一种由鲎细胞裂解液制备眼部护理液的方法与流程

本发明涉及眼部护理液技术领域，具体是一种由鲎细胞裂解液制备眼部护理液的方法。

背景技术：

眼睛及眼睛周围皮肤是非常稚嫩的，眼睛周围的皮肤特别柔细纤薄，并有许多褶皱，故眼周肌肤水分蒸发速度较快，同时眼周肌肤汗腺和皮脂腺较少，特别容易干燥缺水。而现代人们因为化妆、游泳、长时间面对电脑和手机、周围环境雾霾严重等多种外在境况的影响，使得眼睛及眼睛周围皮肤受到很大的影响，出现眼睛干燥、眼睛痒、眼部皮肤痒、眼部皮肤干燥、黑眼圈、眼袋、眼部浮肿、眼部皱纹等多种情况，而目前市面上的眼膏、眼霜等产品在保湿、清洁、抑菌去痒等方面还不涉猎，这也就不能满足目前人们的使用需要。

鲎，隶属节肢动物门arthropoda，是一种生活在海洋中的大型节肢动物,在早古生代的奥陶纪出现,至今已有4亿多年的历史,是动物界具有独特进化地位的“活化石”之一。其中东方鲎属中的东方鲎(又叫中国鲎)tachypleustridentatus分布于我国沿海的浙江、福建、台湾地区、广西和广东。鲎的血液能提取鲎试剂，后来又发现鲎素对真菌、流感病毒、口腔泡疹病毒及获得性免疫缺陷综合症病毒(hiv)有抗性。所以鲎是可大力开发的珍贵海洋药用动物资源。

鲎细胞裂解液中含有丰富的鲎素肽、sod、多种氨基酸、多种肽等成分。鲎素是1988年nakamurat.等从中国鲎血细胞碎屑里用酸提取法得到的一种17氨基酸且含2个二硫键的β-折叠结构的抗菌肽。鲎素抗菌肽主要存在于鲎血细胞里的小颗粒中，通过和细菌脂糖形成复合物，在低浓度下就能抑制革兰氏阴性及阳性细菌的生长。鲎素在低ph、高温下相当稳定，是一种很有应用潜力的抗菌活性物质。另外其本身就是氨基酸，具有修复、保健功效。sod(超氧化物歧化酶)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充sod具有抗衰老的特殊效果。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供鲎细胞裂解液的新用途，将鲎细胞裂解液应用于眼部护理领域，具体是提供一种由鲎细胞裂解液制备眼部护理液的方法。

本发明实现其技术目的所采用的技术方案如下：

一种由鲎细胞裂解液制备眼部护理液的方法，包括步骤如下：

第一步，鲎细胞裂解液的制备

(1)取一定量的鲎血细胞按1:1-1:15加入裂解液进行冻融裂解；

(2)裂解后，经离心得到鲎细胞裂解液；

第二步，鲎素肽冻干粉的制备

(1)取100份鲎细胞裂解液与0.1-3份赋形剂均匀混合；

(2)然后将上述混合溶液罐装到瓶中进行冻干，得鲎素肽冻干粉成品；

第三步，眼部护理液的制备

将上述鲎素肽冻干粉按1:1-1:300的比例加入到纯化水溶解液中，得鲎素肽眼部护理液。

而且，所述鲎素肽眼部护理液中鲎素肽冻干粉与纯化水的最佳比例范围为：1:10-1:200。

而且，所述第一步中步骤(2)的离心转数为3000-5000转/分。

而且，所述第二步的步骤(1)中的赋形剂为去除热源的乳糖。

而且，所述第二步的步骤(2)中冻干的具体操作为：在真空度为10pa的条件下，-50℃预冻1小时，然后程序升温，制品到达24℃，开启渗气阀，开始二次干燥，然后制品匀速升温到达31℃，破解真空，制品出仓。

而且，在100份的所述第三步的鲎素肽眼部护理液中进一步加入透明质酸钠0.1-10份和冰片0.1-5份。

本发明的优点和效果是：

1、本发明的鲎细胞裂解液(鲎素肽)为天然物质，绿色、天然；具有清洁抑菌的作用。

2、本发明产品除含有鲎素肽外，还含有多种氨基酸等营养成分，可以起到滋养、防皱、修复皮肤损伤的作用。

3、在本发明的溶解液中添加的透明质酸钠是高效锁水保湿剂，含有肌肤修复基团，赋予产品水润嫩滑的肤感；含有的冰片具有清肝明目功效。

4、本发明直接采用鲎血细胞裂解液裂解而成，方法简单易行，成分协同功效好，具有清洁、滋养、防皱、眼部保健功效，应用于眼部护理领域，具有极大的市场价值。

附图说明

图1为1:1比例纯净水稀释鲎素肽冻干粉在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图；

图2为1:5比例纯净水稀释鲎素肽冻干粉在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图；

图3为1:10比例纯净水稀释鲎素肽冻干粉在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图；

图4为1:15比例纯净水稀释鲎素肽冻干粉在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图；

图5为高纯水在金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌上的2分钟和20分钟抑菌试验的抑菌率测试照片图。

图6为1:1到1:300溶解比例的样品在2分钟时的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌抑菌率的曲线变化对比图。

具体实施方式

下面结合具体实施方案对本发明进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。

一种由鲎细胞裂解液制备眼部护理液的方法，该方法包括步骤如下：

第一步，鲎细胞裂解液的制备

(1)取一定量的鲎血细胞按1:1-1:15加入裂解液进行冻融裂解；

(2)裂解后，经离心得到鲎细胞裂解液；

其中，离心转数为3000-5000转/分；

第二步，鲎素肽冻干粉的制备

(1)取100份鲎细胞裂解液与0.1-3份赋形剂均匀混合；

(2)然后罐装到瓶中进行冻干，得冻干粉成品；

其中，所述赋形剂为去除热源的乳糖，所述冻干条件为-50℃预冻1小时，真空度10pa，然后程序升温，制品到达24℃，开启渗气阀，开始二次干燥，制品温度到达31℃，可以破解真空，制品出仓。

第三步，眼部护理液的制备

将上述鲎素肽冻干粉按1:1-1:300的比例加入到纯化水溶解液中，得鲎素肽眼部护理液。

在本发明的具体实施中，在100份所述鲎素肽眼部护理液中进一步加入透明质酸钠0.1-10份、冰片0.1-5份，使得该鲎素肽眼部护理液具有高效锁水保湿功能，清肝明目功效。

对上述鲎素肽冻干粉进行抑菌试验

第一类实验，将上述鲎素肽冻干粉分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌进行2分钟和20分钟的抑菌试验，实验步骤如下：

1)首先用营养琼脂做4支斜面，沙氏培养基2个斜面。每个菌两管—营养琼脂用于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，沙氏培养基用于白色念球菌。

2)制备磷酸盐缓冲液(pbs)，ph＝7.2，0.03mol/l的缓冲液：磷酸氢二钠十二水，7.13g；磷酸二氢钾，1.36g；加1l蒸馏水，121度灭菌15min备用。

3)从划线的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌平板上取菌，将其划在斜面上，将斜面放在37度生化培养箱中培养24h。

4)用2mlpbs分两次洗一个试管中的菌，两个试管用了4mlpbs将其全部洗出，制备菌悬液备用。

5)将想验证的样品—鲎细胞裂解液(鲎素肽)干粉，用注射用水1:1、1:5、1:10、1:15稀释，然后分装到两个试管中，与对比物高纯水组一起构成5种样液。

6)取菌悬液100ul滴于5ml样液中，开始计时，作用2min、20min各计时一次。2min、20min时各取0.5ml样液投入5mlpbs缓冲液试管中，充分混合得a。然后稀释做梯度，做2-4个梯度。从中取1ml样液加入到9mlpbs试管中，充分混合得b，从b中取1ml样液加入到9mlpbs试管中，依次类推。

7)然后将上述做的梯度吸0.5ml放入平板中，加入15ml40-50度的营养琼脂培养液或沙氏培养液，混合均匀后，将其放入37度48h做活菌计数。真菌的话要等待72h。

8)经计算2分钟的细菌抑菌率在85％以上，20分钟的抑菌率在77％以上；2分钟和20分钟的真菌抑菌率均在60％以上。

第二类实验是选取30名20-55岁之间的健康人群进行试用实验，记录他们的感受，观察使用后效果。

实施例1

鲎血细胞和裂解剂按1:10裂解冻融得到鲎血细胞裂解液，该裂解液的冻干粉与溶解液1:1混合得到试验样品，将该试验样品进行大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌试验，试验结果见表1，照片见图1、5。

实施例2

实验步骤与实施例1一致，所不同的是冻干粉与溶解液按照1:5比例混合得到试验样品。试验结果见表1，照片见图2、5。

实施例3

实验步骤与实施例1一致，所不同的冻干粉与溶解液按照1:10比例混合得到试验样品。试验结果见表1，照片见图3、5。

实施例4

实验步骤与实施例1一致，所不同的冻干粉与溶解液按照1:15比例混合得到试验样品。

试验结果见表1，照片见图4、5。

表1为纯化水、纯化水按1:1、1:5、1:10、1:15稀释鲎素肽冻干粉对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌的抑菌率。

表1

实施例5

实验步骤与实施例1一致，所不同的是选取冻干粉与溶解液的比例为1:1、1:5、1:10、1:15、1:20、1:50、1:100、1:200、1:300在2分钟时的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念球菌抑菌率的对比。试验结果见图6。

实施例6

一种鲎素肽眼部护理液，具体包括按质量份数构成的如下组份：

冻干粉：5份，纯化水95份。

选取20-55岁之间的健康人群(性别不限)为测试人群，先清洁双手和脸部、眼部皮肤，将眼部护理液倒入干净杯体5ml，然后将杯体扣在眼睛上，然后仰头持续20秒内按紧杯体，不让液体外流。每次使用后发现眼部皮肤湿润光滑，眼睛干涩缓解，连续使用30天后，发现眼部皮肤明显更光滑有弹性，小细纹消失，眼睛明亮、湿润。与使用普通眼霜相比，皮肤的湿润度增加、弹性增加，眼睛更舒服。

实施例7

一种鲎素肽眼部护理液，具体包括按质量份数构成的如下组份：

冻干粉：5份，纯化水5份。

选取20-55岁之间的健康人群(性别不限)为测试人群，先清洁双手和脸部、眼部皮肤，将眼部护理液倒入干净杯体5ml，然后将杯体扣在眼睛上，然后仰头持续20秒内按紧杯体，不让液体外流。使用后发现，与实施例6相比，冻干粉浓度增大为1:1，每次使用后发现眼部皮肤湿润光滑，眼睛干涩缓解，但因为冻干粉浓度大，30人中有2人感觉眼睛有刺激感，但仍在可接受范围。连续使用30天后，发现眼部皮肤明显更光滑有弹性，小细纹消失，眼睛明亮、湿润。与使用普通眼霜相比，皮肤的湿润度增加、弹性增加，眼睛更舒服。

实施例8

一种鲎素肽眼部护理液，具体包括按质量份数构成的如下组份：

冻干粉：5份，纯化水85份，透明质酸钠10份。

选取20-55岁之间的健康人群(性别不限)为测试人群，增加透明质酸钠后，发现每次保湿的时间增加20％，皮肤滑润感进一步增加。让人的触感更好。

实施例9

一种鲎素肽眼部护理液，具体包括按质量份数构成的如下组份：

冻干粉：5份，纯化水85份，透明质酸钠10份，冰片5份。

选取20-55岁之间的健康人群(性别不限)为测试人群，增加冰片后，发现眼睛有凉凉的感觉，更舒服，眼睛干涩、疼痛、瘙痒症状减轻的速度增加35％，使眼睛更舒适、明亮。

结合实施例5的抑菌效果及实施例6-实施例9的综合人体感受效果，确定所述鲎素肽眼部护理液中鲎素肽冻干粉与纯化水的最佳比例范围为：1:10-1:200。