本发明涉及生物制药领域，具体涉及环二肽在创面修复药物中的应用。
背景技术：
环二肽，又名2,5-二氧哌嗪，由两个氨基酸通过肽键环合形成，是自然界中最小的环肽。许多环二肽是动植物中生来就有的，也有一些是通过发酵或者是在食品加工过程中形成的。当前对环二肽的生物活性研究包括抑菌、抗癌、对心血管系统的作用、保护神经元及改善脑功能、脱瘾与解毒。例如，已有文献报道环(脯-丝)二肽具有抗菌作用，尤其对金黄色葡萄球菌有较明显的抑制作用；环(亮-脯)二肽对乳腺癌、宫颈癌和结肠癌有抑制作用，同时还有免疫活性、调节激素及调控能量代的作用，除抗肿瘤的活性外还具有抗滤过性病原体、抗生素活性，对金黄色葡萄球菌也具有较明显的抑制作用；环(脯-异亮)二肽具有抑制肿瘤活性及抗mrsa活性。
目前已有专利文本公开了少数几种利用合成方法制得的环二肽用于创面修复及消化道溃疡的技术方案，如cn105288585a和cn105294830披露了环脯-丙二肽在制备治疗皮肤创伤的药物中的应用，cn105311619披露了环脯-丙二肽在制备治疗消化道溃疡的药物中的应用，cn105622716披露了环丙-甘二肽和环丙-亮二肽用于急慢性胃溃疡的治疗应用。cn105622717披露了环脯-苯丙二肽、环脯-脯二肽、环脯-缬二肽、环脯-组二肽、环脯-酪二肽以及环脯-甘二肽用于创面治疗的应用。cn105622718披露了环酪-亮二肽用于胃溃疡的治疗应用。目前未有文献披露环二肽中环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽可用于创面修复，特别是有效治疗胃溃疡及皮肤溃疡。
胃溃疡是消化系统常见病、多发病，好发于胃小弯，尤以胃窦小弯侧胃角附近多见，其典型临床表现为慢性、周期性、节律性餐后定时的中上腹疼痛，疼痛性质不一，可隐痛或钝痛。约10％的患者可无腹痛，而以呕血或黑粪为首发症状，也可伴嗳气、反酸、恶心、呕吐、饥饿不适等其他消化道症状。现代医学认为胃溃疡的发生系胃黏膜侵袭性因子与胃黏膜自身防御/修复因素之间失衡造成。临床上常采用h2-r或者ppi类治疗，但停药后复发率高。
皮肤溃疡是临床上常见病、多发病，包括静脉曲张性溃疡、糖尿病性溃疡、压力性溃疡等，以下肢、足、臀部及手部为好发部位。其主要原因有烧伤、化学灼伤、皮肤外伤感染及长期压迫等原因所致。临床上常采用激光、微波及红外线等物理疗法、生物疗法及外用辅料等方式进行治疗。虽然取得了一定的效果，但对于部分难治性皮肤溃疡伤口愈合效果欠佳。
本发明通过从美洲大蠊中提取分离获得了六种环二肽，其中环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对创面修复的治疗有着优异的效果。
技术实现要素：
本发明提供了环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽中任意一种在创面修复中的应用。
本发明提供了环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽中任意一种在治疗急慢性胃溃疡、胃粘膜损伤药物中的应用或在治疗皮肤损伤如皮肤溃疡、皮肤损伤、皮肤炎症药物中的应用。
本发明还提供了一种由美洲大蠊提取分离制备环(脯-丝)二肽(pro-ser)、环(脯-天冬酰胺)二肽(pro-asn)、环(脯-亮)二肽(pro-leu)、环(脯-异亮)二肽(pro-lso)、环(脯-丙)二肽(pro-ala)、环(脯-缬)二肽(pro-val)中任意一种环二肽的方法：
步骤1：将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后浓缩得浸膏；
步骤2：将上述浸膏上大孔树脂柱层析，用水洗脱，将洗脱液浓缩得水部位样品；
步骤3：取水部位样品经mci柱层析，以水洗脱得到组分a；将组分a分为含较多氨基酸的a1组分和含较少氨基酸的a2组分；
步骤4：将a2组分经过lc-ms液质联用分离检测，得到化合物环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-丙二肽、环脯-缬二肽、环脯-异亮二肽、环脯-亮二肽。
在本发明的一个实施例中，步骤2中的大孔树脂柱为hp-20大孔树脂柱。
在本发明的一个实施例中，步骤3中的mci柱的填料类型为mcigelchp20p。
在本发明的一个实施例中，步骤1中，将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后减压浓缩得浸膏。
在本发明的一个实施例中，步骤2中，将所述浸膏旋干乙醇，用去离子水溶解后上大孔树脂柱层析柱。
在本发明的一个实施例中，步骤2中，将洗脱液浓缩再冷冻干燥得水部位样品。
在本发明的一个实施例中，步骤3中，结合tlc检测，通过茚三酮作为显色剂，根据tlc斑点个数将组分a区分为含氨基酸较多的a1组分和含氨基酸较少的a2组分；其中将tlc斑点数目小于等于5个的组分a作为a2组分，而其余的为a1组分；优选地，将tlc斑点数目小于等于3个的组分a作为a2组分，而其余的为a1组分。
在本发明的一个实施例中，步骤3中，tlc检测的展开剂为正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:1。
在本发明的一个实施例中，步骤4中，所述lc液相色谱条件采用的色谱柱选自：capcellpakc18mgll，bostonlunaclonec18，diamonsilc18,bostonlunaclone；优选地，所述lc液相色谱条件采用的色谱柱为bostonlunaclone。
在本发明的一个实施例中，步骤4中，所述lc液相色谱条件中流动相采用流动相a和流动相b；所述流动相a为0.06-0.3％甲酸水溶液或0.06-0.3％磷酸水溶液；优选地，所述流动相a为0.06-0.1％的甲酸水溶液；所述流动相b为乙腈或醇类溶剂；优选地，所述流动相b为甲醇。
在本发明的一个实施例中，步骤4中，所述lc液相色谱条件采用等度或梯度洗脱的方式；优选地，所述lc液相色谱条件采用梯度洗脱的方式，其中，所述梯度洗脱时所述流动相a与所述流动相b的体积比为90:10～5:95。
本发明还提供了一种美洲大蠊经提取分离制备环(脯-丝)二肽(pro-ser)、环(脯-天冬酰胺)二肽(pro-asn)、环(脯-亮)二肽(pro-leu)、环(脯-异亮)二肽(pro-lso)、环(脯-丙)二肽(pro-ala)、环(脯-缬)二肽(pro-val)中任意一种环二肽的方法：
步骤1：将美洲大蠊粗粉经乙醇浸提后减压浓缩得浸膏；
步骤2：将所述浸膏旋干乙醇，用去离子水溶解后上大孔树脂柱层析柱，用水洗脱，将洗脱液浓缩再冷冻干燥得水部位样品；
步骤3：取水部位样品经mci柱层析，以水洗脱得到组分a；通过茚三酮作为显色剂，结合tlc检测将组分a分为含氨基酸较多的部分a1组分和含氨基酸较少的a2组分；其中，将tlc斑点数目小于等于3个的组分a作为a2组分，而其余的为a1组分其中，tlc检测的展开剂为正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:1；
步骤4：将a2组分经过lc-ms分离检测分别得到化合物环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽、环脯-丙二肽和环脯-缬二肽。
在本发明的一个实施例中，上述步骤4中，
lc液相色谱条件为：
色谱柱：bostonlunaclone；
流动相采用表a的梯度洗脱程序；
其中，流动相a：0.1％甲酸水溶液，流动相b：乙腈
表a
其中，环脯-丝二肽保留时间为6.17±0.02min、环脯-天冬酰胺二肽保留时间为8.25±0.02min、环脯-丙二肽保留时间为10.38±0.02min、环脯-缬二肽保留时间为20.23±0.02min、环脯-异亮二肽保留时间为25.58±0.02min、环脯-亮二肽保留时间为27.38±0.02min。
本发明的上述环二肽既可以按照本发明的制备方法制得，也可通过已公开文献的合成方法制备。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：经动物模型实验的治疗效果证明，本发明所述的环(脯-丝)二肽，环(脯-天冬酰胺)二肽，环(脯-亮)二肽，环(脯-异亮)二肽对创面修复如皮肤损伤以及胃溃疡的治疗效果优异，优于对比例环(脯-缬)和环(脯-丙)二肽组及阳性对照组。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1由美洲大蠊同时制备六种环二肽的实施例
1)取美洲大蠊乙醇提取物400ml(约218克)旋干乙醇，用去离子水溶解减压浓缩至合适浓度后，未经过滤直接上柱体积为3.2l的hp-20大孔树脂柱层析，用水洗脱，减压浓缩洗脱液再冷冻干燥处理得到水部位(156g)。
2)将上述得到的美洲大蠊水洗脱部位35g经柱体积为380ml的mci柱层析(填料为三菱化学mcigelchp20p)，用水洗脱，于各个锥形瓶中接得水流分组分a(32g)。将组分a的各瓶以tlc检测，展开剂为正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:1，茚三酮显色，分为含氨基酸较多的a1组分(30g)和含氨基酸较少的a2组分(2g)。其中，将tlc斑点数目小于等于3个的组分a作为a2组分，而其余的为a1组分。分开合并。减压浓缩。
3)将上述得到的a2组分(2g)在如下色谱条件下结合ms质谱(lc-ms)按照极性大小分别得到化合物1环(脯-丝)二肽、化合物2环(脯-天冬酰胺)二肽、化合物3环(脯-丙)二肽、化合物4环(脯-缬)二肽、化合物5环(脯-异亮)二肽、化合物6环(脯-亮)二肽。
其中lc色谱条件如下：
色谱柱：bostonlunaclone(4.6mm×250mm，5μm)；
流动相a:0.1％甲酸，流动相b：乙腈，
采用梯度洗脱程序，见表a；
流速0.4ml/min；柱温40℃；进样量2μl；
表a
其中，化合物1环脯-丝二肽保留时间为6.17±0.02min、化合物2环脯-天冬酰胺二肽保留时间为8.25±0.02min、化合物3环脯-丙二肽保留时间为10.38±0.02min、化合物4环脯-缬二肽保留时间为20.23±0.02min、化合物5环脯-异亮二肽保留时间为25.58±0.02min、化合物6环脯-亮二肽保留时间为27.38±0.02min。
其中化合物1为白色粉末。该化合物1的esi-msm/z:正离子模式185[m+h]+。分子式：c8h12n2o3，分子量：184。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:1.04(3h,d,j＝7.0hz,h-5),2.28(1h,m,h-3),3.61(1h,d,j＝4.4hz,h-2),4.51(1h,m,ser-αh)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:172.0(pro-co),165.3(ser-co),60.0(ser-βch2),59.0(pro-αch),56.9(ser-αch),45.2(pro-δch2),28.0(pro-βch2),21.6(pro-γch2)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物1为环(脯-丝)二肽。
其中化合物为2为白色粉末。该化合物2的esi-msm/z:正离子模式212[m+h]+,234[m+na]+。分子式：c9h13n3o3，分子量：211。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:4.51(1h,m,ser-αh),1.04(3h,d,j＝7.0hz,h-5)，2.28(1h,m,h-3),3.61(1h,d,j＝4.4hz,h-2)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:174.2(nh2-co),171.6(pro-co),166.6(asn-co),59.1(pro-αch),51.8(asn-αch),45.5(pro-δch2),34.4(asn-βch2),27.6(pro-βch2),21.7(pro-γch2)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物2为环(脯-天冬酰胺)二肽。
其中化合物3为白色粉末。该化合物3的esi-msm/z:正离子模式169[m+h]+。分子式：c8h12n2o2，分子量：168。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:1.40(3h,d,j＝6.9hz,h-10),1.94(1h,m,h-5b),2.03(2h,m,h-4a,h-5a),2.33(1h,m,h-4b),3.53(2h,m,h-3),4.21(1h,m,h-6),4.27(1h,m,h-9)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:171.2(c-7),167.7(c-1),59.1(c-6),50.7(c-9),45.0(c-3),27.8(c-5),22.2(c--4),14.3(c-10)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物3为环(脯-丙)二肽。
其中化合物4为白色粉末。该化合物4的esi-msm/z:正离子模式197[m+h]+。分子式：c10h16n2o2，分子量：196。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:0.95(3h,d,j＝6.9hz,h-12),1.11(3h,d,j＝7.2hz,h-11),1.95(2h,m,h-4,10),2.01(1h,m,h-4),2.34(1h,m,h-5),2.51(1h,m,h-5),3.55(2h,m,h-3),4.06(1h,s,h-9),4.23(1h,t,j＝7.2hz,h-6)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:171.2(c-1),166.2(c-7),60.1(c-6),58.6(c-9),44.8(c-3),28.5(c-10),28.1(c-5),21.9(c-4),17.5(c-11),15.3(c-12)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物4为环(脯-缬)二肽。
其中化合物5为白色粉末。该化合物5的esi-msm/z:正离子模式211[m+h]+。分子式：c11h18n2o2，分子量：210。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:0.95(3h,t,j＝7.4hz,h-12),1.09(3h,d,j＝7.1hz,h-12),1.33(1h,m,h-11),1.45(1h,m,h-11),1.94(2h,m,h-4),2.05(1h,m,h-5a),2.19(1h,m,h-5b),2.34(1h,m,h-10),3.54(2h,m,h-3),4.09(1h,s,h-9),4.22(1h,m,h-6)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:170.7(c-7),166.1(c-1),59.9(c-6),58.6(c-9),44.8(c-3),36.6(c-10),28.1(c-5),24.0(c-11),21.8(c-4),15.9(c-13),11.1(c-12)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物5为环(脯-异亮)二肽。
其中化合物6为白色粉末。该化合物6的esi-msm/z:正离子模式211[m+h]+。分子式：c11h18n2o2，分子量：210。1h-nmr(d2o,400mhz)δ:0.98(6h,dd,j＝2.5,6.4hz,h-12,h-13),1.54(1h,m,h-11),1.91(2h,m,h-4),2.03(2h,m,h-10),2.32(1h,m,h-5),3.54(2h,m,h-3),4.15(1h,m,h-9),4.28(1h,t,j＝8.0hz,h-6)。13c-nmr(d2o,100mhz)δ:171.4(c-7),167.5(c-1),58.8(c-6),53.2(c-9),45.1(c-3),38.0(c-10),27.7(c-5),24.4(c-11),22.2(c-12),21.9(c-4),20.8(c-13)。以上波谱数据经与文献对照鉴定化合物6为环(脯-亮)二肽。
实施例2治疗胃溃疡的效果例
1、实验材料：
1.1样品：实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽
1.2实验动物：sd大鼠，体重：180-200g，雌雄各半，来源：上海斯西普尔-必凯实验动物有限公司；昆明种小鼠，体重：18-22g，雌雄各半，来源：上海斯西普尔-必凯实验动物有限公司。
1.3试验试剂：硫糖铝(南京白敬宇制药责任有限公司)、盐酸雷尼替丁(苏州第三制药厂有限责任公司)、无水乙醇、冰醋酸、戊巴比妥钠(国药集团)。
2、实验方法
2.1对无水乙醇致小鼠胃溃疡作用
km小鼠90只，随机分成空白组、模型组及实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽组、阳性对照组(盐酸雷尼替丁)(具体情况见表1)，各试验组给予相应的药物，各组小鼠给药10天，实施例1的环二肽各给药组给药剂量为15mg/kg，盐酸雷尼替丁组给药剂量为75mg/kg。第9天给药后禁食24h，自由饮水。每组的小鼠在末次给药3h后，所有小鼠给予0.2ml无水乙醇进行灌胃，1小时后处死动物，结扎幽门，1％甲醛固定，观察并评定溃疡指数和抑制率。以游标卡尺测量溃疡的最大长径和垂直于最大长径的最大宽径，二者的乘积即为溃疡指数。溃疡抑制率＝(平均模型组溃疡指数-平均实验组溃疡指数)/平均模型组溃疡指数×100％。
2.2对醋酸致大鼠胃溃疡模型的影响
sd大鼠90只，随机分成空白组、模型组及实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽1-6组、阳性对照组(硫糖铝)(具体情况见表2)，除空白组外，其余各试验组大鼠禁食12h后，乙醚麻醉下常规消毒皮肤，背部固定于鼠板，剖腹，暴露胃，将一内径7.0mm长3.0cm的玻璃管座放在脾胃部上面，向玻璃管中注入冰醋酸80μl，1min后用棉球吸净冰醋酸，并用生理盐水冲洗，以大网膜包裹烧灼部位，缓缓将胃送入腹中，分层缝合，术后细心喂养。术后第2日各给药组给予相应的药物，每天给药1次，连续给药10d。实施例1的环二肽各给药组给药剂量为10mg/kg，硫糖铝组给药剂量为100mg/kg。于末日给药后，处死动物，打开腹腔结扎幽门和贲门，摘取全胃，计算溃疡指数及溃疡抑制率。
溃疡指数＝溃疡最大直径×垂直于最大直径的最大宽径；
溃疡抑制率＝(平均模型组溃疡指数-平均实验组溃疡指数)/平均模型组溃疡指数×100％。
3、实验结果
3.1对无水乙醇致小鼠胃粘膜损伤的影响
表1可见，与模型组相比，各给药组均可以显著降低无水乙醇致小鼠胃粘膜损伤的溃疡指数(p<0.05)，其中环脯-天冬抑制效果最佳，具有极显著性差异(p<0.01)，抑制率为71.67％。给药10天后，各环二肽组的溃疡指数和抑制率与阳性药盐酸雷尼替丁组相比，治疗效果均明显优于阳性对照组。从表1中还可发现，与对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽相比，本发明的4种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对无水乙醇所致的慢性胃粘膜损伤具有更明显的保护作用。
表1对无水乙醇致小鼠胃溃疡的影响
注：与模型组比较：*p<0.05；**p<0.01；
与阳性对照组比较：#p<0.05，##p<0.01
3.2对醋酸致小鼠胃粘膜损伤的影响
表2可见，与模型组相比，各给药组均可以显著降低醋酸所致小鼠胃粘膜损伤的溃疡指数，其中环脯-天冬二肽、环脯-丝二肽、环脯-亮二肽作用明显，具有极显著性差异(p<0.01)。给药10天后，各环二肽组的溃疡指数和抑制率均优于阳性对照组硫糖铝组。表2可以看出，与对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽相比，本发明的4种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对醋酸所致的急性胃粘膜损伤具有更优的保护作用。
表2对醋酸致小鼠胃溃疡的影响
注：与模型组比较：*p<0.05；**p<0.01
与阳性对照组比较：#p<0.05
上述研究结果表明：本发明的环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对乙醇所致的慢性胃溃疡和醋酸所致的急性胃溃疡模型均具有较好的黏膜修复作用，与阳性对照组普通药物和对比例环脯-缬二肽、环脯-丙二肽相比，溃疡抑制率高，作用效果更显著。
实施例3治疗皮肤损伤效果例
1、实验材料：
1.1样品：实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽。
1.2实验动物：wistar大鼠，体重：180-200g，雌雄各半，来源：上海斯西普尔-必凯实验动物有限公司；昆明种小鼠，体重：18-22g，雌雄各半，来源：上海斯西普尔-必凯实验动物有限公司。
1.3试验试剂：湿润烧伤膏(汕头市美宝制药有限公司)、角叉菜胶(上海蓝华化学科技有限公司)、二甲苯(晶茂贸易有限公司)、醋酸地塞米松(华润三九医药股份有限公司)
2、试验方法：
2.1对大鼠创伤性皮肤溃疡模型的影响
wistar大鼠90只，随机分成空白组、模型组、实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽组和阳性对照组(湿润烧伤膏)(具体情况见表3)，除空白组外，其余各试验组大鼠腹腔注射10％水合氯醛0.3ml/100g，麻醉大鼠，背部净毛(3cm×2cm)，用打孔器在背中脊柱右侧旁1.5cm切割1个圆形溃疡(直径1.8cm，面积2.54cm2)，除去皮下组织至肌筋膜，止血后备用。各给药组于造模次日开始给药，共给药10天。分别于用药后第3、7、10天观察溃疡愈合情况及创面面积。
2.2对实验大鼠棉球肉芽肿形成影响
wistar大鼠80只，随机分成模型组及实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽组和阳性对照组(醋酸地塞米松组)(具体情况见表4)。将各试验组大鼠用乙醚麻醉，在背部切开一小口，用眼科镊将已经称重为20mg的灭菌棉球从小切口植入皮下，随即缝合皮肤，用碘液消毒后常规饲养备用。各给药组在手术次日开始给药，连续给药10d。给药结束后，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除周围脂肪组织，放烘箱中50℃烘干24h称干重。肉芽肿干重＝实验后棉球干重-实验前棉球重量。
2.3对小鼠二甲苯诱导耳肿胀模型的影响
km小鼠80只，随机分成模型组、实施例1的环脯-丝、环脯-天冬酰胺、环脯-亮、环脯-异亮、环脯-丙、环脯-缬二肽组和阳性对照组(湿润烧伤膏组)(具体情况见表5)。分别在小鼠右耳前后两面涂100％二甲苯致炎液0.02ml/只。30min后，在小鼠右耳肿胀部位涂抹对应的各组试验药物，左耳作为对比不进行处理。4小时后处死动物，立即剪下双耳，用8mm打孔器取相同部位耳片，在分析天平上称重。肿胀度＝右耳片重量-左耳片重量，肿胀率＝(右耳重-左耳重)/左耳重×100％。
3、实验结果
3.1对大鼠创伤性皮肤溃疡模型的影响
表3可见，与模型组比较，各给药组在用药第3、7、10天溃疡面积均显著减小，具有统计学差异(p<0.05，p<0.01)；与阳性对照组湿润烧伤膏相比，本发明的四种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对各给药组皮肤溃疡面积减小，大鼠创面疤痕颜色较浅，愈合速度更快。与对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽相比，本发明的4种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对创伤性皮肤溃疡愈合速度更快、愈合效果更佳。
表3对大鼠创伤性皮肤溃疡的影响
注：与模型组比较：*p<0.05；**p<0.01
3.2对实验大鼠棉球肉芽肿形成的影响
表4可见，与模型组比较，环二肽各给药组和醋酸地塞米松组均可降低棉球肉芽肿的干重。其中环脯-天冬、环脯-丝、环脯-亮和醋酸地塞米松组降低作用最为明显，具有极显著性差异(p<0.01)。研究结果表明：本发明的四种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽各给药组可抑制肉芽组织增生，具有明显的抗炎作用。与对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽相比，本发明的4种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对肉芽组织增生抗炎作用更明显。
表4对大鼠棉球肉芽肿形成的影响
注：与模型组比较：*p<0.05；**p<0.01
3.3对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
表5可见，与模型组比较，环二肽各给药剂量组和湿润烧伤膏组均可明显降低二甲苯所致小鼠右耳肿胀程度，具有极显著性差异(p<0.01)。结果表明：本发明的四种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽各剂量组可明显减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀率，具有一定的抗炎作用。与对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽相比，本发明的4种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽对耳肿胀程度抗炎作用效果更强。
表5对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
注：与模型组比较：*p<0.05；**p<0.01
综合以上结果，本发明所述的美洲大蠊提取物中四种环二肽环脯-丝二肽、环脯-天冬酰胺二肽、环脯-亮二肽、环脯-异亮二肽具有较好地促进创面愈合的功效，具有促进粘膜修复及抗炎的功效。对乙醇所致的慢性胃溃疡模型、醋酸所致的急性胃溃疡模型及大鼠创伤性皮肤溃疡模型均具有较好地治疗作用，并可以明显抑制肉芽组织增生及减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度，具有明显的抗炎作用。其中，环(脯-天冬)二肽、环(脯-丝)二肽、环(脯-亮)二肽相对于阳性对照组以及对比例1环脯-缬二肽和对比例2环脯-丙二肽对于急慢性胃溃疡以及皮肤损伤治疗效果明显；其中，环(脯-天冬)二肽、环(脯-丝)二肽组治疗效果更佳。