一种小鼠下颌下静脉采血方法与流程

本发明涉及血液采集技术领域，尤其涉及一种小鼠下颌下静脉采血方法。

背景技术：

在动物实验研究中，经常要采集实验动物的血液样本进行生理、生化和微生物、寄生虫等的检测和分析。目前，大、小鼠的常用采血方法有眼眶采血法、眼球摘除采血法、心脏采血法和剪尾采血法等。但在原有众多的采血方法中各有其优缺点，眼眶采血法：采血量约为0.2～0.3mL，虽可重复采血，但易损伤眼球导致感染，所采血液很容易凝固而且可能搞得小鼠“面目全非”；眼球摘除采血法：采血量略多，约为0.3～0.4mL，但取血速度无法控制，血液易浸入眼部周围毛发造成污染，且不可重复采血，还可致小鼠失明、感染，止血不严时还可致小鼠死亡，同时也不符合动物福利基本原则；心脏采血法：采血量可达0.5～0.6mL，但由于小鼠个体小、心脏小、心脏搏动快，采血时位置较难固定，因而操作难度系数大，需要麻醉，且容易因操作问题导致动物死亡，所以较适用于兔子采血；剪尾采血法：虽可以连续多次采血，但每次采血量极少，不到0.1mL，且采血速度慢，不适于样本大和需要较多血量的小鼠实验。现有技术缺少一种能够实现大规模推广和应用的小鼠采血方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种小鼠下颌下静脉采血方法。本发明提供的采血方法操作方便，无需麻醉，同一采血部位可反复采血且每次采血量可控，采血后动物恢复快并符合3R原则，能够实现大规模推广和应用。

本发明提供了一种小鼠下颌下静脉采血方法，包括以下步骤:

1)将小鼠固定，对采血部位进行消毒，所述采血部位为小鼠头部下颌骨后方咬肌边缘颌下静脉丛血管处；

2)将柳叶刀垂直扎入采血部位，顺时针转动90°，拔出柳叶刀，收集血液。

优选的是，所述小鼠固定采用单手固定法，小鼠头颈部不能弯曲且要使小鼠的双眼向外突出。

优选的是，所述消毒的方法包括采用酒精进行擦拭。

优选的是，所述步骤2)扎入的深度4～8mm。

优选的是，收集血液后还包括：对采血部位进行止血。

优选的是，所述止血的方法包括：采用灭菌干棉球压迫出血点30～60s。

本发明提供了一种小鼠下颌下静脉采血方法，将小鼠固定，对采血部位进行消毒，所述采血部位为小鼠头部下颌骨后方咬肌边缘颌下静脉丛血管处；将柳叶刀垂直扎入采血部位，顺时针转动90°，拔出柳叶刀，收集血液。本发明提供的采血方法操作方法简单，所需实验器械简易、普遍；对小鼠损伤小，采血所需时间很短，采血操作对小鼠出现的行为和精神无影响，小鼠能很快恢复活跃的状态，而且所有实验小鼠均正常存活；血样采集量大；止血速度快；可多次重复采集血液样本，满足对血样的不同需求。本发明提供的采血方法显著减轻了对实验动物的伤害，尤其在倡导实验动物福利方面有着积极的意义。

附图说明

图1是本发明实施例中小鼠颌下静脉采血部位示意图；

图2是本发明实施例中提供的小鼠颌下静脉采血步骤图，其中，图2a为刀头插入前示意图，图2b为血液流出示意图；

图3是本发明实施例中使用的小鼠采血刀和离心管示意图；

图4是本发明实施例中采血后小鼠的示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种小鼠下颌下静脉采血方法，包括以下步骤:

1)将小鼠固定，对采血部位进行消毒，所述采血部位为小鼠头部下颌骨后方咬肌边缘颌下静脉丛血管处；

2)将柳叶刀垂直扎入采血部位，顺时针转动90°，拔出柳叶刀，收集血液。

本发明将小鼠固定，对采血部位进行消毒，所述采血部位为小鼠头部下颌骨后方咬肌边缘颌下静脉丛血管处。具体的，在本发明中，所述采血部位在眼眶静脉和颌下静脉的交汇处，如图1所示；所述小鼠固定采用单手固定法，小鼠头颈部不能弯曲且要使小鼠的双眼向外突出。本发明对所述消毒的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的采血过程中的消毒方法即可，如采用酒精棉球擦拭采血部位。

对采血部位消毒后，本发明将柳叶刀垂直扎入采血部位，顺时针转动柳叶刀90°，拔出柳叶刀，收集血液。本发明的扎入要迅速。在本发明中，所述扎入的深度为4～8mm。本发明对所述柳叶刀没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的医用柳叶刀即可。所述柳叶刀的刀头长度范围为4～8mm，如4mm、5mm或8mm刀头。在本发明中，所述刀头的长度根据小鼠的重量来选择，具体地，在对25g左右的成年小鼠采血时优选用4mm刀头。找准采血部位，迅速垂直扎入，然后旋转针头90°拔出。本发明在拔出柳叶刀后立刻进行取血，取血量按实验需求优选为0.3～0.6mL，更优选为0.5mL。本发明对血液收集装置没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的血液收集装置即可。

在本发明中，采血过程要遵循无菌操作原则，保证血样的质量。

本发明对所述血液的收集方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的收集血液方法即可，如选用离心管直接在采血部位进行接取即可。

在本发明中，所述收集血液后优选还包括：对采血部位进行止血。在本发明中，所述止血的方法包括：采用灭菌干棉球压迫出血点30～60s，待采血部位不出血时，采血完毕。

下面结合实施例，对本发明提供的一种小鼠下颌下静脉采血方法进行详细的描述，但是不能将它们理解为对本申请保护范围的限定。

实施例1

在无菌操作平台上，选取刀头长度为4mm的医用柳叶刀，单手将25g的小鼠固定住，另一只手用酒精棉球擦拭采血部位，刀头插入前如图2a所示，将柳叶刀在采血部位迅速垂直扎入，采血部位如图1所示，深度即为刀头的长度4mm，刀头插入后，将刀头顺时针转动90°，拔出刀头，血液流出如图2b所示，用离心管在采血部位接住血滴0.5mL。用干棉球压住出血点60s，不出血时，采血完毕。柳叶刀和血液采集用离心管如图3a和图3b所示。采血后小鼠如图4所示。

实施例2

在无菌操作平台上，选取刀头长度为5mm的医用柳叶刀，单手将30g的小鼠固定住，另一只手用酒精棉球擦拭采血部位，用柳叶刀在采血部位迅速垂直扎入，采血部位如图1所示，深度即为刀头的长度5mm，刀头插入后，将刀头顺时针转动90°，拔出刀头，血液流出，用离心管在采血部位接住血滴0.6mL。用干棉球压住出血点40s，不出血时，采血完毕。

实施例3

采用实施例1的采血方法，采血10次，每只小鼠采血用时约为35～45s，平均每次(50±8)s内即可完成对一只小鼠单次采血的整个过程。操作熟练的实验人员，可以在更短时间内完成采血过程。本发明使用颌下静脉采血法对雌雄各10只小鼠进行采血操作，每只小鼠采血量范围为0.38～0.6mL，每只小鼠平均采血量可达(0.38±1.58mL)。所有实验小鼠均正常存活，采血时间短，且采血操作对小鼠出现的行为和精神无影响，小鼠能很快恢复活跃的状态；血样采集量大。

采用本发明采血方法，与常规眼眶采血法、眼球摘除采血法和剪尾采血法采血进行比较。从采血速度和采血量比较，运用本法均显著快于眼眶采血法、眼球摘除采血法和剪尾采血法，且采血量也明显大于上述各法并可重复采血。证明本发明采血方法更为简便、安全、快速。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。