造血干细胞移植患者的处理的制作方法

背景技术

造血干细胞移植(hsct)即多能(multipotent)造血干细胞移植，这些多能造血干细胞通常为骨髓、外周血或脐带血来源。它可以是自体移植(使用患者自身的干细胞)或者是同种异体移植(干细胞来自供体)。这是一个血液学领域的医疗过程，是许多恶性或非恶性造血系统疾病(例如血液或骨髓癌症，如淋巴瘤或白血病)潜在的痊愈手段。移植的细胞可以未加改变或经遗传改造(如采用慢病毒或crispr)。在对恶性病患者实施hsct时，需在移植前对患者进行预备或预处理来破坏或抑制受体的免疫系统(如非清髓、部分或完全清髓处理)从而避免移植排斥并降低肿瘤负荷。这样的预处理可以是放疗和/或化疗。

以最小毒性递送(自体或同种异体)干细胞这一医疗需求尚未能满足，因为移植后死亡和致病中相当一部分与预处理毒性相关。然而，非清髓性预处理后递送干细胞存在移入失败的风险，导致整个移植过程最终无法生效。

非恶性病中不需要预处理的抗瘤效果。因此，需要采用清髓程度较低或免疫抑制性较低的预处理和/或限制与预处理相关的可能的后果，例如副作用。理想地，放疗和化疗可被新型无毒性方法彻底替代。

某些情形中宜采用少于植入通常所需的造血细胞进行移植。但采用较少hsc需要更高强度的预处理，而这样的预处理毒性更高且重建较慢。

造血干细胞移植后，植入速度对接受血液骨髓移植清髓预处理的患者具有重要且直接的影响，因为，血细胞减少(即血细胞数量的减少)，尤其嗜中性白细胞减少(嗜中性粒细胞水平低下)和血小板减少(血小板水平低下)每增加一天通常都会关系到死亡率和致病率的升高。这些死亡和致病缘于感染、出血以及所需红细胞和血小板输血支持。

改善植入，如加速植入，还能令患者更早出院和/或更快地术后恢复。

所以，医疗上亟需一种药学上有效的药物，其能够使得hsct对供体和受体都更安全，并能够扩大hsct受益患者群。还需要能够在对常规预处理不耐受的患者中实施hsct，例如，所述的不耐受是因为预处理会对此类患者造成严重甚至危及生命的后果，此类患者可为例如有代谢疾病的患者、高龄、低龄患者或有合并症的患者。也可能是就所患疾病性质而言没有必要承担常规预处理方案中化疗或放疗相关风险的患者，例如非恶性指征患者。

出人意料地，发现式(i)化合物或其药学上可接受的盐，尤其是krp203，显著提高hsc植入速度。所以，采用该化合物能够最大程度将血细胞缺乏的天数减至尽可能最短并/或允许采用较低剂量的细胞或较低强度的预处理。这还能够使得hsct对供体来说更容易、更安全，由此能够获得更多供体，实施更多移植，并满足更多有此需求的患者群。

技术实现要素：

本发明的第一种实施方式涉及一种改善(例如促进，又如加速)hsct(造血干细胞移植)患者体内造血干细胞(如嗜中性粒细胞)植入的方法，所述方法包括给予该患者有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，

其中，r是h或p(o)3h2。

本发明的另一实施方式涉及用于加速接受供体造血干细胞移植(hsct)的患者体内造血干细胞植入的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。

本文中，式(i)化合物或其药学上可接受的盐，特别是盐酸盐，选自：

和

本文中，krp203指

或其药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的盐”指保持本发明化合物的生物学效果和特性的盐，该盐一般没有生物学或其它方面的不利之处。在许多情形中，本发明的化合物能够因为存在氨基和/或羧基或类似基团而形成酸式和/或碱式盐。

本文中，日剂量指纯活性成分即式(i)化合物或其药学上可接受的盐如2-氨基-2-[4-(3-苄氧基苯硫基)-2-氯-苯基]乙基-丙-1,3-二醇盐酸盐每天的量。

本文中，对接受hsct所需预处理的患者而言的“预处理”、“经预处理”指用合适的方法(例如化疗和/或放疗)将骨髓和免疫系统基本摧毁。

预处理方案被分为高剂量(清髓)、降低强度和非清髓，依据的是国际血液和骨髓移植研究中心(cibmtr)于2006年骨髓移植联席会议期间召集的“降低强度预处理方案研讨会(reduced-intensityconditioningregimenworkshop)”。

本发明方法，例如改善或加速植入，还允许采用较低强度清髓或较低免疫抑制的预处理，并/或限制了可能与此类预处理方案相关的可能的后果如副作用。某些情形中，本发明方法甚至允许实施无预处理hsct。

本发明方法还可允许采用比其他方法实现植入所需更低剂量的造血干细胞进行移植。

根据本发明，实施造血干细胞移植的方法可允许采用低于其他方法所需的较少hsc而无需例如更高强度的预处理。

因此，本发明使得hsct对供体和受体来说都更安全，能扩大hsct受益患者群。本发明可以在对常规预处理不耐受的患者中实施hsct，例如，所述的不耐受是因为预处理处理会对这样的患者造成严重甚至危及生命的后果，这样的患者可为例如有代谢疾病的患者、高龄、低龄患者或有合并症的患者。本发明还可以对就其疾病性质而言没有必要承担常规预处理方案中化疗或放疗相关风险的患者(例如非恶性指征患者)实施hsct。由于本发明，hsct治疗可用于更大的患者群，尤其是因其整体健康状况、年龄和/或所患特殊疾病本无法受用该技术的患者。

举例来说，可采用以下技术：

非清髓性预处理(nma，例如“小-西雅图预处理(mini-seattleconditioning)”，例如氟达拉滨(fludarabin)或其他化疗药物，一般30mg/m²/天共三天，然后一天的全身照射(tbi)，一般1x200cgy/天；

降低强度预处理(ric，一般为flubu)；

清髓性预处理，(mac，一般为bucy或cytbi)；

或

例如高剂量化疗和全身照射(tbi)，一般按照据惯例实践(institutionalpractice)进行了适应性调整的国家操作指南实施，包括给予氟达拉滨，白消安(busulphan)。

以下用药方案仅为举例：

1)氟达拉滨，25mg/m²/天，静脉输注(i.v.)x3天(大致2-3天)，总剂量75mg/m²

2)白消安，0.8mg/kg/6h(大致2至4天)，

3)环磷酰胺，60mg/kg/天，静脉输注(i.v.)x2天(大致2天)，总剂量120mg/kg。为了降低cyc引起出血性膀胱炎的风险，患者还将接受大量液体灌洗和美司钠。

4)tbi大致在第8到第10天进行(hsct前的第-8天和第-1天)。tbi的建议剂量是200cgy，一日两次共三天，总剂量1200cgy。

发明详述

实施方式1记载一种加速接受供体造血干细胞移植的患者体内造血干细胞植入的方法，所述方法包括给予该患者有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐。

本文中，加速植入指：与不给予本文所定义的有效量式(i)化合物相比，在更短时间内实现(例如检测)细胞输注后的植入(例如检测植入首日)。

植入首日通常定义为连续3天血液中嗜中性粒细胞含量(据例如常规血检)≥500/μl的首日。

植入的时长还取决于移植前的预处理或没有预处理。若无krp203治疗，如果是完全预处理(清髓)，时长一般为细胞输注后约15至16天。

实施方式2记载用于加速接受供体造血干细胞移植的患者体内造血干细胞植入的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐。

实施方式3记载如前述实施方式中任一项所述的方法或化合物，例如krp203或其药学上可接受的盐，其中，所述患者首先接受预处理，例如清髓、降低强度或非清髓，例如清髓预处理，例如将患者骨髓基本全部摧毁。

实施方式4记载如实施方式3所述的方法或化合物，其中，所述预处理是高剂量化疗，包括选自氟达拉滨，白消安，甲氨蝶呤，环孢菌素a和环磷酰胺的一种或多种药剂。

实施方式5记载如实施方式3或4所述的方法或化合物，其中，所述预处理是按照国家操作指南实施的全身照射(tbi)。

实施方式6记载如实施方式3至5中任一项所述的方法或化合物，其中，造血干细胞移植(hsct)在预处理之后实施，例如预处理后立即实施，或预处理后0-1天，或预处理后1-8天，或预处理后1-10天。

实施方式7记载如实施方式3至6中任一项所述的方法或化合物，其中，用式(i)化合物处理患者先于预处理5天开始，尤其是先于预处理3天，例如预处理前1天。

实施方式8记载如前述实施方式中任一项所述的方法或化合物，例如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐，其中，所述患者在细胞输注前接受非清髓性预处理或者不接受预处理方案，例如，所述患者患有非恶性病、非血液病、低龄、高龄(如55岁以上)或有合并症。

实施方式9记载一种对有此需要的患者实施造血干细胞移植(hsct)的方法，其中，给予患者式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐)，其中所述患者移植前未接受预处理方案或接受了非清髓预处理，所述患者可选为非血液病患者。

实施方式10记载对有此需要的患者实施造血干细胞移植的方法，所述患者接受来自供体的细胞，所述方法包括给予所述患者一定数量的供体细胞，该数量低于不给予式(i)化合物所需达50％，例如低于不给予式(i)化合物所需达40％，例如低于不给予式(i)化合物所需达30％，例如低于不给予式(i)化合物所需达20％，例如不给予结构式(i)化合物所需达10％。可选性地，患者在移植前接受预处理方案，例如非清髓预处理方案。

实施方式11记载对有此需要的患者实施造血干细胞移植的方法，所述患者接受来自供体的细胞，所述方法包括给予所述患者一定数量的cd34细胞，该数量介于约1x10e6个细胞/kg受体体重至约9x10e6个细胞/kg受体体重，例如约1x10e6个细胞/kg受体体重至约8x10e6个细胞/kg受体体重，例如约1x10e6个细胞/kg受体体重至约7x10e6个细胞/kg受体体重，例如约1x10e6个细胞/kg受体体重至约6x10e6个细胞/kg受体体重，例如约1x10e6个细胞/kg受体体重至约5x10e6个细胞/kg受体体重，例如约1x10e6个细胞/kg受体体重至约4x10e6个细胞/kg受体体重。可选性地，患者在移植前接受预处理方案，例如非清髓预处理方案。

实施方式12记载对有此需要的患者实施造血干细胞移植的方法，所述患者接受一定剂量的来自供体的细胞，该剂量约为1x10e6个细胞/kg受体体重，或约2x10e6个细胞/kg受体体重，或约2x10e6个细胞/kg受体体重，或约2x10e6个细胞/kg受体体重或约5x10e6个细胞/kg受体体重。可选性地，患者在移植前接受预处理方案，例如非清髓预处理方案。可选性地，患者在移植前接受预处理方案，例如非清髓预处理方案。

实施方式13记载如前述实施方式中任一项所述的方法，其中，直至实现植入的首日的时长为至少一天至一周之内，例如至少一天之内，至少2天之内，至少3天之内，至少4天之内，至少6天之内。

实施方式14记载如实施方式1至13中任一项所述的方法，其中，有此需要的患者体内造血干细胞的植入于细胞输注后约12至14天、如约12至13天内实现，尤其是细胞输注前实施过预处理，例如清髓或非清髓预处理的情形。

实施方式15记载如前述实施方式中任一项所述的方法，例如krp203或其药学上可接受的盐如krp203盐酸盐，其中，所述患者选自患有以下疾病的患者：恶性病，非恶性病，代谢疾病和合并症以及自身免疫疾病，例如，如本文所定义，例如再生障碍性贫血，血红蛋白病，地中海贫血，镰状细胞病，hurler氏病。

实施方式16记载一种对代谢病患者和/或高龄患者(如55岁以上)或低龄患者实施造血干细胞移植(hpsc)的方法，所述代谢病可为例如血红蛋白病、再生障碍性贫血、地中海贫血、镰状细胞病、hurler氏病，所述方法包括给予所述患者式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐。该方法可以包括或不包括细胞移植前预处理，例如包括非清髓预处理方案。

实施方式17记载一种治疗接受造血干细胞移植(hsct)患者的代谢病例如血红蛋白病、再生障碍性贫血、地中海贫血、镰状细胞病、hurler氏病的方法，所述方法包括：

(i)给予患者有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐；

(ii)对患者进行移植前的预处理，例如进行非清髓预处理；和

(iii)给患者移植来自供体的造血干细胞。

实施方式18记载一种对有此需要的患者例如低龄、高龄(如55岁以上)患者实施造血干细胞移植(hsct)的方法，所述方法包括：

(i)给予患者有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐；

(ii)对患者进行细胞输注前预处理，例如非清髓预处理；和

(iii)给患者移植来自供体的造血干细胞。

实施方式19记载用于根据实施方式9至18任一项所述方法的根据前述实施方式所述的化合物，例如krp203或其药学上可接受的盐，例如krp203盐酸盐。

实施方式20记载前述实施方式中任一项所述的方法或化合物，其中，所述化合物(例如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))按每日1、2、3、4或5mg(每位患者)的日剂量给予，例如每日1mg或2mg或3mg的日剂量。式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如盐酸盐))可按日用一次给药或日用数次给药，例如日用一次。式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如盐酸盐))还可以按更长的间隔给药，例如每周一次，或4-5天一次。按照本发明，供体可以是接受其自身干细胞(自体移植)的患者，或是他人(同种异体移植)。干细胞来源可以是脐带、半相合来源。

实施方式21记载如前述实施方式中任一项所述的方法或化合物，所述化合物按照每日1、2或3mg(每位患者)的日剂量给药。式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐)的日剂量可以按照每日一次给药或日用数次，例如日用一次。

实施方式22是用于对有此需要的患者实施hsct的式(i)化合物如krp203或其药学上可接受的盐，包括给约1mg至3mg，如约1mg、如约2mg、如约3mg的日剂量。

实施方式23是用于对有此需要的患者实施hsct的方法，包括给予有此需要的患者式(i)化合物如krp203或其药学上可接受的盐，按照约1mg至3mg，如约1mg、如约2mg、如约3mg的日剂量给药。

实施方式24是用于治疗非恶性病或非血液病的式(i)化合物如krp203或其药学上可接受的盐，包括给约1mg至3mg，如约1mg、如约2mg、如约3mg的日剂量，并且包括对患者实施hsct。可选地，患者选自低龄、高龄患者和有合并症的患者，例如55岁以上患者。

实施方式25是一种治疗有此需要的患者的非恶性病或非血液病的方法，包括如下步骤：i)对患者实施hsct和ii)给予有此需要的患者式(i)化合物，如krp203或其药学上可接受的盐，按照约1mg至3mg，如约1mg、如约2mg、如约3mg的日剂量。可选地，患者选自低龄、高龄患者和有合并症的患者，例如55岁以上患者。

患者(受体)可能患有代谢病、恶性病(如血癌)，例如患有选自以下所述的疾病：白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤，例如急性淋巴细胞白血病、急性成髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤。某些实施方式中，患者患有非恶性病，如再生障碍性贫血；代谢疾病或紊乱，如血红蛋白病、地中海贫血、镰状细胞病或hurler氏病。患者可能有合并症，如心脏病、aids或癌症。患者可能接受了耐受诱导为目的的骨髓移植合并实体器官移植。患者可能患有自身免疫病，例如i型糖尿病、多发性硬化症、硬皮病。

实施方式26记载一种治疗或预防前文所述疾病之一的方法，例如恶性病、非恶性病、合并症或自身免疫病，所述方法包括：

(i)给予患者有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐：

(ii)给所述患者移植来自供体的造血干细胞；以及可选地，

(iii)在细胞输注前对所述患者进行预处理，例如进行非清髓预处理。式(i)化合物或其药学上可接受的盐(如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))可按约0.5mg至5mg，如约1mg至约3mg、如约0.5mg、如约1mg、如约3mg的日剂量给药。

实施方式27记载了用于加速接受供体造血干细胞移植的患者体内造血干细胞植入的方法的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如krp203或其药学上可接受的盐，如krp203盐酸盐。

根据本发明，患者可以是身体虚弱、高龄(如55岁以上，如60岁以上)、低龄(如幼儿)患者，其具有严重合并免疫缺陷。

式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))可在移植后给药，例如移植后长达150天期间、例如移植后长达120天期间、例如移植后长达100天期间，例如移植后3个月期间、如一个月期间、如一周期间。例如，式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))可在移植后约120天期间内给药、如移植后约110天、如移植后约100天、如移植后约90天给药。

根据本发明，式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))的给药可以开始于移植之前，例如先于移植1至3天(例如先于移植一天、两天)，或在移植当日给药。式(i)化合物(如krp203或其药学上可接受的盐(如krp203盐酸盐))的给药期间可以是移植后约120天、如约110天、如约100天，如约90天。

根据本发明，供体可以是接受其自身干细胞(自体移植)的患者，或是他人(同种异体移植)。患者(受体)可能患有选自以下所述的一种疾病：白血病，多发性骨髓瘤，淋巴瘤，例如急性淋巴细胞白血病，急性成髓细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，骨髓增生异常综合征，非霍奇金淋巴瘤。

治疗/处理流程

用于加速造血干细胞植入的化合物：

提供了式(i)化合物，尤其是krp203，特别是包含0.5、1、2、3、4或5mg的2-氨基-2-[4-(3-苄氧基苯硫基)-2-氯-苯基]乙基-丙-1,3-二醇或其药学上可接受的盐的组合物。尤其优选含1或2mg2-氨基-2-[4-(3-苄氧基苯硫基)-2-氯-苯基]乙基-丙-1,3-二醇(例如其盐酸盐)的胶囊或片剂。

处理可包括(代表性方案)：

a:筛查期(第-50至-2天)，基线(第-1天),

b:药物处理期间为第1天至第111天以及可达365天的随访期(自移植起算)，其中，药物是式(i)化合物或其药学上可接受的盐，例如2-氨基-2-[4-(3-苄氧基苯硫基)-2-氯-苯基]乙基-丙-1,3-二醇(例如其盐酸盐)，

c:清髓或小西雅图预处理将在第2至第10天进行，如本文所述；

d:移植(干细胞输注)即hsct将在第11天进行。研究性处理之外的其他标准操作可包括标准gvhd预防，移植前和移植后支持性护理以及随访测评，均按照惯例实践进行。

造血干细胞(hsc)

按照惯例实践采用外周动员干细胞。合适的干细胞来源必须是据jacie*的移植物选择算法为可用的，该算法根据采用充t细胞外周干细胞作为移植物来源的惯例标准进行了调整。(*jacie:欧洲联合认证委员会，包括国际细胞疗法协会和欧洲血液和骨髓移植小组)。此外，据分子hla匹配技术，供体与受体必须9/10或10/10匹配。

实施例

实施例1：遗传性代谢病(imd)小鼠模型

受体c57bl/6或iduaki(b6.129s-iduatm1.1kmke/j)小鼠接受轻度非清髓预处理方案。移植来自同类系小鼠的1x10e3个受限数量的hsc。分组为无处理或krp处理15天。第56天，krp203处理组与无处理组相比实现植入的小鼠数量更多，且实现了植入的小鼠具有更多供体细胞。结论是：受限量hsc条件下、非清髓情况下，围移植期(peri-transplantperiod)krp处理加强植入。

实施例2：

实验说明

第一天＝药物处理开始(如2mgkrp203/每天)

第2天和第10天：如前所述进行预处理(例如“小西雅图”或ric)

第11天：实施同种异体干细胞移植

第11天：按照前文所述移植流程，测定嗜中性粒细胞计数：krp203组为基线以上33％；对照组为基线以上11％

第15天：嗜中性粒细胞计数：krp203组为基线以上100％，对照组为基线以上48％。

为监测供体造血干细胞在受体内的植入，一般每日测定嗜中性粒细胞计数。普遍认可的“植入日”(获取)定义为连续三天嗜中性粒细胞计数高于500个细胞/毫升的首日。以下实验实现了嗜中性粒细胞计数高于500个细胞/毫升，其时植入机率为相比基线1.0倍(100％)或更高。一般在第30日通过基因组分析确认这些细胞的供体来源。

结果

表1

图1和表1显示对照组与krp203处理患者组之间的嗜中性粒细胞植入机率比较。可以看出，krp203处理组的植入比对照组快得多。