本发明涉及制药领域，具体涉及一种防治龋病的药物组合物，本发明还涉及该药物组合物的制备方法和用途。
背景技术：
龋病俗称虫牙、蛀牙，是细菌性疾病，可以继发牙髓炎和根尖周炎，甚至能引起牙槽骨和颌骨炎症。如不及时治疗，病变继续发展，形成龋洞，终至牙冠完全破坏消失，其发展的最终结果是牙齿丧失。龋病特点是发病率高，分布广。是口腔主要的常见病，也是人类最普遍的疾病之一，世界卫生组织已将其与肿瘤和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病。
目前公认的龋病致病原因是，致龋性食物糖(特别是蔗糖和精制碳水化合物)紧紧贴附于牙面，由唾液蛋白形成的获得性膜，这种获得性膜不仅得以牢固的附着于牙面，而且可以在适宜温度下，有足够的时间在菌斑深层产酸，侵袭牙齿，使之脱矿，并进而破坏有机质，产生龋洞。
龋病的预防和早期治疗，是龋病达到良好预后的关键。现今的临床用药多为进口药品多乐氟(高露洁公司生产)，此商品为美国fda认证的金标准商品，主要成分为5％的氟化钠，蜂胶，虫胶，增稠剂，香精等。
多乐氟因为纯进口，价格较高，且其ph值为4.5，酸性的药物对于口腔内使用需要小心保护粘膜等。实际使用效果并不理想。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种价格低廉，治疗效果好的防治龋病的药物组合物，以减少目前高成本的多乐氟的临床使用。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种防治龋病的药物组合物，其为壳聚糖、β甘油磷酸钠、氟化钠为主要成分制成的凝胶。
所述的药物组合物，其由以下方法制得：将壳聚糖用酸溶解制成壳聚糖饱和溶液；2)用去离子水配制50％w/v～60％w/v的β-甘油磷酸钠溶液；3)将氟化钠加入步骤1)制备的壳聚糖盐酸溶液，滴加步骤2)制备的β-甘油磷酸钠溶液，冰水浴下搅拌均匀，制备成壳聚糖氟化钠凝胶。
更具体地，其由以下方法制得：1)取壳聚糖，溶解于0.05mol/l的盐酸溶液，制备成壳聚糖盐酸饱和溶液，高温灭菌，冷却至常温备用；2)用去离子水配制56％w/v的β-甘油磷酸钠溶液；3)将氟化钠加入步骤1)制备的壳聚糖盐酸溶液，滴加步骤2)制备的β-甘油磷酸钠溶液，冰水浴下搅拌均匀，制备成壳聚糖氟化钠凝胶。
其中，所述凝胶中氟化钠的含量优选为5％。氟化钠的含量以5％为佳，根据实际情况和人群可以适当调整。
其中，所述壳聚糖的脱乙酰度为75％。脱乙酰度高低会直接改变溶液的溶解度及凝胶的温感变化，本发明所配制的药物在口内温度下成凝胶，同时可根据临床或生产与储存条件选用不同脱乙酰度的壳聚糖，形成系列产品。
本发明还提供所述药物组合物的制备方法，其包括如下步骤：将壳聚糖用酸溶解制成壳聚糖饱和溶液；2)用去离子水配制50％w/v～60％w/v的β-甘油磷酸钠溶液；3)将氟化钠加入步骤1)制备的壳聚糖盐酸溶液，滴加步骤2)制备的β-甘油磷酸钠溶液，冰水浴下搅拌均匀，制备成壳聚糖氟化钠凝胶。
更具体地所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：1)取壳聚糖，溶解于0.05mol/l的盐酸溶液，制备成壳聚糖盐酸饱和溶液，高温灭菌，冷却至常温备用；2)用去离子水配制56％w/v的β-甘油磷酸钠溶液；3)将氟化钠加入步骤1)制备的壳聚糖盐酸溶液，滴加步骤2)制备的β-甘油磷酸钠溶液，冰水浴下搅拌均匀，制备成壳聚糖氟化钠凝胶。
本发明所述的药物组合物在制备防治龋病药物中的应用。可以单独使用，也可以结合其他药物或者治疗方案使用。
本发明提供了壳聚糖和β-甘油磷酸钠在制备氟化物防龋化合物产品中的应用。本领域技术人员可以根据本发明的技术启示，开发出相关产品。
本发明提供的防治龋病的药物组合物，不仅成本比多乐氟更低，而且实验表明，其可以有效的抑制牙齿的酸蚀，并促进龋齿的再矿化。并且此组合物保存简单使用方便，适合临床广泛推广应用。
附图说明
图1为氟化钠标准液经氟离子选择电极测定氟离子标准曲线，标准曲线函数:y＝41.143x-66.667，线性相关指数r2＝0.9345。
图2为壳聚糖氟化钠凝胶释放曲线。
图3为釉质抗酸实验结果，其中第一排为多乐氟，第二排是壳聚糖氟化钠凝胶，第三排壳聚糖空白凝胶，第四排空白对照组。
图4为脱矿液中钙离子浓度各组均值比较，单位mg/l。
图5为壳聚糖氟化钠凝胶组sem结果(x1000)。
图6为壳聚糖氟化钠凝胶组sem结果(x1500)。
图7为壳聚糖空白凝胶组sem结果(x1000)。
图8为壳聚糖空白凝胶组sem结果(x1500)。
图9为多乐氟组sem结果(x1000)。
图10为多乐氟组sem结果(x1500)。
图11为空白对照组sem结果(x1000)。
图12为空白对照组sem结果(x1500)。
图13为eds检测各组f元素比例比较，单位％。
图14为eds检测各组p元素比例比较，单位％。
图15为eds检测各组ca元素比例比较，单位％。
具体实施方式
以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的前提下，对本发明所作的修改，均属于本发明的范围。
实施例1壳聚糖氟化钠凝胶的制备
原料：脱乙酰度75％的壳聚糖粉末，β甘油磷酸钠，氟化钠，盐酸
配制方法如下：
1.1溶液配制
1.1.1制备0.05mol/l的盐酸100ml；
1.1.2放入壳聚糖，室温搅拌24h，制备出饱和的壳聚糖盐酸溶液。离心机，去除多余的壳聚糖粉末，保留上清；
1.1.3壳聚糖上清液，至于广口瓶中，高压蒸汽灭菌30分钟，静置冷却到常温，放入四度冰箱备用；
1.1.4ph仪测定壳聚糖盐酸溶液的ph值；
1.1.5去离子水配制56％w/v的β-甘油磷酸钠溶液。
1.2壳聚糖氟化钠凝胶制备
1.2.1取2ml壳聚糖盐酸溶液，0.1894gnaf，逐滴滴加1.2mlβ-甘油磷酸钠溶液，在冰水浴下搅拌均匀，配制成5％w/w的壳聚糖氟化钠凝胶。
实施例2壳聚糖氟化钠凝胶相关实验
1.1溶液配制
1.1.1制备0.05mol/l的盐酸100ml；
1.1.2放入壳聚糖，室温搅拌24h，制备出饱和的壳聚糖盐酸溶液。离心机，去除多余的壳聚糖粉末，保留上清；
1.1.3壳聚糖上清液，至于广口瓶中，高压蒸汽灭菌30分钟，静置冷却到常温，放入四度冰箱备用；
1.1.4ph仪测定壳聚糖盐酸溶液的ph值；
1.1.5去离子水配制56％w/v的β-甘油磷酸钠溶液。
1.2壳聚糖氟化钠凝胶制备及检测
1.2.1取2ml壳聚糖盐酸溶液，0.1894gnaf，逐滴滴加1.2mlβ-甘油磷酸钠溶液，在冰水浴下搅拌均匀，配制成5％w/w的壳聚糖氟化钠凝胶，肉眼观察，倒置实验，基本物理性质检查；
1.2.2ph仪测定壳聚糖氟化钠凝胶的ph值；
1.2.3精确称取4.2gnaf，与100ml去离子水混合，配置0.1mol/l的标准氟化钠溶液，使用tisabⅱ缓冲，甘汞氟离子选择电极测定，氟离子浓度标准曲线；
1.2.4制备三份壳聚糖氟化钠凝胶样本，甘汞氟离子选择电极测定，氟离子的释放出的浓度。
结果
1.1壳聚糖氟化钠凝胶的制备
壳聚糖氟化钠凝胶常温下呈淡黄色粘稠清亮液体，ph值为6.98。放置在37度恒温箱内，3min初步凝固，10min后从恒温箱内取出，呈软白色果冻状凝胶，质软。取样测试壳聚糖氟化钠凝胶4h氟离子累积释放量所占比例70.22％。
1.2壳聚糖氟化钠凝胶释放率结果
氟化钠标准液经氟离子选择电极测定氟离子标准曲线如图1所示，图1标准曲线函数：y＝41.143x-66.667，线性相关指数r2＝0.9345。
取样测试壳聚糖氟化钠凝胶4h氟离子累积释放量所占比例70.22％，累积释放量0.133004714g。氟化钠释放曲线如图2所示。
壳聚糖氟化钠凝胶释放曲线显示的是壳聚糖氟化钠凝胶4h氟离子累积释放量，一般凃氟后会建议患儿四小时内不喝水不漱口不进食，所以壳聚糖氟化钠凝胶测取的是4h氟离子累积释放量。
2.1釉质抗酸实验
2.1.1配制0.1mol/l的乳酸溶液，常温测定ph值
2.1.2每一组的釉质片分别进行5ml，0.1mol/l乳酸溶液酸蚀5min，取出釉质片，用3ml去离子水冲洗，收集各样本的酸蚀溶液和冲洗液8ml
2.1.3溶液进行火焰原子吸收分光光度法检测溶液中钙离子的浓度。
结果
2.1肉眼观察
我们参考ekstrand增强肉眼光学检查视诊等级计分标准对各实验组釉质的酸蚀处理后的情况进行分析(图3)
表2-1ekstrand增强肉眼光学检查视诊等级计分标准
各组釉质片在经历了5min的酸蚀处理后，以ekstrand增强肉眼光学检查视诊等级计分标准(表2-1)评定，各组均表现为1级计分，潮湿牙面无明显异常，吹干5s后发现不透明的斑块。其中壳聚糖空白凝胶组和空白对照组表现的色泽较壳聚糖氟化钠凝胶组及多乐氟组要更白，通透性更差。
2.2脱矿液中钙离子浓度的检测
表2-2脱矿液中钙离子浓度单因素方差分析
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数据
结果如图4所示，表明各组之间的抗酸蚀能力不同，而使用了多乐氟的和壳聚糖氟化钠凝胶两组类似，说明两组凝胶均有有较好的抗酸蚀能力。
3.1釉质试件处理
3.1.1称取64.4g羧甲基纤维素钠颗粒，7.46ml乳酸，用1l去离子水充分搅拌24h，ph仪测定其ph值
3.1.2取出釉质片，用吸水纸吸干表面水分，全部侵没在乳酸羧甲基纤维素钠凝胶中，放入37℃恒温箱48h，制作早期龋模型
3.1.3从凝胶中取出釉质片，三用枪冲洗1min去除表面的凝胶后，置于去离子水4℃冰箱中备用
3.1.4取早期龋模型的釉质片，随机分成4组，三组分别进行药物涂布，均匀地涂上壳聚糖氟化钠凝胶，壳聚糖空白凝胶，多乐氟，另一组不处理作为空白对照。4h后用尖刀片去除药物，三用枪冲洗30s，吸干
3.2釉质试件ph循环实验
3.2.1去离子水配制1l含1.5mmcacl20.9mmkh2po44.7662ghepes的再矿化液，去离子水配制1l含1.5mmcacl20.9mmkh2po450mm乙酸的脱矿液。
3.2.2各组各釉质片每片进行ph循环处理，每次3h5ml脱矿液，21h5ml再矿化液，换液之间，用去离子水冲净30s，吸水纸吸干。经过7天的循环，取出釉质片，去离子水洗净，放入去离子水中4℃冰箱保存
3.3釉质试件再矿化检测
各组釉质片进行sem及eds测定，收集整理数据。
结果
3.1sem结果
四组选取统一放大倍率1000及1500倍观察
壳聚糖氟化钠凝胶组(图5、6)：釉质表面结构粗糙，孔隙大部分被新生的矿物质结晶所堵塞，结晶结构相对统一，能看到明显的结晶形态
壳聚糖空白凝胶(图7、8)：呈蜂窝状凹陷，大量的孔隙结构暴露，个别孔隙被结晶结构堵塞
多乐氟组(图9、10)：釉质表面粗糙，有散在的不规则结晶结构，同时也能观察到不少孔隙
空白对照组(图11、12)釉质表面形态不规则、粗糙，大量的孔隙结构，少数的结晶结构。
3.2eds检测结果(图表及附录一)
3.2.1f元素
表3-1
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数据
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数据
结果如图13所示，氟元素的含量为经过化学洗脱处理之后定植在釉质表面的氟，差异表明了，壳聚糖氟化钠凝胶与多乐氟都能在釉质表明释放大量的氟，氟的含量越高，能达到的抗龋蚀效果越好，再矿化能力也越强。
3.2.2p元素
表3-2
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数据
结果如图14所示，同样是经过酸蚀和再矿化之后，有更多的p元素沉积在釉质表明，说明壳聚糖氟化钠凝胶有更好地再矿化效果。
3.2.3ca元素
表3-3
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数据
结果如图15所示，ca的含量说明了釉质表明经过再矿化处理之后，ca的沉积量，釉质表面的量越高，说明再矿化效果越好。
f、p的元素比较均无统计学意义，ca元素的单因素方差分析有统计学意义，且组间比较壳聚糖氟化钠凝胶组高于其余各组，其余各组两两比较没有统计学差异。综合f、p、ca三种元素的统计，可以很好的说明，壳聚糖氟化钠凝胶和多乐氟一样有很好的再矿化效果，比单纯的壳聚糖凝胶和不做任何处理的样本比起来，有更多的元素沉积在釉质表面。
壳聚糖氟化钠凝胶使氟化钠以接近中性的药物形式进行使用；壳聚糖氟化钠凝胶处理后的乳前牙釉质，与金标准的多乐氟达到了一致的抗酸能力；再者壳聚糖氟化钠凝胶用于乳前牙早期龋模型经过ph循环的再矿化过程，展示了更好的治疗效果。所以壳聚糖氟化钠凝胶可以作为防治乳牙早期龋的药物应用于临床治疗。