用于提高精子受精能力进而提高自然受孕几率的阴道营养液及其制备方法与流程

文档序号:12848801阅读:1095来源:国知局

本发明涉及阴道用营养液领域,具体而言,涉及用于提高精子受精能力进而提高自然受孕几率的阴道营养液及其制备方法。



背景技术:

当今社会,随着压力的增大以及环境污染等因素的影响,性功能障碍的比率也随之增加,这不仅仅表现在女性不孕,由于精子质量的下降,也造成了越来越多的男性不育。

据who数据统计,全球人均单位精子数从1970年的1亿个/ml,现已下降到约2000-4000万个/ml。近年来,我国少精症、弱精患者的数量明显上升,精子数量、精子活力、精子成活率下降趋势明显。中信湘雅精子库显示:2006年合格率为45.9%,2008年为41%,2010年至2013年为30%-40%,到了2014年降至17.9%,2015年为17.7%,2016年1-9月19.4%。据中华医学会生殖医学分会专家披露的数据显示,我国内地不孕不育的发生率由20年前的3%,已经增长到现在的12%,不孕不育的人数也超过4000万,接近发达国家水平,且未来状况更为堪忧。

采用医学辅助的方法以提高自然受孕率,一直都是生殖研究的重点所在,现有技术中也公开了多种用于提高受孕率的器械和药物,例如现有技术(cn201620812502.9)就公开了一种使用方便、体贴舒适且应用体位功能的助孕情趣垫;同时,现有技术(cn201610847335.6)也公开了一种以益母草、枸杞子、赤芍、乌药、黄芪、熟地,以及白酒为原料的助孕酒,该酒具有益肾调经的功效,可用于肾亏所致不孕;同样的,现有技术(cn201410298322.9)也公开了一种助孕汤,其以月季花、玫瑰花、丹参、当归、生地、白芍、柴胡、香附、苏梗、淫羊藿、鹿衔草、枸杞子等十多种药材配伍而成,主要针对女子月经不调,久不孕育,经行腹痛,血瘀闭经,积聚结块,肾阳虚,血虚,无排卵型“功血症”之症;进一步的,现有技术(cn201310032745.1)公开了一种由仙茅、淫羊藿(仙灵脾)、菟丝子、覆盆子、枸杞子、五味子、巴戟天、鹿角胶、肉苁蓉、熟地、当归、赤芍、淮山药、山茱萸(山萸肉)、丹参、紫河车、明日叶和鹿衔草所制成的调经助孕药物,该药物能够补肾助阳,温养冲任,促进女性卵泡发育,从而达到调经助孕的功效,能够有效治疗多囊卵巢综合征性不孕症。

虽然现有技术中对于提高自然受孕率做出了如上所述的多种研究和尝试,然而,现有技术中所提供的方案和方法所能够起到的,都是通过改变受孕姿势或改善人体机能从而间接提高受孕率的作用,对于如何直接提高精子在体外的活性,并通过促进精子运动进而提高受孕率的研究并不多见。

有鉴于此,特提出本发明。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种用于提高精子受精能力进而增加自然怀孕机率的阴道营养液,本发明阴道营养液直接作用于阴道,能够针对性的延长精子存活时间、增强精子运动能力、促进精子获能,提高自然性交后到达受精部位的精子数量,增加精卵结合的概率,从而提高怀孕机率。

本发明的第二目的在于提供一种所述阴道营养液的制备方法,该方法具有制备方法步骤少,操作简易,适于大规模工业化生产等优点。

本发明的第三个目的在于提供一种包含本发明阴道营养液的药物或者药物组合物。

为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:

一种用于提高精子受精能力进而提高自然受孕几率的阴道营养液,所述阴道营养液主要由以下组分制成:

氯化钠,氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌。

可选的,本发明中,所述阴道营养液的每升溶剂中,各组分用量如下:氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g和/或酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,硫酸锌0.1~0.5g;优选的,所述硫酸锌为七水合硫酸锌;所述乙二胺四乙酸四钠盐为乙二胺四乙酸四钠盐二水合物;所述氯化镁为六水合氯化镁;所述氯化钙为二水合氯化钙。

可选的,本发明中,所述阴道营养液的每升溶剂中,各组分用量如下:氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.3g,磷酸二氢钠0.03~0.05g,乳酸钠1.2~1.5ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.04g,山梨醇2~2.2g,碳酸氢钠0.1~0.3g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.02~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.4g,果糖0.3~0.8g,维生素e0.2~0.5g,硫酸锌0.1~0.3g。

可选的,本发明中,所述阴道营养液的每升溶剂中,各组分用量如下:氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.3g,磷酸二氢钠0.03~0.05g,乳酸钠1.5~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.04g,山梨醇2~2.2g,碳酸氢钠0.1~0.3g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.01~0.03g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.4g,果糖0.3~0.8g,维生素e0.2~0.5g,硫酸锌0.1~0.3g。

可选的,本发明所述阴道营养液的制备方法包括如下步骤:首先,向溶剂中加入氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,并混合溶解;或者,向部分溶剂中加入氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,并混合溶解,得到第一溶液;聚乙烯醇以剩余溶液溶解,得到第二溶液,然后将第一溶液和第二溶液混合;然后,加入氯化钠调节渗透压;调节ph;过滤除菌后分装,并密封包装,得到阴道营养液;优选的,所述溶剂为水;更优选的,所述溶剂为双蒸水。

可选的,本发明中,,所述阴道营养液中还进一步包括如下组分:聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶。

可选的,本发明中,所述阴道营养液的每升溶剂中,进一步所包含的组分,每升溶剂中的用量如下:氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g和/或酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,硫酸锌0.1~0.5g,聚维酮碘0.1~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~1×105iu。

可选的,本发明所述阴道营养液的制备方法进一步包括如下步骤:首先,向溶剂中加入氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶并混合溶解;或者,向部分溶剂中加入氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶并混合溶解,得到第一溶液;聚乙烯醇以剩余溶液溶解,得到第二溶液,然后将第一溶液和第二溶液混合;然后,加入氯化钠调节渗透压;调节ph;过滤除菌后分装,并密封包装,得到阴道营养液;优选的,所述溶剂为水;更优选的,所述溶剂为双蒸水。

可选的,本发明中,所述密封包装,可在惰性气体条件下,进行包装和密封;也可在真空条件下进行包装和密封;也可采用双层包装,即先在惰性气体条件下进行包装和密封,再在真空条件下进行包装盒密封。

可以在惰性气体中,进行密封和包装;也可在真空条件下进行密封和包装;也可采用两层混合密封包装,即先用惰性气体进行密封盒包装,在用真空进行密封盒包装。

进一步的,本发明也提供了包括本发明阴道营养液的药物或者药物组合物。

与现有技术相比,本发明的有益效果为:

(1)本发明营养液性质稳定,且对人体无刺激性,能够在阴道中较长时间留存,并能够提高进入阴道中精子的运动能力和获能、提高精子到达受精部位数量的作用,进而有效提高自然受孕率;

(2)本发明方法中所用到的原料价廉易得,且制备方法步骤简便,且无需复杂操作和昂贵的处理设备,适于大规模、工业化的生产。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。

有鉴于目前对于直接提高自然受孕率的研究并不多见,特提供一种通过提高精子受精能力,进而提高自然受孕几率的阴道营养液。具体的,本发明所述阴道营养液的原料如下:

氯化钠,氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌;

其中,氯化钠,氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,以及氯化钙作为缓冲体系,可以起到稳定阴道的ph环境的作用,而这也更有利于精子的存活及运动,同时在一定程度上帮助精子获能;

果糖是一种单糖,能够被精子利用,可以为精子运动提供能量,延长其存活时间,其作用机理参考如下:

硫酸锌:锌离子是精浆中正常成分,可以刺激阴道收缩,更有利于精子到达受精部位。根据相关文献,不孕不育症的精浆中锌离子含量不足,增加硫酸锌可以针对性的解决此问题;

维生素e:又名生育酚,可以明显提高繁殖功能;防止精子氧化;

本发明中,通过建立缓冲体系并增加营养功能成分,使得本发明阴道营养液能够提高现有精子到达受精部位的数量,并针对性的解决因为精子总数量不足、前向运动精子数(pr)不足等导致的难以正常怀孕问题;同时,也可以增强现有精子的运动能力,针对性的改善因为精子运动能力不足、弱精症等导致的难以正常怀孕问题;进一步的,还可以促进现有精子的获能,直接、具体的改善因为精子获能不足、无法获能等导致的难以正常怀孕问题。相较于传统的辅助药物或器械而言,本发明阴道营养液的作用方式更加直接,因而也能更加有效的促进自然受孕的成功率。

同时,本发明所述阴道营养液中,以所用溶剂为1l计(优选的,所用溶剂为水;更优选的,为双蒸水),各原料的用量可具体参考如下:

氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g和/或酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g;

优选的,所含原料和各原料用量如下:

氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g;

或者,氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g;

或者,氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g;

又或者,氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g;

更优选的,各原料用量为:

氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2386~0.3000g,磷酸二氢钠0.0300~0.0408g,乳酸钠1.3~1.4ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.200g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.0380~0.0500g,氯化镁0.1017~0.3000g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g;

或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2386~0.3000g,磷酸二氢钠0.0300~0.0408g,乳酸钠1.3~1.4ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.200g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.010~0.030g,氯化镁0.1017~0.3000g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g;

或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2370~0.3000g,磷酸二氢钠0.0408~0.0500g,乳酸钠1.868~2.000ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.2000g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.0380~0.0500g,氯化镁0.102~0.300g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g;

又或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2370~0.3000g,磷酸二氢钠0.0408~0.0500g,乳酸钠1.868~2.000ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.2000g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.010~0.030g,氯化镁0.102~0.300g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g。

进一步的,本发明所述阴道营养液还可以进一步包括以下组分:聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶;

即,本发明同样也提供了一种以氯化钠,氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,聚乙烯醇,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶为原料的阴道营养液;

其中,聚维酮碘(pvp-i):具有杀菌或抑制细菌生长的作用,避免病原微生物对精子的伤害。

葡萄糖:葡萄糖是生物体内新陈代谢不可缺少的营养物质。它的氧化反应放出的热量是人类生命活动所需能量的重要来源,可以给精子提供能量;

三磷酸腺苷(atp,adenosinetriphosphate)是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成,水解时释放出能量较多,是生物体内最直接的能量来源;可以给精子提供能量;

l-肉碱:在精子膜中有大量的多聚脂肪酸,可以敏感的感受到活化氧的变化,容易被活化氧破坏,产生应激损伤,加速精子的凋亡;l-肉碱能够有效的阻止活化氧的产生,保护精子不受氧化应激的破坏,进而提高精子的存活率;

维生素c:在生物体内,维生素c是一种抗氧化剂,清除体内自由基,保护精子。

菠萝蛋白酶:促进精液的液化。

同时,本发明进一步所提供的阴道营养液中,以所用溶剂为1l计(优选的,所用溶剂为水;更优选的,为双蒸水),各原料的用量可具体参考如下:氯化钠1~7g,氯化钾0.2~0.5g,磷酸二氢钠0.02~0.05g,乳酸钠1.2~2ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2~2.5g,丙酮酸钠0.02~0.05g,山梨醇2~2.5g,碳酸氢钠0.1~0.5g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.01~0.05g和/或酚红0.01~0.05g,氯化镁0.1~0.3g,氯化钙0.2~0.5g,果糖0.3~1g,维生素e0.1~0.5g,水合硫酸锌0.1~0.5g,聚维酮碘0.1~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~1×105iu;

进一步优选的,本发明进一步所提供的阴道营养液中,各原料的用量可具体参考如下:氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2386~0.3000g,磷酸二氢钠0.0300~0.0408g,乳酸钠1.3~1.4ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.200g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.0380~0.0500g,氯化镁0.1017~0.3000g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g,聚维酮碘0.2~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~5×104iu;

或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2386~0.3000g,磷酸二氢钠0.0300~0.0408g,乳酸钠1.3~1.4ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.200g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,乙二胺四乙酸四钠盐0.0380~0.0500g,氯化镁0.1017~0.3000g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g,聚维酮碘0.2~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~5×104iu;

或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2370~0.3000g,磷酸二氢钠0.0408~0.0500g,乳酸钠1.868~2.000ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.2000g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.010~0.030g,氯化镁0.102~0.300g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g,聚维酮碘0.2~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~5×104iu。

或者,氯化钠1.0000~6.6633g,氯化钾0.2370~0.3000g,磷酸二氢钠0.0408~0.0500g,乳酸钠1.868~2.000ml,4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐2.3830~2.5000g,丙酮酸钠0.0220~0.0400g,山梨醇2.1864~2.2000g,碳酸氢钠0.1680~0.3000g,聚乙烯醇0.1~0.3g,酚红0.010~0.030g,氯化镁0.102~0.300g,氯化钙0.2940~0.4000g,果糖0.5~0.8g,维生素e0.3~0.5g,水合硫酸锌0.1619~0.3000g,聚维酮碘0.2~0.5g,葡萄糖0.1~0.5g,三磷酸腺苷0.1~0.5g,l-肉碱0.1~0.5g,维生素c0.1~0.5g,以及菠萝蛋白酶1×104~5×104iu。

本发明所提供的阴道营养液的制备方法的步骤可具体参考如下:将氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,以大部分溶剂(溶剂位常温溶剂,温度为20~25℃)溶解,得到第一溶液;然后,将剩余溶液升温(升温至30~45℃)溶解聚乙烯醇,得到第二溶液,再将第一溶液和第二溶液混合,得到混合体系,并定容;

或者,将所用溶液加热至中温(30~45℃),并将除氯化钠之外的全部组分在溶液中溶解,得到混合体系,并定容;

然后,向所得混合体系中加入适量氯化钠,使得体系的渗透压力达到295~310mosm;

接着,在搅拌条件下,向体系中加入酸(优选的为盐酸溶液)或碱(优选的为氢氧化钠溶液),将体系的ph调节至接近中性,优选的至6.0-7.5;

然后,将调整ph后的体系以过滤器过滤除菌,优选的,过滤器的孔径为0.22μm;过滤后分装,优选的分装至分装瓶内;

最后,先在真空条件下,进行一次包装,然后密封;然后在惰性气体条件下,进行二次包装和密封,即得到本发明阴道营养液。

进一步的,针对于聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶等组分的阴道营养液,上述方法也要进行一定的调整,具体方法参考如下:

将氯化钾,磷酸二氢钠,乳酸钠,4-羟乙基哌嗪乙磺酸和/或4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,丙酮酸钠,山梨醇,碳酸氢钠,乙二胺四乙酸四钠盐和/或酚红,氯化镁,氯化钙,果糖,维生素e,硫酸锌,聚维酮碘、葡萄糖、三磷酸腺苷、l-肉碱、维生素c,以及菠萝蛋白酶以大部分溶剂(溶剂为常温溶剂,温度为20~25℃)溶解,得到第一溶液;然后,将剩余溶液升温(升温至30~45℃)溶解聚乙烯醇,得到第二溶液,再将第一溶液和第二溶液混合,得到混合体系,并定容;

或者,将所用溶液加热至中温(30~45℃),并将除氯化钠之外的全部组分在溶液中溶解,得到混合体系,并定容;

然后,向所得混合体系中加入适量氯化钠,使得体系的渗透压力达到295~310mosm;

接着,在搅拌条件下,向体系中加入酸(优选的为浓盐酸)或碱(优选的为氢氧化钠溶液),将体系的ph调节至接近中性,优选的至6.0-7.5;

然后,将调整ph后的体系以过滤器过滤除菌,优选的,过滤器的孔径为0.22μm;过滤后分装,优选的分装至分装瓶内;

最后,首先在惰性气体条件下,进行一次包装和密封;然后在真空条件下,进行二次包装,然后密封;得到本发明所提供的阴道营养液。

本发明阴道营养液可以单独使用,或者配合其他具有消毒等功效的药物或辅助器械等共同使用;因而,本发明实际上也提供了一种包含本发明阴道营养液的药物、药物组合物,或者用于提高自然受孕率的医疗体系。

实施例1

1.配制溶液:

用分析天平依次称取以下成份:0.2386gkcl,0.0408gnah2po4,1.4ml乳酸钠,2.3830g4-羟乙基哌嗪乙磺酸,0.0220g丙酮酸钠,2.1864g山梨醇,0.1680g·nahco3,0.0380g乙二胺四乙酸四钠盐二水合物(edta·4na·2h2o),0.1017gmgcl2·6h2o,0.2940gcacl2·2h2o,0.5000g果糖,0.3000g维生素e,0.1619gznso4·7h2o;

在1l烧杯中加入850ml常温二蒸水(25℃左右),放置在磁力搅拌器上,将转子放入烧杯中,启动磁力搅拌器搅动液体,加入如上称量的各组分,并混合溶解,得到第一溶液;

在搅拌条件下,将0.1g聚乙烯醇(pva)轻轻倒入30~45℃的100ml二蒸水中,充分混匀,得到第二溶液;

将第一溶液和第二溶液混合,得到混合体系,并定容至1l;

2.渗透压调试:

向定容后的混合体系中加入5.7041gnacl,并将体系的渗透压调节至295-310mosm;

3.ph值调试:

调试好ph计,将ph计测试探头放入上述混匀的试剂中,并在搅拌条件下,读取ph计上稳定后的数值,然后,加入高浓度hcl或naoh将ph值调节至7.2~7.4之间;

4.过滤除菌:

将配好的试剂放入超净工作台内,用0.22μm孔径的滤器过滤并分装上述试剂到分装瓶内;

5.包装密封:

首先在惰性气体条件下,进行一次包装和密封;然后在真空条件下,进行二次包装,然后密封;得到本发明所提供的阴道营养液。

进一步的,由实施例1方法所制备的阴道营养液可以直接作为相应的药物洗液使用,或者与其他药物配合并作为药物组合物使用。

实施例2

1.配制溶液:

用分析天平依次称取以下成份:0.2370gkcl,0.0408gnah2po4,1.868ml乳酸钠,2.3830g4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠盐,0.0220g丙酮酸钠,2.1864g山梨醇,0.1680gnahco3,0.010g酚红,0.102gmgcl2·6h2o,0.2940gcacl2·2h2o,0.5000g果糖,0.3000g维生素e,0.1619gznso4·7h2o,0.2g聚维酮碘(pvp-i),0.5000g葡萄糖,0.1000gatp,0.1000gl-肉碱;0.1000g维生素c,以及1×104iu菠萝蛋白酶10iu/ml;

在烧杯中加入950ml温度为30~45℃的二蒸水,然后在搅拌条件下,加入如上各原料,并搅拌混合溶解,得到混合体系,并定容至1l;

2.渗透压调试:

向定容后的混合体系中加入4.7014gnacl,将体系的渗透压调节至295-310mosm;

3.ph值调试:

调试好ph计,将ph计测试探头放入上述混匀的试剂中,并在搅拌条件下,读取ph计上稳定后的数值,然后,加入高浓度hcl或naoh溶液将ph值调节至7.2~7.4之间;

4.过滤除菌:

将配好的试剂放入超净工作台内,用0.22μm孔径的滤器过滤并分装上述试剂到分装瓶内;

5.包装密封:

采用先真空包装作为第一层包装;再充入惰性气体,作为第二层包装。

对比例1

1.配制溶液:

用分析天平依次称取以下成份:0.2386gkcl,0.0408gnah2po4,2.3830g4-羟乙基哌嗪乙磺酸,0.0220g丙酮酸钠,2.1864g山梨醇,0.1680g·nahco3,0.0380g乙二胺四乙酸四钠盐二水合物(edta·4na·2h2o),0.1g聚乙烯醇(pva),0.1017gmgcl2·6h2o,0.2940g,cacl2·2h2o,0.1619gznso4·7h2o;

在烧杯中加入950ml温度为30~45℃的二蒸水,然后在搅拌条件下,加入如上各原料,并搅拌混合溶解,得到混合体系,并定容至1l;

2.渗透压调试:

向定容后的混合体系中加入7.9041gnacl,将体系的渗透压调节至295-310mosm;

3.ph值调试:

调试好ph计,将ph计测试探头放入上述混匀的试剂中,并在搅拌条件下,读取ph计上稳定后的数值,然后,加入高浓度hcl或naoh溶液将ph值调节至7.2~7.4之间;

4.过滤除菌:

将配好的试剂放入超净工作台内,用0.22μm孔径的滤器过滤并分装上述试剂到分装瓶内;

5.包装密封:

采用先真空包装作为第一层包装;再充入惰性气体,作为第二层包装。

实验例:本发明阴道营养液对体外精子相关实验

1、标本采集与样本处理。

1.1标本采集:收集人类禁欲2~7天正常精液标本,年龄20-38岁,标本量23份,置37℃孵育箱内30-60分钟充分液化。

2.2样本处理:将液化后的精液于30分钟内检测。在超净台内充分混匀,之后平均分成4份于两个离心管内分别标记为试验组1、试验组2、试验组3和对照组。

试验组1内1:1添加待检测液(实施例1配制阴道营养液);

实验组2内1:1添加待检测液(实施例2配制阴道营养液);

实验组3内1:1添加待检测液(对比例1配制阴道营养液);

对照组采用原精液,不做任何处理。

均充分混匀后放置于37℃培养箱保存孵育;保存孵育1小时后检测相关指标;保存孵育2小时后进行检测相关指标。

2、本发明阴道营养液对于精子常规指标的相关数据检测。

2.1ph值测定:精液ph值的测定用ph计直接测定数值。

2.2单用伊红的精子存活率试验:

试剂准备:nacl,0.9%(w/v):将0.9gnacl溶于100ml双蒸水中;伊红y,0.5%(w/v):将0.5g伊红y(颜色指数45380)溶于100ml0.9%nacl中;

试验步骤:充分混匀精液标本;取5μl精液和5μl伊红溶液置于载玻片上,用移液器吸头混合、搅拌玻片上的样本;覆盖22mm×22mm盖玻片,静止30秒;再次混匀精液标本,取一份重复样本,与尹红溶液混匀,步骤同上。检查每张玻片,用负相差显微镜在200倍下观察。用试验室计数器,计数染色精子(死精子)和非染色精子(活精子)的数目。每份重复样本评估200个精子,以降低抽样误差。计算重复玻片活精子百分率的平均值和差异。

试验评定标准:活精子头部呈白色或淡粉红色,死精子头部呈红色或暗粉红色。

2.3应用低渗膨胀的精子存活率试验

试剂准备:用于诊断目的的膨胀液:0.735g枸橼酸钠和1.351gd-果糖溶于100ml纯水中。将溶液以1ml分装,冻存于-20℃。

试验步骤:解冻冻存的膨胀液,使用前充分混匀。取1ml膨胀液,置于一只加盖的微量离心管中,37℃加热5分钟。充分混匀精液标本,取100μl精液,加入膨胀液中。用移液管轻轻的吸进和排出,加以混匀。在37℃孵育箱中30分钟,然后取10μl加到洁净载玻片上,覆盖22mm×22mm盖玻片。重新混匀精液标本,取重复样本与膨胀液混合,按照如上步骤,孵育并制备另一张重复玻片。使用相差显微镜,在×200的视野下,检查每张玻片。借助实验室计数器,计数未膨胀(死的)和膨胀(活的)精子。每份样本重复评估200个精子,降低抽样误差。计算重复玻片活精子百分率的平均值和差异。

试验评定:发生膨胀的精子会改变精子形状,通过尾部卷曲来辨别活精子,评定所有尾部膨胀类型的精子为活精子。

2.4精子活力的试验:

试验步骤:在37℃评估精子活力,保温板预热10分钟,使温度保持恒定。制备1个20微米深的湿片,用×200倍的相差显微镜观察载玻片。

试验评定:观察和计数。记录pr(前向运动精子:精子主动的呈直线或沿一大圆周运动,不管其速度如何。),np(非前向运动精子:所有其他非前向运动的形式,如以小圆周泳动,尾部动力几乎不能驱使头部移动,或者只能观察到尾部摆动。),im(不活动:没有运动)的数据并分析。

2.5casa评估精子的活力试验:

试验步骤:先对casa分析仪(计算机辅助精液分析仪)进行正确的设置和调试。精液标本温度保持在37℃。精子浓度高的标本,取出一定量精液样本离心(16000g,6分钟),取得无精子的精浆;用无精子的精浆稀释最初的精液标本,使精子浓度低于50×106个/ml。

试验评定:记录vcl(曲线速率μm/s),alh(精子头侧摆幅度μm),bcf(鞭打频率hz),vsl(直线速率μm/s),lin(直线性,vsl/vcl),结果如下表1所示:

表1营养液对精子常规指标的影响

结果与分析:试验组1相对于对照组,在精子存活率、精子存活时间、精子运动能力指标中,数据优良;试验组2相对于对照组,在精子存活率、精子存活时间、精子运动能力指标中,数据优良。试验组3相对于对照组,在精子存活率、精子存活时间、精子运动能力指标中,数据不稳定,直接证明配方需要精益求精。

结论与分析:同样的精液样本,采用本发明的营养液保存孵育一段时间后,在精子存活率、精子存活时间、精子运动能力上,要优于不采取任何措施的原精液和不完善的阴道营养液。

原因与分析:本发明的营养液,可以调节ph值为精子适合生存范围;可以调节渗透压为精子适合生存范围;可以补充精子所需能量;可以一定程度上保护精子免受氧化干扰。

3、本发明阴道营养液对于精子形态学指标测定。

试验步骤:用巴氏染色程序,对试验组和对照组精液进行涂片处理。在1000倍油镜下用亮视野观察涂片。每张重复图片评估200个精子,降低抽样误差。借助实验室计数器,记录正常精子数目、头部异常精子数目、中段异常精子数目、尾部异常精子数目。对数据进行分析和评估,结果如下表2所示:

表2营养液对精子形态学影响

结果与分析:对照组、试验组1、试验组2、试验组3,均不会明显改变精子的形态学特征。但是相对来讲,在正常精子所占百分比中,试验组1和试验组2,优于对照组和试验组3。

结论与分析:同样的精液样本,采用本发明的营养液保存孵育一段时间后,正常精子的百分率,要优于不采取任何措施的原精液和不完善的阴道营养液。

原因与分析:正常精子在本发明的营养液中,因为适宜的生存环境,衰竭消亡的速度会变慢。

4、本发明阴道营养液对于精子获能及顶体酶活性指标测定。

4.1acp检测:取培养1小时和2小时的精液;1000r/min,离心1min,取精子悬浮上液10μl。采用磷酸苯二钠法检测acp活性。

4.2精子顶体酶活性检测:采用广州友宁公司的试剂盒进行检测。

第一步过滤和洗涤精液,去除精浆细胞,保留精子细胞。因为精浆细胞中还有蛋白酶反应抑制剂。第二步:用去垢剂底物溶解孵育精子,去垢剂能渗透精子细胞导致精子顶体粒蛋白和底物反应。精子前体蛋白将底物转化成带颜色的可溶性物质。第三步:以405-410nm波长的酶标仪测定精子样本的od值、对照od值,结合精子密度计算顶体酶活力指数,每百万精子的顶体酶活性,结果如下表3所示:

表3营养液对精子的获能及顶体酶活性影响

本实验证明:试验组1、试验组2、试验组3和对照组,均不会引起精子的顶体反应。

由如上表格的数据对比可知,本发明阴道营养液不会引起精子的顶体反应;而且,相较于对照组而言,经本发明阴道营养液处理后,能够有效提高精子的体外存活时间、活力以及获能,而这也能够进一步促进精子在自然条件下与卵子成功结合的几率。

本发明阴道营养液以缓冲成分和功能性物质为原料,能够直接作用于阴部,且无任何刺激性,并且还能够有效延长阴道内精子的存活时间,增强精子的运动能力,并促进精子获能,进而提高达到受精部位精子的数量和质量,提高自然受孕率。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

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