本申请要求2016年1月29日提交的美国临时申请号62/288,881的优先权，该临时申请通过引用以其全文并入本文。
技术实现要素：
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂伤口的方法，该方法包括：向个体中的复杂伤口施用治疗有效量的胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述复杂伤口为溃疡、下肢溃疡、足溃疡、慢性足溃疡、压疮或缺血性伤口。在一些实施方案中，所述复杂伤口包含外露骨。在一些实施方案中，所述复杂伤口包含骨丢失。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述复杂伤口进行清创。在一些实施方案中，所述清创为外科清创术。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对骨骼进行切除。在一些实施方案中，进行所述骨骼切除直至到达健康骨骼。在一些实施方案中，进行所述骨骼切除以基本上去除坏死骨骼或患病骨骼。在一些实施方案中，所述方法进一步包括打开外露骨的皮质。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述复杂伤口施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料、metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖所述胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用选自抗生素、高压氧疗法、血运重建疗法及其组合的治疗。在一些实施方案中，所述个体患有骨髓炎。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是无菌处理的或最终灭菌的。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，所述脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，所述脐带产品包含华顿氏胶(wharton'sjelly)。在一些实施方案中，所述脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，所述脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂下肢溃疡的方法，该方法包括：向所述个体中的复杂下肢溃疡施用治疗有效量的胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述溃疡进行清创。在一些实施方案中，所述清创为外科清创术。在一些实施方案中，所述溃疡包含外露骨。在一些实施方案中，所述溃疡包含骨丢失。在一些实施方案中，所述溃疡包含坏死软组织、坏死骨骼或其组合。在一些实施方案中，所述方法进一步包括对所述骨骼进行切除。在一些实施方案中，进行所述骨骼切除直至到达健康骨骼。在一些实施方案中，进行所述骨骼切除以基本上去除坏死骨骼或患病骨骼。在一些实施方案中，所述方法进一步包括打开外露骨的皮质。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述溃疡施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料、metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖所述胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用选自抗生素、高压氧疗法、血运重建疗法及其组合的治疗。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是无菌处理的或最终灭菌的。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，所述脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，所述脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，所述脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。
在某些实施方案中，本文公开了修复有需要的个体中的脊柱裂缺陷的方法，该方法包括：向所述个体中的脊柱裂缺陷施用治疗有效量的脐带产品以修复所述缺陷。在一些实施方案中，所述个体为子宫内胎儿。在一些实施方案中，将所述脐带产品缝合就位。在一些实施方案中，所述修复包括再生表皮层、真皮层和皮下层。在一些实施方案中，所述脐带产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，所述脐带产品是无菌处理的或最终灭菌的。在一些实施方案中，所述脐带产品为移植物。在一些实施方案中，所述脐带产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，所述脐带产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，所述脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，所述脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，所述脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。
在某些实施方案中，本文公开了减少或预防有需要的个体中由肉芽组织形成瘢痕的方法，该方法包括：向所述个体中的肉芽组织施用治疗有效量的胎儿支持组织产品，借此减少或预防瘢痕形成。在一些实施方案中，所述肉芽组织在受损组织的愈合期间产生。在一些实施方案中，所述受损组织为烧伤、创伤、损伤、溃疡或手术的结果。在一些实施方案中，所述受损组织为皮肤、骨骼、肌肉、肌腱、软骨、韧带、软组织或关节。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述肉芽组织施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料、metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖所述胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品是无菌处理的或最终灭菌的。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，所述胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，所述脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，所述脐带产品包含华顿氏胶。在一些实施方案中，所述脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，所述脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。
附图说明
本发明的新特征在所附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对其中利用本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在这些附图中：
图1例示了脐带(uc)的横截面。
图2图示了针对显示完全愈合的26个伤口的伤口闭合时间，以通过kaplan-meier分析来确定随时间推移所愈合的伤口的百分比。
图3a-3b图示了基于初始伤口面积的伤口闭合。图3a图示了针对实现完全愈合的26个伤口，基于初始伤口面积将伤口分成四分位数。图3b图示了对于每个相应的四分位数而言实现完全伤口闭合的总时间。尽管初始伤口大小存在显著性差异(即，*p<0.05，相对于q1；^p<0.05，相对于q2；#p<0.05，相对于q3)(图3a)，但当在四个四分位数中进行比较时，在实现伤口闭合的平均时间方面不存在差异，p>0.05(图3b)。
具体实施方式
本文提供了治疗复杂伤口的方法。复杂慢性伤口构成危及生命且严重令人衰弱的病况。复杂伤口可发生于需要长时间住院同时活动受限以治疗慢性疾病(例如，压疮或褥疮)的患者中，并导致较高死亡率和较低生活质量。由于静脉淤滞性溃疡形成引起的复杂伤口导致相当高的发病率和不良生活质量。复杂伤口可发生于具有自身免疫疾病或进行免疫抑制疗法的患者中(例如，导致大面积溃疡的血管炎)，该复杂伤口可导致住院时间变长且治疗成本上升。fournier坏疽(fournier'sgangrene)是另一种复杂伤口，且特征在于由需氧和厌氧生物体的混合物导致的会阴和生殖器区域的感染性坏死性筋膜炎。由这种感染所导致的死亡率可高达67％。
例如，非愈合性糖尿病足溃疡(dfu)已在世界范围内成为医疗保健系统的明显负担。据世界卫生组织估计，全球有3.47亿人罹患糖尿病，并且根据美国疾病控制中心统计，在2010年有2580万美国人患有糖尿病。糖尿病患者在有生之年患上足溃疡的风险为大约25％，其中所估计的年发病率为2％。
骨髓炎以及骨骼和/或肌腱、肌肉、关节囊的暴露是糖尿病足溃疡的普遍且严重的并发症。骨髓炎是指骨骼的炎症或感染，并且是与大约20％的糖尿病足溃疡并发的病况。因此，据估计，每年在美国有100,000人罹患并发有潜在骨髓炎的糖尿病足溃疡。深度溃疡和大面积溃疡，特别是那些具有外露骨的溃疡，更有可能并发骨髓炎。几乎所有具有潜在骨髓炎的糖尿病足溃疡均由从邻近软组织到皮质骨和/或骨髓的连续感染扩散而引起。
这类复杂非愈合性糖尿病足溃疡的预后通常不良。具有外露骨的以及具有骨髓炎的糖尿病足溃疡具有使溃疡延迟愈合/无法愈合、溃疡复发和截肢的可能性增加的高风险。非愈合性溃疡损害真皮——第一道防线，使患者易遭受感染和非感染性组织缺损。溃疡的感染通常是促使住院且导致截肢的事件。当溃疡感染进展为重度或危及肢体时，据报道截肢率高达51％。在美国每年对糖尿病患者进行超过65,000例非创伤性下肢截肢术。与单纯的软组织感染相比，当足溃疡并发有骨髓炎时，截肢的风险增加了四倍。不幸的是，在一次重大下肢截肢术之后，5年存活率估计为50％，其低于大多数恶性肿瘤的存活率且仅次于肺癌的存活率。此外，一旦进行截肢，则50％的患者将在5年内在对侧肢体发生溃疡。对于截肢术幸存者而言，日常功能严重受损。许多人在使用或不使用手杖或助行器的情况下均无法行走。一项研究发现，在2010年，美国有22.8％的经历下肢截肢术的患者在30天内再次入院，这是该研究中所考察的手术中的最高再入院率。此外，即使有最好的医疗护理，截肢术及其后果仍为创伤性经历，预期其可随着患者应对外形损伤和功能丧失的社交和财务后果而产生抑郁。总体而言，对于该国家和全世界内具有可导致截肢的高风险的复杂非愈合性足溃疡的严重性，可以想像得到一幅沉重的画面。
处理具有临床疑似骨髓炎(具有外露的骨骼和/或肌腱、肌肉、关节囊)的高风险的复杂非愈合性糖尿病足溃疡的主要治疗目标在于尽可能快地闭合溃疡，从而降低其他伤口相关并发症的风险，例如可导致截肢的较高感染严重程度。目前的医学疗法包括局部伤口医护(例如伤口敷料施加和清创术)、疼痛缓解、压力缓解(减荷)和感染治疗。还实施了另外的新技术，诸如真空提取装置、高压氧治疗和声波技术。伤口医护产品的新进展包括先进的皮肤替代物和重组生长因子如血小板衍生生长因子(pdgf)。然而，这些先进的皮肤替代物产品中没有一种适用于治疗呈现骨髓炎的复杂溃疡。另外，绝大多数尚未证实在(具有展现出骨骼和/或肌腱、肌肉、关节囊暴露的深度的)复杂非愈合性糖尿病足溃疡的治疗中是安全或有效的。这些产品中的至少一些不适用于具有肌腱、肌肉、囊或骨骼暴露的溃疡，并且禁忌用于临床上感染的伤口。此外，几乎所有这些先进的皮肤替代物均需要“植入”(engraftment)或“移植入”(grafttake)。
本发明所请求保护的方法不依赖于起支架作用的胎儿支持组织产品，并且当施加于创面上时，其植入依赖于血管形成或宿主组织/细胞整合。因此，不希望受任何特定理论束缚，胎儿支持组织产品(例如，脐带产品)可采用与常规先进皮肤替代物不同的愈合机制。与以治疗病况的特定作用为目标的多种目前可用疗法(例如旨在特异性地处理感染的银敷料和旨在刺激血管生成的pdgf)相比，胎儿支持组织产品(例如，脐带产品)发挥多模式作用，包括抗炎、抗瘢痕形成以及在不同类型细胞中的再生作用。
复杂伤口通常是慢性且非愈合性的，并且在老年人或免疫功能不全患者中或患有导致愈合不良的其他慢性疾病(例如，糖尿病、免疫系统缺陷、动脉或静脉功能不全、慢性阻塞性肺病或截瘫或四肢瘫痪)的患者中存在或出现感染和坏死组织时带来其他治疗难题。本发明方法提供了一种用于复杂伤口的改进治疗。如本文在第一示例性研究中所提供的，在向复杂伤口施用胎儿支持组织之后，27个复杂伤口中的26个得以完全愈合(实施例1)。在本文所提供的第二示例性研究中，在手术和放射疗法之后具有涉及组织和骨骼坏死的复杂头皮伤口的患者用胎儿支持组织予以治疗表现出软组织愈合和骨骼再生长的刺激。因此，本发明公开的方法解决了已成为全球公共健康问题且表现为显著未满足的医疗需求的这一严重且潜在致命的病况。
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂伤口的方法，该方法包括：以有效治疗复杂伤口的量将胎儿支持组织产品施加于该个体中的复杂伤口。
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂下肢溃疡的方法，该方法包括：以有效治疗个体中的复杂下肢溃疡的量将胎儿支持组织产品施加于该个体中的复杂下肢溃疡。
在某些实施方案中，本文公开了修复有需要的个体中的脊柱裂缺陷的方法，该方法包括：以有效修复该缺陷的量将脐带产品施加于该个体中的脊柱裂缺陷。
在某些实施方案中，本文公开了减少或预防有需要的个体中由肉芽组织形成瘢痕的方法，该方法包括：以有效减少或预防瘢痕形成的量将胎儿支持组织产品施加于该个体中的肉芽组织。
某些定义
如本文所用，“胎儿支持组织产品”意指用于支持胎儿发育的组织所衍生的任何分离的产品。胎儿支持组织产品的实例包括但不限于(i)胎盘羊膜(pam)或基本上分离的pam，(ii)脐带羊膜(ucam)或基本上分离的ucam，(iii)绒毛膜或基本上分离的绒毛膜，(iv)羊膜-绒毛膜或基本上分离的羊膜-绒毛膜，(v)胎盘或基本上分离的胎盘，(vi)脐带或基本上分离的脐带，或(vii)其任何组合。在一些实施方案中，胎儿支持组织选自胎盘羊膜(pam)、脐带羊膜(ucam)、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘、脐带及其任何组合。在一些实施方案中，胎儿支持组织包含脐带。胎儿支持组织产品包括任何形式的胎儿支持组织，包括经低温保藏的、经最终灭菌的、经冻干的胎儿支持组织或由磨碎胎儿支持组织产生的粉末。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆、提取物或经最终灭菌的产品。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为移植物。
如本文所用，“人体组织”意指来源于人体的任何组织。在一些实施方案中，人体组织为选自胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合的胎儿支持组织。
如本文所用，短语“肉芽组织”是指在愈合过程中在伤口表面上形成的新组织和微小血管。在一些实施方案中，肉芽组织展现出含有新毛细血管生长的凹凸不平或颗粒状表面。在一些实施方案中，肉芽组织从伤口的底部生长，并且能够填充几乎任何大小的伤口。在一些实施方案中，将本文公开的胎儿支持组织产品施加于肉芽组织以预防或减少由肉芽组织形成瘢痕组织。在一些实施方案中，将本文公开的胎儿支持组织产品施加于肉芽组织以促进组织再生伤口修复。在一些实施方案中，肉芽过多阻止上皮化并且使愈合过程停滞。
如本文所用，“复杂伤口”是指具有外露的骨骼、肌肉、肌腱、关节囊或其组合的伤口。在一些实施方案中，复杂伤口包含外露骨。在一些实施方案中，复杂伤口包含骨丢失。在一些实施方案中，骨丢失是由于坏死引起的。在一些实施方案中，复杂伤口包括软组织、骨骼或其组合的坏死。复杂伤口通常难以愈合并且极易遭受皮肤、肌肉和肌腱感染，并且使患者易于遭受骨髓炎的风险。复杂伤口处于导致截肢的较高风险下，特别是当与缺血或感染相关联时。在一些实施方案中，复杂伤口为溃疡、下肢溃疡、足溃疡、慢性足溃疡或缺血性伤口。在一些实施方案中，复杂伤口为压疮。在一些实施方案中，复杂伤口为静脉淤滞性溃疡或由于血管炎引起的溃疡。在一些实施方案中，复杂伤口是缺血性的。在一些实施方案中，复杂伤口涉及头皮、颅骨、硬脑膜或其组合的伤口。在一些实施方案中，复杂伤口与感染相关联。在一些实施方案中，复杂伤口与骨髓炎相关联。在一些实施方案中，复杂伤口是缺血性的且经感染的。
如本文所用的“简单伤口”是指皮肤伤口，其不存在或几乎不存在诸如肌肉、肌腱、关节或骨骼的下方组织的损伤。
如本文所用，“移植物”意指用于替代受损、功能不全或缺失组织的蛋白质(例如，胶原蛋白和弹性蛋白)和聚糖(例如，皮肤素、透明质酸和软骨素)的基质。在某些情况下，敷设所述基质并且宿主细胞逐渐整合到基质中。
如本文所用，“最低程度的操作”意指(1)对于结构性组织而言，未改变与组织的重建、修复或替换效用有关的组织的原始相关特征的处理；以及(2)对于细胞或非结构性组织而言，未改变细胞或组织的相关生物学特征的处理。
如本文所用，“处理”意指除了回收、供体筛选、供体测试、储存、标记、包装或分配以外，对胎儿支持组织产品进行的任何行为，例如微生物测试、制备、灭菌、灭活或去除外源因子的步骤、保留用于储存以及从储存中取出。
如本文所用，“薄片”意指任何连续展开区域或表面。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品的薄片是基本上扁平的。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品的薄片是平面的。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品的薄片是管状的。薄片可以是适合于待治疗伤口的任何形状或大小。在一些实施方案中，薄片为正方形、圆形、三角形或矩形。
如本文所用，术语“受试者”用于意指任何动物，优选哺乳动物，包括人类或非人类。术语患者、受试者和个体可互换使用。这些术语不应解释为需要医疗专业人员(例如，医生、护士、医师助理、护理员、临终关怀机构员工)的督导。
当在胎儿支持组织产品的语境中使用时，“基本上分离的”或“分离的”意指胎儿支持组织产品已与来源于原始来源生物体的大多数其他非胎儿支持组织材料(例如，其他组织、红细胞、静脉、动脉)相分离。
如本文所用，短语“其中分离的胎儿支持组织产品的生物和结构完整性基本上得到保留”意指当与新鲜uc的生物活性和结构完整性相比时，分离的uc的生物活性和结构完整性仅降低约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％或约60％。
术语“新鲜胎儿支持组织”是指在出生之后不到10天大且与出生后的形式基本上相同的胎儿支持组织。
如本文所用，“生物活性”意指胎儿支持组织的多肽和多糖的活性。在一些实施方案中，在胎儿支持组织中发现的多肽和多糖的生物活性为抗炎、抗瘢痕形成、抗血管生成或抗粘连。在一些实施方案中，该生物活性为胎儿支持组织中的hc-ha/ptx3复合物的生物活性。在一些实施方案中，胎儿支持组织中的hc-ha/ptx3复合物的生物活性基本上得到保留。在一些实施方案中，在胎儿支持组织中发现的多肽和多糖的活性促进伤口愈合。在一些实施方案中，在胎儿支持组织中发现的多肽和多糖的活性预防瘢痕形成。在一些实施方案中，在胎儿支持组织中发现的多肽和多糖的活性减少炎症。
如本文所用，“结构完整性”意指构成胎儿支持组织产品的基质和基底膜的完整性。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品的结构完整性带来缝合拉出强度。
如本文所用的，术语“治疗”或“处理”包括减轻、缓和或改善疾病或病况症状，预防额外症状，改善或预防症状的潜在代谢病因，抑制疾病或病况例如阻止疾病或病况的发展，缓解疾病或病况，导致疾病或病况的消退，缓解由疾病或病况引起的状况，或者预防性和/或治疗性地阻止疾病或病况的症状。在一些实施方案中，治疗伤口如复杂伤口或复杂下肢溃疡是指促进伤口闭合。在一些实施方案中，治疗伤口如复杂伤口或复杂下肢溃疡是指伤口完全愈合。在一些实施方案中，伤口完全愈合是指伤口面积的100％再上皮化。在一些实施方案中，治疗伤口如复杂伤口或复杂下肢溃疡是指促进新的骨骼、肌腱、肌肉和皮肤的生成。在一些实施方案中，治疗伤口如复杂伤口或复杂下肢溃疡是指促进骨骼、肌腱、肌肉和皮肤的生成，从而使伤口闭合。在一些实施方案中，治疗伤口如复杂伤口或复杂下肢溃疡是指避免对感染肢体进行截肢的需要或使之最小化。
胎儿支持组织产品
如本文所用，术语“产品”是指来源于胎儿支持组织的磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆、提取物或最终灭菌的产品。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为薄片。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，脐带产品包含脐带羊膜和至少一些华顿氏胶。在一些实施方案中，脐带产品不含脐带静脉和动脉。
如本文所用，“胎盘羊膜”(pam)意指来源于胎盘的羊膜。在一些实施方案中，pam是基本上分离的。
如本文所用，“脐带”意指将发育中的胎儿连接到胎盘的器官。脐带由羊膜(ucam)、华顿氏胶和血管组成。ucam用于调节uc内的流体压力。对于脐带的横截面视图，参见图1。如本文所用，“华顿氏胶”意指脐带内的胶状物质，其主要由黏多糖(透明质酸和硫酸软骨素)组成。脐带进一步包含埋入华顿氏胶内的两条动脉(脐动脉)和一条静脉(脐静脉)。在某些情况下，脐静脉向发育中的胎儿供应来自胎盘的含氧血液。在某些情况下，脐动脉将脱氧血液返回至胎盘。
如本文所用，“脐带羊膜”(ucam)意指来源于脐带的羊膜。它减少炎症、减少血管生成、减少瘢痕形成且减少粘连。ucam是半透明膜。ucam具有多个层：上皮层；基底膜；致密层；成纤维细胞层；以及海绵层。此外，ucam的基底膜充当干细胞的天然生态位。它缺乏血管或直接的血液供应。在一些实施方案中，ucam是基本上分离的。在一些实施方案中，ucam进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，ucam进一步包含华顿氏胶的至少一部分。在一些实施方案中，ucam包含血管和/或动脉。在一些实施方案中，ucam包含华顿氏胶和血管和/或动脉。
如本文所用，“胎盘”意指将发育中的胎儿连接到母体子宫壁以允许进行营养吸收、废弃物排泄以及通过母体血液供应进行气体交换的器官。胎盘由三层组成。围绕胎儿的最内层的胎盘层被称为羊膜。尿囊是胎盘的中间层(衍生自胚胎后肠)；来源于肚脐的血管穿过这层膜。胎盘的最外层，即绒毛膜，与子宫内膜接触。绒毛膜和尿囊融合形成绒毛尿囊膜。
如本文所用，“绒毛膜”意指由胚外中胚层和两层滋养层形成的膜。绒毛膜绒毛从绒毛膜伸出，侵入子宫内膜，并允许营养物质从母血转移至胎血。绒毛膜由以下两层组成：由滋养层形成的外层和由体壁中胚层形成的内层；羊膜与后者接触。滋养层由立方体形或棱柱形细胞内层，细胞滋养层或朗汉斯(langhans)层，以及缺乏细胞边界的富核原生质外层(即合体细胞滋养层)组成。无血管羊膜附着在绒毛膜的内层。
如本文所用，“羊膜-绒毛膜”意指包含羊膜和绒毛膜的产物。在一些实施方案中，羊膜和绒毛膜不分离(即，羊膜自然地附着在绒毛膜的内层)。在一些实施方案中，羊膜最初与绒毛膜分离，且随后在处理过程中与绒毛膜合并。
uc产品的生成
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为uc产品。在一些实施方案中，uc产品包含：分离的uc组织，该分离的uc组织不包含静脉或动脉。在一些实施方案中，uc产品包含：分离的uc组织，该分离的uc组织不包含静脉或动脉、具有代谢活性的细胞、活动性hiv-1、活动性hiv-2、活动性htlv-1、活动性乙型肝炎、活动性丙型肝炎、活动性西尼罗河病毒(westnilevirus)、活动性巨细胞病毒、活动性人类传染性海绵状脑病或活动性苍白密螺旋体(treponemapallidum)，其中uc产品的天然结构完整性在初始获得之后基本上保留至少15天。在一些实施方案中，uc产品包含脐带羊膜和华顿氏胶。在一些实施方案中，uc产品中的hc-ha/ptx3复合物的生物活性基本上得到保留。在一些实施方案中，uc产品中的hc-ha/ptx3复合物的生物活性基本上保留至少15天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少20天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少25天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少30天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少35天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少40天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少45天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少50天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少55天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少60天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少90天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少180天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少1年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少2年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少3年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少4年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在初始获得之后基本上保留至少5年。
在某些实施方案中，本文进一步公开了产生uc产品的方法，该方法包括：获得预先冷冻的脐带并去除脐静脉和脐动脉，其中uc产品的结构完整性在处理之后基本上保留至少15天。在一些实施方案中，从脐带产品中去除基本上全部血液。在一些实施方案中，通过解冻预先冷冻的脐带、去除脐静脉和脐动脉并从脐带中去除基本上全部血液来处理脐带。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少20天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少25天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少30天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少35天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少40天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少45天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少50天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少55天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少60天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少90天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少180天。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少1年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少2年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少3年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少4年。在一些实施方案中，uc产品的生物和结构完整性在处理之后基本上保留至少5年。在一些实施方案中，去除华顿氏胶的至少一部分。脐带从任何合适的来源(例如，医院或组织库)回收。在一些实施方案中，脐带从哺乳动物中获得。在一些实施方案中，脐带从人、非人灵长类动物、牛或猪中获得。
将脐带产品保持在-80℃直至确定供体和样品的合格性。在一些实施方案中，在-80℃下储存uc产品杀死在uc中发现的基本上所有细胞。在一些实施方案中，在-80℃下储存uc产品杀死在uc产品中发现的基本上所有细胞，同时相对于新鲜的(即未冷冻的)uc保持或提高了uc产品的生物活性(例如，其抗炎、抗瘢痕形成、抗原性和抗粘连性质)。在一些实施方案中，在-80℃下储存uc产品导致在uc中发现的基本上所有细胞的代谢活性丧失。在一些实施方案中，在-80℃下储存uc导致在uc中发现的基本上所有细胞的代谢活性丧失，同时相对于新鲜的(即未冷冻的)uc保持或提高了ucam的生物活性(例如，其抗炎、抗瘢痕形成、抗原性和抗粘连性质)。在一些实施方案中，对uc予以干燥。在一些实施方案中，uc是未脱水的。
uc产品的处理
遵循优质组织规范(gtp)完成所有处理，以确保没有污染物引入uc产品中。
使用fda许可的筛选试验针对hiv-1、hiv-2、htlv-1、乙型肝炎和丙型肝炎、西尼罗河病毒(westnilevirus)、巨细胞病毒、人类传染性海绵状脑病(例如，creutzfeldt-jakob病)和苍白密螺旋体(treponemapallidum)来检测脐带。组织被hiv-1、hiv-2、htlv-1、乙型肝炎和丙型肝炎、西尼罗河病毒或巨细胞病毒污染的任何迹象导致组织标本的即时隔离及随后销毁。
此外，针对乙型肝炎、丙型肝炎或hiv感染的危险因素及临床证据检查供体的医疗记录。供体具有被hiv-1、hiv-2、htlv-1、乙型肝炎和丙型肝炎、西尼罗河病毒、巨细胞病毒、人类传染性海绵状脑病(例如，creutzfeldt-jakob病)和苍白密螺旋体感染的危险因素和/或临床证据的任何迹象导致组织标本的即时隔离及随后销毁。
在一些实施方案中，uc是冷冻的。在一些实施方案中，uc是未冷冻的。如果uc是未冷冻的，则立即如下所述对其进行处理。
在一些实施方案中，从uc(例如，从在uc中发现的任何动脉和静脉，以及已渗入组织中的血液)中去除基本上所有的血液。在一些实施方案中，在冷冻uc之前从uc中去除基本上所有的血液。在一些实施方案中，未从uc中去除血液。在一些实施方案中，在冷冻uc之前未从uc中去除血液。在一些实施方案中，在将uc冷冻之后基本上去除血液。
在一些实施方案中，在搅拌下用缓冲液洗涤脐带组织以去除过量的血液和组织。在一些实施方案中，在搅拌下用缓冲液浸泡脐带组织以去除过量的血液和组织。在一些实施方案中，在搅拌下洗涤或浸泡缩短了洗涤时间。在一些实施方案中，将缓冲液洗涤溶液更换为新鲜的缓冲溶液。在一些实施方案中，将脐带组织浸泡在等渗溶液中并更换该溶液。在一些实施方案中，用等渗缓冲液或组织培养基洗涤脐带。在一些实施方案中，用盐水洗涤uc。在一些实施方案中，用pbs洗涤uc。在一些实施方案中，用1xpbs洗涤uc。在一些实施方案中，用tris缓冲盐水洗涤uc。在一些实施方案中，用hepes缓冲盐水洗涤uc。在一些实施方案中，用林格氏溶液(ringer’ssolution)洗涤uc。在一些实施方案中，用哈特曼氏溶液(hartmann’ssolution)洗涤uc。在一些实施方案中，用ebss洗涤uc。在一些实施方案中，用hbss洗涤uc。在一些实施方案中，用蒂罗德盐溶液(tyrode’ssaltsolution)洗涤uc。在一些实施方案中，用格氏平衡盐溶液(gey’sbalancedsaltsolution)洗涤uc。在一些实施方案中，用dmem洗涤uc。在一些实施方案中，用emem洗涤uc。在一些实施方案中，用gmem洗涤uc。在一些实施方案中，用rpmi洗涤uc。
在一些实施方案中，(例如，使用解剖刀)将uc切成多个切段。切段的大小取决于来源于uc的uc产品的所需用途。在一些实施方案中，(例如，使用解剖刀或剪刀)对一段脐带进行纵向切割以打开uc。在一些实施方案中，未将该段uc切成两半。在一些实施方案中，将该段uc切成两半。在一些实施方案中，在华顿氏胶中进行另外的切割以帮助使uc变平。
在一些实施方案中，任选地用缓冲液再次洗涤切割的uc组织，以进一步去除多余的血液和组织。
在一些实施方案中，使用任何合适的方法将uc固定至基底(例如，聚苯乙烯泡沫板)上(例如，用针或销(例如，t型销)对其进行固定)。在一些实施方案中，将脐带的两端固定至基底。在一些实施方案中，仅一端附接至基底。在一些实施方案中，用基底(例如，吸收性毛巾布、盖布)使uc稳定。在一些实施方案中，对uc进行定向，使得uc的内表面(例如，包含华顿氏胶的面)面朝上，而外表面(即，包含ucam的面)面朝基底。如果脐带的一端保持自由，则在一些实施方案中，固持(例如，用夹子、止血钳或一套镊子(例如，宽锯齿状尖镊子))脐带的自由端，同时去除部分或全部华顿氏胶。或者，在一些实施方案中，uc的两端均保持自由。
脐带包括两条动脉(脐动脉)和一条静脉(脐静脉)。在一些实施方案中，从uc中去除静脉和动脉。在某些情况下，静脉和动脉环绕(或悬浮或内埋)于华顿氏胶中。在一些实施方案中，去除静脉和动脉，同时去除华顿氏胶。在一些实施方案中，从脐带剥离(或抽拉)静脉和动脉(例如，使用一套镊子)。在一些实施方案中，从分段的脐带中切掉(或刮掉)静脉和动脉。在一些实施方案中，用旋转研磨器(rotoblator)将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。在一些实施方案中，利用吸脂机将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。在一些实施方案中，利用静脉剥离器将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。在一些实施方案中，用处于高压下的液体将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。在一些实施方案中，用刷子将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。在一些实施方案中，用外科皮刀将静脉和动脉与华顿氏胶同时去除。
uc产品的所需厚度决定了去除多少华顿氏胶。在一些实施方案中，使脐带与缓冲液接触以促进华顿氏胶与ucam的分离。在一些实施方案中，从成层的uc中剥离华顿氏胶(例如，使用一套镊子、止血钳)。在一些实施方案中，从分段的uc中切掉(例如，刮掉)华顿氏胶。在一些实施方案中，利用旋转研磨器(即，附接至具有金刚石涂覆的毛刺的钻孔器的导管)去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用吸脂机去除华顿氏胶。在一些实施方案中，施加处于高压下的液体以去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用刷子去除华顿氏胶(例如，在高速下旋转的机械刷)。在一些实施方案中，利用外科皮刀去除华顿氏胶。
在一些实施方案中，uc产品包含分离的脐带羊膜(ucam)。在某些情况下，ucam包含蛋白质、聚糖、蛋白质-聚糖复合物(例如，透明质酸和iαi重链与ptx3的复合物)和促进组织修复的酶。例如，ucam的基质含有生长因子、抗血管生成蛋白质和抗炎蛋白质以及各种蛋白酶的天然抑制剂。在一些实施方案中，在ucam中发现的蛋白质和酶从uc中扩散出来并进入周围组织。在一些实施方案中，通过从uc去除所有的华顿氏胶和脐带血管，留下ucam，以分离出ucam。在一些实施方案中，使脐带与缓冲液接触以促进华顿氏胶与ucam的分离。在一些实施方案中，从成层中的uc中剥离华顿氏胶(例如，使用一套镊子、止血钳)。在一些实施方案中，从分段的uc中切掉(例如，刮掉)华顿氏胶。在一些实施方案中，利用旋转研磨器(即，附接至具有金刚石涂覆的毛刺的钻孔器的导管)来去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用吸脂机去除华顿氏胶。在一些实施方案中，施加处于高压下的液体以去除华顿氏胶。在一些实施方案中，利用刷子去除华顿氏胶(例如，在高速下旋转的机械刷)。在一些实施方案中，利用外科皮刀去除华顿氏胶。在一些实施方案中，直接从管状脐带去除ucam。在一些实施方案中，将ucam从脐带上刮掉。在一些实施方案中，使用任何合适的方法将ucam从脐带上刮掉。在一些实施方案中，使用刮刀或手术皮刀将ucam从脐带上刮掉。在已获得基本上纯的ucam之后，任选地用缓冲液洗涤ucam以去除多余的血液和组织。
在一些实施方案中，uc产品包含ucam作为支架，并且将多个细胞整合到该支架中。在一些实施方案中，该细胞为胚胎干细胞、间充质干细胞或成体谱系定型干细胞(adultlineage-committedstemcells)或分化的表皮细胞(例如，用于治疗皮肤上的烧伤或手术切口)。在一些实施方案中，该细胞为间皮细胞(例如，用于治疗内脏器官中的伤口(例如手术切口))。
在一些实施方案中，所述应用是同源应用(例如，功能性同源应用或结构性同源应用)。在一些实施方案中，对uc产品进行最低程度的操作。在一些实施方案中，uc产品不包含除了水、类晶体或灭菌剂、防腐剂或储存剂之外的另一种物质。在一些实施方案中，uc产品不具有全身效应，并且其主要功能不依赖于活细胞的代谢活性。
在一些实施方案中，所述uc产品为任何合适的形状(例如，正方形、圆形、三角形、矩形)。在一些实施方案中，所述uc产品由uc薄片产生。在一些实施方案中，该薄片是平面的。在一些实施方案中，该薄片是管状的。
所述uc产品的大小取决于uc产品的所需用途。在一些实施方案中，(例如，使用解剖刀)将uc产品切成多个切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1.0cm×约0.25cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1.0cm×约0.5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1.0cm×约0.75cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约1cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约2cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约3cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约4cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约1cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约2cm×约2cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约2cm×约3cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约2cm×约4cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约2cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约2cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约3cm×约3cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约3cm×约4cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约3cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约3cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约4cm×约4cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约4cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约4cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约5cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约5cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约6cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约1cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约2cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约3cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约4cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约5cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约8cm×约6cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约10cm×约10cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约12cm×约10cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约15cm×约10cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约20cm×约10cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约25cm×约10cm的切段。在一些实施方案中，将uc产品分成约30cm×约10cm的切段。
在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液相接触以去除基本上所有剩余的红细胞。在一些实施方案中，使uc产品与等渗缓冲液相接触。在一些实施方案中，使uc产品与盐水相接触。在一些实施方案中，使uc产品与pbs相接触。在一些实施方案中，使uc产品与pbs1x相接触。在一些实施方案中，使uc产品与林格氏溶液相接触。在一些实施方案中，使uc产品与哈特曼氏溶液相接触。在一些实施方案中，使uc产品与tris缓冲盐水相接触。在一些实施方案中，使uc产品与hepes缓冲盐水相接触。在一些实施方案中，使uc产品与ebss相接触。在一些实施方案中，使uc产品与hbss相接触。在一些实施方案中，使uc产品与蒂罗德盐溶液相接触。在一些实施方案中，uc产品与格氏平衡盐溶液相接触。在一些实施方案中，使uc产品与dmem相接触。在一些实施方案中，使uc产品与emem相接触。在一些实施方案中，使uc产品与gmem相接触。在一些实施方案中，使uc产品与rpmi相接触。
在一些实施方案中，在搅拌下使uc产品与缓冲液接触以去除基本上所有剩余的红细胞。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触10分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触15分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触20分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触25分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触30分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触35分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触40分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触45分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触50分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触55分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触60分钟。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触2小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触3小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触4小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触5小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触6小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触6小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触10小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触12小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触18小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触24小时。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触2天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触3天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触4天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触5天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触6天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触7天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触10天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触14天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触21天。在一些实施方案中，使uc产品与缓冲液接触30天。在一些实施方案中，任选地在接触期间更换缓冲液(例如，当红细胞从uc薄片扩散的速率减慢时)。在一些实施方案中，在接触期间添加磁力搅拌器。在一些实施方案中，添加(和启动)磁力搅拌器提高了红细胞从uc薄片扩散的速率。
用于生成粉碎的胎儿支持组织产品的处理
在一些实施方案中，使用分离的胎儿支持组织产品来生成粉碎的胎儿支持组织产品。如本文所用，“粉碎的胎儿支持组织产品”意指包含已分解(或分离)的组织的胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，粉碎的胎儿支持组织产品为干粉。在一些实施方案中，通过将胎儿支持组织粉末与载体混合将粉碎的胎儿支持组织产品进一步加工成溶液、悬浮液或乳液。在一些实施方案中，将粉碎的胎儿支持组织产品配制成乳膏、洗剂、软膏、糊剂、凝胶、薄膜或涂料。在一些实施方案中，使粉碎的胎儿支持组织产品与贴片或伤口敷料相接触。
在一些实施方案中，通过任何合适的方法将分离的胎儿支持组织粉碎。在一些实施方案中，通过使用粉碎机(例如，bessman组织粉碎机、biospec生物粉碎机或covariscryoprep)将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过使用组织研磨机(例如，potter-elvehjem研磨机或wheaton顶置式搅拌机)将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过使用超声波仪将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过使用珠磨器(beadbeater)将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过使用冰箱/磨粉机(例如，spexsampleprep冰箱/磨粉机或retch球磨机)将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过使用研杵和研钵将分离的胎儿支持组织予以粉碎。在一些实施方案中，通过手动使用研杵和研钵将分离的胎儿支持组织予以粉碎。
在一些实施方案中，任选地在粉碎之前将分离的胎儿支持组织冻干。在一些实施方案中，通过任何合适的方法(例如，暴露于液化气体、放置在冰箱中)将分离的胎儿支持组织冻干。在一些实施方案中，将分离的胎儿支持组织放置在冻干装置的真空室中直至去除全部或基本上全部流体(例如，水)。在一些实施方案中，在冷冻之后(例如，暴露于低于0℃、-20℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-75℃、-80℃、-90℃或-100℃的温度下)将分离的胎儿支持组织冻干。
胎儿支持组织产品的储存
在一些实施方案中，储存胎儿支持组织产品以供后续使用。在一些实施方案中，储存胎儿支持组织产品不会破坏胎儿支持组织细胞外基质的完整性。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品冻干。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品储存在任何合适的储存介质中。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品储存在50％dmem+50％甘油中。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品储存在10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％甘油中。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品储存在10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％丙二醇中。
在一些实施方案中，任选地使胎儿支持组织产品与基底(即，支持性背衬)相接触。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品不与基底相接触。在一些实施方案中，对胎儿支持组织产品进行定向以使该胎儿支持组织产品与基底相接触。在一些实施方案中，对胎儿支持组织产品进行定向以使基质与基底相接触。在一些实施方案中，对胎儿支持组织产品进行定向以使上皮侧与基底相接触。
在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品附接至基底。在一些实施方案中，该基底为硝化纤维素纸(nc)。在一些实施方案中，该基底为尼龙膜(nm)。在一些实施方案中，该基底为聚醚砜膜(pes)。低温保藏
在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品冷冻以用于低温保藏。在一些实施方案中，对胎儿支持组织产品进行低温保藏不会破坏胎儿支持组织细胞外基质的完整性。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品暴露于液态气体(例如，液氮或液氢)。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品暴露于液氮。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品不接触液态气体。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品放置于容器中并使该容器与液态气体相接触。在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品暴露于液态气体直至胎儿支持组织产品得以冷冻。
冻干
在一些实施方案中，将胎儿支持组织产品冻干。在一些实施方案中，在冷冻之后将胎儿支持组织产品冻干。在一些实施方案中，通过任何合适的方法(例如，暴露于液化气体，放置于冰箱中)冷冻之后将胎儿支持组织产品冻干。在一些实施方案中，通过暴露于低于约0℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-20℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-40℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-50℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-60℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-70℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-75℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-80℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-90℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于低于约-100℃的温度将胎儿支持组织产品冷冻。在一些实施方案中，通过暴露于液态气体将胎儿支持组织产品冷冻。
在一些实施方案中，将低温保藏的胎儿支持组织产品冻干。在一些实施方案中，将低温保藏的胎儿支持组织产品放置于冻干装置的真空室中，直至已经去除全部或几乎全部流体(例如，水)为止。灭菌
在一些实施方案中，通过任何合适的(例如，医学上可接受的)方法对胎儿支持组织产品进行最终灭菌。在一些实施方案中，将冻干的胎儿支持组织产品暴露于γ辐射一段时间，在该时间内足以对胎儿支持组织产品进行灭菌。在一些实施方案中，将冻干的胎儿支持组织产品暴露于25kgy的γ辐射一段时间，在该时间内足以对胎儿支持组织产品进行灭菌。在一些实施方案中，将冻干的胎儿支持组织产品暴露于电子束一段时间，在该时间内足以对胎儿支持组织产品进行灭菌。在一些实施方案中，将冻干的胎儿支持组织产品暴露于x射线辐射一段时间，在该时间内足以对胎儿支持组织产品进行灭菌。在一些实施方案中，将冻干的胎儿支持组织产品暴露于uv辐射一段时间，在该时间内足以对胎儿支持组织产品进行灭菌。
再水化
在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品部分或完全再水化。在一些实施方案中，通过使胎儿支持组织产品与缓冲液或水接触来使胎儿支持组织产品再水化。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与等渗缓冲液相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织与盐水相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与pbs相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与林格氏溶液相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与哈特曼氏溶液相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与tris缓冲盐水相接触。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与hepes缓冲盐水；50％dmem+50％甘油；10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％甘油；和/或10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％丙二醇相接触。
在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触10分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触15分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触20分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触25分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触30分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触35分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触40分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触45分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触50分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触55分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触60分钟。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触2小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触3小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触4小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触5小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触6小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触6小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触10小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触12小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触18小时。在一些实施方案中，使胎儿支持组织产品与缓冲液接触24小时。
使用方法
治疗复杂伤口
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂伤口的方法，该方法包括：向个体中的复杂伤口施用治疗有效量的胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该复杂伤口为溃疡、下肢溃疡、足溃疡、慢性足溃疡或缺血性伤口。在一些实施方案中，该复杂伤口为头皮、颅骨、硬脑膜或其组合的伤口。在一些实施方案中，该复杂伤口包含外露骨。在一些实施方案中，该复杂伤口是缺血性的。在一些实施方案中，该复杂伤口是经感染的。在一些实施方案中，该复杂伤口是缺血性的且经感染的。在一些实施方案中，该方法进一步包括对复杂伤口进行清创。在一些实施方案中，该清创为外科清创术。在一些实施方案中，该方法进一步包括对骨骼进行切除。在一些实施方案中，进行骨骼切除直至到达健康骨骼。在一些实施方案中，进行骨骼切除以基本上去除坏死骨骼或患病骨骼。在一些实施方案中，该方法进一步包括打开外露骨的皮质。在一些实施方案中，打开皮质包括在皮质骨中向小梁骨钻孔。在一些实施方案中，该方法进一步包括监测伤口的愈合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向伤口施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该方法还进一步包括向外露骨施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，向外露骨施用第二胎儿支持组织产品包括将第二胎儿支持组织注射至该外露骨中。在一些实施方案中，该方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料，metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用选自抗生素、高压氧疗法、血运重建疗法及其组合的治疗。在一些实施方案中，所述个体患有骨髓炎。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品衍生自脐带。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆、提取物或最终灭菌的产品。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品基本上不含血液。
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，该脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，该脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，该脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，该脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。在一些实施方案中，该脐带产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，该脐带产品为移植物。在一些实施方案中，该脐带产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，该脐带产品来自人脐带、非人灵长类动物脐带、牛脐带或猪脐带。
治疗复杂下肢溃疡
在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的个体中的复杂下肢溃疡的方法，该方法包括：向个体中的复杂下肢溃疡施用有效量的胎儿支持组织产品以治疗复杂下肢溃疡。在一些实施方案中，该溃疡为足溃疡、慢性溃疡、糖尿病足溃疡、动脉功能不全溃疡、静脉淤滞(vs)溃疡、神经营养性溃疡或动脉(缺血性)溃疡。在一些实施方案中，复杂伤口包含外露骨。在一些实施方案中，该方法进一步包括对溃疡进行清创。在一些实施方案中，该清创为外科清创术。在一些实施方案中，该方法进一步包括对骨骼进行切除。在一些实施方案中，进行骨骼切除直至到达健康骨骼。在一些实施方案中，进行骨骼切除以基本上去除坏死骨骼或患病骨骼。在一些实施方案中，该方法进一步包括打开外露骨的皮质。在一些实施方案中，打开皮质包括在皮质骨中向小梁骨钻孔。在一些实施方案中，该方法进一步包括监测溃疡的愈合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向溃疡施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该方法进一步包括向外露骨施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，向外露骨施用第二胎儿支持组织产品包括将第二胎儿支持组织注射至外露骨中。在一些实施方案中，该方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料、metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用选自抗生素、高压氧疗法、血运重建疗法及其组合的治疗。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品衍生自脐带。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆、提取物或最终灭菌的产品。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品基本上不含血液。
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，该脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，该脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，该脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，该脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。在一些实施方案中，该脐带产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，该脐带产品为移植物。在一些实施方案中，该脐带产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，该脐带产品来自人脐带、非人灵长类动物脐带、牛脐带或猪脐带。
治疗脊柱裂
脊柱裂是神经管的先天缺陷，其涉及骨干和脊髓周围的膜的不完全闭合。脊柱裂可分为隐性脊柱裂或囊性脊柱裂。隐性脊柱裂是其中一块或多块脊椎未能正确形成的最轻微形式的脊柱裂，并且通常仅明显地表现为背部上有凹陷、簇生毛发或红色标记。囊性脊柱裂是较严重的形式，并且呈含有脑脊膜的包囊(脑脊膜膨出)、含有脑脊膜和脊髓两者的包囊(脑脊膜脊髓膨出)或仅含脊髓的包囊(脊髓膨出，也被称为脊髓裂)的形式。
在某些实施方案中，本文公开了修复有需要的个体中的脊柱裂缺陷的方法，该方法包括向个体中的脊柱裂缺陷施用治疗有效量的脐带产品以修复该缺陷。在一些实施方案中，脊柱裂缺陷为囊性脊柱裂缺陷。在一些实施方案中，囊性脊柱裂缺陷为脑脊膜膨出缺陷、脑脊膜脊髓膨出缺陷或脊髓膨出缺陷。在一些实施方案中，所述个体为子宫内的胎儿或新生儿。在一些实施方案中，所述个体是子宫内的胎儿。在一些实施方案中，将脐带产品缝合就位。在一些实施方案中，修复包括再生表皮层、真皮层和皮下层。在一些实施方案中，施用脐带产品包括子宫内手术。在一些实施方案中，施用脐带产品包括在出生之后12、24或48小时内进行手术。
在一些实施方案中，所述脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，该脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，该脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，该脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。在一些实施方案中，该脐带产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、薄片、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，该脐带产品为移植物。在一些实施方案中，该脐带产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，该脐带产品是无菌处理的或最终灭菌的。在一些实施方案中，该脐带产品来自人脐带、非人灵长类动物脐带、牛脐带或猪脐带。
减少或预防由肉芽组织形成瘢痕
在某些实施方案中，本文公开了减少或预防有需要的个体中由肉芽组织形成瘢痕的方法，该方法包括：向个体中的肉芽组织施用治疗有效量的胎儿支持组织产品以减少或预防瘢痕形成。在一些实施方案中，肉芽组织在受损组织的愈合期间产生。在一些实施方案中，受损组织为烧伤、伤口、损伤、溃疡或手术的结果。在一些实施方案中，受损组织为皮肤、骨骼、肌肉、肌腱、软骨、韧带、软组织或关节。在一些实施方案中，该方法进一步包括监测受损组织的愈合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向肉芽组织施用第二胎儿支持组织产品。在一些实施方案中，该方法进一步包括用敷料、抗微生物敷料、抗微生物藻酸盐敷料、压迫敷料、metipel伤口接触层、纱布、贴片、基底、背衬、覆盖物、绷带或其组合来覆盖胎儿支持组织产品。
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来源于胎盘羊膜、脐带、脐带羊膜、绒毛膜、羊膜-绒毛膜、胎盘或其任何组合。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆、提取物或最终灭菌的产品。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为移植物。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品是基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品来自人、非人灵长类动物、牛或猪。在一些实施方案中，胎儿支持组织产品基本上不含血液。
在一些实施方案中，胎儿支持组织产品为脐带产品。在一些实施方案中，该脐带产品包含脐带羊膜。在一些实施方案中，该脐带产品进一步包含华顿氏胶。在一些实施方案中，该脐带产品基本上不含血液。在一些实施方案中，该脐带产品不含脐带静脉和脐带动脉。在一些实施方案中，该脐带产品是磨碎的、粉碎的、颗粒化的、移植物、粉末、凝胶、匀浆或提取物。在一些实施方案中，该脐带产品为移植物。在一些实施方案中，该脐带产品为基本上扁平的薄片。在一些实施方案中，该脐带产品来自人脐带、非人灵长类动物脐带、牛脐带或猪脐带。
实施例
实施例1：低温保藏的脐带的单中心、回顾性研究，用以促进具有潜在骨髓炎的患者中的复杂足溃疡愈合
进行回顾性调查，以评估在单一伤口医护中心由同一外科医师通过锐器清创术、切除患骨、打开皮质以及施加低温保藏的脐带(cuc)而治疗的31名患者的愈合，这些患者呈现33个复杂足溃疡并伴有经确认的骨髓炎的组织病理学诊断。
方法
临床数据检索
在由巴拿巴卫生系统机构审查委员会(theinstitutionalreviewboardofthebarnabashealthsystem)(westorange，nj)批准之后进行该回顾性调查，来对关于2013年1月至2014年12月之间在克拉马斯医疗中心(claramaassmedicalcenter)的伤口医护中心由同一外科医师处理的31名合格患者的所有相关临床数据进行获取、核实及后续分析，以确定cuc在促进复杂慢性足溃伤的伤口愈合方面的安全性和有效性。临床数据包括人口统计信息，包括诸如糖尿病、高血压、外周血管疾病、肾病和心血管疾病等共病在内的既往及当前病史，前期治疗以及先前截肢。特别关注通过核实骨骼、肌腱、肌肉或关节囊的暴露、初始伤口面积(cm2)、伤口位置、软组织感染和缺血的存在来评估指标溃疡的程度。另外，还检索了关于伤口测量和摄影术评估的数据，以记录整个随访时间过程中溃疡的变化。
研究患者
所有研究患者均患有展现外露骨骼、肌腱、肌肉或关节囊的非愈合性慢性足溃疡。这些复杂伤口均与骨髓炎的临床诊断相关联，该骨髓炎通过骨骼活组织检查加阳性微生物培养和含有淋巴细胞或浆细胞的骨组织的组织病理学证据而确认。
标准评价和管理
在全面的初始医学评价之后，所有患者均呈现持续时间长于3周、宽度大于2cm且深度为3mm、探骨测试(probe-to-bone)呈阳性或有外露骨的并发有骨髓炎的溃疡。在进行基线x射线和血液检验(包括全血细胞计数、c反应蛋白、红细胞沉降率和碱性磷酸酶)的同时，对患者进行感染性疾病会诊。还对那些呈现疑似外周血管疾病的患者进行血管病会诊。对没有明显血管累及但在临床上高度怀疑骨髓炎(即，白细胞计数、c反应蛋白、红细胞沉降率或碱性磷酸酶升高)以及具有指示骨骼坏死的放射影像学证据的患者立即安排如下治疗：在手术室中，对所有溃疡均进行锐器外科清创术，并且当外科医师认为在医疗上必要时将坏死骨骼切除。对于具有足前溃疡的患者而言，基于物理特性进行骨骼切除直至到达健康骨骼。对于足中和足后溃疡而言，以“逐段(piecemeal)”方式进行骨骼切除，旨在切除大部分患病骨骼组织，同时保留尽可能长的长度。切除后，进行骨骼活组织检查以获得用于微生物培养和骨髓炎的组织病理学确认的样品。还取得了临床上推定为健康的骨骼的小边缘(约2mm)并且将其提交进行病理学分析以确保完全去除患病骨骼，并且指导全身性抗生素施用的持续时间。之后，使任何外露骨接受使用6-2k线或外科清创装置(misonix.inc.,farmingdale,ny)进行的皮质打开程序，以产生约3个(取决于伤口大小)穿过皮质骨到达下面的小梁骨的等距孔。这允许获得多能性成体祖干细胞以帮助如先前所述的修复。然后用一层cuc(
所有患者一旦在临床上稳定就让他们出院，并返回至伤口诊所进行每周一次伤口监测，其包括遵循上述医护标准的敷料更换，同时添加磺胺嘧啶银(
结果测量
通过使用尺子测量伤口的长度和宽度来确定伤口面积。伤口完全愈合被定义为由研究者所确定的100％再上皮化。对于那些实现完全愈合的伤口，评估实现初始伤口闭合所需的总时间。除了伤口闭合之外，还通过如先前所述将初始伤口区域细分为四分位数来评估初始伤口面积与实现闭合所需时间之间的关系。使用非配对t检验在四分位数之间比较平均伤口面积和实现伤口闭合的平均时间；各组之间p值<0.05被认为具有统计学显著性。
结果
患者具有多种共病，包括糖尿病、高血压、外周血管疾病、肾衰竭和冠状动脉疾病。溃疡大部分为缺血性的，一半以上是坏疽性的，并且有一些先前接受过部分截肢和血运重建尝试。平均溃疡大小为15.6±17.7cm2(0.4-73.95cm2)。总体而言，26个伤口实现完全闭合(78.8％)。五名患者失联而无法随访，并且一名患者在治疗过程期间死亡(expired)(相信与治疗无关)，导致未失联而接受随访的患者的愈合率为96.3％，其中cuc平均施加次数为1.24次。尽管建议对所呈现的16种溃疡进行截肢术，但仍有两名患者使用cuc实现伤口完全闭合而无须进行截肢术，一名患者最终接受膝下截肢术，而剩余13个伤口接受部分足趾切除。
临床特征
总共31名呈现33个足溃疡的患者得到鉴定而包括在本研究中。表1中提供了他们的临床数据总结。有26名男性和5名女性，其平均年龄为58.3±12.9岁。所治疗的大多数患者是高加索人(12/31)或非洲裔美国人(10/31)。总体而言，这些患者呈现多种共病，其中最明显的是糖尿病(26/31)、高血压(23/31)、外周血管疾病(16/31)、肾衰竭(12/31)和冠状动脉疾病(9/31)。另外，33个伤口中的24个(72.2％)在临床上被判定为在患肢中是缺血性的，而33个伤口中的17个(51.5％)在患肢上具有坏疽。
表1.患者临床数据总结
本研究中包括的所有溃疡均是持续超过3周且最长达1年7个月的持续时间的非愈合性慢性伤口。在施加cuc时所有伤口的平均伤口面积为15.6±17.7cm2(0.4-73.95cm2)。在初始呈现时，33个溃疡中的9个(27.3％)为足后溃疡，33个溃疡中的21个(63.6％)为主要与足趾相关的足前溃疡，一个溃疡为足底溃疡，而2个溃疡为非愈合性肖帕尔截肢术(chopartamputation)部位溃疡。全部33个溃疡被认为是具有外露肌腱、肌肉、关节囊或骨骼的“复杂”溃疡，并且33个溃疡中的27个(81.8％)展现了全部四种组织的暴露。另外，通过表明在骨髓和阳性微生物培养物中组织病理学存在炎性细胞的骨骼活组织检查，所有患者均被确诊为骨髓炎。在33个伤口中，有16个(48.5％)伤口被任一咨询医师建议进行截肢术。
施加cuc后的伤口愈合
全部33个复杂溃疡经历了锐器清创术、具有活组织检查的坏死骨骼切除、打开皮质及施加cuc，而没有并发症。如通过完全上皮化所证实的，总共26个伤口实现了伤口完全闭合，导致总愈合率为78.8％。在最初施加cuc后，五名患者失联而无法进行施加cuc后的随访，并且一名患者由于据信与研究产品无关的原因而死亡。对于未失联而接受随访的27个伤口而言，总愈合率为96.3％。对于完全愈合的26个伤口而言，平均伤口闭合时间为16.0±9.3周(范围：4-44周)(图2)。愈合的26个伤口中的21个接受单次cuc施加，并且需要2次cuc施加以实现剩余5个伤口的愈合，其中第二次施加在初次施加后4-10周之间进行。由于伤口并发症和其他共病，具有非愈合性伤口的患者经历膝下截肢术。
为了确定初始伤口面积是否对实现伤口完全闭合的时间具有任何影响，基于其分别为2.2±0.9、5.8±1.6、13.8±3.9和43.0±23.1cm2的初始面积将伤口分成四个四分位数(0-25％、25-50％、50-75％和75-100％)(图3a)。正如所预期的那样，在这四个四分位数的伤口大小上存在统计学差异。然而，发现实现伤口闭合的平均时间相似，在它们之间没有统计学显著性差异(图3b)。
尽管建议对所呈现的16个溃疡进行截肢术，但仍有两名患者使用cuc实现了伤口完全闭合而无须进行截肢术。如上所述，一名患者(6.25％)在单次cuc施加之后最终接受膝下截肢术。剩余13个伤口接受部分趾切除，其程度低于最初建议的程度。
代表性病例
病例研究#1：具有坏疽的第2跖骨和第3跖骨伤口
一名52岁女性呈现多种共病，包括ii型糖尿病、糖尿病性神经病变、外周血管疾病、终末期肾病、高血压、高胆固醇血症和冠状动脉疾病。她在左侧第2跖骨和第3跖骨上呈现足前溃疡，并且外露肌肉、肌腱、韧带和骨骼伴有坏疽，其被医院的传染病科建议切除第2趾和第3趾。在锐器清创术、骨骼切除、骨骼活组织检查和打开皮质程序之后，施加cuc以完全覆盖食指溃疡。骨骼活组织检查证实了骨髓炎的诊断。在六周时，伤口大小减小了大约50％。在7周时，注意到伤口愈合进展已经停滞，并且在清创术和打开皮质手术程序之后予以第二次cuc施加。在12周时，食指溃疡实现了完全上皮化，使得第2趾及第3趾得以保留而不需要进行任何截肢术。在整个32周的随访期间，未存在复发。
病例研究#2.第4趾射线截肢(rayamputation)后的伤口
一名患有糖尿病、蜂窝织炎和局部缺血的57岁男性在左侧第4脚趾截肢之后呈现开放伤口，伴有骨骼、肌腱、肌肉和韧带外露。在锐器清创术、骨骼切除、骨骼活组织检查和打开皮质程序之后，施加cuc以完全覆盖伤口。在施加之后4天和两周时，可观察到cuc充满血液。然而，使cuc残余物留在创面上就位，并且伤口继续愈合，至第13周时实现完全再上皮化。
病例研究#3第1趾射线截肢
一名具有i型糖尿病和外周血管疾病史的63岁男性在第一趾射线截肢之后在足中呈现开放伤口。除了骨髓炎以外，患肢上还存在坏疽。在锐器清创术、骨骼切除、骨骼活组织检查和打开皮质程序之后，用cuc来覆盖伤口。在7周时，显示伤口大小减小了44％。在9周时，在锐器清创术和打开皮质手术程序之后进行另一次cuc施加。指标伤口在11周时继续显示改善，并在15周时得以完全愈合。在28周时伤口保持愈合而未复发。
实施例2：用于产前脊柱裂修复的低温保藏的人脐带(huc)与生物纤维素膜(bscf)
针对天然细胞的再生性向内生长和相关的炎性应答，比较缝合在视黄酸(ra)大鼠模型中的脊柱裂(sb)病变上的两种贴片——huc和bcf。
在妊娠期第10天(gd10)用ra(40mg/kg)强饲待产sprague-dawley大鼠，以在幼崽中诱发sb。在gd20进行剖腹术和子宫切开术，并且在脊柱缺陷上缝合huc(n＝11)或bcf(n＝10)。放置于羊膜腔中而未在病变上缝合的贴片为对照。移植后30-34小时获得幼崽并经福尔马林固定。h&e和三色染色评估细胞向贴片中的迁移。进行免疫组织化学以证实细胞迁移的性质。所评估的天然细胞标志物为ck5/6(表皮细胞)、gfap(星形胶质细胞)和vwf(内皮细胞)。炎性标志物为cd3(淋巴细胞)、mpo(嗜中性粒细胞)和f4-80(巨噬细胞)。评估所有贴片和周围渗出物的四个高倍视野(hpf)，并使用image-j软件对细胞进行定量。
幼崽存活期相同：huc8/11，bcf7/10，(p＝0.9)。组织学显示了与bcf贴片中无细胞迁移相比，施加于病变上的所有huc贴片中有细胞迁移(中值：38[范围：13-102]个细胞/hpf)(图；p<0.001)。发现ck5/6阳性细胞在huc贴片表面上迁移(4-7个细胞/hpf)：在与病变邻近的huc贴片表面上发现gfap阳性细胞(3-11个细胞/hpf)；在huc贴片中发现vwf阳性细胞(5-15个细胞/hpf)。在bcf贴片中未发现ck5/6、gfap或vwf阳性细胞(p＝0.03)。huc贴片显示最少mpo(2％[0-7％])、cd3(7％[3-12％])和f4-80(0％)阳性细胞。与bcf相比，huc治疗的幼崽中的分泌物具有较少mpo(0％[0-9％]相比于17％[0-39％]；p<0.01)和cd3(7％[0-13％]相比于15％[0-22％]；p<0.01)阳性细胞，并且表明在f4-80上无差异。huc和bcf对照贴片均未展现浸润。
实施例3：用于子宫内骨髓裂修复的低温保藏的人脐带
本文中描述了在妊娠23周时经历子宫内脊柱裂修复的具有chiariii型畸形的大腰骶骨髓裂的病例。在脑膜层初步闭合后，使用低温保藏的人脐带贴片闭合皮肤缺陷。该妊娠无并发症，并且在37周时通过选择性剖腹产进行分娩。修复部位是完好无损的，而没有皮肤脑脊液漏出的迹象。分娩之后4周的时间内，皮肤再生至贴片。存在chiariii型畸形的完全逆转、侧脑室正常、下肢感觉和运动反应正常、排泄性膀胱尿道造影照片正常。
将在216/7周妊娠时具有胎儿脊髓裂的一名21岁g1p0-0-0转介至赫曼儿童纪念医院(children’smemorialhermannhospital)的胎儿中心以进行可能的子宫内脊柱裂修复。在采用超声和mri两者进行评估时，皮肤缺陷从l3水平延伸至s4，并且没有可辨认的脑膜囊。病变的总尺寸为1.6cm×2.7cm。髂后上棘通过缺陷而凸出。其经历羊膜穿刺术，其结果为46xx核型、母体血清甲胎蛋白升高(中值为8.25倍)以及乙酰胆碱酯酶阳性。胎儿mri显示iii级chiariii型畸形，伴有小脑延髓池和第四脑室消失以及小脑扁桃体成氙至c2-c3水平。左侧脑室经测量为7.1mm，并且右侧脑室经测量为8.1mm。双下肢均活动良好且不存在畸形足。患者符合关于子宫内脊柱裂修复的所有脊髓脊膜膨出研究管理标准(managementofmyelomeningocelestudy，moms)。由于骨髓裂的大尺寸以及皮肤边缘与髂后上棘的关系，讨论了使用贴片覆盖皮肤的必要。在位于德克萨斯州休斯顿市的德克萨斯大学医学院(universityoftexasmedicalschool)的胎儿治疗委员会和机构审查委员会(fetaltherapyboardandtheinstitutionalreviewboard)批准之后，为患者提供huc贴片作为常用
在妊娠24周时，进行类似于mom研究方案的手术。简言之，患者在全身麻醉下行剖腹术，随后使子宫暴露。将胎儿进行定位，使得脊柱裂病变接近于子宫切开术的可能部位。在两个全厚度留置缝合线之间进入子宫。使用可吸收的订合钉(covidien，dublin,ireland)延伸切口。暴露胎儿脊柱裂缺陷部位。通过弗利导管(foleycatheter)输注含有萘夫西林(nafcillin)1g/l的乳酸盐林格氏溶液的连续子宫内输注液。肌肉内施用由芬太尼20μg/kg和麻痹剂(维库溴铵400μg/kg)组成的胎儿麻醉剂。该缺陷被确认为脑膜层延伸超过病变边缘并伴有髂后上棘凸起的脊髓裂。皮肤病变经测量为5cm×6cm。在脑膜和皮肤的接合处制作切口。将脑膜层从筋膜上切下并使用6-omonocryl缝合线(ethicon，somerville,nj)在中线闭合主要路径。使用6-omonocryl缝合线以运行锁定(朝向贴片)的方式将皮肤边缘沿边缝合至huc贴片。对胎儿进行子宫内重新定位。进行羊膜腔灌注以再填充子宫腔。使用0-oprolene缝合线闭合子宫切口，以多个留置缝合线和连续缝合线重新接近边缘。以常规方式闭合剖腹术切口。术后，患者经过静养期，并在术后第5天出院回家。产后过程无并发症。在每周一次超声检查中，发现病变部位覆盖有厚度经测量为3-4mm的组织。发现在脊髓后部和修复部位处的组织下方存在流体填充的空间。
在妊娠371/7周时，患者通过剖腹产选择性分娩。病变部位显示完全得到覆盖，而没有皮肤csf漏出的迹象。贴片呈半透明状，并伴有在其下方可见的透明流体；通过贴片可见硬脑膜闭合。缺陷大小经测量为6cm×5cm。前囟柔软；头围经测量为33.5cm。在腿部中的全部邻近肌肉群中存在对称的5/5力。最初存在轻微的右背屈无力，在出院时得到改善。在全部腰椎皮片、s1和围产期区域中注意到对针测试的感觉。排泄性膀胱尿道造影照片正常，并且排泄后残余量经测量为<5ml。将新生儿以仰卧位放置，采用下脊柱抬高作为预防测量，持续2周。在过渡期间，皮肤迅速再生至移植物中。伤口护理包括每日更换一次非粘连性敷料。
在第1天，贴片呈不透明，并伴有外周血管增多。在第7天，在外周边缘处继续血管形成和上皮化。存在沉积在贴片中心上的血纤蛋白涂层。在第14天，除了其中存在用血纤蛋白覆盖的血管组织的缺陷下部2cm×1.5cm以外，所述缺陷得以完全上皮化。注意到角质化从缺陷边缘向中央部分行进，直至上皮化的组织。在第21天，存在由上皮化和角质化包围的经测量为1cm×1cm的肉芽组织的中央区域。在第28天，除了3×5mm区域仍在上皮化以外，皮肤已经完全愈合并伴有角质化。
在第21天进行头部超声和mri。chiariii型畸形得到完全逆转，并具有左小脑半球的萎缩性变化，与手术之前的后脑疝的红斑一致。侧脑室经测量在正常范围内。存在测量厚度为4-5mm的覆盖缺陷部位的组织桥。在再生的皮肤中不存在流体填充的空间。脊髓和鞘层后部存在流体空间。t1/t2加权图像显示在修复的上边缘处的脊髓至椎管的后鞘覆盖之间的低密度纤维组织(其暗示拴系)。拴系粘连在l3水平上经测量厚度为1mm。圆锥(conus)终止于l4水平。不存在圆锥的拴系。在l2-s1处观察到后脊柱元件的闭合不全。上覆于缺陷的皮肤似乎完好无损，不存在明确的皮下道。
新生儿在第22天出院回家。出院时的头围保持在33cm，具有柔软的和舟状骨成形的前囟。下肢能正常活动。新生儿尿动力学检测在正常范围内，并且肛门反射正常。
在该病例中，贴片的主要目的是在脊髓与羊水之间成功地形成防渗且有效的屏障。huc贴片还显示chiariii型畸形的逆转和出生时下肢神经功能的保留。子宫内缺乏上皮化和角质化是令人惊讶的发现。另外，分娩后血管形成、上皮化和角质化的快速向内生长是显著的，我们能够每日对其加以证实。贴片与硬脑膜闭合之间存在脑脊液以及显示出前囟的波动支持了脑膜密封不完全的可能性。然而，在贴片完全愈合之后，在mri上发现修复部位与脑膜之间不存在流体空间。这支持了防渗愈合。
实施例4：cuc的制备过程
在确定供体合格性和胎盘/脐带适用性之后，根据当前的优质组织规范(cgtp)对来自捐献的人胎盘组织的cuc进行无菌处理。
在收到运输的组织后，将运输容器储存在指定的冰箱中。
对冷冻组织进行解冻以供处理。从胎盘上分离uc并将其打开。去除动脉、静脉和与血管相关联的华顿氏胶的一部分，留下am和其余的华顿氏胶部分。通过在溶液中浸泡并涡旋以及手动轻轻去除来除去血液。
切割组织以达到指定的产品大小。
将每个组织单元无菌封装在储存介质中，即用于单次施加的无菌透明塑料易撕袋中。
实施例5：使用胎儿支持组织产品减少或预防肉芽组织中的瘢痕形成
鉴定具有展现出肉芽组织的伤口的个体。制备胎儿支持组织产品。将胎儿支持组织产品施加至肉芽组织上。将保护性覆盖物置于该胎儿支持组织产品上。
实施例6：使用胎儿支持组织产品修复牙龈伤口
鉴定需要修复牙龈伤口的个体。制备胎儿支持组织产品。根据需要对伤口进行清创。将胎儿支持组织产品置于该伤口上。将保护性覆盖物置于该胎儿支持组织产品上。
实施例7：使用胎儿支持组织产品修复受损的关节腔
鉴定需要修复受损的关节腔的个体。制备胎儿支持组织产品。准备关节腔。将胎儿支持组织产品置于该关节腔上。将保护性覆盖物置于该胎儿支持组织产品上。
实施例8：使用胎儿支持组织产品治疗复杂足溃疡
鉴定患有复杂足溃疡的个体。制备胎儿支持组织产品。根据需要对该溃疡进行清创。根据需要对骨骼进行切除。任选地，进行打开皮质程序。将胎儿支持组织产品置于该溃疡上。将保护性覆盖物置于该胎儿支持组织产品上。
实施例9：低温保藏的脐带(cuc)对累及软组织和骨骼的黑素瘤去除后的辐射伤口的治疗
该患者是具有肾移植史(由于多囊性肾病)且最近在其头皮上有黑素瘤的87岁男性。手术去除显示癌症已渗透到骨骼。邻近大脑的黑素瘤不允许以手术方式将其全部去除，因此患者经历了放射治疗。辐射导致颅骨坏死，并且具有外露大脑硬脑膜的明显伤口。
将4×3cmcuc移植物(neox1k；nx-10-4030)切成6条，并在伤口上以星号图案放置，并用非粘连性敷料(adaptictouch)覆盖。在4周内，移植物得到吸收，并且创面已经开始颗粒化。在最初施加cuc移植物后16周，将100mg颗粒形式的组织(cr-fl-100mg；clarixflo)注射至骨骼中以刺激颅骨边缘的进展。从最初施加cuc起21周，发现在上皮化和颅骨边缘中均有进展。因此，将另外100mg颗粒cuc(clarixflo)注射至骨骼中，并沿伤口边界放置第二个4×3cmcuc组织移植物(nx-10-4030)以促进该伤口完全愈合。
本病例研究证明了cuc的独特愈合能力。值得注意的是，该患者的年龄、肾功能受损以及暴露于辐射产生了极具挑战性的伤口环境。然而，将cuc引入伤口不仅促进了伤口的软组织完全愈合，而且还表现出刺激骨再生的能力，这是新的观察结果。
尽管本文中已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对本领域技术人员而言显而易见的是：这些实施方案仅以示例的方式提供。本领域技术人员在不脱离本发明的情况下现将会想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文中所述的本发明实施方案的各种替代方案可用于实施本发明。旨在以下述权利要求限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。