一种止脱生发剂及其制备方法与流程

本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种止脱生发剂及其制备方法。

背景技术：

随着社会竞争增加及环境日益恶化，脱发的发生呈现日趋上升的趋势。全世界大约有50%的成年男子受到脱发的困扰。“中国脱发人群调查”数据表明，我国脱发人群约达3亿，其中男性脱发人数约2.3亿；中青年成了脱发人群中的“主力军”，许多80后甚至是90后的学生加入到了脱发行列，脱发更加年轻化。最新报告显示，压力已成中国一线城市25-45岁男性脱发元凶。快节奏的工作，高压力的生活，过重的学习，都会加重脱发现状。

在如此庞大的脱发群体中，脂溢性脱发人群占大部分。雄性激素是导致脂溢性脱发的主要原因。体内睾酮在5α-还原酶的催化作用下转变为双氢睾酮，双氢睾酮与毛囊上的雄激素受体结合活性最高，激活后的雄激素受体引起下游信号通路的活化最终导致脱发。

国内外用于治疗脱发的药品主要为西药，如米诺地尔，其经头皮吸收后可扩张头皮下血管，改善毛囊周围的微循环，减少毛囊周围炎症细胞浸润，从而使萎缩的毛囊增大并促进毛发的生长，使毳毛变成终毛；此外，非那雄胺是一种能抑制5α-还原酶的活性以阻止雄性激素合成的药物。但米诺地尔和非那雄胺主要是针对雄激素性脱发有较好的疗效，有一定局限性，且要长期用药，对人体会产生副作用。国内也有很多主要成分为中药的产品，但是由于其成分单一，没有从毛囊生理性生长的角度去解决问题，所以效果并不显著。近几年开始流行的植发技术，也是临床上治疗脱发的一种直接有效的方式，但对于脱发面积较大、毛发稀少的患者，也不能满足需求。

随着对毛囊微观结构及毛发再生机理研究的深入，人们发现毛发再生受到毛囊自身干细胞及毛囊周围干细胞微环境的综合调控。干细胞是一类具有自我复制，自我更新的原始细胞，具有向多种组织细胞分化的能力，在体内能通过分泌多种调控因子从而调节组织器官的正常生理代谢。因此，开发针对于毛囊部位干细胞微环境修复的再生产品成为治疗脱发药物的发展趋势。

中国专利cn200510048870.7公开了使用低传代人毛乳头细胞条件培养液制成的冻干粉具有诱导毛囊形成的能力，在治疗斑秃中有明显的疗效。但是在体外培养情况下，第6-9代以后细胞不再表现凝集性生长，诱导毛囊形成的能力也逐渐减弱并消失，所以即使成功分离毛乳头细胞，在培养状态下也无法长期维持毛乳头细胞的功能状态。而且由于人的毛囊标本不易获得，毛乳头细胞所在位置隐蔽，周围组织结构复杂，目前还没有形成一种高效、简洁的分离培养毛乳头细胞的方法，不利于规模化细胞培养。

中国专利cn201510792991公开了使用脂肪来源干细胞培养液和辅助药物制成的生发剂用于脱发的治疗，由于干细胞培养液不易储存，极易失去活性，如果在制作生发剂的过程中使其活性丧失，就达不到预期效果，而且直接使用培养液，不利于临床推广。

综上所述，国产中成药和进口西药均没有从毛囊干细胞及毛囊微环境角度去解决脱发问题，没有从根本上改善脱发问题并促进头发再生。外科植发手术虽可快速改善秃发的不良视觉，达到一定的美容效果，但是手术价格昂贵，大多需要多次移植才能达到理想的效果。毛乳头细胞培养液的生发效果显著，但是毛乳头细胞取材不易、分离培养困难。直接使用干细胞培养液容易失去活性，达不到治疗效果。所以，人们仍在渴求研究开发一种成本低、便于使用、且治疗效果好的止脱生发产品。

技术实现要素：

本发明实施例提供了一种止脱生发剂及其制备方法，不仅可以用于临床上脂溢性脱发的治疗，对斑秃、头皮烫染损伤均具有很好的治疗作用。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种滋养焕发精华液结合滋养焕发冻干粉的止脱生发剂的制备方法及应用，选用来源广泛且易于分离干细胞的脂肪组织，经体外干细胞分离、鉴定、扩大培养并条件刺激后收集细胞培养液，经培养液浓缩、冻干、质检，得到滋养焕发冻干粉；将侧柏叶提取物、苦参根提取物、当归根提取物、三七根提取物、白藜芦醇用甘油和水作为溶剂，溶解后得到滋养焕发精华液；用滋养焕发精华液溶解滋养焕发冻干粉，即为止脱生发剂，可用于临床上男女脂溢性脱发、斑秃、头皮烫染损伤等头皮问题的治疗。

本发明应用纳米微针和电穿孔促渗仪作为物理促渗方法，指导止脱生发剂的使用。

一种滋养焕发精华液结合滋养焕发冻干粉的止脱生发剂的制备方法及应用，其步骤如下：

步骤一：滋养焕发精华液的制备

取侧柏叶提取物3-8份、苦参根提取物2-7份、当归根提取物1-6份、三七根提取物1-6份，白藜芦醇1-6份，用甘油和水作为溶剂，溶解上述各种功效原料，使滋养焕发精华液中植物功效成分混合物的终浓度为5-10mg/ml。

本发明中，所述侧柏提取物可激活毛囊，还能激活黑素细胞，增强酪氨酸酶的活性，具有黑发的作用。当归提取物具有活血作用。苦参提取物有拮抗雄激素的作用。三七提取物有促进毛发生长的作用。近几年的科研研究表明，白藜芦醇有促进毛发再生的作用。

步骤二：滋养焕发冻干粉的制备

（1）adscs条件培养液的收集：对adscs进行条件刺激，后继续培养，收集培养到第三天的adscs条件培养液，贮存于4℃，于次日及时将条件培养液分装并贮存于-20℃。有效期为6个月。

（2）条件培养液的除杂浓缩：首先采用超滤浓缩技术对收集到的条件培养液进行除杂、一次浓缩与二次浓缩，最终得到二次浓缩液，即为生物活性因子冻干粉原液。

（3）生物活性因子冻干粉原液的过滤除菌：采用微孔滤膜对生物活性因子冻干粉原液进行过滤除菌。

（4）总蛋白浓度测定：采用bca法对生物活性因子冻干粉原液总蛋白浓度进行测定。蛋白浓度应为0.5-2.0mg/ml。

（5）ph值测定：采用ph计对生物活性因子冻干粉原液ph值进行测定。冻干粉原液ph应为6.5~8.0。

（6）添加冻干保护剂：以最后测得的总蛋白浓度为标准，再加相应比例的甘露醇、海藻糖和右旋糖酐40的混合物作为冻干保护剂。

（7）生物活性因子冻干粉原液的冷冻干燥：过滤后的液体进行分装，分装后冷冻干燥，得到冻干粉常温贮存备用。

本发明中，所述条件刺激可以是维生素ｃ、细胞因子、低氧、低剂量uvb四种方法中的一种或多种。条件刺激可使细胞发生应激反应，分泌更多的生长因子。

本发明中，所述adscs条件培养液含有多种细胞因子，例如vegf，pdgf，scf，tgf，hgf，igf等，均能够调节毛囊生长的微环境，激活毛乳头细胞，使毛囊进入生长期，促进毛发再生。

本发明中，所述微孔滤膜过滤孔径为0.22-0.45μm，目的是浓缩液过滤除菌，保留冻干粉原液中14kb-44kb的小分子细胞因子蛋白，除去大部分的无关蛋白。

本发明中，所述冻干保护剂，目的是保护冻干粉原液中的蛋白质在冻干过程中免受低温破坏。所加甘露醇占冻干粉原液的比例为10%-15%；海藻糖的为0.6%-1%；右旋糖酐40的为0.4%-1%。

本发明中，所述（6）、（7）步骤均要在无菌条件下进行。

步骤三：生发剂的使用

（1）止脱生发剂的配制：用一支滋养焕发精华液溶解滋养焕发冻干粉，充分摇匀，备用。

（2）擦拭消毒：首先用生理盐水对脱发患者头皮进行清洁，再用碘伏进行消毒。

（3）微针导入：将止脱生发剂均匀滴于患者头皮脱发部位，使用微针仪进行导入操作。每个患者用微针导入过程需30-40min。

（4）按摩促渗：微针导入操作完成后头皮残留的导入液再使用促渗仪在头皮导入部位进行按摩，以促进导入液的吸收，按摩10-15min。按摩完成后，用医用纱布擦拭头发上残留的导入液，待头皮部位的导入液完全吸收后，促渗按摩操作完成。

本发明中，所述生理盐水为医用0.9%的nacl注射液；所述碘伏为医用级消毒碘伏。

本发明中，所述微针仪为36针纳米微针。微针透皮给药机制是利用微针刺穿皮肤表皮的角质层进入皮肤特定深度，形成与皮肤垂直的微小通道，药物通过该通道可有效促进经皮渗透和在特定部位的蓄积。微针插入和移除后在皮肤表面形成微米级的的孔隙，孔隙可以便于药物制剂通过，从而在皮肤的局部作用或经过皮肤的毛细血管吸收。

本发明中，所述促渗仪为电穿孔导入仪，在高电压脉冲电流作用下皮肤角质层形成短暂可逆的水性孔道，增加药物的渗透率。

本发明中，将微针技术与物理促渗技术联合使用可以进一步加快药物进入皮肤表皮细胞的速度，增加药物的经皮吸收效果，且皮肤没有明显的刺激感和疼痛感。

本发明的有益效果：

（1）成分：滋养焕发精华液所含的植物提取物，本身具有育发功效，再结合滋养焕发冻干粉中的丰富的细胞因子成分，不仅能使头皮微环境恢复正常，还能激活毛囊干细胞，达到生发目的。

（2）工艺：采用超滤浓缩及冷冻干燥工艺制备的滋养焕发冻干粉，能是细胞因子的活性得到最大化的保存，且这种剂型方便产品的储存及推广使用。

（3）使用方法：本发明的止脱生发剂结合纳米微针与电穿孔促渗仪的使用，能最大限度的保证生发剂的吸收，且不损伤头皮。

（4）作用：本发明中的止脱生发剂，不仅可以用于临床上脂溢性脱发的治疗，对斑秃、头皮烫染损伤均具有很好的治疗作用。

附图说明

附图1为本止脱生发剂中滋养焕发精华液外观图；

附图2为本止脱生发剂中滋养焕发冻干粉外观图；

附图3为两位男性秃发患者使用本发明止脱生发剂前示意图；

附图4为两位男性秃发患者使用本发明止脱生发剂3个月后示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提供一种止脱生发剂的制备方法，具体包括：

步骤一：滋养焕发精华液的制备

取侧柏叶提取物8份、苦参根提取物5份、当归根提取物3份、三七根提取物3份，白藜芦醇2份，用甘油和水作为溶剂，溶解上述各种功效原料，使滋养焕发精华液中植物功效成分混合物的终浓度为5-10mg/ml。

如图1，为本止脱生发剂中滋养焕发精华液外观图，为淡黄色液体。

步骤二：滋养焕发冻干粉的制备

（1）adscs条件培养液的收集：对adscs进行条件刺激，后继续培养，收集培养到第三天的adscs条件培养液，贮存于4℃，于次日及时将条件培养液分装并贮存于-20℃。有效期为6个月。

（2）条件培养液的除杂浓缩：首先采用超滤浓缩技术对收集到的条件培养液进行除杂、一次浓缩与二次浓缩，最终得到二次浓缩液，即为生物活性因子冻干粉原液。

（3）生物活性因子冻干粉原液的过滤除菌：采用微孔滤膜对生物活性因子冻干粉原液进行过滤除菌。

（4）总蛋白浓度测定：采用bca法对生物活性因子冻干粉原液总蛋白浓度进行测定。蛋白浓度应为0.85-2.0mg/ml。

（5）ph值测定：采用ph计对生物活性因子冻干粉原液ph值进行测定。冻干粉原液ph应为6.5~8.0。

（6）添加冻干保护剂：以最后测得的总蛋白浓度为标准，再加相应比例的甘露醇、海藻糖和右旋糖酐40的混合物作为冻干保护剂。

（7）生物活性因子冻干粉原液的冷冻干燥：过滤后的液体进行分装，分装后冷冻干燥，得到滋养焕发冻干粉常温贮存备用。

如图2，为本止脱生发剂中滋养焕发冻干粉外观图，为白色粉末。

步骤三：止脱生发剂的使用

（1）止脱生发剂的配制：用一支滋养焕发精华液溶解滋养焕发冻干粉，充分摇匀，备用。

（2）擦拭消毒：首先用生理盐水对脱发患者头皮进行清洁，再用碘伏进行消毒。

（3）微针导入：将止脱生发剂均匀滴于患者头皮脱发部位，使用微针仪进行导入操作。每个患者用微针导入过程需30min。

（4）按摩促渗：微针导入操作完成后头皮残留的导入液再使用促渗仪在头皮导入部位进行按摩，以促进导入液的吸收，按摩15min。按摩完成后，用医用纱布擦拭头发上残留的导入液，待头皮部位的导入液完全吸收后，促渗按摩操作完成。

步骤四：临床应用

本发明在通过生物安全性鉴定后，挑选出2例年龄分别为24、32岁的脂溢性脱发男性作为生发剂使用患者，在患者知情同意的情况下，按照生发剂的使用方法，用于患者脱发处。定期拍照观察，3个月后观察生发效果。

脱发患者一，男，24岁，3年前忽然大量脱发，多次中药调理均无效。

脱发患者二，男，32岁，因工作繁重，心理压力大，患脱发2年余。

每位脱发患者在每周固定时间做滋养焕发滋养液的使用。

如图3，为两位男性秃发患者使用本发明止脱生发剂前示意图；图4为两位男性秃发患者使用本发明止脱生发剂3个月后示意图。

2例止脱生发剂治疗的脂溢性脱发患者中，2人均有显著疗效。在结合微针和促渗仪应用本发明生发剂治疗脱发患者2周后，即可明显看到原脱发部位头皮颜色转黑，头皮的油脂分泌也减少，说明患者脱发区的毛囊已逐渐激活，开始进入生长期。使用生发剂一个月后，脱发区有绒毛长出，颜色偏黄，均匀覆盖。adscs条件培养液的冻干粉结合植物提取物在治疗脂溢性脱发上明显优于纯中药复方或是西药制剂。我们对使用促渗仪的和未使用促渗仪的患者作对比，发现促渗仪能迅速促进患者头皮对生发剂的吸收，促渗效果明显。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。