本发明涉及植物化学提取
技术领域：
，具体涉及一种小马泡提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
：小马泡(cucumisbisexualis)为葫芦科黄瓜属一年生匍匐草本植物的果实，别称“马包”、“马泡蛋儿”、“香瓜蛋儿”，为中国的特有植物。分布于我国的河北、山东、河南、江苏和安徽等地，资源丰富，产量宏丰，成熟后可食。查阅文献发现，有关小马泡在医药方面的研究较少，尤其在神经保护和减肥方面未见有相关报道。技术实现要素：本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，为了进一步开发小马泡的潜在药用价值，选取药食两用的植物——小马泡作为研究对象，采用现代提取技术对小马泡进行提取、分离得到一种提取物，并提供了其制备方法和应用，同时，本发明还对该提取物在神经保护和减肥方面进行了药理活性筛选研究，这对于从我国特有植物——小马泡中研制神经保护和减肥药物具有重要的理论价值。为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种小马泡提取物，所述小马泡提取物的提取方法包括以下步骤：1)取近成熟的小马泡，在温度45-50℃下烘干，粉碎至30-40目，用体积百分浓度为85-95％的乙醇溶液在温度95-100℃的条件下进行回流提取，合并滤液，45-55℃低温浓缩，得到小马泡总浸膏，备用；2)将步骤1)得到的小马泡总浸膏均匀分散在蒸馏水中，小马泡总浸膏与蒸馏水的体积比为1：1，静置24-26h，过滤除去水不溶物，得到滤液备用；3)在步骤2)得到的滤液中加入二氯甲烷连续萃取3次，滤液与二氯甲烷的体积比为1:1.5，合并二氯甲烷萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到二氯甲烷萃取层和水层一，备用；4)在步骤3)得到水层一中加入乙酸乙酯连续萃取3次，水层一与乙酸乙酯的体积比为1:1.3，合并乙酸乙酯萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到乙酸乙酯萃取层和水层二，备用；5)将步骤4)得到水层二中加入正丁醇连续萃取3次，水层二与正丁醇的体积比为1:1.2，合并正丁醇萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到正丁醇萃取层，备用；6)将步骤5)得到的正丁醇萃取层上ab-8大孔吸附树脂柱，采用体积浓度为15％至95％的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液是经过45-55℃低温减压蒸馏去溶剂后分别得到的4个馏分：a、b、c、d；7)将步骤6)得到的馏分c上100-200目的硅胶柱，采用(10:1:0.5)至(3:1:0.5)比例的氯仿-甲醇-水作为流动相进行洗脱，分别得到3个亚馏分：c-1、c-2、c-3；将亚馏分c-2依次上toyopearlhw-40柱，用体积百分浓度为95％的甲醇作为流动相进行洗脱，将洗脱液以45-55℃低温减压浓缩干燥，即得小马泡提取物。本发明的第二个目的是提供了上述一种小马泡提取物的制备方法，包括以下步骤：1)取近成熟的小马泡，在温度45-50℃下烘干，粉碎至30-40目，用体积百分浓度为85-95％的乙醇溶液在温度95-100℃的条件下进行回流提取，合并滤液，45-55℃低温浓缩，得到小马泡总浸膏，备用；2)将步骤1)得到的小马泡总浸膏均匀分散在蒸馏水中，小马泡总浸膏与蒸馏水的体积比为1：1，静置24-26h，过滤除去水不溶物，得到滤液备用；3)在步骤2)得到的滤液中加入二氯甲烷连续萃取3次，滤液与二氯甲烷的体积比为1:1.5，合并二氯甲烷萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到二氯甲烷萃取层和水层一，备用；4)在步骤3)得到水层一中加入乙酸乙酯连续萃取3次，水层一与乙酸乙酯的体积比为1:1.3，合并乙酸乙酯萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到乙酸乙酯萃取层和水层二，备用；5)将步骤4)得到水层二中加入正丁醇连续萃取3次，水层二与正丁醇的体积比为1:1.2，合并正丁醇萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到正丁醇萃取层，备用；6)将步骤5)得到的正丁醇萃取层上ab-8大孔吸附树脂柱，采用体积浓度为15％至95％的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液是经过45-55℃低温减压蒸馏去溶剂后分别得到的4个馏分：a、b、c、d；7)将步骤6)得到的馏分c上100-200目的硅胶柱，采用(10:1:0.5)至(3:1:0.5)比例的氯仿-甲醇-水作为流动相进行洗脱，分别得到3个亚馏分：c-1、c-2、c-3；将亚馏分c-2依次上toyopearlhw-40柱，用体积百分浓度为95％的甲醇作为流动相进行洗脱，将洗脱液以45-55℃低温减压浓缩干燥，即得小马泡提取物。本发明的第三个目的是提供了上述一种小马泡提取物在制备具有神经保护作用的药物中的应用。本发明的第四个目的是提供了上述一种小马泡提取物在制备具有减肥作用的药物中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的小马泡提取物及其制备方法和应用，是选取中国特有植物——小马泡的干燥果实作为原料，利用现代提取技术得到小马泡提取物，通过实验证明，该提取物在神经保护和减肥方面，均具有良好的效果；同时，本发明的原料来源丰富，制备方法简单易行，绿色环保，易于控制，所得提取物产率较高。附图说明图1显示为本发明提供的小马泡提取物的制备路线图。具体实施方式实施例1：2)将步骤1)得到的小马泡总浸膏均匀分散在蒸馏水中，小马泡总浸膏与蒸馏水的体积比为1：1，静置24-26h，过滤除去水不溶物，得到滤液备用；3)在步骤2)得到的滤液中加入二氯甲烷连续萃取3次，滤液与二氯甲烷的体积比为1:1.5，合并二氯甲烷萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到二氯甲烷萃取层和水层一，备用；4)在步骤3)得到水层一中加入乙酸乙酯连续萃取3次，水层一与乙酸乙酯的体积比为1:1.3，合并乙酸乙酯萃取液，45-55℃低温减压干燥，得到乙酸乙酯萃取层和水层二，备用；一种小马泡提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)取近成熟的小马泡9.0kg，在45-50℃下烘干，粉碎至30-40目，用22l体积分数为85-95％的乙醇溶液在95℃的条件下进行回流提取，合并滤液，低温浓缩(50℃)，得到小马泡的总稠膏(1.1kg)，备用；(2)将步骤(1)得到的总浸膏均匀分散在蒸馏水(总浸膏:蒸馏水＝1:1，v/v)中，静置24-26h，通过过滤除去水不溶物，得到滤液备用。(3)在步骤(2)得到滤液中加入二氯甲烷(滤液:二氯甲烷＝1:1.5，v/v)连续萃取3次，合并二氯甲烷萃取液并干燥，45-55℃低温减压干燥，得到二氯甲烷萃取层(112.6g)和水层，备用；(4)在步骤(3)得到水层中加入乙酸乙酯(水层:乙酸乙酯＝1:1.3，v/v)连续萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液并干燥，45-55℃低温减压干燥，得到乙酸乙酯萃取层(285.2g)和水层，备用；(5)将步骤(4)得到水层中加入正丁醇(水层:正丁醇＝1:1.2，v/v)连续萃取3次，合并正丁醇萃取液，低温(50℃)减压干燥，得到正丁醇萃取层(486.4g)，备用；(6)将步骤(5)得到的正丁醇萃取层上大孔吸附树脂柱(ab-8)，采用不同浓度(体积浓度分别为15％、25％、40％、95％)的乙醇进行梯度洗脱，洗脱液是经过低温(50℃)减压蒸馏去溶剂后分别得到4个馏分：a(86.5g)、b(109.7g)、c(165.0g)、d(68.7g)；(7)将步骤(6)得到的馏分c上硅胶柱(100-200目)，采用不同比例(10:1:0.5→5:1:0.5→3:1:0.5)的氯仿-甲醇-水作为流动相进行洗脱，分别得到3个亚馏分：c-1(43.8g)、c-2(68.4g)、c-3(35.3g)。将上述得到馏分c-2依次上toyopearlhw-40柱，用体积浓度为95％甲醇作为流动相进行洗脱，将洗脱液减低温(45-55℃)浓缩干燥，即得小马泡提取物(59.5g)。小马泡提取物的新医药用途：(1)神经保护活性：取铺满单层的pc12细胞，除去原培养液，加入5％fbs、5％马血清的dmem完全培养液，用吸管轻轻吹打使细胞分散完全，以5×104个/ml密度，每孔100μl接种于预先用多聚赖氨酸(0.1mg/ml)处理过的96培养板中，培养24h后即可用于实验。实验分为空白组、模型组和加药组。空白组给予完全培养基，鱼藤酮模型组是加入终浓度为4μm鱼藤酮的完全培养基，使其充分作用细胞48h；去血清模型组是换成无血清dmem培养基使其作用细胞48h；加药组则在造模的同时加入10μg/ml小马泡提取物，然后加入10μl5mg/mlmtt，作用4h后除去上清液，再加入150μldmso，在波长570nm测得的吸光度值表示存活细胞数，进而确定小马泡提取物的神经保护活性。小马泡提取物对pc12细胞损伤的影响，其具体筛选结果见表1(means士sd,n＝6)。表1序号剂量(m)去血清模型(％)鱼藤酮模型(％)对照组-100±4.4100±6.0模型组-60.8±10.3###73.9±13.8##加药组10-568.4±8.6*85.7±3.5**其中，##p<0.01,###p<0.001vs.对照组；*p<0.05,**p<0.001vs.模型组。从上述表1可以看出，小马泡提取物对去血清、鱼藤酮模型诱导pc12细胞损伤具有显著神经保护作用。因此，本发明涉及的小马泡提取物对于从中国特有植物——小马泡中发现具有神经保护作用的药物具有重要指导意义。(2)减肥作用：a.临床资料：根据国际公认的计算标准，体重指数(bmi)＝体重(kg)/身高2(m2)。如果bmi低于18.5，表明体重过轻；如果bmi在18.5-24.99，表明体重正常；如果bmi在20-25，表明体重适中；如果体重bmi在25-28，表明体重过重；如果bmi在28-32，表明肥胖；如果bmi高于32，表明非常肥胖。专家指出最理想的体重指数(bmi)为22。本发明采用自愿原则，随机观察了308肥胖症患者。其中，患者年龄在16岁—60岁之间，男性163人，女性有145人。使用时，每100毫升水中加入小马泡提取物3毫克,用温水冲服，1日2次，连服2个月，个别患者因不同情况连服至3个月。b.疗效评价标准：显效：连服小马泡提取物2个月后，体重减少了2公斤以上。有效：连服小马泡提取物2个月后，体重减少了0.5-1.0公斤。无效：连服小马泡提取物2个月后，体重未减少。c.临床疗效：经过临床试验研究发现，体重显著减少(显效)的有227人，占73.8％；体重减少(有效)的有78人，占25.3％；体重未减少(无效)的有3人，占0.9％，总有效率达99.1％。本发明根据使用过程和后期跟踪回访表明，使用本发明小马泡提取物均没有出现任何呕吐、腹泻和食欲减退等不良反应，并且也不存在停止服用后出现反弹的现象。同时，肥胖症患者长期服用小马泡提取物后，容光焕发、气色红润、身体通畅，各个脏腑器官的机能达到最佳状态，这表明本发明的小马泡提取物不仅具有很好的医疗作用，而且还具有养生保健的功效。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12