参考相关申请此申请主张提申日期2016年2月17日的美国临时申请第62/296,252号依据35u.s.c.119(e)的权益，该案全文援引于此并融入本说明书的揭示。有关联邦赞助研发的陈述本发明根据nihey024868、ey017017、ey022275、p01hd18655；波士顿儿童医院眼科基金会与全体教员生涯发展奖、亮焦基金会(brightfocusfoundation)、雄狮眼研究公司(masslionseyeresearchinc.)nihey024963在政府的赞助下进行。政府对本发明拥有若干权利。
背景技术：
：：黄斑部的视网膜新生血管乃老年人的第一大眼盲起因(lim,l.s.,etal.,lancet379,1728-1738(2012))。光接收器乃人体中最高耗能细胞中的一者(wong-riley,m.t.t.eyebrain2,99-116(2010)，及okawa,h.,etal.,currbiol18,1917-1921(2008))，而黄斑部乃光接收器的最高密度区。视网膜血管瘤增殖(rap)血管病变出现在黄斑部毛细血管扩张症(mactel)(yannuzzi,l.a.,etal.retina32suppl1,450460(2012))，以及出现在15-20％新生血管性年龄相关性黄斑部变性(amd)(bottoni,f.,etal.archophthalmol123,1644-1650(2005))，此点与视网膜血管新生相关联的高能源需求符合一致。虽然vegf促成黄斑部疾病的新生血管，但引发vegf分泌的因素大半仍然未知。血脂异常和粒线体功能异常(年龄相关性)乃新生血管性amd的重要因素(feehan,m.,etal.bmcmedgenet12,83(2011)，fritsche,l.g.,etal.natgenet40,892-896(2008)，及barot,m.,etal.,curreyeres36,1069-1077(2011))。目前对amd或mactel并无治愈之道。因此，业界需要有识别改善及/或预防amd及/或mactel的治疗方法的需要。技术实现要素：本发明至少部分地基于识别游离脂肪酸受体1(ffa1，又称g蛋白耦合受体(gpr)40依赖型(gpr40)蛋白质)作为以血管生成为特征的神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病及/或病症的治疗标靶。特别预期涵盖以一种或多种拮抗剂，包括已知的拮抗剂诸如gw1100，反义试剂及/或rnai试剂靶定ffa1，用于治疗或预防以血管生成为特征的眼睛(例如，视网膜)疾病或病症。于本发明的某些方面中，也经识别如于本文中描述的能够针对眼睛的血管疾病诸如年龄相关性黄斑部变性(amd)及早产儿视网膜病变(rop)，以及通常针对视网膜变性及/或视网膜肿瘤发挥疗效。于某些方面中，本文中也经识别，不仅ffa1(gpr40)，同时例如gpr84及/或gpr120也如此被靶定而具有相似的疗效。也预期涵盖使用眼睛及/或视网膜细胞来筛检与识别抑制ffa1的额外化合物或试剂。不欲受理论所限，ffa1的抑制作用相信经由增加葡萄糖进入视网膜而发挥疗效。于一个方面中，本发明提出一种于个体的神经细胞治疗或预防血管生成及/或于个体治疗或预防癌症的方法，该方法涉及(a)识别患有神经细胞血管生成或有神经细胞血管生成风险及/或患有癌症或有发展成癌症风险的个体；及(b)将ffa1抑制剂投予该个体，由此治疗或预防该个体的神经细胞中的血管生成及/或治疗或预防该个体的癌症。于一个具体例中，所述神经细胞为视网膜细胞，任选地为光感受器细胞。本发明的另一方面提出一种于个体治疗或预防视网膜血管瘤增殖(rap)血管病变的方法，该方法涉及(a)识别患有癌症或有发展成rap血管病变风险的个体；及(b)将ffa1抑制剂投予该个体，由此治疗或预防该个体的rap血管病变。于某些具体例中，该个体患有黄斑部毛细血管扩张症(mactel)或新生血管性年龄相关性黄斑部变性(amd)。于一个具体例中，比较适当对照个体的所述细胞，该个体的所述细胞的脂质摄取受损。于另一个具体例中，该个体患有血脂异常或粒线体功能异常。于一额外具体例中，该ffa1抑制剂为小分子拮抗剂或rnai试剂。任选地，ffa1拮抗剂为gw1100。于某些具体例中，该ffa1抑制剂投予该个体的该眼部。任选地，该ffa1抑制剂借玻璃体内注射投予。于另一个具体例中，投予该ffa1抑制剂加强于该个体的所述视网膜细胞中的glut1表达。本发明的一额外方面提出一种于视网膜细胞增加葡萄糖摄取的方法，该方法涉及获得一视网膜细胞及让该视网膜细胞与ffa1抑制剂接触，由此增加于该视网膜细胞中的葡萄糖摄取。于一个具体例中，该视网膜细胞为于活体外的一视网膜细胞。于某些具体例中，于与ffa1抑制剂接触的该视网膜细胞中glut1表达被加强。本发明的另一方面提出一种识别一试验化合物为ffa1抑制剂的方法，该方法涉及让一视网膜细胞与一试验化合物接触；及测量于该视网膜细胞中的葡萄糖摄取，其中于该试验化合物的存在下，于该视网膜细胞中的葡萄糖摄取增加的度量识别了该试验化合物为ffa1抑制剂。于某些具体例中，该视网膜细胞具有极低密度脂蛋白受体(vldlr)基因的突变或删除，其遏止于该视网膜细胞中的脂肪酸摄取。于一个具体例中，于与试验化合物接触的该视网膜细胞中glut1表达被加强。本发明的一额外方面提出一种于个体治疗或预防眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症的方法，该方法涉及(a)识别患有癌症或有发展成眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症的个体；及(b)将gpr84抑制剂投予该个体，由此治疗或预防该个体的眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症。于一个具体例中，该gpr84抑制剂为小分子拮抗剂或rnai试剂。于另一个具体例中，该gpr84抑制剂为glpg1205。于某些具体例中，该眼睛的血管疾病为年龄相关性黄斑部变性(amd)或早产儿视网膜病变(rop)。本发明的另一方面提出一种于个体治疗或预防眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症的方法，该方法涉及(a)识别患有癌症或有发展成眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症的个体；及(b)将gpr120抑制剂投予该个体，由此治疗或预防该个体的眼睛的血管疾病、视网膜变性及/或癌症。于某些具体例中，该gpr120抑制剂为小分子拮抗剂或rnai试剂。于另一个具体例中，该gpr120为4-甲基-n-9h-呫吨-9-基-苯磺酰胺。定义除非另行定义，否则本文中使用的全部技术与科学术语皆具有本发明所属本领域技术人员一般了解的意义。下列参考文献给本领域技术人员提供于本发明中使用的许多术语的通用定义：剑桥科技辞典(thecambridgedictionaryofscienceandtechnology)(walkered.,1988)；遗传学辞汇(theglossaryofgenetics),5thed.,r.riegeretal.(eds.),springerverlag(1991)；及hale&marham,哈波柯林生物学辞典(theharpercollinsdictionaryofbiology)(1991)。如于本文中使用，除非另行载明，否则下列术语具有后文赋予其的意义。除非另行陈述或从上下文中显然自明，否则如于本文中使用，术语「约」须了解落入于业界的正常公差范围内，例如，平均值的两个标准差以内。「约」可被了解为落入于所陈述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、或0.01％以内。除非从上下文另行明白了解，否则本文中提供的全部数值皆由术语「约」加以修饰。「试剂」表示任何小型化合物、抗体、核酸分子、或肽或其片段。「试剂」包括如下文定义的「治疗剂」。如于本文中使用，「年龄相关性黄斑部变性」或「amd」指造成接近视网膜中心的一个小点或眼睛需要锐利中心视力部分的黄斑部劣化或崩坏的眼睛病况。更明确而言，黄斑部内部的光感受器细胞缓慢地死亡，如此造成视力的进行性丧失。「改善」一词表示减少、遏止、衰减、减轻、中止、或稳定化疾病的发展或进行。如于本文中使用，「激动剂」指提升蛋白质的生物功能的分子。因而激动剂可结合至标靶蛋白质以提引出其功能。然而，本文也涵盖不会结合至蛋白质的激动剂。激动剂可直接地或间接地提升蛋白质的生物功能。增加某些基因的表达的激动剂预期涵盖于本发明的特定具体例的范围。合宜的激动剂将为本领域技术人员显然易知。用于本发明，激动剂并非必要直接地提升标靶蛋白质的功能。反而，也预期涵盖在最终导致标靶蛋白质活化的路径上游稳定化、或提升一个或多个蛋白质功能的激动剂。另外，激动剂可抑制标靶蛋白质的负向转录调节子的功能，其中该转录调节子作用在最终遏止标靶蛋白质的转录的路径上游。「拮抗剂」可指称例如，通过竞争激动剂的一个或多个结合位点而干扰另一个分子的活性或结合，但不会诱生活性反应的分子。如于本文中使用，癌症可包括下列类型的癌症：乳癌；胆管癌；膀胱癌；脑癌包括胶质母细胞瘤及髓母细胞瘤；子宫颈癌；绒毛膜癌；大肠癌；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；血液肿瘤包括急性淋巴细胞性及骨髓性白血病；t细胞急性淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤；毛细胞白血病；骨髓性白血病、多发性骨髓瘤；爱滋性相关性白血病及成人t细胞性白血病淋巴瘤；上皮内肿瘤包括波温氏病及帕吉氏病；肝癌；肺癌；淋巴瘤包括何杰金氏病及淋巴球性淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌包括鳞状细胞癌瘤；卵巢癌包括源自于上皮细胞、基质细胞、生殖细胞、及间质细胞者；胰癌；摄护腺癌；直肠癌；肉瘤包括平滑肌肉瘤、骨骼肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、及骨肉瘤；皮肤癌包括黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、基底细胞癌、及鳞状细胞癌；睪丸癌包括胚肿瘤，诸如精原细胞瘤、非精原细胞瘤(畸胎瘤、绒毛膜癌)、基质肿瘤、及生殖细胞肿瘤；甲状腺癌包括甲状腺癌瘤及髓质癌瘤；及肾癌包括腺癌及威尔姆氏肿瘤。其它癌症为本领域技术人员显然易知。于本文揭示中，「包含」、「包含有」、「含有」、及「具有」等可具有如于美国专利法中对其赋予的相同意义，且可表示「包括」、「包括有」等；同理，「主要组成为」或「主要组成有」也具有如于美国专利法中对其赋予的相同意义，且该术语为开放端者，允许有比所引述者更多者的存在，只要其被引述的基本或新颖特性不因多于所引述者的存在而被改变即可，但先前技术具体例除外。本文中提供的任何组合物或方法可与本文中提供的任何其它组合物及方法中的一或多者组合。「血脂异常」一词表示血液中的脂质含量异常。血脂异常传统上借脂质及脂蛋白的升高样式分类。更实用的系统将血脂异常分类为原发性或续发性，及将其以只有胆固醇增加(纯粹或经分离的高胆固醇血症)、只有tg增加(纯粹或经分离的高三酸甘油酯血症)、或胆固醇和tg两者增加(混合型或组合型高脂血症)加以特征化。「有效量」表示改进未经治疗病人的疾病症状需要的试剂的用量。用于实施本发明用来治疗性处理疾病的活性剂的有效量取决于投予方式、个体的年龄、体重、及一般健康状况而改变。最终，临床医师或兽医师将决定适当用量及用法。此种用量称作为「有效」量。「游离脂肪酸受体1」或「ffa1」又称作gpr40，类别ag-蛋白耦合受体，由ffar1基因加以编码(nm_005303.2mrna；np_005294.1蛋白质)。于自然界ffa1由中链至长链脂肪酸活化。「抑制性核酸」表示双股rna、sirna、shrna、或反义rna、或其部分、或其模拟物，其当投予哺乳动物细胞时导致目标基因的表达减少(例如，达10％、25％、50％、75％、或甚至9-100％)。壳聚糖组合物用于病原感染及相关疾病的治疗或预防上有用的多核苷酸(诸如抑制性核酸分子)的递送上有用。典型地，核酸抑制剂包含目标核酸分子的至少一部分、或其同源基因，或包含目标核酸分子的互补股的至少一部分。举例而言，抑制性核酸分子包含此处描绘的任何或全部核酸的至少一部分。术语「黄斑部」指视网膜内部的一小区。黄斑部是负责中心视力，允许看东西清晰的视网膜部分。虽然只占视网膜的一小部分，但黄斑部比视网膜其余部分对细节更敏锐。许多老年人在身体自然老化过程中发展出黄斑部变性。黄斑部变性的症状包括视力模糊、中心视力的黑暗区或扭曲、或甚至中心视力的永久丧失。通常不影响侧边视力或周边视力。术语「粒线体疾病」指发生在细胞的粒线体无法产生足够能量供给细胞或器官功能使用时的慢性遗传疾病。粒线体疾病有许多形式包括：粒线体肌病、糖尿病、莱伯氏遗传性视神经病变、李氏症候群、神经病变、共济失调、色素性视网膜炎及上睑下垂(narp)、肌强直性癫痫及破烂红纤维(merrf)、及粒线体肌病、脑肌病、乳酸中毒、中风样症候群(melas)。如于本文中使用，如于「获得试剂」中的「获得」包括合成、购买、或以其它方式取得该试剂。除非另行陈述或从上下文中显然自明，否则如于本文中使用，术语「或」须了解为涵括。除非另行陈述或从上下文中显然自明，否则如于本文中使用，术语「一(a)」、「一(an)」、及「该」须了解为单数或复数。「光感受器细胞」指视网膜的庞大神经元。光感受器细胞收集光能单元(光子)，及将事件登录为中枢神经系统的电气信号。然后，信号中继到视网膜的神经元的邻接层，及在资讯沿视神经纤维传送到大脑以前组织资讯。「pparα」指过氧化物酶体增殖物激活受体α，此乃由ppara基因编码的核蛋白。pparα为转录因子及肝脏中脂质代谢的调节因子。pparα主要通过配位子结合活化，包含，例如，用来治疗高脂血症的纤维酸盐(fibrate)药物，及杀虫剂、除草剂、塑化剂、及有机溶剂的各式各样集合，其合称为过氧化物酶体增殖物。如于本文中使用，术语「预防」、「预防的」、「预防作用」、「预防性处理」等指于未患有，但有风险或对发展出病症或病况易感的个体降低发展出病症或病况的机率。「参考」一词表示标准或对照，例如，标准或对照条件。本文中提供的范围须了解为在该范围以内的全部数值的速记法。举例而言，1至50的范围须了解为包括选自于由下列所组成的组群中的任何数字、数字组合、或子范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50。「减少」一词表示至少10％、25％、50％、75％、或100％的负向变更。「sirna」一词表示表示双股rna。最适宜地，sirna为长18、19、20、21、22、23或24核苷酸及在其3’端有2个碱基旁出。此等dsrna可被导入个别细胞内或全动物体内；举例而言，其可透过血流而被系统性导入。此等sirna被用来向下调节mrna浓度或启动子活性。如于本文中使用，术语「shrna」(小发夹rna)指rna双链体，其中部分sirna为发夹结构(shrna)的一部分。除了双链体部分以外，发夹结构可含有位在形成双链体的二序列间的环圈(loop)部分。环圈的长度可改变。于有些具体例中，环圈为长度5、6、7、8、9、10、11、12或13个核苷酸。发夹结构也可含有3’或5’悬垂(overhang)。于有些方面中，悬垂为长度0、1、2、3、4或5个核苷酸的3’或5’悬垂。于某些方面中，载体中的核苷酸序列作为小发夹rna表达的样板，包含有义区、环圈区、及反义区。于表达以后，有义区及反义区形成双链体。就是这个双链体形成shrna，其杂交至例如ffar1mrna，及减少ffa1的表达，诱导新生血管生成。「个体」一词表示哺乳动物，包括，但非限制性，人类或非人哺乳动物，诸如牛、马、犬、羊、或猫。「治疗上有效量」为足够执行有利的或期望的结果包括临床效果的量。有效量可以一次或多次投药投予。如于本文中使用，术语「治疗」、「治疗的」、「治疗性」等指减轻或改善与其相关联的病症及/或症状(例如，amh、mactel或眼部的其它血管生成相关联的疾病或病症，或一般肿瘤)。须了解虽然并非排它，但治疗病症或病况并不要求病症、病况或与其相关联的症状完全消失。术语「肿瘤」、「固体肿瘤」、「原发性肿瘤」、及「续发性肿瘤」指神经元来源的癌瘤、肉瘤、腺瘤、及癌症，及实际上指并非源自于造血系统的任何类型的癌症，及特别有关于：癌瘤、肉瘤、腺瘤、肝细胞癌、肝细胞癌、肝母细胞癌、骨骼肌肉瘤、食道癌、甲状腺癌、神经节母细胞瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤、尤温氏肿瘤(ewing’stumor)、平滑肌肉瘤、骨骼肌上皮肉瘤(rhabdotheliosarcoma)、大肠癌、胰癌、乳癌、卵巢癌、摄护腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肾细胞癌、血肿、胆管癌、黑素瘤、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、威尔姆氏肿瘤、子宫颈癌、睪丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶细胞瘤、星状细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、视网膜母细胞瘤、多发性骨髓瘤、直肠癌、甲状腺癌、头颈癌、脑癌、周边神经系统癌、中枢神经系统癌、神经母细胞瘤、子宫内膜癌，以及以上全部的转移。本文中提供的任何组合物或方法可与本文中提供的任何其它组合物及方法中的一或多者组合。本发明的其它特征及优点从后文实施方式及申请专利范围各项将为本领域技术人员显然易知。附图说明图1a描绘示意图，其显示视网膜能源缺乏与vldlr-/-中的血管病变相关联。当有足够养分能满足其能源需求时，光感受器具有高代谢率。hif被降解，未产生vegf。用于糖解及脂肪酸β-氧化的底物减少，可能减低克雷伯氏循环代谢产物α-酮戊二酸的产量，此乃以标签标示hif1α用于降解的丙基羟基酶(phd)的辅因子。hif1α稳定化可触发光感受器中vegf的表达，刺激病理性新生血管病变的发展。图1b描绘影像，其显示于p16，源自于深部血管丛(dvp)的vldlr-/-视网膜中的，及破口出外网状层(p12)的，朝向光感受器外节段(os)延伸的病变血管；比例尺：200微米。n＝5视网膜。图1c描绘比较正常12小时明/暗周期(ctl.对照，n＝28)，于暗处养育的vldlr-/-仔畜(n＝10视网膜)以提高视网膜能源需求的影像及条形图，比例尺：1毫米(左)，0.5毫米(其它)。白点标示血管病变(p＝0.0031)。图1d描绘影像，其显示借视网膜扫描电子显微术(sem)影像的3d重建而量化的粒线体体积；光感受器内部的粒线体(假彩色)；n＝23光感受器。比例尺：5微米。p<0.0001。图1e描绘条形图，其显示比较同窝仔畜对照组wt(n＝4)，vldlr-/-视网膜中的视网膜atp浓度显著较低；双尾学生t-试验，**p<0.01，***p<0.001。p＝0.0026。结果以平均值±sem呈现。图2a描绘线图，其显示于有或无脂肪酸(fa)氧化抑制剂伊托莫夕(etomoxir)(40μm)存在下，被提供以长链脂肪酸棕榈酸盐的野生型(wt)视网膜的耗氧率(ocr)；n＝6-8视网膜。图2b描绘条形图，其显示于有或无fa氧化抑制剂伊托莫夕(40μm)存在下，被提供以长链fa棕榈酸盐或对照组(ctl：牛血清白蛋白或bsa)的wt视网膜的最大ocr；n＝6-8视网膜。图2c描绘条形图，其显示于wt小鼠及vldlr-/-小鼠体内的循环血浆棕榈酸盐浓度。n＝7wt，13vldlr-/-小鼠血浆样本；(n＝wt:7，vldlr-/-:13视网膜p<0.0001)。图2d描绘热图，其显示借lc/ms/ms测量的faβ-氧化程度的代谢产物阵列；n＝3动物视网膜。图2e描绘条形图，其显示借lc/ms/ms测量的总酰基肉碱及游离肉碱浓度(p＝0.0014)；n＝3动物视网膜。图2f描绘条形图，其显示借qrt-pcr，完好视网膜(左：p＝0.0052)雷射拍摄显微切片(lcm)视网膜层的cpt1amrna。onl：外核；inl：内核(光感受器)及gcl：神经节细胞层；n＝3动物视网膜。图2g描绘影像及条形图，其显示18f-fdg显微pet/ct扫描，泄示于vldlr-/-视网膜中的葡萄糖摄取减少，由视网膜伽玛放射性计数加以证实；比例尺：4mm，n＝22wt，12vldlr-/-视网膜；p＝0.0116。图2h描绘条形图，其显示借lcm及qrt-pcr，glut1mrna(于完好视网膜中表达左，n＝9wt；12vldlr-/-视网膜；p＝0.0119)及视网膜层(右)(n＝3视网膜)。双尾学生t-试验(图2c-2f及图2g-2i)及单向anova带有tukey事后分析(图2b、2f、及2h)；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。图2i描绘条形图及墨点图，其显示完好wt及vldlr-/-视网膜的glut1蛋白质表达；n＝6视网膜p＝0.03；结果以平均值±sem呈现。双尾学生t-试验(图2c-2f及图2g-2i)及单向anova带有tukey事后分析(图2b、2f、及2h)；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。图3a描绘示意图，其显示ffa1调制视网膜的葡萄糖摄取及rap。于vldlr-/-视网膜中的脂质摄取减少，增加了胞外中/长链fa，亦即脂质感测器ffa1的激动剂，其与glut1表达减低相关联。图3b描绘条形图，其显示于wt及vldlr-/-完好视网膜中fa感测gpcr的表达。图3c描绘条形图，其显示借lcm(qrt-pcr)，视网膜层中的ffar分布。onl：外核层；inl：内核层；gcl：神经节细胞层；n＝3动物视网膜；ffa1激动剂gw9508。图3d描绘条形图，其显示葡萄糖摄取(3h-2-dg追踪剂)(n＝ctl：5-8ctl，gw：9-16个经gw处理的视网膜)。图3e描绘条形图及墨点图，其显示ffa1激动剂gw9508激动剂glut1蛋白质表达(n＝12视网膜；p<0.0001)。图3f描绘影像及条形图，其显示于p16，于wt及于vldlr-/-小鼠的rap样病变血管病变的数目。图3g描绘影像，其显示vldlr-/-小鼠的ffar1删除(vldlr-/-/ffar1-/-)已重建葡萄糖摄取(18f-fdg；n＝4视网膜；比例尺：4mm，gw：n＝11载体ctl：n＝7，p＝0.0002)。图3h描绘条形图及墨点图，其显示于vldlr-/-小鼠的ffar1删除(vldlr-/-/ffar1-/-)提高了glut1蛋白质表达至wt程度(n＝wt:10，其它9视网膜)。图3i描绘影像及条形图，其显示比较同窝仔畜vldlr-/-/ffar1+/+小鼠，于vldlr-/-小鼠的ffar1删除(vldlr-/-/ffar1-/-)减少了wt(无病变)及vldlr-/-小鼠的rap样病变血管病变的数目(p16；n＝10视网膜；p＝0.0153)。双尾学生t-试验(图3e、3f、及3i)及单向anova带有邓尼特(dunnett’s)(图3b、3c、3g、及3h)或杜凯氏(tukey’s)(图3d)事后比较；*p≤0.05，**p<0.01，***p<0.001。结果以平均值±sem呈现。图4a描绘示意图，其显示燃料缺乏vldlr-/-视网膜生成较少的α-酮戊二酸及较多的vegf。葡萄糖摄取及fa摄取的双重缺乏减少了vldlr-/-视网膜中的乙酰辅酶a(lc/ms/ms；n＝wt：11，vldlr-/-：15动物视网膜)。图4b描绘条形图，其显示丙酮酸摄取及fa摄取的双重缺乏减少了vldlr-/-视网膜中的乙酰辅酶a(lc/ms/ms；n＝wt：15，vldlr-/-：12动物视网膜；p＝0.0032)。图4c描绘条形图，其显示葡萄糖摄取及fa摄取的双重缺乏减少了vldlr-/-视网膜中的乙酰辅酶a(lc/ms/ms；n＝wt：11，vldlr-/-：15动物视网膜；p＝0.0069)；借测量乙酰基肉碱估计。图4d描绘条形图，其显示于vldlr-/-视网膜中的tca(克雷伯氏)循环中间产物α-kg(lc/ms/ms；n＝wt：11，vldlr-/-：15动物视网膜；p＝0.0016)。连同氧气(o2)，α-kg为(以标签标示hif1α用于借脯胺酸羟基化(羟脯胺酸)降解的)丙基-羟基酶脱氢酶(phd)的主要共活化剂。图4e描绘条形图，其显示于wt及vldlr-/-视网膜中羟脯胺酸残基的浓度借lc/ms/ms测量；n＝wt：15，vldlr-/-：12动物视网膜；p＝0.0004。图4f描绘墨点图及条形图，其显示wt、vldlr-/-、及vldlr-/-/ffar1-/-视网膜核摘取的hif1α稳定化。核仁纤维蛋白(fibrillarin(fb1))用作为核负荷对照(n＝3全部组别)。图4g描绘影像，其显示于vldlr-/-光感受器层中的hif1α视网膜表达(onl；p12视网膜铺片(flatmount))。比例尺：100微米；左：延伸焦点；中图及右图：3d共焦ihc，n＝3。图4h描绘条形图，其显示也分泌vegfa(p16，elisa，n＝6视网膜，n＝3视网膜)。图4i描绘影像，其显示也分泌vegfa及3d共焦ihc，n＝3视网膜；比例尺：100微米；左：延伸焦点；中图及右图：3d共焦ihc。图4j描绘条形图，其显示比较无病变新生血管的对照个体(黄斑部裂孔；n＝8)，借elisa测得患有amd，其或为视网膜血管瘤增殖(rap，n＝3)或为脉络膜新生血管(cnv)，的人类个体具有较高的vegfa玻璃体浓度。双尾学生t-试验(图4c及4d)，曼恩-惠尼(mannwhitney)试验(4b及4e)，及单向anova带有事后邓尼特(图4f及4g)或杜凯氏多重比较(图4h)；*p≤0.05，**p<0.01，***p<0.001。结果以平均值±sem呈现。图5a描绘条形图，其显示光感受器选择性vldlr删除，生成了rap样病变。于wt(n＝4)，杂合子(het)vldlr+/-(n＝5)及vldlr-/-小鼠(n＝5视网膜；qrt-pcr)中的视网膜vldlr表达；ns：无显著意义。图5b描绘条形图，其显示采用于光感受器中局部剔除vldlr的vldlr+/-(het)小鼠的三酸甘油酯。n＝wt：7vldlr+/-：8血浆。图5c描绘条形图，其显示采用于光感受器中局部剔除vldlr的vldlr+/-(het)小鼠的棕榈酸盐浓度。n＝wt：7vldlr+/-：8血浆。图5d描绘影像，其显示含光感受器特异性hrk启动子的aav2病毒性载体经选殖，以涵括萤光egfp及对抗vldlr的不同的shrna(cahill,g.f.nengljmed282,668-675(1970)，wong-riley,m.t.t.eyebrain2,99-116(2010)，及niu,y.-g.&evans,r.d.jlipids2011,189876(2011))。图5e描绘影像，其显示视网膜下载体注射(p1)及视网膜收集(p12,16,26)的时间。图5f描绘影像，其显示病毒性载体的视网膜分布。图5g描绘影像，其显示于光感受器(onl)中病毒性载体的视网膜分布。os：外节段，is：内节段，onl：外核层；inl：内核层；gcl：神经节细胞层；n＝5视网膜。图5h描绘条形图，其显示于vldlr+/-小鼠借3个不同shrna的视网膜vldlr遏止(qrt-pcr；n＝shctl:8,shrna-1:12,shrna-2:4,shrna-3:8视网膜)。图5i描绘影像，其显示当于vldlr+/-小鼠光感受器中的vldlr被选择性删除时，发展出若干rap样病变。dvp：深部血管丛，rpe：视网膜色素上皮。n＝5视网膜。双尾学生t-试验(图5b及5c)及单向anova带有邓尼特事后比较(图5a及5h)；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。图6a描绘示意图，其显示脂肪酸及葡萄糖供应燃料给小鼠视网膜。图6a描绘脂肪酸及葡萄糖代谢会聚而产生乙酰辅酶a的示意综览图，乙酰辅酶a供应燃料给克雷伯氏(或tca)循环及电子移转链(etc)而产生atp；ns：无显著意义。图6b描绘线图，其显示于有(n＝8)或无(n＝6视网膜)伊托莫夕(etomoxir)(40μm)存在下，与棕榈酸盐培养的活体外视网膜的耗氧率(ocr)。图6c描绘条形图，其显示于有(n＝8)或无(n＝6视网膜)伊托莫夕(40μm)存在下，与棕榈酸盐培养的活体外视网膜的最大ocr；p＝0.0027。图6d描绘线图，其显示与葡萄糖(12mm)培养的且经以2-去氧基葡萄糖(2-dg；100mm)处理或否的，以抑制糖解及葡萄糖氧化的活体外视网膜的ocr；n＝8视网膜。图6e描绘条形图，其显示与葡萄糖(12mm)培养的且经以2-去氧基葡萄糖(2-dg；100mm)处理或否的，以抑制糖解及葡萄糖氧化的活体外视网膜的最大ocr。n＝8视网膜；p＝0.0019。图6f描绘条形图，其显示针对葡萄糖(n＝8)或棕榈酸盐(n＝6视网膜)相对于其个别的抑制剂的最大氧化能力。图6g描绘条形图，其显示于含葡萄糖培养基(12mm，6小时)培养的活体外视网膜的葡萄糖摄取及乳酸分泌；糖解考虑大部分16葡萄糖利用率，每个葡萄糖分子产生2个乳酸；n＝4视网膜。图6h描绘条形图，其显示棕榈酸盐增加了野生型(wt；n＝ctl：15，棕榈酸盐：14视网膜)的最大ocr，但于vldlr-/-视网膜则否(n＝ctl：10，棕榈酸盐：13视网膜；p＝0.0035)；双尾曼恩-惠尼(图6b、6c、及6f)或学生t-试验(图6d、6e、及6h)；**p<0.01。图7a描绘影像及条形图，其显示于vldlr-/-小鼠的脂质摄取不足。借雷射拍摄显微切片(lcm及qrt-pcr)，vldlr于光感受器(外核层；onl)高度表达。gcl：神经节细胞层，inl：内核层，rpe：视网膜色素上皮。n＝3视网膜。图7b描绘影像，其显示比较以萤光色素加标记的长链fa(波里皮(bodipy)c-16)管饲的vldlr-/-小鼠，于wt小鼠的光感受器内节段(is)中此等以萤光色素加标记的长链fa增加。也须注意从与脂质摄取减少相关联的血清脂质增加，造成了vldlr-/-小鼠的目测可见混浊血清(角隅)；n＝3视网膜。图7c描绘条形图，其显示比较wt视网膜(n＝16)，vldlr-/-(n＝12)的溴棕榈酸盐-14c视网膜摄取的减少。图7d描绘条形图，其显示与三酸甘油酯的增加相关联的，比较wt视网膜(n＝16)，vldlr-/-(n＝12)的溴棕榈酸盐-14c视网膜摄取减少。图7e描绘影像及条形图，其显示比较wt视网膜(n＝16)，vldlr-/-(n＝12)的溴棕榈酸盐-14c视网膜摄取减少，fa血浆浓度(红：棕榈酸盐，c16)；n＝wt：7，vldlr-/-；13血浆样本；双尾曼恩-惠尼(图7e)或学生t-试验(图7c-7e)及单向anova带有tukey事后比较(图7a)；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。图8a描绘条形图，其显示于vldlr-/-小鼠pparα(过氧化物酶体增殖物激活受体α)的角色。调节faβ氧化的pparα于vldlr-/-视网膜被遏止(n＝3，p＝0.0079)。图8b描绘条形图，其显示调节faβ氧化的pparα于vldlr-/-视网膜被遏止，大部分于光感受器(onl，n＝3动物)。图8c描绘影像及条形图，其显示pparα激动剂wy16463减少血管病变数目。ctl：n＝10，wy：n＝12视网膜；p＝0.0429。双尾学生t-试验(图8a及8c)及单向anova带有tukey事后比较(图8b)；*p<0.05，***p<0.001。图9a描绘线图，其显示外生性脂质及内生性脂质借光感受器的fa氧化。于有或无伊托莫夕(40μm)存在下，与接合至bsa的棕榈酸盐或单独bsa(对照组)培养的光感受器(661w)的活体外耗氧率(ocr)；n＝5-6视网膜。图9b描绘条形图，其显示于有或无伊托莫夕(40μm)存在下，与接合至bsa的棕榈酸盐或单独bsa(对照组)培养的光感受器(661w)的最大氧化能力；n＝5-6视网膜。图9c描绘线图，其显示于有或无棕榈酸盐存在下且以pparα激动剂处理与否(gw9578，100nm，48小时)，光感受器(661w)的ocr；n＝4-6视网膜。图9d描绘条形图，其显示于有或无棕榈酸盐存在下且以pparα激动剂处理与否(gw9578，100nm，48小时)，光感受器(661w)的最大氧化能力；n＝4-6视网膜。图9e描绘线图，其显示于有或无棕榈酸盐存在下且以pparα激动剂处理与否(gw9578，100nm，48小时)，光感受器(661w)的胞外酸化率(ecar)；n＝4-6视网膜。图9f描绘条形图，其显示于有或无棕榈酸盐存在下且以pparα激动剂处理与否(gw9578，100nm，48小时)，光感受器(661w)的胞外酸化率(ecar)；n＝4-6视网膜。如由可相媲美的酸化率提示，pparα激动剂诱生faβ-氧化而不显著地影响糖解。单向anova带有tukey事后比较(图9a-9d)及克鲁斯凯-沃利斯(kruskal-wallis)带有邓恩氏(dunn’s)多重比较(图9e及9f)；ns：无显著意义，***p<0.001。图10a描绘影像，其显示葡萄糖代谢在vldlr-/-视网膜受阻遏。比较wt与vldlr-/-视网膜，碳水化合物代谢是在基因阵列上最受到调节的分子路径。独创性路径分析(ingenuitypathwayanalysis)，n＝3动物(同窝仔畜)。图10b描绘条形图，其显示与糖解的最终单向步骤相关联的丙酮酸酯激酶(pkm2)在基因阵列上高度被调节。借qrt-pcr于vldlr-/-视网膜确证pkm2遏止。n＝wt：6，vldlr-/-：5视网膜；p＝0.0215。图10c描绘条形图及墨点图，其显示在wt(n＝4)与vldlr-/-(n＝3)视网膜间，glu3及glu4蛋白质表达并无显著差异；双尾学生t-试验；*p<0.05。图11a描绘条形图，其显示glut1受ffa1调节。ffa1激动剂gw9508(gw)减少了在wtp＝0.0142与vldlr-/-p＝0.0284的glut1表达；视网膜；n＝11-16视网膜。图11b描绘条形图，其显示葡萄糖摄取(18f-fdg)；于vldlr-/-小鼠的ffar1删除重建了视网膜葡萄糖摄取及glut1表达；n＝b：6-17，c：3-9视网膜。图11c描绘条形图，其显示于wt、vldlr-/-、vldlr-/-/ffar1-/-、及ffar1-/-视网膜中的glut1mrna表达。于vldlr-/-小鼠的ffar1删除重建了视网膜葡萄糖摄取及glut1表达；n＝b：6-17，c：3-9视网膜。图11d描绘条形图，其显示ffar1的基因剔除(活体外)(使用sirna；p＝0.0025)。图11e描绘条形图，其显示使用sirna的ffar1基因剔除，防止了于光感受器细胞(661w)中glut1被gw9508遏止；n＝3实验。图11f描绘条形图，其显示mek/erk信号传导抑制(pd：pd98059，20μm；p＝0.0056)防止了于661w光感受器中ffa1媒介的glut1遏止，但非jnk信号传导(sp：sp600125，50μm，p＝0.0121)；n＝3-7。双尾学生t-试验(图11a、11d、及11f)或曼恩-惠尼(图11f)，及单向anova带有邓尼特(图11b及11c)或邦费罗尼(bonferroni’s)事后比较(图11e)；*p≤0.05，**p<0.01，***p<0.001。结果以平均值±sem呈现。图12a描绘影像，其显示ffa1激动剂增加视网膜血管瘤增殖。ffa1被具有c>6的脂肪酸活化(briscoeetal.j.biol.chem278:11303-11311)。喂饲c8-10的mct(中链三酸甘油酯；n＝10视网膜)的小鼠比较对照组(当量盐水；n＝15视网膜；p＝0.0011)，血管病变数目多于两倍。图12b描绘条形图，其显示喂饲mct的小鼠遏止了于vldlr-/-视网膜的glut1表达；p＝0.0231。图12c描绘影像及条形图，其显示选择性ffa1激动剂tak-875显著地增加了rap样病变数目；ctl:n＝9，tak:n＝8视网膜；p＝0.0035；比例尺：1毫米。结果以平均值±sem呈现。双尾学生t-试验；*p<0.05，**p<0.01。图13a描绘墨点图及条形图，其显示ffa1稳定化hifα，及促进光感受器中vegfa的分泌。于活体内，于wt视网膜中ffa1激动剂gw9508(gw)稳定化了hifα；n＝6实验；p＝0.0044。图13b描绘墨点图及条形图，其显示于vldlr-/-视网膜中ffa1激动剂gw9508(gw)稳定化了hifα；n＝6实验；p＝0.0411。图13c描绘墨点图及条形图，其显示于经gw9508处理的或葡萄糖欠乏的光感受器(661w)中，葡萄糖摄取的减少与稳定化的hifα相关；n＝3实验；p＝0.0006。图13d描绘条形图，其显示于经gw9508处理的或葡萄糖欠乏的光感受器(661w)中，葡萄糖摄取的减少与vegfa表达的增加相关；n＝3实验。图13e描绘条形图，其显示于经gw9508处理的或葡萄糖欠乏的光感受器(661w)中，葡萄糖摄取的减少与分泌(elisa)相关；n＝3实验；p＝0.0013。双尾学生t-试验(图13a、13c、及13e)或曼恩-惠尼试验(图13b)，及双向anova带有邦费罗尼事后比较(图13d)；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。结果以平均值±sem呈现。图14a描绘条形图，其显示巨噬细胞环绕成熟的(但非早期发育不全的)rap样病变。巨噬细胞的标记(cd68)于vldlr-/-rap样病变发展(p12)初期并未增加，即便具有较多血管病变的于暗处养育的仔畜亦复如此；n＝7-13视网膜。图14b描绘条形图，其显示发炎性细胞激素(tnfα)于vldlr-/-rap样病变发展(p12)初期并未增加，即便具有较多血管病变的于暗处养育的仔畜亦复如此；n＝7-13视网膜。图14c描绘影像，其显示巨噬细胞/微神经胶质细胞(iba1，绿色)。图14d描绘影像，其显示如由病变的共焦剖面图确证，巨噬细胞/微神经胶质细胞环绕成熟血管病变；n＝5视网膜。图14e描绘影像，其显示如由病变的共焦剖面图确证，巨噬细胞/微神经胶质细胞并不环绕接近深部血管丛(dvp)的新生rap样血管。n＝5视网膜。onl：外核层。比例尺：图14e，20微米。克鲁斯凯-沃利斯带有邓恩氏多重比较；*p<0.05，**p<0.01。具体实施方式优选实施例的详细说明本发明至少部分地基于发现视网膜使用脂肪酸(fa)β氧化作为能源，及特定而言，当脂肪酸(fa)为可资利用时，脂质感测器(ffa1)制止葡萄糖的摄取。发现ffa1的此种角色，至少部分地指示于个体及/或模型系统中，以血管生成为特征的神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病及/或病症，透过治疗上有效量/预防上有效量的ffa1抑制剂投予该个体及/或模型系统，能被有效地治疗或预防。任选地，眼睛的血管疾病诸如年龄相关性黄斑部变性(amd)及早产儿视网膜病变(rop)的治疗，以及通常视网膜变性及/或视网膜肿瘤的治疗，预期也涵盖于本发明的抑制剂的范围内。于相关方面中，不仅ffa1(gpr40)同时也例如gpr84及/或gpr120能被靶定于相似的疗效。明确地预期涵盖使用已知的ffa1抑制剂，包括小细胞化合物及抑制性核酸。也预期涵盖透过例如，活体外监视与例如化合物存库接触的视网膜细胞(任选地包含vldlr删除)的葡萄糖摄取，来识别新颖ffa1抑制剂的方法。本发明的额外方面及实施例描述如下。作用机转不欲受理论所限，相信本发明以如下方式发挥作用。具有高代谢率的组织常利用脂质以及葡萄糖作为能源，赋与在盛宴及饥荒期间的存活优势(cahill,g.f.nengljmed282,668-675(1970))。目前教理提示高耗能光感受器依赖葡萄糖(wong-riley,m.t.t.eyebrain2,99-116(2010))。在具有高代谢率的组织中表达的极低密度脂蛋白受体(vldlr)，有助于三酸甘油酯衍生的fa的摄取(niu,y.-g.&evans,r.d.jlipids2011,189876(2011))。vldlr存在于光感受器(dorrell,m.i.,etal.jclininvest119,611-623(2009))。在vldlr-/-视网膜中，ffa1感测到高循环脂质浓度，遏止了葡萄糖转运子glut1，尽管fa的摄取减少亦复如此(goudriaan,j.r.,etal.journaloflipidresearch45,1475-1481(2004))。此种葡萄糖进入光感受器内的障碍，导致了克雷伯氏循环中间产物α-酮戊二酸(kg)的脂质/葡萄糖双重燃料缺乏及减少。低α-kg浓度促成由饥饿的vldlr-/-光感受器产生的缺氧诱生因子1α(hif1α)稳定化及血管内皮生长因子(vegfa)分泌，吸引新生血管来供应燃料。此等反常的血管入了侵vldlr-/-视网膜中正常无血管的光感受器，关联着与人体高玻璃体vegf浓度相关联的的视网膜血管瘤增殖(rap)，此乃新生血管性年龄相关性黄斑部变性(amd)的一个子集(bottoni,f.,etal.archophthalmol123,1644-1650(2005))。因此，脂质及葡萄糖调节异常的光感受器能源代谢可能是新生血管性amd及其它视网膜疾病的驱动力。视网膜新生血管(rap)出现在黄斑部毛细血管扩张症(mactel)(yannuzzi,l.a.,etal.retina32suppl1,450-460(2012))以及出现在15-20％黄斑部新生血管性年龄相关性黄斑部变性(amd)(bottoni,f.,etal.archophthalmol123,1644-1650(2005))，amd乃老年人眼盲的最主要起因(lim,l.s.,lancet379,1728-1738(2012))。在黄斑部里最密集的光感受器属于最高耗能细胞与粒线体丰富的细胞(wong-riley,eyebrain2,99-116(2010)，及okawa,currbiol18,1917-1921(2008))，此乃与高能源需求引发黄斑部新生血管符合一致。vegf促成了视网膜新生血管，但在黄斑部疾病中引发vegf分泌的因素仍大半未知。脱序的光感受器粒线体能源代谢的假说是：在正常无血管的光感受器中驱使反常的血管生成，试图增加燃料的供应，此乃与血脂异常及粒线体功能异常(老化相关联的)是新生血管性amd的主要风险因子符合一致(lim,l.s.,lancet379,1728-1738(2012))。视网膜神经元相信仰赖葡萄糖作为燃料(wong-riley,eyebrain2,99-116(2010)，及cohen,l.h.&noell,w.k.jneurochem5,253-276(1960))。葡萄糖被代谢成丙酮酸酯(通过糖解作用)，在进入克雷伯氏循环以产生atp以前，在细胞溶质中转化成乳酸，或在粒线体中氧化成乙酰辅酶a。于光感受器中，主要葡萄糖转运子为glut1(mantych,g.j.,endocrinology133,600-607(1993)，及gospe,s.m.,jcellsci123,3639-3644(2010))。临床上，glut1的缺乏导致婴儿癫痫发作与发育迟缓(klepper,j.epilepsia49suppl8,46-49(2008))，强调了葡萄糖代谢在脑部的重要性。然而，glut1缺乏的个体具有正常的视力，提示了视网膜能源的替代底物，或许透过脂质β氧化作用。脂质β氧化常见于具有高代谢率的心脏和骨骼肌，于其中丰富的vldlr有助于脂肪酸(fa)的摄取(lopaschuk,g.d.,etal.,physiolrev90,207-258(2010))。vldlr与乳糜微粒结合，及使得长链脂肪酸能借脂蛋白脂解酶而自三酸甘油酯(tg)裂解(goudriaan,j.r.,etal.jlipidres45,1475-1481(2004))(goudriaan,j.r.,etal.journaloflipidresearch45,1475-1481(2004))。vldlr助长活性脂蛋白脂解酶跨内皮细胞的胞吞传输(obunike,j.c.,etal.jbiolchem276,8934-8941(2001))，而传递游离fa至组织，vldlr删除遏止了心脏的脂质摄取及faβ-氧化(niu,y.-g.&evans,r.d.jlipids2011,189876(2011))。在vldlr丰富的及脂质丰富的光感受器中有相似机转的假说被提出。脂质β-氧化酶在眼睛表达(tyni,t.,etal.,pediatrres56,744-750(2004))。临床上，vldlr删除引发黄斑部病变(tyni,t.,etal.,pediatrres56,744-750(2004))，及vldlr-/-小鼠发展出rap样的视网膜血管病变(图1a)(dorrell,m.i.,etal.jclininvest119,611-623(2009))。vldlr-/-小鼠使其能探索下述假说：脂质供应燃料给光感受器，而燃料缺乏促成了新生血管。年龄相关性黄斑部变性(amd)amd乃50岁以上长者的常见眼睛病况及视力丧失的领先起因。amd造成黄斑部的损伤，黄斑部乃接近视网膜中心，及需要有锐利的中心视力的眼睛部分的一小点，其让我们看到正前方的物体。有些人的amd进行太过缓慢，因而长期不会出现视力损失。而于其它人，疾病进展得较快速，而可能造成一眼或两眼的视力丧失。随着amd的进展，靠近视力中心有个模糊区乃常见症状。随时间的推移，模糊区可能变大，或在中心视力可能发展出空白点。物体也可能不如过去般明亮。amd本身不会导致完全眼盲，没有看东西的能力。然而，amd的丧失中心视力可能干扰简单日常活动，诸如看脸孔、开车、阅读、写字，或在家中做近距离工作，诸如煮饭或修理东西的能力。血脂异常血脂异常是以血中脂质的含量异常为特征。于已开发国家中，大半血脂异常乃高脂血症，其常因饍食及生活方式所致。传统上，血脂异常借脂质及脂蛋白的升高样式分类。更实用的系统将血脂异常分类为原发性或续发性，及将其以只有胆固醇增加(纯粹或经分离的高胆固醇血症)、只有tg增加(纯粹或经分离的高三酸甘油酯血症)、或胆固醇和tg两者增加(混合型或组合型高脂血症)加以特征化。血脂异常通常不会引发症状，但能导致症候性血管病，包括冠状动脉病(cad)、中风、及周边动脉病。高浓度tg(>1000mg/dl[>11.3mmol/l])可能引发急性胰炎。高浓度ldl可能引发角膜弓环，及在阿基里斯腱、肘腱、及膝腱及在掌指关节上方的肌腱黄瘤。粒线体疾病(年龄相关性)粒线体疾病乃发生在细胞的粒线体无法产生足够能量供给细胞或器官功能使用时的慢性遗传病。美国的发生率约为1:4000个体。粒线体疾病有许多形式包括：粒线体肌病、糖尿病、莱伯氏遗传性视神经病变、李氏症候群、神经病变、共济失调、色素性视网膜炎及上睑下垂(narp)、肌强直性癫痫及破烂红纤维(merrf)、及粒线体肌病、脑肌病、乳酸中毒、中风样症候群(melas)。粒线体的疾病显然对脑、心、肝、骨骼肌、肾、及内分泌系统及呼吸系统的细胞造成最大损伤。取决于何种细胞受害，症状可包括丧失运动控制、肌肉虚弱与疼痛、胃肠病症及吞咽困难、成长发育不良、心脏病、肝病、糖尿病、呼吸并发症、癫痫发作、视觉/听觉问题、乳酸中毒、发育迟缓、及好发感染。黄斑部黄斑部由提供锐利的中心视力的数百万个感光细胞组成。黄斑部是视网膜最敏感的部分，其位在眼睛的背后。视网膜将光转换成电信号，及然后，通过视神经将此等电信号发送至大脑，于该处所述电信号被转译成我们看到的影像。当黄斑部受损时，你的视野的中心可能出现模糊、扭曲、或黑暗。mactel(黄斑部毛细血管扩张症)黄斑部毛细血管扩张症是黄斑部受影响而造成中心视力丧失的疾病。黄斑部负责中心视力的视网膜(内衬在眼睛背后的感光组织)中的一小区，使其能清晰的看到精细细节。当环绕中心凹(黄斑部的中心)的微细血管有问题时，出现黄斑部毛细血管扩张症。有两型黄斑部毛细血管扩张症(第1型及第2型)，及其各自对血管产生不同的影响。黄斑部毛细血管扩张症可能出现为视网膜血管病或系统性疾病诸如糖尿病或高血压的结果，但于许多情况下，临床所见显示并无已知的起因。黄斑部毛细血管扩张症的一项严重的并发症是在视网膜下方发展出异常血管。此病称作脉络膜新生血管，可能要求注射称作血管内皮生长因子抑制剂(anti-vegf)的药物。anti-vegf药物靶定于在眼中在视网膜下方造成异常血管生长的特定化学物质。该化学物质称作血管内皮生长因子或称vegf。借药物注射阻断vegf，可减少异常血管的生长，减缓其渗漏，有助于减少视网膜的肿胀、及于某些情况下可能改善视力。第1型黄斑部毛细血管扩张症于第1型黄斑部毛细血管扩张症中，血管变成扩张，形成了微小动脉瘤，造成黄斑部细胞肿胀受损。该病几乎经常性地只出现在一眼，而与第2型有别。第2型黄斑部毛细血管扩张症最常见的黄斑部毛细血管扩张症是第2型黄斑部毛细血管扩张症，其中环绕中心凹的微细血管渗漏、变扩张(变宽)或二者。此乃未知起因的两侧疾病，其以黄斑部毛细血管网路变异及神经感觉萎缩为特征。于某些情况下，新生血管生成于视网膜下方，其也可能断裂或渗漏。来自渗漏血管的流体造成了黄斑部肿大或增厚，此种病况称作黄斑部水肿，其影响中心视力。又，在黄斑部及中心凹上方偶尔可能生成瘢痕组织，造成细节视力的丧失。第2型影响双眼，但非必然有相同的严重程度。rap(视网膜血管瘤增殖)rap描述起源于神经感觉视网膜内部的血管病程，始于毛细血管增殖，视网膜内新生血管生成，及视网膜-视网膜血管吻合。rap病变已在文献中被特征化为具有不良自然病史，但其参考组为何未明。此等陈述指视力结果、解剖结果、或两者也未明。报告rap病变的文献内部另一项重复出现的理论是，此等病变对治疗的反应不佳，并无明确疗法显示对减少视力耗损与控制病变为有效益。如此已导致针对此等病变使用多种不同治疗模型，疗法表单类似已经用于任何amd相关cnv病变的疗法，包括：直接雷射光凝固、穿瞳孔热疗法、病变的手术移除、视网膜馈给血管的手术切除、由萤光或吲哚靛青绿(icg)染料导引的有及无玻璃体内三胺可酮(triaminocolone)的光动态疗法(pdt)、眼周乙酸阿奈可塔夫(anecortave)；使用皮葛塔尼(pegaptanib)钠(眼技药品公司(eyetechpharmaceuticals)，美国纽约)、赖尼比祖马(ranibizumab)(鲁山堤(lucentis)，基因技术公司(genentechinc)，美国加州南旧金山)、或比乏喜祖马(bevacizumab)(雅乏斯汀(avastin)，基因技术公司，美国加州南旧金山)的抗血管内皮生长因子(vegf)治疗方案；或前述的各种组合。早产儿视网膜病变(rop)早产儿视网膜病变(rop)乃潜在造成眼盲的眼睛病症，其主要影响在31周妊娠期(足月怀孕具有38-42周的妊娠期)以前出生的体重约2又3/4磅(1250克)或以下的早产儿。婴儿生产时愈小，则婴儿愈有可能出现rop。此种病症通常出现在双眼，乃儿童期视力丧失的最常见起因中的一者，可能导致终生视力损伤及目盲。rop于1942年首次被诊断出。随着新生儿照护的进步，更小的更早产的婴儿被救回。此等婴儿具有远较高的rop风险。并非全部早产儿皆会发展出rop。美国每年约出生390万个婴儿；其中约有28,000个的体重为2又3/4磅或以下。此等婴儿中约14,000-16,000个患有某种程度的rop。较轻度的rop病例，疾病改善而未留下永久性损害。患有rop的全部婴儿中约有90％属于较轻度类别而无需治疗。然而，患有较重度疾病的婴儿可能发展出视力损伤或甚至目盲。每年约有1,100-1,500个婴儿发展出rop，其够严重而需要药物治疗。每年美国约有400-600名婴儿因rop而变成法定盲人。rop被分类成五期，从轻度(第i期)至重度(第v期)：第i期-轻度异常血管生长。发展出第i期的许多儿童无需治疗即改善，且最终发展成正常视力。疾病本身自行缓解而不再进一步进行。第ii期-中度异常血管生长。发展出第ii期的许多儿童无需治疗即改善，且最终发展成正常视力。疾病本身自行缓解而不再进一步进行。第iii期-重度异常血管生长。异常血管朝向眼睛中心生长，而非遵照其沿着视网膜表面的正常生长样式。发展出第iii期的有些婴儿无需治疗即改善，且最终发展成正常视力。然而，当婴儿发展成某种程度的第iii期及「外加疾病」时，则须考虑治疗。「外加疾病」表示视网膜的血管变大且变扭曲，指示疾病恶化。此时治疗具有良好的预防视网膜剥离的机会。第iv期-视网膜部分剥离。来自瘢痕的拖曳力造成出血，异常血管将视网膜自眼壁拉扯开。第v期-视网膜完全剥离及疾病的末期。若于此期将眼睛置的不理，则婴儿患有严重视觉受损及甚至目盲。发展出rop的大部分婴儿属于第i期或第ii期。然而，于少数婴儿，rop恶化，偶尔极为快速恶化。未经治疗的rop危及摧毁视力。患有rop的婴儿被视为于后来一生中有较高风险发展出某些眼睛问题，诸如视网膜剥离、近视(近视眼)、斜视(斜视眼)、弱视(弱视眼)、及青光眼。于许多病例中，此等眼睛问题可获得治疗或控制。当异常血管生长且扩展遍布视网膜(内衬在眼睛背后的组织)时出现rop。此等异常血管脆弱且可能渗液，视网膜结痂而将视网膜拉扯脱位。如此造成了视网膜剥离。视网膜剥离乃rop中视力受损与目盲的主要起因。数种复杂的因素可能造成rop的发展。在约16周的怀孕期，当视网膜的血管开始在眼睛背后的视神经生成时，眼睛开始发育。血管逐渐朝向发育中的视网膜边缘生长，供给氧气及养分。在孕期的最末12周期间，眼睛快速发育。当婴儿足月生产时，视网膜血管生长大部分已经完全(视网膜通常在生产后数周至一个月结束生长)。但若婴儿为早产，在此等血管已经到达视网膜边缘以前生产时，正常血管生长可能停止。视网膜边缘(周边)可能无法获得足够的氧气及养分。相信此时视网膜周边送出信号至视网膜的其它区要求供应营养。结果，新的异常血管开始生长。此等新生血管脆弱而可能出血，导致视网膜结痂。当此等瘢痕收缩时，拉扯视网膜，造成视网膜从眼睛背后剥离。迄今为止，经证实的最有效的rop治疗为雷射疗法或冷冻疗法。雷射疗法「烧掉」没有正常血管的视网膜的周边。利用冷冻疗法，医师使用生成冰冻温度的仪器，简单地接触覆在视网膜周边上方的眼表上的多点。雷射疗法与冷冻疗法两者皆摧毁视网膜的周边区，减慢或逆转血管的异常生长。不幸地，治疗也破坏了若干侧边视力。如此进行是为了挽救吾等视力最重要的部分-吾等需要用在「正前方」活动诸如阅读、缝纴、及开车的锐利中心视力。雷射疗法与冷冻疗法两者只在患有恶化rop的婴儿执行，特别是第iii期带有「外加疾病」。两种治疗皆被视为眼睛的侵入性手术，医师未知各自的长期副作用。于rop的后期阶段，其它治疗选项包括：●巩膜扣带。如此涉及环绕眼球放置一条硅胶带，将其系紧。如此避免玻璃体凝胶拉扯瘢痕组织，使得视网膜能摊平贴回眼球壁上。因眼球持续生长故，带有巩膜扣带的婴儿须在数月或数年后移除扣带；否则将变成近视眼。巩膜扣带通常在患有第iv期或第v期的婴儿执行。●玻璃体切除术。玻璃体切除术涉及去除玻璃体，而以盐水溶液置换。玻璃体被移除以后，视网膜上的瘢痕组织可被撕离或切除，让视网膜能松弛，向下贴回抵靠着眼球壁。玻璃体切除术只在第v期执行。虽然rop治疗减低了视力丧失的机会，但并非经常能防止视力丧失。并非全部婴儿皆对rop治疗有反应，疾病可能恶化。若针对rop的治疗无法发挥功效，则可能发展成视网膜剥离。经常，只有部分的视网膜剥离(第iv期)。当出现此种情况时，可能无需进一步治疗，原因在于部分剥离可能维持原状或未经治疗即消失不见。但于某些情况下，医师可能推荐治疗以试图防止视网膜剥离的进一步恶化(第v期)。若视网膜中心剥离或整个视网膜剥离，则中心视力受威胁，可能推荐动手术以重新贴回视网膜。ffa1(又称为gpr40)「游离脂肪酸受体1」或「ffa1」也称作为gpr40，属于由ffari基因编码的类别ag-蛋白耦合受体。ffa1被中链至长链脂肪酸活化。gpcr为以具有七个推定穿膜域为特征的膜蛋白，所述穿膜域通过活化对多样性生理功能具有关键重要性的胞内信号传导路径而对多个分子起反应。ffa1首度被识别为来自人类基因体dna片段的孤儿受体(亦即，没有已知配位基的受体)。ffa1在胰脏β细胞及胰岛素分泌细胞中高度表达。ffa1活化关联到胞内信号传导蛋白质的gq家族的调制，及同时诱生升高的钙浓度。已了解脂肪酸作为ffa1的配位基，及脂肪酸透过ffa1调节胰岛素的分泌。g-蛋白耦合受体的调制(例如，选择性激动剂刺激)导致磷酸脂酶c活化，及产生肌糖醇1,4,5-三磷酸及二酰基甘油，及升高的胞内钙浓度，其活化凋亡蛋白酶(caspase)依赖型细胞凋亡径路(tsujihata,etal.,jpharmacolexpther339:228-237(2011)；及briscoe,etal.jbiochem278,11303-11311(2003))。gpr40激动剂(例如，通过选择性激动剂刺激)已经用来抑制某些癌细胞(例如，衍生自神经脊组织的癌症)的生长或诱生某些癌细胞的凋亡。又复，gpr40激动剂业已报告对某些癌症及癌细胞导致胞毒性效应。gpr40的激动剂刺激(例如，透过ω-3脂肪酸)活化了抑制癌症且对癌症的治疗上及/或预防上有用的信号传导路径。gpcr乃具有七个穿膜域的膜蛋白，及可对多种分子起反应，由此活化胞内信号传导的转导路径，且对达成多项生理功能具有关键重要性。ffa1是在细胞表面上识别的第一个脂肪酸受体，能够与血浆中最常见的脂肪酸结合，诸如棕榈酸盐、油酸盐、硬脂酸盐、亚油酸盐、及亚麻酸盐等。ffa1可视为养分感测受体，扮演数种组织依赖型角色，其可能影响整体葡萄糖运用及/或脂肪代谢。举例而言，于胰脏13细胞透过ffa1的活化，长链ffa可扩增gsis。若干专利申请已揭示一连串ffa1激动剂，诸如wo2005087710、wo2005051890、及wo2004106276。其它gpcr预期涵盖借本发明的组合物、配方及方法靶定的其它gpcr，包括gpr120、gpr44(又称为前列腺素d2受体2(dp2))、gpr42、gpr84、及人类等同物。举例而言，gpr120业已显示媒介ω-3脂肪酸的抗发炎功效及胰岛素敏化功效，及gpr120的缺乏造成脂肪代谢减低，因而导致肥胖。gpr120抑制剂实施例可包括4-甲基-n-9h-呫吨-9-基-苯磺酰胺。于另一实施例中，gpr84为具有c9至c14碳链长度的中链ffa的受体。发炎可高度诱发其表达，其在嗜中性细胞上的表达可以lps刺激而予增高，而以gm-csf刺激而予减少。gpr84不会被在单核细胞/巨噬细胞中由lps诱生的短链及长链饱和及不饱和ffa所活化。此外，gpr84在单核细胞/巨噬细胞中的活化可以浓度相依性方式，扩大lps刺激的il-12p40产量。gpr84抑制剂实施例为glpg1205。糖尿病性视网膜病变糖尿病性视网膜病变描述影响视网膜内血管的一种糖尿病性眼病，此乃糖尿病病人视力丧失最常见的起因，且是工作年龄成年人中视力受损及目盲的领先起因。来自糖尿病的长期高血糖是与视网膜中的血管损伤有关，因而导致糖尿病性视网膜病变。如此改变了水晶体的曲率，结果导致发展出视力模糊症状。一旦血糖浓度获得控制，则因水晶体肿胀结果导致的远距离视力模糊将消退。糖尿病病人的血糖浓度获得更佳控制也将减慢糖尿病性视网膜病变的发作与进行。糖尿病性视网膜病变的症状可包括在个体的视野里看到小点或飘浮物、视力模糊、个体的视力中心有暗点或空白点、及夜间视物困难。糖尿病性视网膜病变可通过四个阶段进行：i.轻度非增殖性视网膜病变：可能发生视网膜血管中小的膨胀区造成微小鼓起，称作微小动脉瘤，从其壁面凸起。ii.中度非增殖性视网膜病变：疾病的进行可能导致血管肿胀及扭曲，因此影响其传输血液的能力。iii.重度非增殖性视网膜病变：更多血管被阻断，剥夺了血液供应到视网膜各区。iv.增殖性糖尿病性视网膜病变：疾病的恶化阶段，于其中，由视网膜分泌的生长因子触发了新生血管的增殖，其沿着视网膜的内侧表面生长，及生长入填充眼球的流体内部。新生血管脆弱，使得其较易渗液及出血。瘢痕组织可能造成视网膜剥离(将视网膜从底下组织扯离)。视网膜剥离可能导致永久性视力丧失。脂肪酸受体gpr40已获得关注作为治疗第ii型糖尿病的有展望的治疗标靶。业界提供证据证实，注意到gpr40的活化改良了葡萄糖耐性，其又转而有利于治疗第ii型糖尿病(例如，激动剂tak-875)。然而，参考文献仍然未明有关gpr40的抑制是否将有利于治疗第ii型糖尿病。小分子拮抗剂(dc260126)业已显示可通过减轻β细胞过度负荷，而保护不发生胰脏β细胞功能异常。ffa1抑制剂预期涵盖ffa1的抑制剂用于本发明的方法及组合物。此等抑制剂包括小分子及核酸抑制剂两者。ffa1的小分子抑制剂包括下列。gw-1100(4-[5-[(2-乙氧基嘧啶-5-基)甲基]-2-[(4-氟苯基)甲基硫烷基]-4-侧氧基嘧啶-1-基]苯甲酸乙酯)为已知的ffa1的抑制剂，具有如下结构式。dc260126(n-(4-丁基苯基)-4-氟-苯磺酰胺)乃另一种被识别为gpr40的小分子拮抗剂的化合物(sunetal.plosdoi:10.1371/journal.pone.0066744)，具有如下结构式。其它业界已知的ffa1抑制剂及更通常为gpcr抑制剂包括例如百日咳毒素。前述ffa1抑制剂化合物仅为举例说明，原因在于任何业界已知的ffa1抑制剂皆预期涵盖使用于本发明的方法及组合物。神经元变性神经元变性是以神经元的结构及功能的进行性丧失及包括神经元死亡为特征。许多神经变性疾病包括肌萎缩性脊侧索硬化、帕金森氏病、阿兹海默氏病、及杭丁顿氏病，因神经变性病程的结果而发生。此等疾病为无法治愈，结果导致神经元细胞的进行性变性及/或死亡。只有极小部分(少于5％)的神经变性疾病是因基因突变所引起，其余皆由毒性蛋白在脑部累积及丧失粒线体功能，因而导致神经毒性分子浓度增高所引起。随着调查研究的进展，关着在次细胞层级上，此等疾病彼此间出现许多相似性。不同的神经变性病症间有许多平行发展，包括非典型蛋白质构成体以及诱发细胞死亡。神经变性可出现在自分子层级至系统层级范围的神经元循环的许多不同层级。神经变性疾病的最大风险因子为老化。粒线体dna突变以及氧化压力两者皆促成老化。许多此等疾病皆为晚期发作，各种疾病的潜在因子为神经元随着年龄的老化而逐渐丧失功能。目前并无疗法可资应用于治愈神经变性。针对各种疾病，药物只能缓和症状，及辅助改良病人的生活品质。癌症本发明可进一步提供癌症的治疗方法，及更特定而言，可用来变更恶性细胞的代谢。癌症可被称作为细胞不受控制的生长，其干扰身体系统的正常功能。从其原先位置迁移且播种于活命器官的癌症，最终可能透过患部器官的功能恶化而导致个体的死亡。癌瘤为源自上皮细胞的恶性癌症，包括腺癌及鳞状细胞癌瘤。肉瘤为结缔组织或支持组织的癌症，包括骨肉瘤、软骨肉瘤、及胃肠道基质肿瘤。造血系统癌症诸如白血病能够在个体的正常造血空腔中竞争胜出，因而导致造血衰竭(呈贫血、血小板缺乏、及嗜中性血球缺乏形式)，最终造成死亡。本领域技术人员能将癌症分类为肉瘤、癌瘤、或造血系统癌症。如于本文中使用，癌症包括下列类型的癌症：乳癌；胆管癌；膀胱癌；脑癌包括胶质母细胞瘤及髓母细胞瘤；子宫颈癌；绒毛膜癌；大肠癌；子宫内膜癌；食道癌；胃癌；血液肿瘤包括急性淋巴细胞性及骨髓性白血病；t细胞急性淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤；毛细胞白血病；骨髓性白血病、多发性骨髓瘤；爱滋性相关性白血病及成人t细胞性白血病淋巴瘤；上皮内肿瘤包括波温氏病及帕吉氏病；肝癌；肺癌；淋巴瘤包括何杰金氏病及淋巴球性淋巴瘤；神经母细胞瘤；口腔癌包括鳞状细胞癌瘤；卵巢癌包括源自于上皮细胞、基质细胞、生殖细胞、及间质细胞者；胰癌；摄护腺癌；直肠癌；肉瘤包括平滑肌肉瘤、骨骼肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、及骨肉瘤；皮肤癌包括黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、基底细胞癌、及鳞状细胞癌；睪丸癌包括胚肿瘤，诸如精原细胞瘤、非精原细胞瘤(畸胎瘤、绒毛膜癌)、基质肿瘤、及生殖细胞肿瘤；甲状腺癌包括甲状腺癌瘤及髓质癌瘤；及肾癌包括腺癌及威尔姆氏肿瘤。其它癌症为本领域技术人员显然易知。抑制性核酸本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸也可于活体内自位在或接近新生血管区的重组病毒性载体胞内地表达。本发明的重组病毒性载体包括本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸的编码序列，及用来表达sirna、shrna、或其它抑制性核酸序列的任何合宜启动子。合宜启动子包括例如，u6或h1rnapoliii启动子序列及巨细胞病毒启动子。其它合宜启动子的选择落入业界的技巧范围内。本发明的重组病毒性载体也可包含用来于特定组织中或于特定胞内环境中，表达sirna、shrna、或其它抑制性核酸的可诱生的或可调节的启动子。于活体内，使用重组病毒性载体来传递本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸给细胞容后详述。本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸可自重组病毒性载体表达为两个分开的互补rna分子，或表达为具有两个互补区的单一rna分子。如于本文中使用，术语「载体」指能够转运其已连结的另一个核酸的核酸分子。一型载体是「质体」，其指于其中可接合额外dna节段的圆形双股dna环圈。另一型载体是病毒性载体，其中额外dna节段可接合入病毒基因体。某些载体能在其被导入的宿主细胞(例如，具有细菌性复制起点及游离型(episomal)哺乳动物载体的细菌性载体)内自生复制。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)当被导入宿主细胞内部时整合入宿主细胞的基因体内，因而连同宿主基因体一起复制。再者，某些载体(亦即表达载体)能够指导其可操作式连结的基因表达。通常，本发明中有用的载体包括，但非限制性，质体、噬菌粒、病毒、衍生自根据本发明已藉插入或并入核酸操纵的病毒来源或细菌来源的其它载体。病毒性载体乃载体类型的实施例，及包括，但非限于得自下列病毒的核酸序列：反录病毒，诸如莫洛尼(moloney)鼠白血病病毒、哈维(harvey)鼠肉瘤病毒、鼠乳房肿瘤病毒、及劳司肉瘤病毒；腺病毒、腺相关病毒；sv40型病毒；多瘤病毒；eb病毒；乳突瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；小儿麻痹病毒；及rna病毒诸如反录病毒。本领域技术人员将容易采用未被列举出但为业界已知的其它载体。某些病毒性载体基于非致细胞病变的真核病毒，其中非必要基因已经以关注基因置换。非致细胞病变病毒包括反录病毒(例如，慢病毒)，其生命周期涉及基因体病毒rna反转录成dna，随后原病毒整合入宿主细胞dna内。反录病毒已被核准用于人类基因疗法试验。最有用者为复制缺陷(亦即，能够指导期望蛋白质的合成，但无法制造传染性粒子)的所述反录病毒。此等基因经变更的反录病毒表达载体于活体内具有用于基因的高效率转导的一般应用。产生复制缺陷反录病毒的标准方案(包括下列步骤：将外生性基因物质结合入质体内，以质体转染包封细胞，藉包封细胞而生产重组反录病毒，自组织培养基收集病毒颗粒，及以病毒颗粒感染目标细胞)提供于murry,“分子生物学方法(methodsinmolecularbiology),”vol.7,humanapress,inc.,chiffon,n.j.,1991。用在传递本发明的核酸试剂有用的某些病毒为腺病毒及腺相关(aav)病毒，其乃已被核准供人类使用于基因疗法的双股dna病毒。实际上已知12种不同的aav血清型(aav1至aav12)，各自有不同的组织向性(wuz,asokana,samulskirj:腺相关病毒血清型：用于人类基因疗法的载体工具套组(adeno-associatedvirusserotypes:vectortoolkitforhumangenetherapy).molther14:316-327,2006)。重组aav衍生自相依性细小病毒aav2(choivw,samulskirj,mccartydm:腺相关病毒dna发夹结构对重组的功效(effectsofadeno-associatedvirusdnahairpinstructureonrecombination).jvirol79:6801-6807,2005)。腺相关病毒第1至12型可经基因改造成变成复制缺陷，能够感染宽广范围的细胞型及种(wuz,asokana,samulskirj:腺相关病毒血清型：用于人类基因疗法的载体工具套组(adeno-associatedvirusserotypes:vectortoolkitforhumangenetherapy).molther14:316-327,2006)。其进一步具有优点诸如，热及脂质溶剂安定性；于各色各样世系细胞，包括造血细胞中的高转导频率；缺乏重复感染抑制，因而允许多系列的转导。据报导，腺相关病毒可以位点特异性方式整合入人类细胞dna内，因而最小化反录病毒感染的特征性插入基因表达的插入突变发生及易变性的可能。此外，野生型腺相关病毒感染在无选择压力的存在下，已于组织培养中被追踪历经多于100个继代培养，暗示腺相关病毒基因体整合乃相对稳定事件。腺相关病毒也可以染色体外方式发挥功能，大部分重组腺病毒为染色体外的。于视网膜的经遮蔽环境中，在单一治疗以后，aav载体可在视网膜色素上皮(rpe)、光感受器、或神经节细胞长时间维持高浓度的转移基因表达。各个细胞型可通过抉选aav血清型、启动子、及眼内注射位点的妥适组合而被特异地靶定(dinculescuetal.,humgenether.2005jun；16(6):649-63及lebherz,c.,maguire,a.,tang,w.,bennett,j.&wilson,j.m.,用于改良眼基因转移的新颖aav血清型(novelaavserotypesforimprovedoculargenetransfer).jgenemed10,375-82(2008))。于一个具体例中，以aav血清型8为特别合宜。可使用能够接受针对欲表达的sirna、shrna、或其它抑制性核酸的写码序列的任何病毒性载体，例如衍生自腺病毒(av)；腺相关病毒(aav)；反录病毒(例如，慢病毒(lv)、棒状病毒、鼠白血病病毒)；疱疹病毒等载体。病毒性载体的游离体也可藉以来自其它病毒的被膜蛋白质或其它表面抗原，将载体假型包装加以修饰。举例而言，本发明的aav载体可以来自水泡性口炎病毒(vsv)、狂犬病病毒、伊波拉病毒(ebola)、莫柯拉病毒(mokola)等的表面蛋白质加以假型包装。适用于本发明的重组病毒性载体的选择、用于将sirna表达入载体的核酸序列插入方法、及将病毒性载体递至关注细胞的方法落入于业界的技巧范围内。例如参考，dornburgr(1995),genetherap.2:301-310；eglitisma(1998),biotechniques6:608-614；millerad(1990),humgenetherap.1:5-14；及andersonwf(1998),nature392:25-30，其全文揭示藉参考爰引于此并融入本发明的揭示。任选地，采用来自av及aav的病毒性载体。于某些具体例中，本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸被表达成来自重组aav载体，其包含例如，u6或h1rna启动子、或巨细胞病毒(cmv)启动子的二分开的互补单股rna分子。用于表达本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸的合宜av载体，构成重组av载体的方法，及将载体递送入目标细胞内的方法描述于xiahetal.(2002),nat.biotech.20:1006-1010。用于表达本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸的合宜aav载体，构成重组aav载体的方法，及将载体递送入目标细胞内的方法描述于samulskiretal.(1987),j.virol.61:3096-3101；fisherkjetal.(1996),j.virol.,70:520-532；samulskiretal.(1989),j.virol.63:3822-3826；u.s.pat.nos.5,252,479；5,139,941；国际专利申请第wo94/13788号；及国际专利申请第wo93/24641号，其全文揭示藉参考爰引于此并融入本发明的揭示。于活体内核酸的非病毒性投予已藉多种方法完成。此等方法包括脂质体/微脂粒融合procnatlacadsci84,pp7413-7417(1993)；有与无腺病毒加强的聚离胺酸缩合humangenetherapy3,pp147-154(1992)；及转铁蛋白转移核酸的受体递送至细胞procnatlacadsci87,pp3410-3414(1990)。由聚丙烯酸组成的特定组合物的使用已揭示于wo94/24983。已投予裸露dna，如于wo90/11092的揭示。于某些具体例中，微脂粒及/或奈米粒子的使用预期涵盖用于将本发明的核酸导入目标细胞内部。微脂粒自磷脂质生成，磷脂质分散于水性介质内，自发地生成多层同心双层泡囊(又称多层泡囊(mlv))。mlv通常具有25奈米至4微米的直径。mlv的超音波震动处理导致小型单层泡囊(suv)的生成，具有200埃至500埃的范围的直径，核心中含有水性溶液。设计用来限制微脂粒媒介的转染所遭遇的困难及危险的合成阳离子性脂质，能被使用来制备微脂粒用于活体内核酸的转染。阳离子性脂质的使用可促成带负电荷核酸的包胶，也促成与带负电荷细胞膜的融合(felgneretal.,1989)。另外，于活体内跨细胞膜递送核酸的最简单最安全的方式的一，可涉及高浓度游离或裸露多核苷酸(典型地mrna或dna)的直接施用。「裸露dna(或rna)」表示先前未曾与其它化学部分错合的dna(rna)分子。由动物细胞摄取的裸露dna可藉可与赋形剂及核酸同时投予细胞而予增加。此等赋形剂为提升或增加dna穿透跨细胞膜，因而递送至治疗剂的细胞递送的试剂。业界已描述各种赋形剂，诸如界面活性剂，例如选自于由崔顿(triton)x-100、硫酸十二烷酯钠、吐温(tween)20、及吐温80所组成的组群的界面活性剂；细菌性毒素，例如链球菌溶血素、霍乱毒素、及大肠杆菌的重组修饰不稳定毒素；及多醣类，诸如葡萄糖、蔗糖、果糖、或麦芽糖，例如其藉破坏细胞膜附近的渗透压发挥作用。已描述其它方法来提升游离多核苷酸的递送，诸如透过藉胞外-及胞内-核酸酶进行核酸内切或外切裂解而阻断多核苷酸的失活化。于某些具体例中，本发明的核酸在异源性调节区，例如异源性启动子的控制下。启动子可以是一般活性启动子，或于某些具体例中，可以是例如眼球及/或光感受器特异性启动子，诸如人类感红视锥细胞视蛋白启动子的三个版本(pro.5、3lcr-pr0.5及pr2.1)、人类感蓝视锥细胞视蛋白启动子hb569(genether.2008jul；15(14):1049-55.epub2008mar13.,以人类视锥细胞视蛋白启动子于重组aav靶定基因表达至视锥细胞(targetinggeneexpressiontoconeswithhumanconeopsinpromotersinrecombinantaav).komáromyam,alexanderjj,cooperae,chiodova,glushakovalg,aclandgm,hauswirthww,aguirregd)；三种光感受器特异性启动子(光感受器间视网膜状的结合蛋白-irpb1783；鸟苷酸环化酶活化蛋白1-gcap292；视紫质-mop500)，(molvis.2007oct18；13:2001-11.使用携载两个内部不相干启动子的自行失活化的绝缘慢病毒性载体于神经视网膜中两种蛋白质的靶定表达(targetedexpressionoftwoproteinsinneuralretinausingself-inactivating,insulatedlentiviralvectorscarryingtwointernalindependentpromoters).semple-rowlandsl,ecclesks,humberstoneej.)；人类视紫质激酶(rk)启动子(investophthalmolvissci.2007sep；48(9):3954-61.具有人类视紫质激酶启动子的视杆细胞及视锥细胞光感受器的经aav媒介的表达靶定(aav-mediatedexpressiontargetingofrodandconephotoreceptorswithahumanrhodopsinkinasepromoter).khanisc,pawlykbs,bulgakovov,kaspereke,youngje,adamianm,sunx,smithaj,alirr,lit.)；用于视锥细胞转导的α亚单元的启动子，或视锥细胞光感受器调节元体1(cpre-1)此乃talphac启动子中的新颖20-bp强化子元体(jbiolchem.2008apr18；283(16):10881-91.epub2008feb13.视锥细胞光感受器特异性表达的新颖演化保留性强化子(anovel,evolutionarilyconservedenhancerofconephotoreceptor-specificexpression).smythva,dilorenzod,kennedybn.)，孤儿核受体nr2e3的启动子；人类视网膜鸟苷酸环化酶1(retgc1)的启动子；及视锥细胞转录因子trβ2(pengandchen,2005；ohetal.,2007)；用于磷酸二酯酶的β亚单元的启动子，pde6b(malietal.,2007)。启动子也可任选地选自于由人类视紫质(hrho)、人类感红视蛋白、(hro)、人类感绿视蛋白、及小鼠视锥细胞抑制蛋白-3(mcar)所组成的基因组群。于某些具体例中，可使用小鼠视锥细胞抑制蛋白-3(mcar)。投予本发明的核酸的合宜方法，亦即，侵入性及非侵入性方法，任选地因而接触光感受器，为业界众所周知。虽然多于一种途径可用来投予核酸，但某些途径比较其它途径可提供更加立即的更有效的反应。因此，所描述的投予途径仅为举例说明性而绝非限制性。据此，所述方法并非仰赖本发明的核酸投予动物(任选地人类)以达成期望效果的投予模式。因此，任何投予途径皆适合，只要本发明的核酸靶定于适当宿主细胞即可(例如，眼细胞，例如，当ffa1抑制时涉及治疗或预防血管生成的视网膜细胞及/或视网膜相关细胞)。本发明的核酸可妥适地以注射剂、眼用洗剂、软膏剂、植体等剂型形式配方与投予。本发明的核酸例如可经系统性、局部、结膜下方、眼内、眼球后、眼周、视网膜下、或脉络膜上施用。于某些情况下，可适当投予多次施药，及采用多个途径，例如，视网膜下或玻璃体内，以确保被靶定的眼细胞(例如，视网膜细胞及/或视网膜相关细胞)足够暴露至本发明的核酸。也可要求多次施用本发明的核酸以达成期望的功效。取决于特定情况，可能期望将本发明的核酸非侵入性投予病人。例如，若已进行多次手术，则病人显示对麻醉剂的耐受性低；或若存在有其它眼部相关病症，则局部投予依据本发明的核酸可能为最适合。局部配方为本领域技术人员众所周知。于本发明的上下文中，此等配方适合施用至眼。贴片、角膜罩(例如参考u.s.pat.no.5,185,152)、及眼用溶液剂(例如参考u.s.pat.no.5,710,182)及软膏剂，例如眼用滴剂的使用也落入于业界的技巧范围内。本发明的核酸也可使用无针注射装置，诸如得自生物注射公司(bioject,inc.)的生物注射器2000无针注射管理系统@(biojector2000needle-freeinjectionmanagementsystem@)非侵入性注投予。本发明的核酸可任选地存在于据此允许核酸的受控的或持续释放装置内或装置上，诸如眼用海绵、网状物、机械贮器、或机械植体。植体(例如参考u.s.pat.nos.5,443,505、4,853,224及4,997,652)、装置(例如参考u.s.pat.nos.5,554,187、4,863,457、5,098,443及5,725,493)，诸如可植入装置，例如，机械贮器、眼内装置或带有眼内导管的眼外装置、或包含聚合物组合物的植体或装置，用在眼内投予依据本发明的核酸特别有用。依据本发明的核酸也可以持续释放配方的形式投予(例如参考u.s.pat.no.5,378,475)，该配方包含例如，明胶、硫酸软骨素、聚磷酯，诸如贰-2-羟基乙基-对苯二甲酸酯(bhet)、或聚乳酸乙醇酸。另外，依据本发明的核酸可使用侵入性程序投予，诸如玻璃体内注射或视网膜下注射任选地先进行玻璃体切开术。视网膜下注射可投予眼睛的不同空腔，亦即前房。虽然以眼内注射为优选，但注射用组合物也可经肌肉、静脉、及腹内投予。用于注射用组合物的医药上可接受的载剂为本领域技术人员众所周知(药剂学与药学实务(pharmaceuticsandpharmacypractice),j.b.lippincottco.,philadelphia,pa.,bankerandchalmers,eds.,pages238-250(1982)，及ashp注射用药手册(ashphandbookoninjectabledrugs),toissel,41hed.,.pages622-630(1986))。依据本发明的核酸也可于活体内藉粒子碰撞，亦即基因枪投予。任选地，本发明的核酸透过用于递送至眼睛特定区的眼科仪器投予。使用特化的眼科仪器可确保核酸的精准投予，同时最小化对邻近眼部组织的伤害。本发明的核酸递送至眼睛特定区，也限制了非患部细胞暴露于本发明的核酸，因而减低副作用风险。眼科仪器的一实施例为镊子与视网膜下针或锐角弯曲套管的组合。另外，本发明的核酸可藉电穿孔法或电离子导入法手段而直接地注射入玻璃体、房水、睫状体组织或细胞、及/或眼外肌。依据本发明投予动物，特别人类的本发明的核酸的剂量须足够历经合理的时框，于动物体发挥期望的反应。本领域技术人员将了解剂量将取决于多项因素，包括年龄、物种、关注的病理、及病况或疾病状态。剂量也取决于欲表达的及/或活性的核酸，以及估计受影响或实际受神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病或病症影响的眼组织量。剂量大小也将由下列因素决定：投予途径、时间、及频率，以及可能伴随着依据本发明的特定核酸投予的任何不良副作用及期望的生理功效的存在、本质、及程度。本领域技术人员将了解各种病况或疾病状态，特别地，慢性病况或疾病状态可能要求涉及多次投予的长期治疗。本发明的核酸可呈医药组合物投予，其包含医药上可接受的载剂及本发明的核酸。任何合宜的医药上可接受的载剂皆可应用于本发明的上下文，此等载剂为业界众所周知。载剂的选择部分由该组合物欲投予的特定部位，及用来投予该组合物的特定方法决定。合宜配方包括水性及非水性溶液剂、等张无菌溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂、及使得配方变成与预期接受者的血液或眼内液等张性的溶质；及水性及非水性无菌悬浮液剂，其可包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、安定剂、及保藏剂。配方可以单剂或多剂密封容器包装，诸如安瓿及小瓶，且可贮藏于冷冻干燥(冻干)条件，只要求恰在使用前添加无菌液体载剂，例如，水。即席制作的溶液剂及悬浮液剂可自先前描述的该种无菌粉末、颗粒、及锭剂制备。任选地，医药上可接受的载剂为经缓冲的食盐水溶液。于某些具体例中，用于本发明的方法中的本发明的核酸呈经配方用来保护本发明的核酸免于投药前受损的医药组合物投予。举例而言，医药组合物可经配方来在用来制备、贮藏、或投予本发明的核酸的装置上减少本发明的核酸的耗损，诸如玻璃器皿、注射器、或针头上的耗损。医药组合物可经配方来减低本发明的核酸的光敏感度及/或温度敏感度。为了达成此项目的，医药组合物任选地包含医药上可接受的液体载剂，诸如例如前述者，及选自于由下列所组成的组群中的安定剂：聚山梨酸酯80、l-精胺酸、聚乙烯基吡咯啶酮、海藻糖、及其组合。此种医药组合物的使用将延长核酸的储存寿命，辅助投药，及提高本发明的方法的效率。就此方面而言，医药组合物也可经配方来提升转导功效。此外，本领域技术人员将了解核酸可与其它治疗剂或生物活性剂一起存在于组合物。举例而言，可存在有特定适应症的治疗上有用的治疗因子。例如，若治疗视力丧失，则玻尿酸酶可添加至组合物来执行眼睛玻璃体中的血液及血液蛋白质的分解。控制发炎的因子，诸如伊布普芬(ibuprofen)或类固醇，可以是组合物的一部分来减少与活体内投予依据本发明的核酸及眼部窘迫相关联的肿胀与发炎。免疫系统抑制剂可组合投予来减低对核酸本身的任何免疫反应。同理，可共同投予维生素及矿物质、抗氧化剂、及微量营养素。可存在有抗生素，亦即杀微生物剂及杀真菌剂来降低基因移转程序及其它病症相关联的感染风险。本发明也有关于包含依据本发明的经分离的核酸的医药组合物。本发明也有关于一种治疗神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病或病症的方法，其包含对有需要的病人投予治疗上有效量的依据本发明的经分离的核酸。含有一指定目标序列的sirna、shrna、或其它抑制性核酸造成rnai媒介的目标mrna的降解，可使用用来测量细胞内的rna或蛋白质浓度的标准技术评估。举例而言，本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸可被递送至培养细胞，及目标mrna的浓度可藉北方墨点或墨点吸渍技术测量，或藉定量rt-pcr测量。另外，于例如培养细胞及/或个体细胞中的ffa1蛋白质浓度可藉elisa或西方墨点测量。藉含有一指定目标序列的sirna、shrna、或其它抑制性核酸造成rnai媒介的目标mrna的降解，也可使用视网膜血管生成的动物模型加以评估，诸如本文中描述的小鼠模型。举例而言，在投予本发明的sirna、shrna、或其它抑制性核酸以前及以后，小鼠的血管生成/新生血管面积可经测量。当投予sirna、shrna、或其它抑制性核酸时，此小鼠的血管生成/新生血管面积减少，指示目标mrna(例如，ffar1)的向下调节。医药组合物本发明的另一方面有关于本发明化合物的医药组合物。本发明的医药组合物典型地包含本发明的化合物及医药上可接受的载剂。如于本文中使用，「医药上可接受的载剂」包括其为生理上可相容的任何及全部溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂及抗真菌剂、等张剂及吸收延迟剂等。载剂类型可根据期望的投药途径作选择。于多个具体例中，载剂适合用于静脉、腹内、皮下、肌肉、局部、经皮、或经口投予。医药上可接受的载剂包括用于无菌注射用溶液剂或分散液剂的即席制作的无菌水性溶液或分散液及无菌粉末。用于医药上活性物质的此等介质及试剂的使用为业界众所周知。但与活性化合物不可相容的任何习知介质及试剂除外，预期涵盖其使用于本发明医药组合物。补充性活性化合物也可掺混入组合物中。治疗性组合物典型地于制造与储存条件下须为无菌且安定。组合物可配方成溶液、微乳液、微脂粒、或适合高药物浓度的其它次幂结构。载剂可以是溶剂或分散介质，含有例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、及液体聚乙二醇等)、及其合宜混合物。举例而言，藉使用包衣诸如卵磷脂，以分散液为例藉维持要求粒径，及藉使用界面活性剂，可维持适当流动性。于许多情况下，优选组合物中涵括等张剂，例如，糖类、多元醇类诸如甘露糖醇、山梨糖醇、或氯化钠。通过于组合物中涵括延迟吸收剂，例如一硬脂酸盐及明胶，可获得注射用组合物的延长吸收。再者，化合物可以定时释放配方投予，例如呈涵括缓释聚合物的组合物，或呈本文中描述的脂肪垫。活性化合物能以载剂制备，该载剂将保护该化合物不会快速释放，诸如受控释放配方，包括植体及微包胶递送系统。可使用可生物分解的可生物相容性聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯类、聚乳酸、及聚乳酸聚乙醇酸共聚物(plg)。此等配方的许多制备方法通常为业界已知。藉将活性化合物以需要量，与前文枚举的成分组合一起掺混于适当溶剂内，视需要，接着藉过滤灭菌，可制备无菌注射溶液剂。一般而言，分散液剂的制法为将活性化合物掺混入含有基本分散介质及来自前文枚举的其它所需成分的无菌载体内。以用于制备无菌注射溶液剂的无菌粉末为例，若干制备方法为真空干燥及冻干，其获得活性成分加来自先前无菌过滤溶液的任何额外期望成分的粉末。取决于投予途径，化合物可以材料包衣，以保护其免于酶、酸、及其它可能使得试剂失活化的自然条件的作用。举例而言，化合物可于与酶抑制剂共同投予的适当载剂或稀释剂内，或于适当载剂诸如微脂粒内投予个体。医药上可接受的稀释剂包括食盐水及水性缓冲液。酶抑制剂包括胰脏胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟磷酸酯(dep)、及抑肽酶(trasylol)。微脂粒包括水包油包水型乳液，以及习知微脂粒(strejan,etal.,(1984)j.neuroimmunol7:27)。分散液剂也可于甘油、液体聚乙二醇、及其混合物中及于油类中制备。于寻常贮藏与使用的条件下，此等制剂可含有保藏剂以防止微生物生长。组合物中的活性剂(亦即，ffa1抑制剂)优选以治疗上有效量配方于组合物。「治疗上有效量」指就剂量及历经所需时间长度而言，可有效达成期望疗效，因而影响特定疾病状态的疗程的用量。活性剂的治疗上有效量可根据下列因素而改变，诸如个体的疾病状态、年龄、性别、及体重、及试剂于个体内提引出期望的反应的能力。用法用量可经调整以提供最优选治疗反应。治疗上有效量也是其中试剂的毒性效应或有害效应经权衡而由治疗上有利效果超越胜出。于另一个具体例中，活性剂以预防上有效量配方于组合物中。「预防上有效量」指就剂量及历经所需时间长度而言，可有效达成期望的预防效果的用量。典型地，预防用剂在疾病以前或在疾病的早期阶段运用在个体，故预防上有效量将少于治疗上有效量。组合物中的活性化合物含量可根据下列因素而改变，诸如个体的疾病状态、年龄、性别、及体重。用法用量可经调整以提供最优选治疗反应。举例而言，可投予单次大剂量，可随时间投予数个平分剂量，或如由治疗病情的迫切情况指示，可成比例地增减剂量。特别优异地以单位剂型配方肠道外组合物，以供投药上容易及剂量的一致。如于本文中使用，单位剂型指适合用于欲治疗的哺乳动物个体作为单位剂量的实体上分开单元；各个单元含有经计算结合所需医药载剂而产生期望疗效的预定量的活性化合物。本发明的单位剂型的规格如下指示且直接取决于(a)活性化合物的独特特性及欲达成的特定疗效，及(b)混料业界特有的限制，诸如用于个体敏感度的治疗的活性化合物。本发明的化合物(例如，ffa1抑制剂)的剂量实施例包括例如约0.0001％至5％，约0.0001％至1％，约0.0001％至0.1％，约0.001％至0.1％，约0.005％至0.1％，约0.01％至0.1％，约0.01％至0.05％，及约0.05％至0.1％。本发明的化合物可以延长所述化合物的生物可用性时间的方式投予，增加化合物的作用时间及化合物的释放时框达选自于由下列所组成的组群中的量：至少3小时、至少6小时、至少12小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少4日、至少5日、至少6日、至少7日、至少2周、至少3周、及至少一个月，但至少若干量超过化合物于无脂肪垫递送系统存在下的量。任选地，任何或全部先前效果的时间延长达至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少6小时、至少12小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少4日、至少5日、至少6日、至少7日、至少2周、至少3周、或至少一个月。本发明的化合物可配方成医药组合物，于其中，该化合物为其中唯一的活性剂。另外，医药组合物可含有额外活性剂。举例而言，可组合使用二种或多种本发明的化合物。再者，本发明的化合物可组合对癌症具有调制效果的一种或多种其它试剂。套组本发明也包括涵括本发明的组合物，任选地，也涵括化合物(例如，ffa1抑制剂)，及其使用指南的套组。将藉下列实施例进一步例示本发明，但不应解译为限制性。本案全文中引用的全部参考文献、专利案、及公开专利申请的内容以及图式皆爰引于此并融入本发明的揭示。实施例实施例1：材料及方法动物全部研究皆遵守nih实验动物照护与使用指南，视觉及眼科研究协会(arvo)有关动物用于眼科及视觉研究的陈述，且由波士顿儿童医院动物照护与使用委员会核准。vldlr剔除小鼠(vldlr-/-；jacksonlabstock:002529)与野生型c57b1/6小鼠杂交，以获得用于同窝仔畜受控实验的杂合子种畜。vldlr-/-小鼠也与ffar1剔除小鼠(ffar1-/-)1杂交，来最终获得vldlr-/-/ffar1-/+杂合子种畜及双重剔除小鼠(vldlr-/-/ffar1-/-)。出生后日数(p)16，体重低于5克或大于7克的仔畜被排除(stahl,a.,etal.amjpathol177,2715-2723(2010))。同窝仔畜vldlr-/-自p8至p15，以wy164363(50mg/kg每日一次，腹内；西格玛(sigma))、gw9508(14μm，每日一次腹内；开曼(cayman))、tak-875(15mg/kg每日两次管饲；西利肯(selleckchem))、中链三酸甘油酯油(mct，20微升每日一次管饲；雀巢(nestle))或对应载体处理，及于p16牺牲，以量化视网膜血管病变。使用两性仔小鼠。血管病变的量化为了外视网膜血管病变的量化，注意视网膜血管瘤增殖(rap)及黄斑部毛细血管扩张症(mactel)，小鼠以甲苯噻嗪(xylazine)及k他命(ketamine)安乐死，摘出眼球及于室温固定于4％三聚甲醛中历经1小时。切除视网膜，小心地去除全部玻璃体血管，及于室温以萤光化同工凝集素b4(外源凝集素)(alexafluor594–i21413，分子探针(molecularprobes))于1mmcacl2于pbs染色隔夜。经外源凝集素染色的视网膜全体安装在superfrost/plus显微镜载玻片(费雪科学(fisherscientific))上，光感受器面向上，及埋置于缓褪抗褪色剂(slowfadeantifadereagent)(英维垂金(invitrogen))中。为了视网膜病变的量化，在蔡司(zeiss)axioobserver.z1显微镜上以10倍放大，获得20张各个全体安装视网膜的影像，及使用axiovision4.6.3.0软体合并而生成一张影像。血管病变计数使用swift_mactel方法分析，该方法为用来测量氧气诱生视网膜病变模型中的新生血管(swift_nv)的方法的调适(stahl,a.,etal.angiogenesis12,297-301(2009))。swift_mactel生成一组巨集指令，其开发来在imagej平台上跑(国家卫生院，http://imagej.nih.gov/ij/)。简言之，swift_mactel自经外源凝集素染色的视网膜全体安装分离感红通道，将影像分割成四个象限，及去除背景萤光，以使得新生血管(nv)结构相对于正常血管的背景萤光清晰突显。使用滑杆来增减特定象限的萤光临界值，swift_mactel用户指定一临界值，其标记nv结构(但非正常血管)至各个象限。在设定适当临界值以后，例如细胞碎屑或高萤光视网膜缘等假影，可藉手动去除及从量化中排除。然后，swift_mactel分析影像中高于所选强度临界值的，且为具有最小尺寸100像素大小的物体部分的全部像素。通过设定物体大小的此截取值，小型假影例如血管分支点自动被去除。测量全部四个象限以后，swift_mactel从全部四个nv象限生成复合物，及计算总nv像素数目。已发现得自swift_nv方法的结果与得自已确立的手测量方案结果有良好相关性(r2＝0.9372)，及显示稳健的个体内(r2＝0.9376)及个体间(r2＝0.9424)可再现性(stahl,a.,etal.angiogenesis12,297-301(2009))。n为经量化的眼球数目。扫描电子显微术及3d视网膜重建使用由deerincketal.2010确立的方案的经调适版本，组织经处理用于系列分段脸部扫描电子显微术(sem)(t.deerinck,etal.,显微术与微量分析(microscopyandmicroanalysis)16,no.s2(2010))。分离全眼球及固定于柯诺夫斯基(karnovsky)固定器内。角膜及水晶体经移除，组织进一步固定于鞣酸中隔夜。然后进行重金属浸润；组织于1.5％铁氰化钾、0.5％四氧化锇于二甲胂酸盐缓冲液内培养，接着进行硫代碳酰肼处理，及第二次暴露于1％锇培养。未进行华顿(walton)天冬酸铅暴露，故以1％乙酸铀酰结束培养，接着脱水至环氧丙烷，及埋置于杜酷邦(durcupan)acm树脂内。组织经系列切片，及使用嵌合至蔡司西格玛可变压力野放射扫描电子显微镜(蔡司，英国剑桥)的葛坦(gatan)3view系列分段脸部成像系统(葛坦，英国亚宾棱)成像。资料经收集，及使用于amira软体(fei，美国俄勒冈州)以便重建3d影像。使用相同软体，针对wt小鼠，环绕于vldlr-/-小鼠的病变，及远离vldlr-/-小鼠的病变，估计光感受器粒线体体积。atp度量atp使用套组遵照指示手册(分子探针，a22066)测量。简言之，自下列成分制作标准反应溶液：dh2o，20x反应缓冲液，dtt(0.1m)，d-虫萤光素(10mm)，萤火虫虫萤光素酶备用溶液(5mg/ml)。藉将atp溶液(5mm)于dh2o中稀释而制备低浓度atp标准溶液。针对一系列稀释的atp标准溶液，自冷光读数中扣除标准反应溶液的背景冷光，而生成标准曲线。针对含atp样本得知冷光度量，及自标准曲线计算实验样本中的atp含量。耗氧率及胞外酸化率全部耗氧率使用西荷斯(seahorse)xfe96flux测量。全视网膜经分离，1毫米打孔活体切片载荷入96孔孔板内。视网膜打孔在分析试验培养基(dmem5030培养基补充以12mm葡萄糖，10mmhepes及26mmnahco3)中培养，来测量耗氧率(ocr)及胞外酸化率(ecar)。于测量前一小时，光感受器(661w)细胞于其分析试验培养基(dmem5030，12mm葡萄糖，10mmhepes)中培养。通过在分析前40分钟以伊托莫夕(etomoxir)(40μm；西格玛)处理组织或细胞，及然后提供bsa(对照)或bsa/棕榈酸盐接合物(西荷斯)而测定脂肪酸氧化率。资料获取期间，注入2-去氧基葡萄糖(2-dg，100mm；西格玛)或培养基对照以后，测量葡萄糖氧化率。为了测定最大脂肪酸或葡萄糖氧化能力，在注入0.5μm甲酰基氰化物-p-三氟甲氧基苯基腙(fccp)以后，自耗氧率中扣除非粒线体呼吸(注入2μm鱼藤酮及2μm抗霉素a(antimycina)后的速率)。葡萄糖及乳酸度量全视网膜及光感受器(661w)分别于分析试验培养基(dmem5030，12mm葡萄糖，10mmhepes)中培养6小时及48小时。收集培养基，简短地离心(13g)以去除细胞碎屑，及使用黄弹簧仪器(yellowspringsinstrument(ysi))2950测得的葡萄糖及乳酸浓度与未暴露至组织或细胞的对照培养基作比较。为了测定葡萄糖至乳酸的转化率(糖解率)，乳酸产量除以葡萄糖摄取量。视网膜脂质摄取针对以0.1mg4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-苯并二茚(indacene)-3-十六烷酸管饲的野生型小鼠及vldlr-/-小鼠，比较视网膜长链脂肪酸摄取(bodipyflc16；分子探针)。2小时后小鼠被安乐死，摘除眼球，埋置于oct中及低温切片(10微米)以供藉萤光显微术即刻成像。视网膜fa摄取使用自p9至p12，每日两次注射经14c标记的溴棕榈酸盐追踪剂(i.p.；0.5uci/每剂)加以量化；总投予的放射性针对小鼠体重加以标准化。然后视网膜经切除，及于终极金(ultimagold)液体闪烁计数混合液(柏金艾玛(perkinelmer))中均化，使用崔卡(tri-carb)2900tr仪器(柏金艾玛)作β计数(14cdpm)，对背景闪烁作校正。血浆三酸甘油酯(tg)及脂肪酸(fa)分析藉将全血于经edta涂覆的试管中离心(2000gx20min；4℃)，而自wt小鼠及vldlr-/-小鼠分离血浆。tg遵照指南手册使用randoxtrigs套组(tr210)测定。全血浆中的fa如前述分析试验(spahis,s.,etal.prostaglandinsleukotessentfattyacids99,25-34(2015))。简言之，各个样本接受直接转酯化，及然后使用雅吉兰(agilent)gc自动取样器系统(7890a)注入气相层析。fa藉与已知标准品预期的滞留时间作比较，及然后使用openlab套装软体(雅吉兰)分析加以识别。β-氧化代谢产物量化酰基肉碱代谢产物使用冰冷甲醇，萃取自wt及vldlr-/-(p12)急速冷冻视网膜。样本经超音波振动处理，离心，及上清液移转到新鲜试管用于氮气气化。当干燥时，在动相(acn:h2o80:20，甲酸0.05％)中重建以前，进行丁醇分解(丁醇-hcl，55℃历时20分钟)。样本藉液相层析术分析，接着为串联质谱术(lc/ms/ms，alliance2795lc及quattromicro，瓦特士公司(waterscorp))。资料以正电喷洒离子化纪录及以neolynx(瓦特士公司)分析。视网膜葡萄糖摄取对wt、vldlr-/-；vldlr-/-/ffar1-/-及ffar1-/-小鼠(p16；焦点120高解像度，西门子(siemens))进行正子发射断层扫描术(pet)成像研究，接着为微cat成像(microcatii扫描器，西门子)。藉腹内注射(i.p.)投予氟-18氟去氧葡萄糖(18f-fdg)获得无毒放射性浓度(3.7及37mbq；或0.1至1.0mci)。实际投予活性在注射以前与以后，使用剂量校准器测量注射器内的活性加以测定。注射后60分钟，获得影像以确保放射性追踪剂的摄取。成像前小鼠空腹6小时，维持于暗处，及在整个手术过程期间经由鼻锥藉吸入异氟烷(isoflurane)(2-4％)麻醉。动物以头先成像，俯卧姿势，置于加热垫上以维持适当体温。成像完成时，小鼠被安乐死，切除视网膜用于进行精密18f-fdg视网膜活性，藉伽玛计数器量化，及对衰减作校准。wt及vldlr-/-小鼠仔鼠也注射微量3h-2-去氧葡萄糖(0.5μci每日，i.p.)，及以gw9508或载体(14μm每日，i.p.)处理历经5日(p7-p12)。视网膜经收集及在闪烁计数混合液(伊可莱(ecolite)+，mp生医公司)中均化，及使用ls6500多用途闪烁计数器(贝克曼(beckman))测量β计数值。雷射拍摄显微切片于摘除以后，眼球埋置于oct内及即刻急速冷冻。眼球于不含rnase条件下低温切片成10微米切片，及收集于不含rnase的聚伸乙基萘甲酸酯玻璃片(11505189，莱卡(leica))上。切片针对外源植物凝集素染色(1:50于1mmcacl2)，及以70％、90％及100％乙醇洗涤脱水。视网膜血管及各层以莱卡lmd6000系统(莱卡微系统)显微切片，及直接收集入得自rneasymicro套组(夸金(qiagen)，美国加州雀特沃)的rna稳定缓冲液内。rna使用如前述rneasy套组(夸金)而萃取自微切片组织，及以生成的cdna进行即时pcr。反转录与量化即时pcr分析得自细胞培养、全视网膜、或雷射拍摄新生血管及各层的rna样本以dnasei(夸金，美国加州雀特沃)处理，以去除任何污染的基因体dna。然后，经dnase处理的rna使用反转录酶(英维垂金)转换成cdna。使用引子存库及ncbiprimerblast软体设计用于目标基因及对照基因的pcr引子cyclophilina。基因表达的量化分析使用带有sybr绿主人(sybrgreenmaster)混合套组的abiprism7700序列检测系统生成，及基因表达使用δct方法相对于cyclophilina计算。引子序列表达阵列以生物学三次重复(小鼠-wg6表达珠粒晶片，伊鲁米娜(illumina))进行wt与vldlr-/-视网膜的伊鲁米娜小鼠基因微阵列分析。晶片含有代表34,000基因的45,000探针集合。自cdna分析至原始资料标准化的微阵列研究藉在波士顿儿童医院的分子遗传学核心设施进行。简言之，总rna(各1微克)经反转录，接着为单一活体外转录扩增，以结合经生物素标记的核苷酸，及随后根据制造商的指示杂交，及以链丝菌抗生物素-cy3染色。晶片以伊鲁米娜珠粒阵列读取器扫描，以藉加标记的标靶测量信号强度。原始资料以微阵列软体(beadstudiogeneexpression版本3.4.0)分析，用于品质管制、背景分析及以等级不变量演算法(rankinvariantalgorithm)加以标准化。已标准化的资料使用独创性路径分析(p＝0.05及δ为0.19；奎金)进一步分析，用于比较分子及细胞路径调节(calvano,s.e.,etal.nature437,1032-1037(2005))。免疫组织化学用于整体安装免疫组织化学，摘除眼球及于室温于4％三聚甲醛中固定1小时。视网膜经分离，及于室温(rt)以萤光素化同工凝集素b4(alexafluor-594于pbs含cacl21mm，i21413，分子探针)染色视网膜血管床及病变隔夜。视网膜以蔡司axioobserver.z1显微镜使用5倍物镜目测观察，及使用藉axiovision软体(版本4.6.3.0)操作的蔡司axiocammrm成像。整体安装也经固定，及于冷甲醇经通透性处理(于-20℃20分钟)，封阻于3％牛血清白蛋白及0.1％崔顿x-100中，以同工凝集素b4染色，以使得血管变目测可见(如前述)，及/或于4℃以对抗hif1α(1:100于tbs，nb00-134，诺弗斯(novus))，vegf(1:100，rb-222，热科学(thermoscientific))，iba-1(1:200，cp290a，生物照护医学(biocaremedical)uk)及感蓝视蛋白视锥(1:100，sc-14365，圣塔克鲁兹)的初级抗体染色隔夜，接着二级抗体染色(于室温1小时；alexafluor1:1000，英维垂金)。铺片(及剖面)以共焦显微术(莱卡tcssp2aobs)成像，及z-堆迭使用volocity软体(柏金艾玛)3d重建。西方墨点及elisa如前文描述获得视网膜样本。来自三头不同动物的视网膜溶解产物(20微克)或内皮细胞溶解产物(10微克)载至sds-page凝胶上，及电吸渍至pvdf膜上。封阻以后，膜与对抗β-肌动蛋白(西格玛，a1978)、hif1α(novus，nb100-134)、及glut1(诺引斯，nb300-666及亚伯肯(abcam)，ab652)的抗体一起培养隔夜(各1:1000)。洗涤以后，膜与1:10,000辣根过氧化酶接合抗兔或抗小鼠二级抗体(阿默山(amersham)，na931v及na934v)于室温培养一小时。使用imagej进行密度计量分析。视网膜vegfa浓度藉elisa(遵照手册，mmv00，r&d系统公司)测量，及藉进行bradford标准化以测量各个样本的总细胞蛋白质含量。代谢产物分析快速解剖的wt与vldlr-/-视网膜(自安乐死算起少1分钟以内急速冷冻；15-16生物重复次数)的代谢产物，使用tissuelyserii(奎金)珠粒磨机，于含有内部标准品次黄嘌呤-15n4、胸腺嘧啶-d4、及糖基胆酸盐-d4(剑桥同位素实验室(cambridgeisotopelaboratories))的80％甲醇(8微升/毫克组织)中以20hz均化4分钟。样本经离心(9,000g，10min，4℃)以将碎屑造粒，及上清液使用两种液相层析术串级质谱术(lc-ms)方法分析，以如前述测量极性代谢产物(jain,m.,etal.science336,1040-1044(2012)，及townsend,m.k.,etal.clinchem59,1657-1667(2013))。简言之，使用耦合至5500qtrap三重四极质谱仪(absciex)的acquityuplc(瓦特士)，获得负离子化模式多重反应模式(mrm)资料。上清液直接注入至150x2.0毫米lunanh2管柱(菲诺米尼(phenomenex))上，该管柱以400微升/分钟流速洗提，初始条件为10％动相a[20mm乙酸铵及20mm氢氧化铵(西格玛-亚利胥(sigma-aldrich))于水(vwr)]及90％动相b[10mm氢氧化铵于75:25v/v乙腈/甲醇(vwr)]，接着为10分钟线性梯度至100％动相a。离子喷洒电压为-4.5kv及来源温度为500℃。使用耦合至1100系列泵浦(雅吉兰)的4000qtrap三重四极质谱仪(absciex)及htspal自动取样器(利帕技术(leaptechnologies))，获得正离子化模式mrm资料。细胞萃取物(10微升)使用含安定同位素加标记内部标准品[0.2ng/μl缬胺酸-d8，艾索技(isotec)；及0.2ng/μl苯基丙胺酸-d8(剑桥同位素实验室)]的74.9:24.9:0.2(v/v/v)乙腈/甲醇/甲酸40微升稀释，及注入至150x2.1毫米atlantishilic管柱(瓦特士)上。管柱于250微升/分钟以5％动相a(10mm甲酸铵及0.1％甲酸于水)等梯度洗提1分钟，接着为历时10分钟线性梯度至40％动相b(含0.1％甲酸的乙腈)。离子喷洒电压为4.5kv及来源温度为450℃。原始资料使用multiquant2.1(absciex)处理用于自动化峰值积分，及代谢产物经人工复核积分的品质，且与已知标准品作比较以确认身分。光感受器(661w)细胞培养视锥光感受器细胞(al-ubaidi,m.r.,jcellbiol119,1681-1687(1992)及tan,e.,etal.investophthalmolvissci45,764-768(2004))(661w；得自dr.al-ubaidi)于含fbs10％补充有氢可体松(hydrocortisone)(20μg/500ml，h-2270，西格玛)、黄体酮(progesterone)(20μg/500ml，p-8783，西格玛)-腐胺(putrescine)(0.016g/500ml，p-7505，西格玛)及β-巯基乙醇(20μl/500ml，m-6250，西格玛)的dmem中，于37℃，5％co2于湿化气氛中培养成单层。相等数目的661w细胞(0.3x106)接种于6孔皿内’及培养至80％融合。细胞以pbs洗两次，挨饿4小时(如上培养基不含fbs)，然后以gw9508(14μm，开曼)或载体刺激。然后，处理后8小时收集光感受器用于hif1α蛋白质表达(参考西方墨点)；同时于12小时时收集其培养基用于藉elisa(遵照手册，mmv00，r&d系统)进行vegfa量化。藉进行bradford测量各孔的总细胞蛋白质含量，vegfa浓度针对每孔的细胞数目加以标准化。aav2-rkshvldlr载体及aav2病毒的制备使用公开演算法(park,y.k.,etal.nucleicacidsresearch36,w97-103(2008))设计对抗vldlr的三个独立shrna。合成包括有义及反义的样板寡核苷酸，含有mir-30microrna、mir-30环圈及vldlrshrna(英维垂金)。根据先前报告(grieger,j.c.,etal.,natureprotocols1,1412-1428(2006))dna片段经扩增、纯化、消化及插入经修饰的cag-gfp-mir30载体内(由波士顿儿童医院dr.zhiqianglin及dr.williamt.pu提供)，及cag启动子以自paavrk-gfp(由dr.conniecepko及dr.tiansenli提供)选殖的视玫红质激酶(rk)启动子置换(khani,s.c.,etal.investigativeophthalmology&visualscience48,3954-3961(2007))。于仔畜视网膜中试验vldlr剔除的功效。如前述产生重组aav2载体(vandenberghe,l.h.,etal.humangenetherapy21,1251-1257(2010))。简言之，aav载体、rep/cap封包质体、及腺病毒助手质体与聚伸乙基亚胺混合，及转染入hek293t细胞(crl-11268，atcc)。转染后72小时，细胞经收获，及细胞丸粒再悬浮于病毒缓冲液内，接着为3个冷冻-解冻周期，及均化。细胞碎屑于5,000g造粒20分钟，上清液在碘克沙醇(iodixanol)梯度上跑。回收aav载体使用阿米康(amicon)100k管柱(emdmillipore)以pbs洗三次。即时pcr使用来测定重组aav的基因体效价。此方案也被使用来制备对照aav2-shcontrol。病毒被稀释成各种浓度以测试感染，约2×1012gc/ml浓度使用于实验。小鼠的序列如下：shvldlr#1(5’-3’),ggaaagttcaagtgcagaagcg；shvldlr#2(5’-3’),ggaatgccatatcaacgaatgc；shvldlr#3(5’-3’),gggatctgcagtcaaatttgta；乱序shrna对照(5’-3’),gatttaagacaagcgtataaca。人类样本及玻璃体切除术研究符合赫尔辛基宣言宗旨，人类临床研究的核准及知情同意书得自maisonneuve-rosemont医院(hmr)道德委员会(ref.cer:10059)。追踪全部先前诊断患有amd的病人，及由单一玻璃体视网膜医师(f.a.r.)进行手术。活体剖检后即刻将玻璃体样本在干冰上冷冻及储存(-80℃)。根据制造商指示(dve00，r&d系统)进行vegfaelisa。统计分析使用学生t-试验及anova带有邓尼特、邦费罗尼或杜凯氏事后分析(参考表1)，来比较不同组别；p<0.05被视为统计上差异。d’agostino-pearson或kolmogorov-smirnov(ks)常态试验被使用来确证常态分布。具有非高斯分布的资料使用曼恩-惠尼试验(非参数，两组)分析。动物非随机分配，但可能时量化为盲目进行。全部实验至少重复三次。偏离平均值多于2标准差的值被视为离群值而被排除。根据「动物使用于神经科学指南(2003)」，样本大小经估计，以检测20％差值，具有80％(1-β)次幂及0.05α。结果以平均值±sem呈现。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。统计分析的描述针对各图表的n、方差、统计试验及p值的细节描述(表1)：实施例2：rap样病变数目与视网膜能源需求间的相关性rap样病变数目关联着光感受器能源需求。杆状光感受器在暗处比亮处多耗用3-4倍能源，以维持称作为「暗电流」的光子感应去极化需要的电化学梯度(okawa,h.,etal.,currbiol18,1917-1921(2008))。相反地，膜周转率及视觉周期活性于暗处减低(okawa,h.,etal.,currbiol18,1917-1921(2008))。在暗处养育的vldlr-/-小鼠比在正常明/暗周期养育者发展出的血管病变多1.5倍(图1b)，指示能源代谢影响新生血管疾病。已描述光感受器从视神经向外朝向周边成熟。随着光感受器的成熟(p12-16)，能源耗用增加，及于p16，更成熟的中心视网膜拥有更多rap样病变(wong-riley,m.t.t.eyebrain2,99-116(2010)，及trick,g.l.&berkowitz,b.a.progretineyeres24,259-274(2005))。为了测定特别于光感受器的vldlr损耗是否足以驱使病变血管，拥有正常循环脂肪酸浓度的vldlr-/-小鼠于光感受器中的剩余vldlr(使用aav2-hrk)被选择性地剔除(furukawa,etal.,cell91,531-541(1997))(图5a-5i)。与能源缺乏符合一致地，vldlr-/-光感受器具有肿大的粒线体(3d扫描电子显微术及图1d；视讯-图中未显示)。此等结果进一步于视讯(资料未显示于图中)中获得确证，其比较wt与vldlr-/-光感受器粒线体，于其中wt与vldlr-/-光感受器中的假彩色粒线体藉扫描电子显微术的3d重建变成目测可见。于vldlr-/-小鼠中，也检测得血管病变。再者，vldlr-/-视网膜具有较低的atp存量(图1e)，其确证于vldlr-/-小鼠的能源欠乏。实施例3：除葡萄糖以外脂肪酸也促成视网膜能源生产及也可能于vldlr-/-视网膜中欠乏为了探讨能源缺乏助长新生血管的病因，检视脂肪酸及葡萄糖对wt视网膜能源产量的贡献(图6a)。长链脂肪酸棕榈酸盐供应燃料给视网膜外植体中的粒线体β-氧化，使得耗氧率(ocr)变加倍。伊托莫夕诱生脂肪酸转运入粒线体的抑制作用，消除粒线体呼吸，验证脂肪酸β-氧化有助于视网膜能源代谢(图2a-2b，及6a-6c)。进一步检视葡萄糖氧化的贡献，如脂肪酸般有效地，视网膜葡萄糖也藉粒线体氧化(图6d-6f)。然而，如由warburg、cohen及winkler(cohen,l.h.&noell,w.k.jneurochem5,253-276(1960)，及winkler,b.s.jgenphysiol77,667-692(1981))报告，大部分葡萄糖(87％)藉糖解(而非藉氧化磷酸化)而被转换成乳酸(图6g)。不似wt视网膜，vldlr-/-视网膜(带有有限的脂肪酸摄取)当暴露于棕榈酸盐时不会增加粒线体呼吸(图6h)。除了葡萄糖以外，fa有助于视网膜能源生产，及也可能于vldlr-/-视网膜中缺乏。脂肪酸摄取的量化有鉴于vldlr于视网膜脂质能源代谢上可能扮演的角色，视网膜脂肪酸摄取经量化。据报告vldlr于视网膜光感受器高度表达(图7a)(hu,w.,etalinvestophthalmolvissci49,407-415(2008))。视网膜中/长链脂肪酸摄取于vldlr-/-视网膜中减少。血清浊度反映出较高的循环脂质浓度(图7b及7c)。三酸甘油酯及中/长链脂肪酸浓度(特别棕榈酸盐)于vldlr-/-小鼠升高(图6c，及图7d及7e)。重要的是，于粒线体脂质的脂肪酸β-氧化以产生乙酰辅酶a的过程受遏止(图6d)。于vldlr-/-视网膜中，总酰基肉碱及游离肉碱浓度减低(图6e)。低细胞溶质fa浓度与过氧化物酶体增殖物激活受体(pparα)的表达减低相关(lefebvre,p.,etal.,jclininvest116,571-580(2006))，主要于vldlr-/-光感受器(图8a及8b)。pparα为脂肪酸β-氧化的数个步骤的关键性调节因子(lefebvre,p.,etal.,jclininvest116,571-580(2006))；包括cpt1a，其媒介fa的内化至粒线体内部(图6b)。于wtcpt1a的含量丰富，但于vldlr-/-光感受器受遏止(图2f)。用来加强脂肪酸β-氧化(nakamura,m.t.,etal.,proglipidres53,124-144(2014))的选择性pparα激动剂(wy16463)减少了vldlr-/-视网膜中的rap样病变(图8c)。给光感受器(661w)细胞单独提供以棕榈酸盐或提供以pparα激动剂(gw9578)，进一步增加了藉脂肪酸β-氧化的粒线体呼吸，而非透过解耦合，原因在于伊托莫夕消除了呼吸的增加(图9a-9d)。反映出来自糖解的乳酸产量的胞外酸化率，并不受pparα激动剂可检测的影响(图9e及9f)。保证进一步探讨pparα于新生血管性眼病中的代谢信号传导中扮演的角色。总的来说，发现指出脂质为能源底物视网膜，挑战了目前的教条：葡萄糖乃光感受器的唯一燃料。葡萄糖摄取的代偿性高涨，预期可缓和vldlr-/-视网膜中的脂肪酸缺乏。出人意表地，视网膜葡萄糖摄取(18f-fdg)藉正子发射断层扫描术(pet)评估，如同主要视网膜葡萄糖转运子glut1的glut1表达般(2h及2i)，特别于vldlr-/-光感受器的表达(图2h)般，比较wt，视网膜18f-fdg计数减少(图2g及所得视讯资料显示，ffa1决定vldlr-/-视网膜中的葡萄糖摄取，于其中18f-fdgmicropet/ct扫描同时比较于wt、vldlr-/-,vldlr-/-/ffar1-/-及ffar1-/-小鼠中的葡萄糖摄取(资料未显示于图中)。因此，比较vldlr-/-视网膜与wt视网膜(图10a)，碳水化合物代谢为基因微阵列上最显著调节的路径。糖解的关键酶-亦即丙酮酸激酶(pkm2)-的遏止藉该阵列识别，及藉qrt-pcr确认(图10b)。glut3及4未经调节(图10c)。因此，vldlr-/-视网膜具有脂质及葡萄糖摄取缺乏两者(图2a-2i)，与全面性能源缺乏符合一致(图1a-1e)。实施例4：脂肪酸感测g-蛋白耦合膜受体的筛检vldlr-/-血清中丰富的脂质推定通过脂质感测器信号传导，以减少葡萄糖摄取，及辅助控制燃料供给视网膜(图3a)。已知的脂肪酸感测g-蛋白耦合膜受体(gpcr)。ffa1乃于wt中最丰富表达的fa受体，且于vldlr-/-视网膜中，特别光感受器中进一步增加(图3b及3c)。ffa1首度发现于胰脏(itoh,y.,etal.nature422,173-176(2003))，管控葡萄糖转运及胰岛素分泌(β-胰岛细胞)(kebede,m.,etal.diabetes57,2432-2437(2008)，及alquier,t.,etal.diabetes58,2607-2615(2009))。高胰脏ffa1表达，遏止了主要内分泌胰葡萄糖转运子glut2的表达(steneberg,p.,etal.,cellmetabolism1,245-258(2005))。ffar1也局限在脑部，于其中其功能未经明确界定(honoré,j.-c.,etal.arteriosclerthrombvascbiol33,954-961(2013))，及briscoe,c.p.,etal.thejbiolchem278,11303-11311(2003))。于wt与vldlr-/-视网膜中，ffa1激动剂(gw9508)经识别为遏止glut1的表达(gospe,s.m.,etal.jcellsci123,3639-3644(2010))及遏止视网膜葡萄糖摄取(图3d及图11a)。重要的是，比较对照组(图3f)，以ffa1激动剂(gw9508)处理，增加了vldlr-/-视网膜中的rap样病变数目多于加倍。ffa1结合包含多于6个碳的脂质(briscoe,c.p.,etal.thejbiolchem278,11303-11311(2003))。以ffa1脂质激动剂中链三酸甘油酯(mct；8-10个碳)(briscoe,c.p.,etal.thejournalofbiologicalchemistry278,11303-11311(2003))或第二ffa1选择性激动剂tak-875(naik,h.,etal.jclinpharmacol52,1007-1016(2012))处理的vldlr-/-小鼠，相较于对照组(图12a-12c)，增加了glut1遏止及增多了rap样病变。于vldlr-/-小鼠体内删除ffar1，提升了视网膜葡萄糖摄取(图3g及视讯资料如前述(资料未显示于图中))及glut1表达朝向wt及ffar1-/-层级(图3h，及图11b-11c)，于vldlr-/-/ffar1-/-小鼠体内具有较少的rap样病变(图3i)。于活体外ffar1的基因剔除或以mek/erk抑制剂(pd98059)处理细胞，防止了于光感受器(661w；图11d-11f)中glut1被gw9508遏止。因此，ffar1可作为养分感测器，耦合粒线体代谢与循环底物的利用率。实施例5：视网膜中的脂质/葡萄糖燃料不足，能驱使在正常无血管的光感受器层的异常血管生成提出假说：受葡萄糖及脂质双重燃料底物缺乏挑衅的光感受器将发讯以增加血管供应，试图恢复能源的体内平衡(图4a)。曾假设缺氧乃血管生成的主要驱动因子，但组织的养分可利用率不足也可能控制血管的生长。经识别丙酮酸浓度的减低，来自葡萄糖摄取减少与糖解减少的代谢中间产物馈给入克雷伯氏(tca)循环(图4b)，以及来自脂肪酸摄取减少及β-氧化减少的乙酰基肉碱减少(图4c)，与必要中间产物，诸如α-酮戊二酸(α-kg为较低，图4d)的产量减少有关。连同氧气，α-kg乃丙基-羟基酶脱氢酶(phd)的必需共同活化因子，phd加标签hif1α以供藉脯胺羟基化降解(kaelin,w.g.coldspringharbsympquantbiol76,335-345(2011))。于vldlr-/-视网膜检测得较少羟脯胺酸，与phd活性的减低符合一致(图4e)。确实，藉ffa1激动剂gw9508于视网膜葡萄糖摄取减少及光感受器(661w)中的葡萄糖饥饿与hif1α稳定化(图13a-13c)及vegfa分泌(图13d及13e)相关联。于活体内，于vldlr-/-光感受器(图4g)中的hif1α稳定化(图4f)与vegfa生产(图4h及4i)相关联。删除vldlr-/-视网膜中的ffar1删除，遏止了hifα稳定化及vegfa分泌(图4f及4h)，因而导致了血管病变减少(图3i)。与先前结果符合一致地(hua,j.,etal.investigativeophthalmology&visualscience52,2809-2816(2011))，经基因改造以于光感受器中分泌vegfa的小鼠，比较vldlr-/-小鼠，发展出视网膜血管瘤增殖(ohno-matsui,k.,etal.theamericanjournalofpathology160,711-719(2002))；因此来自光感受器的vegfa足以促成rap样病变。重要的是，能源危机相关联的氧化压力也可能直接稳定化hif1α，及促进vldlr-/-光感受器中的vegfa的分泌(dorrell,m.i.,etal.jclininvest119,611-623(2009)，chen,y.,etal.microvascres78,119-127(2009)，及zhou,x.,etal.,plosone6,e16733(2011))，潜在地促成了血管病变。然而，经常隐含于amd病因学中的巨噬细胞，并不与初生rap样病变的发展起点相关联，只环绕成熟的血管病变(图14a-14d)。将此等发现转译到人类疾病，比较对照组(黄斑部裂孔；图4j)，于amd/rap人类个体检测得较高的玻璃体vegf浓度。此等发现指出：部分透过克雷伯氏循环代谢产物α-kg的减少，视网膜中的脂质/葡萄糖燃料不足，可能驱使正常无血管的光感受器层中反常的血管生成。于视网膜中，使用脂质及葡萄糖两者作燃料，在高燃料需求或燃料匮乏期间可能有利。禁食从脂肪组织释放fa，fa由能够进行脂肪酸β-氧化的高耗能器官使用，诸如心脏，及或许视网膜(图2a-2f，图6a-6c，及图9a-9d)。确实，faβ-氧化病症先前被识别为与视网膜病变相关(fletcher,etal.,moleculargeneticsandmetabolism106,18-24(2012))。使用脂质作燃料的组织，于挨饿期间抑制葡萄糖摄取(mantych,g.jetal.,endocrinology133,600-607(1993)，及ferrannini,e.,etal.jclininvest72,1737-1747(1983))。感测养分可利用性及调适燃料摄取的能力可改良代谢效率。g-蛋白耦合受体(gpcr)为已知的胺基酸、葡萄糖及脂质的膜感测器(wauson,e.m.etal.molendocrinol27,1188-1197(2013))。于其中，ffa1被显示为fa可利用性的代谢感测器，其控制葡萄糖进入视网膜(图3a-3i))。于光感受器中，葡萄糖的进入长期受ffa1阻遏(或许续发于循环脂质)，可能促成amd或mactel的年龄相关性粒线体功能异常。考虑用于第ii型糖尿病治疗的ffa1激动剂的视网膜效果，须须小心监控，特别在有amd风险增高的老年个体时尤为如此。概要粒线体代谢可能于其它疾病诸如癌症，促成病理性血管生成。为了提供增殖的构建模块，肿瘤以warburg效应有效产生atp为代价，促成了血管生成(warburg,o.science123,309-314(1956))。于抑制粒线体氧化磷酸化中，肿瘤细胞可生成较少的α-kg(zhao,s.,etal.science324,261-265(2009))(或积聚竞争性代谢产物)(kaelin,w.g.coldspringharbsympquantbiol76,335-345(2011))。如此抑制了脯氨酰-羟化酶脱氢酶(phd)，接着hif1α稳定化，驱使了生长需要的肿瘤血管生成。此等发现指出粒线体燃料欠乏作为血管生成的驱动因子的重要性，匹配血管供应的能源需求。随着年龄粒线体功能的衰退，此种过程可能促成老年视网膜疾病的病理性血管生成。综上所述，脂质摄取及脂质β-氧化于vldlr-/-视网膜被削减。增加循环fa可能活化ffa1，与视网膜葡萄糖摄取减低及克雷伯氏循环中间产物α-kg减少相关联。hifα被稳定化，vegfa由vldlr-/-光感受器分泌，产生病理性rap样新生血管。本研究揭开了促成视网膜生理学及新生血管性amd/rap的三项重大新颖机转：(1)脂质β-氧化乃视网膜的能源，(2)ffa1乃循环脂质的重要养分感测器，其控制视网膜葡萄糖进入，以匹配粒线体代谢与可用的燃料底物，及(3)养分缺乏乃视网膜病理性血管生成的驱动因子。此等路径对新疗法的发现上可能重要。实施例6：ffa1抑制剂用于治疗神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病或病症于本实施例中，患有以血管生成为特征的神经细胞疾病或病症或有发展出以血管生成为特征的神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病或病症风险的个体(例如，患有rap血管病变或有发展出rap血管病变风险的个体，例如，患有mactel及/或amd或有发展出mactel及/或amd风险的个体)被投予包含ffa1抑制剂的医药组合物。以血管生成为特征的神经细胞(例如，视网膜细胞)疾病或病症的预防及/或改善，在将ffa1抑制剂投予个体以前与以后监控。ffa1抑制剂(例如，rnai及/或小分子)系统性地或局部性地投予个体(例如，透过眼内注射投予个体)。由此识别ffa1抑制剂于个体的预防性及/或治疗性功效。实施例7：新颖ffa1抑制剂的识别于本实施例中，光感受器细胞(例如，661w细胞)于活体外生长，任选地呈阵列格式生长。细胞(任选地，具有极低密度脂蛋白受体(vldlr)基因的突变或删除)与试验化合物存库接触，监视细胞的葡萄糖摄取。因此，可再现性地影响葡萄糖摄取的显著增高的试验化合物被识别为ffa1抑制剂的新颖候选者。考虑用于ffa1抑制剂的识别的分析试验包括放射性热量计量分析试验，以及非放射性热量计量分析试验来测量葡萄糖摄取。任选地，分析试验针对高产出量分析加以最优化。举例而言，非放射性分析试验包括热量计量葡萄糖摄取分析试验套组(例如，亚伯肯产品编号ab136955)。此外，以葡萄糖摄取细胞为基础的分析试验套组(开曼化学品项目编号600470)用来利用萤光去氧基葡萄糖类似物测量葡萄糖摄取。于又另一个实施例中，ffa1抑制剂通过葡萄糖转运子glut1的细胞表面呈现(例如，基于elisa的分析试验及基因表达分析试验)加以识别。实施例8：ffa1抑制剂用于治疗神经变性的用途于本实施例中，患有神经变性(以神经元功能丧失为特征，及也包括神经元的死亡)或有发展出神经变性风险的个体被投予包含ffa1抑制剂的医药组合物。神经变性的预防及/或改善在将ffa1抑制剂投予个体以前与以后监控。由此识别ffa1抑制剂于个体的预防性及/或治疗性功效。实施例9：ffa1抑制剂用于治疗癌症的用途于本实施例中，患有癌症或有发展出癌症风险的个体被投予包含ffa1抑制剂的医药组合物。癌症的预防及/或改善在将ffa1抑制剂投予个体以前与以后监控。由此识别ffa1抑制剂于个体的预防性及/或治疗性功效。于若干实施例中，抑制剂变更恶性细胞的代谢，由此治疗该个体。等同例本领域技术人员将了解，或能够确定使用不多于例行性实验本文中描述的特定本发明的具体例的许多等同例。此等等同例意图由如上权利要求书所涵盖。当前第1页12当前第1页12