皮肤抗衰组合物的制作方法

本发明涉及一种皮肤抗衰组合物，尤指一种含有多种生物因子的护肤产品，属于化妆品和生物技术领域。

背景技术：

随着年龄的增长，构成皮肤的胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸及糖蛋白的含量和排布、改变或减少。各种有害污染物引起的压力增加以及日光引起的活性氧的增加，加速了退化和变性，因此皮肤基质被破坏并变得越来越薄皮肤衰老症状出现。人们的皮肤变薄、皱纹增多、皮肤弹性下降、肤色变得暗沉、皮肤问题频繁出现，而且老人斑、雀斑及黑斑也随之增多。

随着美容整形市场的扩大，越来越多的人群选择应用激光祛斑、光子嫩肤等方法进行面部美容。皮肤激光美容术是通过光热作用进行皮肤治疗，通过产生高能量，准确聚焦，在人皮肤组织局部产生高能量，通过去除和破坏组织达到美容的目的。但是因为治疗选择不当、操作不当等原因造成术后并发症的人群在逐年增多。因操作不当会造成过多的组织损伤，严重的炎症反应，以及毛细血管怒张等等相反的效果。主要的副作用包括水肿、水疱、色素沉着、色素减退、毛细血管扩张、皮肤敏感性增高等等。

中国专利zl201010130670.7公开了“间充质干细胞生物除皱剂及其制备方法”该发明是一种除皱剂，由间充质干细胞、受体血浆、生长因子、胰岛素和透明质酸均匀混合而成。该发明成分复杂，含有血浆，而且是一种注射剂，需要专业人士操作，不能用于居家日常皮肤护理。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种适用于各种肌肤的使用方便，效果显著的皮肤抗衰组合物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种皮肤抗衰组合物，每10ml组合物由以下含量的成分组成：

优选的皮肤抗衰组合物，每10ml组合物由以下含量的成分组成：

进一步优选的皮肤抗衰组合物，每10ml组合物由以下含量的成分组成：

本发明中原辅料均购于正规化妆品原辅料供应商，干细胞分泌液是脐带来源的间充质干细胞培养得到的培养液的上清液，现有技术中已经公开了多种培养方法。间充质干细胞的来源既是自制，脐带来源的间充质干细胞的分离方法、细胞培养方法及细胞鉴定方法参见《人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定》该文献出自河北医科大学学报第36卷第一期。本发明中分离脐带及培养时均未添加抗生素。

本发明的间充质干细胞分泌液制备方法如下：选取脐带间充质干细胞(来源为健康产妇生产后的脐带)用生理盐水清洗一遍后接种到培养瓶中，加入购买的无血清干细胞培养液(产商：lonza)；第二天全部换新的无血清干细胞培养液，等细胞融合度达到80％以上时收集培养上清液；上清液在4℃下5000转/分钟离心30分钟，回收的上清液经过200目筛网过滤后收集备用，-80℃冰箱内保存。

将以上原料及其他辅料加入到无菌且可以搅拌的容器中，4℃充分搅拌，使各组分充分混匀，达到一个均质状态。本产品因为涉及到生长因子等活性成分，所以存放在4℃环境下效果会最佳。

本发明所述组合物为霜剂、精华液、面膜、乳液、凝胶、水剂或冻干粉剂型。各种剂型的制备方法均为常规方法。如需添加相应辅料，按本领域常规操作即可。

本发明所述的组合物可以用于以下用途，包括但不限于皮肤抗衰、皮肤去皱、提高肌肤弹性、改善肤色、缩小毛孔、提高皮肤保湿度、提高皮肤抗氧化能力、防辐射能力、抗过敏能力，促进皮肤斑痕淡化。

本发明各主要组分的功效如下：

间充质干细胞在体外培养过程中可以分泌出多种促进细胞生长的因子，主要因子如下：

肝细胞生长因子(hgf)：促进肝实质细胞等各组织细胞的增殖。

神经细胞生长因子(ngf)：促进神经细胞(知觉、交感神经节细胞)的增殖。

表皮细胞生长因子(egf)：皮肤、肺、角膜、气管上皮细胞的增殖。

成纤维细胞生长因子(fgf)：促进人成纤维细胞、胶质细胞、血管内皮细胞的增殖。

胰岛素样生长因子(igf)：软骨细胞、平滑肌细胞的增殖。

集落形成刺激因子(csf)：负责免疫细胞的粒细胞、巨噬细胞等干细胞的增殖。

各类白介素(il-1～il19)：促进免疫细胞(t细胞、b细胞、nk细胞)

间充质干细胞分泌因子经血液循环进入细胞组织，开始迅速补充细胞新陈代谢所需的全部营养，使人体老化的细胞及过氧化物等代谢垃圾开始代谢排泄，间充质干细胞分泌因子在体内完全、最大限度地发挥功效，人体受损细胞耙向修复、再生良好，同时，间充质干细胞分泌因子开始耙向激活休眠的干细胞，使干细胞新分化功能细胞活力旺盛，人体恢复并保持年轻健康态。间充质干细胞分泌因子和营养物质进入人体各个角落，其所有的营养成分完全被机体吸引，休眠干细胞被大量激活，细胞分化速度达到生长期的水平，全面修复、补充受损、老化、病变的细胞，为机体补充新鲜细胞并使组织器官恢复到最具有活力的状态。

透明质酸，基本结构是由两个双糖单位d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺组成的大型多糖类。与其它粘多糖不同，它不含硫。它的透明质分子能携带500倍以上的水分，为当今所公认的最佳保湿成分，广泛的应用在保养品和化妆品中。人类皮肤当中也含有透明质酸，在皮肤成熟和老化过程也随着透明质酸的含量和新陈代谢而变化，它可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂。

人体皮肤表层(角质层)水分含量约占15-30％，低于或高于此值均使人不适，会使皮肤干裂或水肿，从而使皮肤失去弹性，粗糙老化。而透明质酸作用于皮肤内部调理后，可在不同环境中自动调节，始终维持皮肤水分在25-30％，保持皮肤的湿润、清爽，使皮肤更富有弹性，起到抗皱防皱、延缓人全皮肤衰老、美容养颜的作用。透明质酸是人体真皮层的其中一种成份，具备保持水份的能力，份量更高达其本身重量的100倍，使用含有透明质酸的护肤品，可以改善干燥和已出现皱纹的肌肤，使其恢复原有的光滑和弹性，因此，透明质酸是改善干燥及老化肌肤的最理想产品。

水解胶原蛋白含有多种氨基酸，其中以甘氨酸最多，其次是丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、羟脯氨酸等，氨基酸总量占水解胶原蛋白的90％以上，其中强脯氨酸的含量高达11.8～12.6％。这些氨基酸是人类合成自身胶原蛋白的重要原料，可以维持皮肤和组织器官的形态和结构，修复各损伤组织。

对于因工作劳累，睡眠不足形成的皮肤晦暗无光、发黄、皮肤弹性差等皮肤衰老的不良症状；由于年龄、太阳辐射因素引起的皮肤松弛、下垂、皱纹、干燥等皮肤衰老现象；由于体内异常黑色素分泌旺盛，大量沉积皮肤表面，肌肤不能及时代谢出异常黑色素，形成各种色斑。如色斑、黄褐斑、雀斑、早期老年斑等；由于长期户外活动及皮肤保养不当使肤质受到损伤，过早出现细纹、皮肤干燥、脱皮、红肿、毛孔粗大等不良症状；由于内分泌功能紊乱，皮肤肤质差、皮肤发油、发暗，易长青春痘留下的色印、色素沉着等，都有很好的修复功效。

间充质干细胞分泌的因子用在化妆品当中可以提高皮肤抗氧化能力、防辐射能力、抗过敏能力，皮肤斑痕淡化，皱纹变浅，内外整体年轻化，具有抗衰老的功效。

表皮生长因子(egf)是一种小肽，是一种多功能的生长因子，能促进dna、rna和功能蛋白质的生物合成，能促进细胞外大分子的合成(如透明质酸、弹性纤维蛋白等)，增加皮肤含水量，进而增加皮肤弹性，滋润肌肤。表皮生长因子能刺激外胚层和内胚层起源的各种细胞，进入细胞分裂周期，启动细胞内一些重要功能基因活化、表达、分泌生物活性蛋白质等，促使胶原纤维呈线状排列，表皮细胞快速规则生长，使皮下真皮组织饱满、肌纤维排列整齐紧密，从而减少和消除皱纹。

成纤维细胞生长因子(bfgf)可以促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖。能够促进新血管形成，修复受损的内皮细胞。

本发明涉及到化妆品技术领域，提供了一种间充质干细胞分泌因子的精华液，而且还包括浓度范围为1.0～7.5ng/ml的表皮生长因子、浓度范围为2.0～9.0ng/ml的成纤维生长因子和浓度范围为200～400mg/ml的水解胶原蛋白。本发明的精华液可单独使用，也可以配合同系列其他产品一起使用。

本发明选用临床应用广泛的脐带间充质干细胞，安全性高。本发明选用无血清培养液，完全消除了血清引起的过敏现象和不良反应。处方成分的配比经过了反复实践筛选验证，能有效抗衰去皱，显著改善皮肤的衰老现象，同时避免了因营养过量给皮肤造成负担出现新的皮肤问题。

本发明组分不含防腐成分，而防腐剂的过量和不恰当使用会令表皮细胞发育不成熟，结构松散，以至于表皮层变薄，易受外界刺激，防御力下降；会损伤细胞dna，令皮肤渐渐失去弹性，容易产生松弛和细纹；而受防腐剂损害的皮肤细胞则会不断缺陷繁殖，令肤质越来越差，特别是敏感肌受到防腐剂的刺激后还会出现过敏反应，使用护肤品得到效果适得其反。

本发明还可以设计成小剂量真空包装，每个包装为一次用量(0.3～0.5ml)，洁面后直接涂抹于面部，这样既起到了抗衰护肤的效果，同时也避免了防腐剂给皮肤带来的刺激与伤害。

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明，并非对本发明的限制。凡是依照本发明公开内容进行的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。

附图说明

图1为皱纹分级图

具体实施方式

实施例1：制备间充质干细胞分泌液

一、原料

1、脐带间充质干细胞：

2、无血清干细胞培养液：lonza，产品名称为ultraculture，cat.12-725f，

无血清添加物：pall，产品名称ultroserg

二、制法

无血清添加物用20ml无血清干细胞培养液溶解后，按照1∶100的比例加到无血清干细胞培养液中，混匀备用，4℃保存。

选取脐带间充质干细胞用生理盐水清洗一遍后接种到t-225培养瓶中(接种密度3x10⁶)，加入无血清干细胞培养液(含有1％ultroserg)20ml，37℃，5％co2下培养；第二天全部换新的无血清干细胞培养液(含有1％ultroserg)30ml，等细胞融合度达到80％以上时收集培养上清液；上清液在4℃环境下高速离心5000转/分钟离心30分钟，回收的上清液经过200目筛网过滤后收集备用，-80℃冰箱内保存。

三、产品测定

用elisa的方法检测间充质干细胞分泌液中以下因子的含量(pg/ml)，试剂盒购于美国rd公司

实施例2：皮肤抗衰组合物

一、原料：

1、透明质酸：华熙福瑞达生物医药有限公司

2、水解胶原蛋白：广州珠烽进出口贸易公司

3、间充质干细胞分泌液：是实施例1得到的间充质干细胞分泌液

4、egf：赛默飞世尔科技(中国)有限公司

5、b-fgf：赛默飞世尔科技(中国)有限公司

6、纯净水

二、处方：

即每10ml组合物由以下含量的成分组成

二、制法：

将以上原料加入到无菌且可以搅拌的容器中，4℃下充分搅拌，使各组分充分混匀，达到均质状态。

本产涉及到生长因子等活性成分，4℃环境下存放效果最佳。

实施例3：皮肤抗衰组合物

一、原料：同实施例2

二、处方：每10ml组合物由以下含量的成分组成

三、制法：同实施例2。

实施例4：皮肤抗衰组合物

一、原料：同实施例2

二、处方：每10ml组合物由以下含量的成分组成

三、制法：同实施例2。

实施例5：皮肤抗衰组合物

一、原料：同实施例2

二、处方：每10ml组合物由以下含量的成分组成

三、制法：同实施例2。

实施例6：皮肤抗衰组合物

一、原料：同实施例2

二、处方：每10ml组合物由以下含量的成分组成

三、制法：同实施例2。

实施例7：效果检验

一、试验方法

1、试用人群：25～55岁，人数220人，女性200人，男性20人。65％以上受试者为混合型肌肤，20％左右受试者为干性肌肤，10％受试者为敏感肌，5％左右受试者为健康肌肤。以上受试者均是随机选出的志愿者，并未特意选定某一类型人群，也并未做区分，都是按照同样的试用方法和检测方法来进行试用和检测的。

2、试用方法：每位受试者领取1瓶50ml的精华液试用装(按实施例1方法制备)，每日早晚洁面后取少量精华液均匀涂于面部，坚持使用三个月。

3、检测方法：每位受试者在领取试用装前都会先对皮肤做一个简单的测试，如皮肤含水量、皮肤细腻程度、皱纹等级等。每位受试者我们都会进行后续的跟踪调查，在使用一周后、四周后、三个月后都进行测试，根据测试结果统计出本发明是否对对抗皮肤衰老有效果。

二、试验结果

1、面部皮肤含水量测试结果：

测试的方法：用皮肤含水量测试仪在受试者脸颊、额头、下巴分别取点进行测试求平均值。测试结果见表1

表1受试者皮肤含水量的比较

2、肤色改善测试结果：

测试方法：用皮肤测试卡来对每位受试者进行主观评价，每位受试者都以各自使用前的色号为基准，使用1周、四周、三个月后再进行测试与其基准进行比较。

表2受试者使用后皮肤色号提升的比较

3、皱纹等级评估结果：

皱纹肉眼主观评估，评估标准，根据日本香妆协会将肌肤老化状态分成了8个等级，见图1。

测试方法：每位受试者根据图1的皱纹分级进行主观评价

表3受试者使用后皱纹等级的比较

4、受试者综合感受评价结果：

受试者自我评估，从肌肤弹性、肤色、毛孔、皮肤保湿程度等方面综合评价。

表4受试者用后自我评价皱纹淡化、减少情况

表5受试者用后自我评价肌肤弹性提高情况

以上试用过程中未出现一例过敏现象，其中检测未得到改善和自我评价中认为无效果人群中75％以上为健康肌试用者，仅有10％为敏感肌试用者，其余15％为其他肌肤试用者。敏感肌试用者使用本发明产品均未出现皮肤泛红、瘙痒、刺痛及起痘等现象，说明本产品不会对敏感肌肤质群体产生刺激带来不良反应。