本发明属于医药领域，特别是涉及一种基于发酵技术治疗皮肤炎症及粘膜修复的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
皮肤覆于人体的表面，是人体最大的器官和第一道防护屏障，它除了可以保护机体、抵御外界侵害外，还有感受刺激、调节体温、维持水盐代谢、修复及排泄废物等功能。随着社会的进步和人们生活水平的提高，人们的生活环境和习惯发生较大变化，使人体皮肤易受到各种刺激和致病因素的影响，而产生过敏反应或炎症病征，例如局部红肿、感染、银屑病、痤疮等，从而给人们的生活造成不便。粘膜破损是发生于口腔、舌、眼、外阴和肛门粘膜等部位的损伤，可与皮肤疾病伴发或独立存在。
目前，治疗皮肤病的常用药主要包括抗菌素制剂、抗组胺药、钙制剂、皮质激素类制剂及中药制剂等。其中，钙制剂和抗菌素制剂的应用最为广泛，但是钙制剂的疗效不很理想，而抗菌素类制剂无论口服还是外用制剂均主要用于皮肤感染患者，产生的副作用及使用禁忌均较多，应用较为局限。另外，抗组胺药及激素类药容易对肾脏功能造成损害，长期大面积使用会形成耐药性(例如对真菌性皮肤病)，容易造成患者的其他过敏性反应，容易使患者的皮肤萎缩，色素沉着，毛细血管扩张，造成诸多不良反应。
皮肤病用药的给药途径有外用、口服、注射等方式。在治疗皮肤病的中成药中，口服制剂均味苦且对胃肠均有一定刺激作用。中药注射制剂的安全性较差，容易引起全身不良反应。外用药物可直接接触到皮肤的损害部位从而发挥各种作用，局部药物浓度高，效果明显，且可避免口服在体内代谢过程中难免的不良反应，因而受到医生和患者的青睐，在皮肤病治疗和预防上占有十分重要的地位。
中药发酵技术是将中药提取液用优选的益生菌作为菌种，通过生物嫁接的方式，在体外模拟人体的肠道环境和中药成分在人体内的消化分解过程，对提取的中药有效成分进行生物学转化，将中药的大分子物质转化为能够被人体肠道直接吸收的小分子成分的方式。现代中药发酵制药技术是在充分吸收近代微生态学、生物工程学研究成果的基础上建立起来的。由于真菌含有丰富的酶类，如纤维素酶、木质素酶、淀粉酶、蛋白酶、脂酶等，以适当的中药为培养基或在培养基中添加适量的中药，利用微生物强大的分解转化能力，不仅可对中药中的纤维、糖类和蛋白等物质加以利用。而且在代谢过程中可能对中药中的一些成分进行转化，从而提高中药活性成分在复合制剂中的比例及效价，从而生产出包含多种活性成分且药效较简单组方配伍更佳的新型发酵制剂。
现有技术中，已公开了部分将中药发酵方法应用于皮肤病治疗药物中的技术。例如在中国专利申请cn201510067275中，用中药发酵制成了一种治疗痘痘的中药生物制品，培养基中含有牛黄、黄芩、金银花，用双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌发酵，经过对比试验治疗痘痘疗效显著好于煎煮法制备的制剂。在中国专利申请cn201610563403中，公开了一种中药发酵剂，由发酵菌、中药和糖类组成，该中药发酵剂具有防治皮肤疾病的作用。
但是，仍然需要开发对皮肤炎症等疾病具有更好治疗效果的中药制剂。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种利用中药发酵技术制备的可基于发酵技术治疗皮肤炎症及粘膜修复的中药组合物。对于本发明的中药组合物，是用微生物对含中药原料的培养基进行发酵制备得到，所述的中药原料由土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨组成。本发明的中药组合物具有消炎止痛、解热消肿、祛除疥癣疮毒的功效，可用于治疗各种皮肤疾病和粘膜损伤，包括皮肤炎症、细菌感染、真菌感染、牛皮癣、白癜风、痤疮、汗斑、牙龈发炎、口腔溃疡、湿疹、奶疹等。
为了达到以上目的，本发明通过以下的技术方案得以实施。
在本发明的第一方面，提供了一种基于发酵技术治疗皮肤炎症及粘膜修复的中药组合物，所述的组合物是用微生物对含中药原料的培养基进行发酵制备得到，所述的中药原料由土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨组成。优选地，所述的中药培养基由土人参4-25重量份、仙人草10-30重量份、樟树皮3-10重量份、枫树叶2-8重量份和枫杨4-15重量份组成。更优选地，所述的中药培养基由土人参14-20重量份、仙人草15-25重量份、樟树皮3-6重量份、枫树叶2-4重量份和枫杨4-10重量份组成。在本发明的中药组合物中，所述的微生物优选为灵芝菌。
本发明的中药组合物中，所使用的中药原料的来源及其功效如下：
土人参，为马齿苋科土人参属植物锥花土人参talinumpaniculatum(jacq.)gaertn.[t.patens(l.)willd.；t.crassifoliumauct.nonwilld]，以根和叶入药。秋、冬季挖根洗净、切片晒干；叶则随时可采，或秋季采集，晒干或蒸后晒干备用。性味甘、平。具有补中益气，润肺生津的功效。可用于气虚乏力，体虚自汗，脾虚泄泻，肺燥咳嗽，乳汁稀少；外用具有捣敷肿毒、解热、消肿退黄、消炎止痛的功效。
仙人草，为唇形科植物凉粉草mesonachinensisbenth.的全草。性味甘、淡、凉。具有祛暑、清热、利湿、解毒、凉血、降压的功效。主治中暑、感冒、糖尿病、痢疾、黄疸、肾炎、肌肉、关节痛、跌打肿痛、高血压病等。
樟树皮，为樟科植物樟的树皮，全年可采，鲜用或晒干。性味辛、温，味苦。樟树皮中含由左旋-表儿茶精，右旋-表儿茶精，原矢车菊素b1、b2、b7、c1及桂皮鞣质ⅰ，还含丙酸，丁酸，戊酸，已酸，辛酸，癸酸，月桂酸，肉豆蔻酸，硬脂酸，油酸及肉豆蔻烯酸等多种活性成分。具有祛风除湿、暖胃和中、杀虫疗疮的功效。主治风湿痹痛、胃脘疼痛、呕吐泄泻、脚气肿痛、跌打损伤、疥癣疮毒、毒虫螫伤等。
枫树叶，为金缕梅科植物枫香树liquidambarformosanahance的叶。性味苦、平。枫树叶具有祛风除湿、行气止痛的功效。内服可用于治疗肠炎、痢疾、胃痛；外用可治疗毒蜂螫伤、皮肤湿疹。
枫杨，为胡桃科枫杨属植物枫杨pterocaryastenopteradc.，以枝及叶入药。性味辛、苦、温。具有杀虫止痒，利尿消肿的功效。外用可治疗黄癣、脚癣等。
另外，灵芝菌为多孔菌科药用真菌，具有提高免疫力、抑制肿瘤、抗病毒、保肝和抗衰老作用，近年来灵芝菌丝体和发酵液被用于中药发酵技术。在本发明的中药组合物中，通过在含中药原料的培养基中对灵芝菌进行发酵，不仅促进了中药成分的转化，并且所述中药成分对灵芝菌的生长及活性成分的产生具有一定促进作用。
在本发明的第二方面，提供了用于治疗皮肤疾病和粘膜损伤的中药制剂，此类中药制剂包含上述的中药组合物和药学上可接受的辅料。常见的中药制剂及其适用辅料在本领域是已知的。本发明的中药制剂优选为外用制剂，包括洗剂、乳剂、软膏剂、喷剂等。
在本发明的第三方面，提供了本发明中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、培养基的制备：将土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨粉碎成80-100目的细粉，加入麸皮、豆粕、磷酸二氢钾、硫酸铵、碳酸钙和硫酸镁，然后置于发酵罐中，加水至含水量为50-70重量％，搅拌均匀，用食醋调节ph值为4.0-6.0，在115℃灭菌20-30min，冷却至室温，备用；
(2)、菌种培养液的制备：将灵芝菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为20-30℃、转速为80-120r/min的恒温摇床上振荡培养，至培养液中活菌的含量达到1.5×107-8cfu/ml时停止培养，备用；
(3)、发酵过程：将步骤(2)中的菌种培养液添加到步骤(1)的培养基中，于20-30℃恒温发酵48-120h；
(4)、精制：将步骤(3)得到的固体发酵物加入20-80％乙醇溶液浸提，过滤，滤液40-60℃减压浓缩至相对密度为1.12-1.26，即得。
为了进一步促进发酵和中药成分的生物转化，优选地，步骤(1)中的中药、麸皮、豆粕、磷酸二氢钾、硫酸铵、碳酸钙和硫酸镁的重量比为(4-9):(1-3):(1-2):(0.025-0.1):(0.05-0.2):(0.009-0.02):(0.01-0.018)。
进一步地，可将步骤(4)得到的浓缩浸膏加入药学上可接受的辅料制成外用制剂，包括洗剂、乳剂、软膏剂、喷剂等。
本申请人基于我国传统中医药理论的指导原则，用土人参解毒消肿、消炎止痛，与仙人草共为君药，以加强解毒止痛之功效。另外，樟树皮、枫树叶和枫杨能除湿止痒、杀虫疗疮、行气止痛，共为臣药，以助君药解毒消炎的功效。经灵芝菌发酵加工后，促进了中药活性大分子的分解和转化，可加快活性成分的吸收速度，从而提高疗效。
因此，在本发明的另一方面，提供了本发明的中药组合物或中药制剂在制备治疗皮肤疾病和粘膜损伤的药物中的应用。所述的皮肤疾病和粘膜损伤包括皮肤炎症、细菌感染、真菌感染、牛皮癣、白癜风、痤疮、汗斑、牙龈发炎、口腔溃疡、湿疹、奶疹等。本发明人意外的发现，本发明的中药制剂不仅可以治疗皮肤炎症和粘膜破损，并且还对痤疮、汗斑、牛皮癣、白癜风、湿疹、奶疹等具有缓解和抑制作用。
与现有技术相比，本发明的中药组合物具有以下优点：本发明的中药制剂克服了现有技术中已有西药常用药对肾脏功能损害大、易产生耐药性和过敏性的缺限，并避免了口服制剂的顺应性和胃刺激性、首过效应等问题，因此毒副作用小、使用安全方便；中药成分经过灵芝菌转化，由大分子变成小分子，吸收率显著提高，经长期临床和实践表明，本发明经中药发酵获得的中药组合物相较于传统提取方法，在治疗皮肤疾病和粘膜破损方面具有更好的治疗效果。
具体实施方式
本发明给出下面的实施例来进一步说明，但本发明的保护范围不限于这些实施例。
实施例1
中药原料组成：土人参15g、仙人草20g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g。
制备方法：将土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨粉碎成80目的细粉，加入麸皮19.2g、豆粕9.6g、磷酸二氢钾0.288g、硫酸铵0.96g、碳酸钙0.144g和硫酸镁0.115g，然后置于发酵罐中，加水至含水量为60重量％，搅拌均匀，用食醋调节ph值为4.2，在115℃灭菌25min，冷却至室温，备用；将灵芝菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为25℃、转速为100r/min的恒温摇床上振荡培养，至培养液中活菌的含量达到1.5×107cfu/ml时停止培养，备用；将菌种培养液添加到培养基中，于25℃恒温发酵96h；将固体发酵物加入40％乙醇溶液浸提，过滤，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.12，加入适量溶剂，混匀，灌装制成喷剂。
实施例2
中药原料组成：土人参18g、仙人草15g、樟树皮6g、枫树叶3g、枫杨4g。
制备方法：将土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨粉碎成80目的细粉，加入麸皮7.7g、豆粕15.4g、磷酸二氢钾0.385g、硫酸铵0.924g、碳酸钙0.116g和硫酸镁0.116g，然后置于发酵罐中，加水至含水量为50重量％，搅拌均匀，用食醋调节ph值为5.0，在115℃灭菌20min，冷却至室温，备用；将灵芝菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为20℃、转速为120r/min的恒温摇床上振荡培养，至培养液中活菌的含量达到2.5×107cfu/ml时停止培养，备用；将菌种培养液添加到培养基中，于20℃恒温发酵96h，至活菌的含量达到2.5×107cfu/ml时停止发酵；将固体发酵物加入60％乙醇溶液浸提，过滤，滤液40℃减压浓缩至相对密度为1.18，加入适量溶剂，混匀，灌装制成喷剂。
实施例3
中药原料组成：土人参15g、仙人草15g、樟树皮4g、枫树叶4g、枫杨8g。
制备方法：将土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨粉碎成100目的细粉，加入麸皮7.7g、豆粕15.4g、磷酸二氢钾0.385g、硫酸铵0.924g、碳酸钙0.116g和硫酸镁0.116g，然后置于发酵罐中，加水至含水量为70重量％，搅拌均匀，用食醋调节ph值为4.0，在115℃灭菌30min，冷却至室温，备用；将灵芝菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为30℃、转速为80r/min的恒温摇床上振荡培养，至培养液中活菌的含量达到2.5×107cfu/ml时停止培养，备用；将菌种培养液添加到培养基中，于30℃恒温发酵120h；将固体发酵物加入70％乙醇溶液浸提，过滤，滤液60℃减压浓缩至相对密度为1.22，加入适量溶剂，混匀，灌装制成洗剂。
实施例4
中药原料组成：土人参16g、仙人草16g、樟树皮5g、枫树叶3g、枫杨5g。
制备方法：将土人参、仙人草、樟树皮、枫树叶和枫杨粉碎成100目的细粉，加入麸皮19.2g、豆粕9.6g、磷酸二氢钾0.288g、硫酸铵0.96g、碳酸钙0.144g和硫酸镁0.115g，然后置于发酵罐中，加水至含水量为60重量％，搅拌均匀，用食醋调节ph值为4.6，在115℃灭菌30min，冷却至室温，备用；将灵芝菌接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为25℃、转速为100r/min的恒温摇床上振荡培养，至培养液中活菌的含量达到1.5×107cfu/ml时停止培养，备用；将菌种培养液添加到培养基中，于25℃恒温发酵120h；将固体发酵物加入60％乙醇溶液浸提，过滤，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.18，加入蜂蜡20g、甘油酸三油酸酯35g、甘油16g、凡士林12g、防腐剂0.5g，搅拌均匀，制成软膏剂。
试验例1：抗皮肤感染研究
1、试验动物：
豚鼠240-320g，雌雄各半。
2、豚鼠皮肤感染模型的建立：
将豚鼠背部毛脱去，脱毛面积为5×6平方厘米，并划1.5厘米长的“井”字型伤口，以划破真皮并渗血为标准。在豚鼠皮肤表面涂表皮金葡菌液，并在“井”字型伤口的中间部位皮内注入0.2ml原菌液，24h后观察应有红肿化感染，红肿面积大约3.0平方厘米，则模型建立成功。
3、给药样品：
本发明组：根据本发明实施例1的中药原料和方法制备得到的喷剂。
对照组1：由土人参35g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，根据本发明实施例1的方法制备得到的喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
对照组2：由仙人草35g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，根据本发明实施例1的方法制备得到的喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
对照组3：称取土人参15g、仙人草20g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，粉碎成80目细粉，加入2倍体积的30％乙醇溶液煎煮提取3次，每次1.5h，合并滤液，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.12，加入适量溶剂，混匀，灌装制成喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
空白对照组：不给药。
阳性对照组：红霉素软膏，每日1次，涂于红肿处，连续给药3天。
4、试验结果：
在连续给药3天后观察结果，并测量红肿面积和坏死结痂面积，结果见表1。
表1各组对豚鼠红肿面积和坏死结痂面积的影响结果
结果表明，本发明的药物组合物在喷涂于皮肤红肿处后的消肿效果和促进愈合效果要显著优于对照组1-3。
试验例2：抗粘膜损伤研究
1、试验动物：家兔1.8-2.2kg，雌雄随机挑选。
2、口腔粘膜溃疡动物模型的建立：在家兔的上口唇的齿面粘膜下注入空气0.05ml，再注入10％氯化钙溶液0.05ml，8-9小时后局部形成化脓性溃疡(3-5mm)，溃疡周围红肿，中央凹陷糜烂并可见少许脓液，则模型建立成功。
3、给药样品：
本发明组：根据本发明实施例1的中药原料和方法制备得到的喷剂。
对照组1：由土人参35g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，根据本发明实施例1的方法制备得到的喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
对照组2：由仙人草35g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，根据本发明实施例1的方法制备得到的喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
对照组3：称取土人参15g、仙人草20g、樟树皮5g、枫树叶2g、枫杨5g作为中药原料，粉碎成80目细粉，加入2倍体积的30％乙醇溶液煎煮提取3次，每次1.5h，合并滤液，滤液50℃减压浓缩至相对密度为1.12，加入适量溶剂，混匀，灌装制成喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
空白对照组：不给药。
阳性对照组：西瓜霜喷剂，每日给药3次，每次红肿处喷药1下，连续给药3天。
4、试验结果：
在连续给药3天后观察结果，并测量红肿面积和溃疡面积，结果见表2。
表2各组对家兔红肿面积和溃疡面积的影响结果
结果表明，本发明的药物组合物在喷涂于口腔粘膜受损处后的消肿效果和促进愈合效果要显著优于对照组1-3。
试验例3：典型案例
典型案例1：赵某，26岁，自述有过敏性皮炎约半年，经长时间激素类药物治疗并未根除病症，易反复发作，患者经常搔抓，丘疹逐渐增多，皮表变为暗褐色，有细碎脱屑。使用本发明中药喷剂1周后症状减轻，使用4周后病症根除，半年后随访，未见复发。
典型案例2：肖某，42岁，自述背部、腹部可见有发红的疹状小结，患处瘙痒难受，经诊断为神经性皮炎。使用本发明中药喷剂1周后症状明显得到控制，使用4周后病症根除，未见复发。
典型案例3：于某，18岁，自述患有湿疹两年，湿疹处瘙痒难耐，换季或饮食休息不当时搔痒面积扩大。使用本发明中药喷剂2周后症状明显得到控制，使用2个月后病症根除，随访未见复发。
典型案例4：顾某，55岁，自述近1年容易出现口腔溃疡，最长愈合时间达半个月，伴局部灼痛、便秘等。使用本发明中药喷剂4天后溃疡面明显缩小，使用2周后病症根除，随访复发次数减少。
典型案例5：冉某，30岁。自述反复发作2年皮疹，全身出现弥漫性潮红浸润，每日大量鳞屑脱落，诊断为银屑病。使用本发明中药喷剂2周后搔痒和脱屑现象明显改善，使用2个月后，病情基本上得到控制。用药期间未出现局部及全身不良反应。