注射用无菌水(swfi)重建的冻干安慰剂产品(其看起来与测试产品相匹配)的静脉内配制物。
施用途径如下进行：以100ml静脉内输注在约30分钟施用。
剂量方案包括通过在第1天、第28天、第56天、和第84天输注，4次(4)每月施用测试配制物或安慰剂配制物，其中基于每次拜访时患者的总体重来计算剂量强度。
实施例1
在抗类固醇的fsgs患者中进行了两(2)剂测试药物配制物或安慰剂的双盲、平行给药、随机研究，其中所述研究分为3个时期：
1.筛选(第1次拜访，多至6周)；
2.治疗期(第1天/第2次拜访，第28天/第3次拜访，第56天/第4次拜访，第84天/第5次拜访，和第112天/第6次拜访)；及
3.随访期(第140天/第7次拜访，第168天/第8次拜访，和第252天/第9次拜访)。
在第1天/第2次拜访，第28天/第3次拜访，第56天/第4次拜访，和第84天/第5次拜访时，患者在诊所接受单次静脉内(iv)测试药物配制物或安慰剂输注。输注持续时间约30分钟，然后将患者留在诊所内观察至少30分钟的时段。安排患者在第112天/第6次拜访直至第252天/第9次拜访返回诊所以供跟进随访。
在每次拜访时收集：肾脏评估(蛋白尿、血清肌酐、和egfr)、血清脂质、血清白蛋白、及重量。基于第1天/第2次拜访，第56天/第4次拜访，第112天/第6次拜访/提前终止(et)、和第252天/第9次拜访时完成的问卷对患者报告的结果进行评估。在研究全程收集安全性数据，包括安全性实验室评估、体检、以及生命体征。在治疗期过程中收集所有不良事件(ae)及伴随使用的药物。在随访期过程中安排收集仅药物相关和方案相关的严重不良反应(sae)及所有感兴趣的医疗事件(meoi)。在随访期过程中仅收集治疗fsgs的药物。
在每个治疗期和随访期拜访时收集用于确定测试产品血清浓度的血液样品。
在第1天/第2次拜访，第112天/第6次拜访，第140天/第7次拜访，第168天/第8次拜访，和第252天/第9次拜访时评估抗-夫苏木单抗抗体的潜在进展。
将总计36名治疗抗性的fsgs患者随机化至用1mg/kg测试药物配制物的治疗(n＝14)、用4mg/kg测试药物配制物的治疗(n＝12)、或用安慰剂配制物的治疗(n＝10)。大多数患者(92％)完成了全部4次研究输注，且没有患者在治疗期间中止研究。测试药物配制物1mg/kg组中的一名患者完成了3次输注，测试药物配制物4mg/kg组中的一名患者完成了3次输注，以及测试药物配制物4mg/kg组中的一名患者完成了2次输注。未完成全部研究治疗的原因包括：对于测试药物配制物1mg/kg组中的患者而言是医师决定(开始另一项治疗)；对于测试药物配制物4mg/kg组中的2名患者而言是轻微肝酶异常及肾衰竭(经评估均与治疗无关)的不良事件。所有36名患者都完成了治疗期(直至经过第112天/第6次拜访)。除一人外(其分配至4mg/kg测试药物配制物组且在第252天研究总结之前失去随访)，所有患者都在随访期间完成了研究拜访。具有肾病蛋白尿的抗类固醇的原发性fsgs患者的诊断和关键标准包括如下：
i)患者愿意并能够提供签署的知情同意书，并且在提供同意书之时为18岁或以上男性或女性。
ii)评估患者的肾脏活检，并且其与包括所有组织学亚型的原发性fsgs的诊断是一致的。
iii)计算得出的患者在第一次拜访时的egfr≥30ml/min/1.73m2。
iv)患者在筛选期间收集的尿样品中至少1个的up/c比率≥3(毫克蛋白/毫克肌酐)，在筛选期间的至少2个样品中up/c比率≥2(毫克蛋白/毫克肌酐)。
v)在研究者看来，患者患有抗类固醇的fsgs。所述患者在此期间必须以高剂量类固醇疗法的进程接受了针对fsgs的治疗最少4周，或发现其在筛选拜访之前不耐受类固醇。
vi)患者在第2次拜访(治疗开始)前已用acei和/或arb以稳定剂量治疗最少4周，不耐受或忌用除外。
患者人口统计特征：患者人群的中值年龄为41岁(范围为19至77岁)，并且由53％男性和47％女性组成。患者人群的人种是约83％高加索人和约17％黑人，且种族划分由约31％西班牙或拉丁美洲人及约69％非西班牙或拉丁美洲人组成。3个治疗组之间的人口统计学和临床特征以及基线蛋白尿和通过egfr反映的肾功能是大体平衡的。与4mg/kg测试药物配制物组(75％)或安慰剂组(90％)相比，1mg/kg测试药物配制物组(57.1％)较少有患者接受过既往的钙调磷酸酶(cni)治疗。1mg/kg测试药物配制物组中有3名患者有血栓史(可能指征更严重的肾病综合征相关疾病)，而另外两组分配中没有这样的患者。
患者群体自初始肾活检诊断的中值时间为3.0年(范围是0.1至16.8年)，且约72％的患者针对其fsgs疾病既往接受过钙调磷酸酶治疗。大多数患者在高剂量皮质类固醇治疗之外，还接受过多疗程不同类型的免疫抑制药物，并且三分之二的药物报告为“无响应”，而剩下的则记录为短暂和/或部分响应。三个治疗组之间的fsgs组织学亚型是合理地非常平衡的。
过往和当前的用于fsgs的药物使用及响应：所有患者针对fsgs疾病接受高剂量皮质类固醇治疗≥4周。36名随机化的患者中，总计有123个皮质类固醇疗程，66个(53.7％)报告为“无响应”，36个(29.3％)报告为“短暂部分响应”，8个(6.5％)报告为“持续部分响应”，2个(1.6％)报告为短暂完全响应，以及11个报告为“患者不耐受药物”。3个治疗组之中的既往响应类型没有显著变化。
其他非类固醇免疫抑制药物由多种药物组成(包括钙调磷酸酶抑制剂、环孢素和他克莫司)，而一些具有数种不同的既往类型的患者的蛋白尿降低是总体不足的，而大多数疗程(107个中的72个，或67.3％)被分类为在所有招入的患者中“无响应”。针对非类固醇免疫抑制药物的既往响应类型在三个治疗组之间变化不显著。
本研究中包括的患者的表征(其详细描述了人口统计学特征和基线疾病)示于表6中(结果以中值(min，max)或n(％)表示)。
表6.人口统计学和基线特征
1：一名患者由于发现了一些肾小球基底膜异常而起初被认为不是原发性fsgs，但与医师和中心病理学家进一步讨论得出其临床表现与卒发肾病综合征一致(基底膜发现无法解释)且不能定义性地排除原发性fsgs，因此将患者招入了本研究；活检中发现的fsgs病损的变体记为nos。
2：如ecrf中记录的既往cni治疗状态已确定是准确的，并且与过往药物(pastmedications)中列出既往cni药物使用相对应。
基因型分型数据：用如下所述的基因型分型程序(a)或出现(b)，在36名随机化患者的35名中进行了apol1基因型分型(获得了4a的患者基因型)。
基因型分型程序(a)-等位基因分型：
通过特定等位基因分型snp基因型分型测定(appliedbiosystems，inc.)进行的8个(8)fsgs相关的apol1遗传变体的确定和评估(bostrom，m.a.，等，“geneticassociationandgene-geneinteractionanalysesinafricanamericandialysispatientswithnondiabeticnephropathy，”amjkidneydis.，2012，59，210-221.；和genovese，g.，等，“ariskalleleforfocalsegmentalglomerulosclerosisinafricanamericansislocatedwithinaregioncontainingapol1andmyh9，”kidneyint.，2010，78，698-704)列示于表7中：
表7
表注：测定id*-
表7中所示的用于确定8个(8)遗传变体的附加试剂包括：
将已知代表各个变体的三种潜在基因型的基因组dna或质粒样品用作pcr对照。适当测试的样品可用多达两年。
2x
无核酸酶水(ambion，产品编号#am9932或等效物carlsbad，ca)。
40xtaqmansnp基因型分型测定试剂一次性小份试样(12μl)。
2xtaqman通用pcr总混合剂一次性小份试样(650μl).
使用设备：带有appliedbiosystems序列检测软件版本2.4或等效物(appliedbiosystems)的appliedbiosystems7900实时pcr系统。
程序：通常，程序涉及将来自患者的基因组dna稀释至终浓度为5ng/ml，然后将其用作模板，根据下文详述的制造商提供的使用说明，在单次snp基因型分型测定试剂和2xtaqman通用pcr总混合剂的存在下进行40个循环定量pcr。基因型的确定是通过quantstudio12kflex实时pcr仪运行软件v1.2.2(lifetechnologies)而得到的。所述程序还涉及如下步骤(一次基因型分型运行耗时约1.5小时完成)：
1-从患者收集(取)全血样品。
2-加工所述全血样品用于分离dna，如果可得到的话，产生两个(2)dna小份试样。
3-等位基因分型测定部分(lots)的资格验证。
4-将样品和对照在无核酸酶水中稀释至5ng/μl，然后进行分析。
5-3个表征的dna样品充当各个感兴趣的snp的对照，如果可用的话。每一个代表特定的基因型：纯合等位基因“1”，杂合子，和杂合等位基因“2”。对各个snp运行一次阳性对照。
6-对于各个患者，将8个(8)snp的每一个按照如下取样计划一式两份进行基因型分型：如果可获得两个dna小份试样，将各个小份试样取样并分析一次；如果仅能获得一个dna小份试样，则将其取样并分析两次。
7-制备总混合剂，并用如下试剂体积(以单一反应体积提供)在预pcr罩(hood)中短暂涡旋使其混合：40xabisnp基因型分型测定试剂(0.63μl)；2xtaqman通用pcr总混合剂(12.50μl)；和无核酸酶水(9.90μl)；从而最终体积为23.03μl。
8-将一瓶2x
9-将40x基因型分型测定试剂涡旋5-10秒并纳米离心(nanofuged)5-10秒以使内容物回到管底。
10-将试剂合并至无核酸酶管中，并短暂涡旋使其混合。
11-制备并完成平板分布图(platemap)，指示样品和对照的位置。
12-根据完成的平板分布图，将23μl合适的总混合剂的小份试样置于各实验孔中。
13-基于平板分布图，将2μl水空白样品(ntc)添加至适当的孔。
14-将平板密封并于1,250±250g离心15-30秒。
15-样品添加：对每个样品使用新的移液枪尖，吸取2.0μl的dna(稀释至5ng/μl)，基于完成的平板分布图添加至适当的孔。上下抽打使其混合。
16-基于平板分布图，添加2μl针对的各个snp测定的各个对照(稀释至5ng/μl)至适当的孔。上下抽打使其混合。
17-用光学胶黏剂密封光学平板，然后在1,250±250g离心15-30秒。
18-数据收集：用压缩空气(whooshduster)确保在将平板装入quantstudiotm12kflex实时pcr仪中的平板承接架之前没有灰尘或碎渣污染平板外部。
19-创建新的基因型分型“实验”文档(.eds)并用按如下定义设置(用仪器的触控面板或来自仪器的控制主机上的quantstudiotm12kflex软件来设置)的参数运行：每孔反应体积(25μl)，预读阶段(60.0°，30秒)；保持阶段(95.0℃，10分钟)；pcr阶段步骤1(95.0°，15秒)；pcr阶段步骤2(60.0°，1分钟)；读取后阶段(60.0°，30秒)；循环数(40)；自动δ(autodelta)(不能进行)，以及起始循环(1)。
基因型分型步骤(b)-测序：
通过特异性直接核苷酸测序对4个(4)fsgs相关apol1遗传变体进行确定和评估，所述直接核苷酸测序用pcr扩增步骤含有apol1基因变体的基因组区，所述pcr扩增步骤使用表8中列出的基因特异性引物：
表8
表8中所示的用于确定所述4个(4)遗传变体的附加试剂包括：
如表9中记录的寡核苷酸聚合酶链式反应(“pcr”)引物(序列以5’-3’方向提供)，以0.2μm规模hplc纯化(eurofinsmwgoperonhuntsville，al)：
表9
已知扩增感兴趣的apol1区的基因组dna用作pcr对照。
platinumtaq聚合酶(invitrogen，产品编号#10966-034carlsbad，ca)。
10mm三磷酸脱氧核苷(“dntps”)，pcr级(invitrogen，产品编号#18427-013或等效物carlsbad，ca)。
10xpcr缓冲液(invitrogen，产品编号#y02028carlsbad，ca)。
无核酸酶水(ambion，产品编号#am9932或等效物carlsbad，ca)。
tris/edta(“te”)缓冲液(10mmtris-hcl，1.0mmedta)，ph8.0(ambion，产品编号#am9849或等效物carlsbad，ca)。
溴化乙锭溶液10ml(10mg/ml)(invitrogen产品编号#15585-011，或等效物，carlsbad，ca)。
100碱基对(“bp”)dna梯度条带试样(invitrogen#15628-019carlsbad，ca)。
latitudeht预制凝胶-2％琼脂糖(lonza#57246或等效物hopkinton，ma)。
去离子水。
还采用了如下试剂：100μm寡核苷酸引物储液，10μm寡核苷酸引物储液，带有50μgl-1溴化乙锭的1xtris硼酸edta运行缓冲液，1x溴酚蓝琼脂糖凝胶上样染料储液，1x琼脂糖凝胶上样染料，及0.1μg/μl100碱基对dna梯度条带试样。
使用的设备：eppendorfmastercyclerpcr仪(eppendorf)。
程序：一般而言，对包含三个apol1变体(其代表apol1g1/g2基因型(rs73885319、rs60910145、和rs71785313))的靶区域用表9中所示的基因特异性寡核苷酸引物对进行pcr扩增。如下文进一步详述的，将所得产物进行纯化并进行荧光双脱氧核苷酸dna测序。在abi373048-毛细管阵列上运行所述产物以通过电泳图档案收集序列。每个个体的外显子的电泳图档案用生物信息学软件包sequencher(genecodescorporation)版本4.10.1进行输出和显示。将来自各样品的基因序列与共有序列进行比较，以确定apol1变体位置rs73885319、rs60910145、和rs71785313处的基因型。apol1的核苷酸编号分别基于ncbi参考序列nm_003661.3和nm_014625.2。所有蛋白结果基于核苷酸变化而推测得出，并未经实验验证。所述程序还涉及如下步骤：
1-从患者收集(取)全血样品。
2-加工所述全血样品用于分离dna，如果可得到的话，产生两个(2)dna小份试样。
3-寡核苷酸引物部分的资格验证。
4-将样品和对照在无核酸酶水中稀释至5ng/μl，然后进行分析。
5-将无模板对照(ntc)空白样品包含在用于各变体测定的初级pcr中，其包含无核酸酶水以取代任何样品或阳性对照。对各个初级pcr设置运行ntc一次。
6-对于患者样品，将4个(4)变体的每一个按照如下取样计划一式两份进行基因型分型：如果可获得两个dna小份试样，将各个小份试样取样并分析一次；如果仅能获得一个dna小份试样，则将其取样并分析两次。
7-制备并完成平板分布图，指示样品和对照的位置。
8-将如下每一项在室温解冻：10xpcr缓冲液、50mmmgcl2、10mmdntp、10μm正向和反向引物(针对感兴趣的变体)。从冰箱取出platinumtaqtmdna聚合酶并将其置于冰上。
9-制备总混合剂，并用如下试剂体积(以单一反应体积/终浓度提供)在预pcr罩中短暂涡旋使其混合：无核酸酶水(17.75μl/--)、10xpcr缓冲液2.5μl/1x)；50mmmgcl2(0.75μl/1.5mm)、10mmdntp混合剂(0.25μl/0.1mm)、10mm正向引物(0.5μl/0.1mm)、10mm反向引物(0.5μl/0.1mm)、platinumtaq聚合酶(0.25μl/1.25单位)；以使最终体积为22.5μl。
10-将22.50μl小份试样的总混合剂放入各实验孔中，密封平板并将其移至指定的样品添加罩(hood)，然后去除密封。
11-样品添加：用新的对每个样品使用新的移液枪尖，吸取2.50μl的dna(稀释至5ng/μl)，基于完成的平板分布图添加至适当的孔。吸取2.50μl的无核酸酶水添加至阴性对照孔。上下抽打使其混合。
12-用pcr板粘合膜密封平板，然后在1,250±250g离心5-10秒。
13-将平板置于eeppendorfmastercyclerpcr仪上，关闭盖子，从具有如下设置的可用的循环程序名单选择适当的“apol1”实验方案：步骤1，94℃，2min.；步骤2，(30个循环)：94℃，20sec.，58℃，30sec.，72℃，30sec.；步骤3，72℃，4min.；以及步骤4，保持在4℃。
14-在热循环程序完成后，将平板从热循环仪取出，并通过琼脂糖凝胶电泳对所有样品和对照的pcr产物进行分析。
15-初级pcr扩增的评估：
i)将预制凝胶(lonza)和塑料托盘从密封袋取出，转移至凝胶盒，用trubandtm锚(anchor)覆盖凝胶(用开口将孔调整对准)，添加足够的带有溴化乙锭溶液(～1l)的1xtbe以完全淹过凝胶和托盘但未淹过trubandtm锚。
ii)对于每个分析的样品，吸取5μl1x溴酚蓝上样染料加入falcon3911u底部96孔板的每个孔，吸取10μl的各个pcr样品与上样染料共同加入所述孔，并轻柔上下抽打混合2至3次；
iii)将3μl的制备的100bpdna梯度条带试样(0.1μg/μl储液)加载至凝胶上每一排的至少一个孔；
iv)将全部体积的每个样品(或多至12μl，取较小的那个)加载至琼脂糖凝胶上适当的孔；
v)滑动trubandtm锚以盖住孔，以约180v将凝胶运行约20分钟或直至溴酚蓝染料前端迁移距离下一排孔或凝胶底部至少2/3的路程；
vi)从凝胶盒取出凝胶，用alphainnotech凝胶成像系统(sci-im-195)拍照，产生两个热敏纸(thermalpaper)图像：(1)针对组合物(按需放大至填满框)和曝光优化(按需调整焦距)的图像，以及(2)初始图像的3d图像；将每个凝胶图像文件保存至专用仪器电脑的c：\驱动器。
vii)根据表10中所述的接受标准对凝胶图像上的对照和样品进行分析，以确定pcr是否成功。阴性对照(ntc)中扩增产物的存在导致测定失败且需要立即重新扩增所有样品和对照，并且样品的两个重复都是需要的，以产生预期大小的条带(任何扩增失败的样品重复都需要重新扩增(一式两份))。
表10.初级pcr对照接受标准
16-通过测序分析样品的pcr产物：(1)用exo-sap-it纯化试剂纯化各样品的pcr产物；(2)针对样品的pcr产物的测序反应按如下步骤进行：将各个“exosapped”的产物用表11中记录的体积(一个反应体积)在正向和反向反应中都扩增一次，以制备所需量的各个总混合剂，然后将纯化的扩增子进行测序和解读。
表11.正向和反向反应混合剂
17-apol1测序的数据分析：
i)将来自abi3730运行文件夹的ab1测序文档导出至genecodessequencher软件中；
ii)将得到的各个对照样品的正向和反向序列与参考序列文档进行比对；
iii)参阅各个样品正向和反向反应的序列，并将各样品重复的变体序列记录为纯合结果或杂合结果，如表8中所示(在一个反应(正向或反向)产生了质量不佳的序列的情况下，可以用另一个来读取序列，前提是该序列是高质量的)。测试样品的两个重复都是需要的，以产出相同的序列结果。如果两个重复之间的结果不一致，则重新评估样品，如果任一重复由于无扩增或扩增不佳而失败，则不记录结果，直至获得确定性的结果为止。
apol1基因型分型：
从每名患者收集一管全血并一式两份进行提取，以产生两个小份试样的基因组dna。如表12中所述，用基因型分型程序(a)或基因型分型程序(b)分析每个小份试样以确定每名患者的apol1基因型，具体如上文所述：
表12.正向和反向反应混合剂
各个治疗的患者的apol1基因型分型结果通过治疗组总结于表13-15中，并按人种及在先钙调磷酸酶抑制剂(cni)治疗进行分层：
表13.1mg/kg的测试药物配制物
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物；nb＝非黑人；b＝黑人；n/a-无法获得用于基因型分型的样品
表14.4mg/kg的测试药物配制物
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物；nb＝非黑人；b＝黑人。
表15.安慰剂配制物
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物；nb＝非黑人；b＝黑人。
apol1g1和g2单倍型与非洲血统人群中增加的fsgs风险有关，其在6名研究受试者中存在(5名黑人受试者和1名非黑人西班牙受试者)。杂合apol1g1发现(g1/g1)被解释为“在非裔美国人群体中与fsgs疾病强相关”，而apol1g1携带体(g1/-或g1/g2)和/或apol1g2携带体(g2/-或g1/g2)则解释为“非裔美国人群体中的潜在风险”。1名来自美国的非黑人的西班牙患者(4016-0001)是apol-1g1携带体，尚未知晓患者是否具有非洲祖辈。
剂量和持续时间：36名随机化的患者的每一个都接受了至少一次研究治疗，并且所有患者均囊括在了安全性数据集中。在安慰剂配制物组中，10名患者(100％)完成了全部四次研究治疗。在1mg/kg测试药物配制物组(n＝14)中，13名患者(93％)完成了全部4次研究输注，而1名(7.1％)完成了3次输注。在4mg/kg测试药物配制物组(n＝12)中，10名患者(83％)完成了全部四次研究治疗，1名患者(8.3％)完成了3次研究治疗，而1名患者(8.3％)完成了2次研究治疗。
统计学方法：用全部分析(fa)套组进行效力分析(所有随机化患者用至少1剂研究药物治疗的且具有至少1次基线后up/c评估)。如果pps低于fas的80％的话，计划采用使用限于主要效力的每次方案(perprotocol，pp)套组(所有不具有显著偏差的fas可评估的患者被认为可能影响效力分析)的分析；未进行pps分析，因为未达标准。
up/c比率和egfr的连续参数提供于下表16-51中，其通过治疗组(表16-29：1mg/kg的测试药物配制物；表30-41：4mg/kg的测试药物配制物；和表52-51：安慰剂配制物)总结。研究输注在第2-5次拜访时进行(“v2-v5”)，并且随访期在第6-9次拜访时进行(“v6-v9”)。随访期间允许使用免疫抑制药物。对于每个患者，每次拜访在分别的2天收集的2个首次早晨空测量值(firstmorningvoidmeasurements)的平均值用于所有up/c比率的效力分析。对每个参数而言，用混合模型重复测量方法来进行自基线至第112天/et的百分比变化的比较。所述混合模型重复测量模型包括在先cni治疗(是，否)、治疗组、人种(黑人、非黑人)、和基线up/c比率和基线egfr作为协变量。用sasprocmixed程序来调适所述模型，并从该模型评估和测试多个时间点处的治疗差异。还用非参数ancova，进行了针对到第112天的up/c比率、egfr、及尿蛋白排泄的百分比变化的非参数分析。
表16.1mg/kg的测试药物配制物-患者1a
表17.1mg/kg的测试药物配制物-患者2a
表注：n/a-样品不可获得
表18.1mg/kg的测试药物配制物-患者3a
表19.1mg/kg的测试药物配制物-患者4a
表注：n/a-样品不可获得
表20.1mg/kg的测试药物配制物-患者5a*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表21.1mg/kg的测试药物配制物-患者6a
表注：n/a-样品不可获得
22.1mg/kg的测试药物配制物-患者7a
表23.1mg/kg的测试药物配制物-患者8a*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表24.1mg/kg的测试药物配制物-患者9a
表注：n/a-样品不可获得
表25.1mg/kg的测试药物配制物-患者10a
表26.1mg/kg的测试药物配制物-患者11a
表注：n/a-样品不可获得
表27.1mg/kg的测试药物配制物-患者12a*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表28.1mg/kg的测试药物配制物-患者13a
表29.1mg/kg的测试药物配制物-患者14a
表30.4mg/kg的测试药物配制物-患者1b
表31.4mg/kg的测试药物配制物-患者2b
表32.4mg/kg的测试药物配制物-患者3b
表注：n/a-样品不可获得
表33.4mg/kg的测试药物配制物-患者4b*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表34.4mg/kg的测试药物配制物-患者5b
表35.4mg/kg的测试药物配制物-患者6b*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表36.4mg/kg的测试药物配制物-患者7b*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物
表37.4mg/kg的测试药物配制物-患者8b
表38.4mg/kg的测试药物配制物-患者9b
表39.4mg/kg的测试药物配制物-患者10b
表40.4mg/kg的测试药物配制物-患者11b
表41.4mg/kg的测试药物配制物-患者12b
表注：n/a-样品不可获得
表42.安慰剂配制物-患者1c
表43.安慰剂配制物-患者2c
表44.安慰剂配制物-患者3c
表45.安慰剂配制物-患者4c
表46.安慰剂配制物一患者5c
表47.安慰剂配制物-患者6c*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物；n/a-样品不可获得
表48.安慰剂配制物-患者7c
表49.安慰剂配制物-患者8c*
表注：*＝接受了其他免疫抑制药物；n/a-样品不可获得
表50.安慰剂配制物-患者9c
表51.安慰剂配制物-患者10c
在积极治疗组(1mg/kg的测试药物配制物和4mg/kg的测试药物配制物)中观察到，总体趋势取向均值egfr(ml/min每1.73m2)随时间的稳定化，直至研究第252天(或直至第9次拜访)，然而安慰剂组(用安慰剂配制物治疗)中的均值egfr水平(ml/min每1.73m2)随时间逐渐下降。这些总体趋势图示于图1中，并且表52中提供了每个具体研究目的分组数据点中所含患者的数目。
表52.用于评估均值egfr(ml/min每1.73m2)的百分比变化的患者数目
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虽然本文显示并描述了本发明优选的实施方案，但本领域技术人员明显了解这些实施方案进作为示例提供。所附的权利要求书意在定义本发明的范围，并且该权利要求书范围内的方法和结构及其等价内容由此涵盖在内。