sanglifehrin大环类似物作为抗癌化合物的用途的制作方法

本发明涉及sanglifehrin大环类似物用于治疗癌症或b细胞恶性肿瘤的用途。本发明还涉及sanglifehrin大环类似物与i)酪氨酸激酶抑制剂、ii)其它激酶的抑制剂、iii)抗受体抗体、iv)遗传毒物、v)影响dna合成、dna结构和/或拓扑异构酶的抑制剂、vi)免疫检查点抑制剂、或vii)激素的组合，或sanglifehrin大环类似物可以与放射疗法或外科手术联合使用。本发明还涉及新的sanglifehrin大环类似物。

背景技术：

亲环蛋白抑制剂

亲环蛋白(cyp)是细胞蛋白家族，其显示肽基-脯氨酰基顺-反异构酶活性，促进蛋白质构象变化和折叠。cyp参与细胞进程，例如转录调节、免疫应答、蛋白质分泌和线粒体功能。

环孢菌素a(inoue等人，(2007).hepatology45(4):921-8)。已知(“csa“)及其结构紧密相关的非免疫抑制临床类似物debio-025(paeshuyse等人，(2006).hepatology43(4):761-70)、nim811(mathy等人，2008antimicrobagentschemother52(9):3267-75)和scy-635(hopkins等人，2009jgastroenterol38(6):567-72)(参见图1)与亲环蛋白结合，并且作为亲环蛋白抑制剂已显示出在hcv感染治疗中的体外和临床功效(crabbe等人，2009expertopininvestigdrugs18(2):211-20)。

环孢菌素类似物的抗hcv作用与免疫抑制性质无关，免疫抑制性质依赖于钙调磷酸酶，与fk506相同的靶标(liu等人，cell199166:807-815)。

sanglifehrins

sanglifehrina(sfa)及其天然同源物属于链霉菌属(streptomycessp.)a92-308110(也称为dsm9954)(参见wo97/02285)产生的一类混合非核糖体肽/聚酮化合物，其最初是基于它们对亲环蛋白a(cypa)的高亲和力而发现的(参见图2，例如结构)。sfa是发酵液中最丰富的成分，并且与csa相比，对cypa的亲和力高出约20倍。当在诸如混合淋巴细胞反应的测定中体外测试时，sanglifehrins也显示出比csa更低的免疫抑制活性(sanglier等人，1999；fehr等人，1999)。sfa以高亲和力结合cypa的csa结合位点(kallen等人，2005jbiolchem280(23):21965-71)。

sfa的‘免疫抑制’作用机制不同于其他已知的免疫亲和素结合免疫抑制药物如csa、fk506和雷帕霉素。sfa不抑制钙调磷酸酶的磷酸酶活性，钙调磷酸酶是csa的靶标(zenke等人，2001jimmunol166(12):7165-71)，相反其‘免疫抑制’活性归因于白细胞介素-6的抑制(hartel等人，2005scandjimmunol63(1):26-34)、白细胞介素-12(steinschulte等人，2003jimmunol171(2):542-6)和白细胞介素-2依赖性t细胞增殖的抑制(zhang&liu,2001jimmunol166(9):5611-8)。然而，sfa发挥其‘免疫抑制’作用的分子靶标和机制是迄今未知的。

sfa的分子结构是复杂的，并且已经提出其与cypa的相互作用主要由分子的大环部分介导。事实上，衍生自sfa氧化切割的大环化合物(羟基大环化合物)显示出对cypa的强亲和力(sedrani等人，2003)。x射线晶体结构数据显示羟基大环化合物结合与csa相同的cypa的活性位点。基于sfa的大环部分的类似物也已被证明缺乏‘免疫抑制’特性(sedrani等人，2003jamchemsoc125(13):3849-59)。已经公开了许多具有强效亲环蛋白抑制的大环类似物(例如，wo2011/098809、wo2011/144924、wo2011/098808、wo2012/085553、wo2011/098805、wo2012/131371、wo2012/131377，hansson等人，2015chembiol.2015年2月19日；22(2):285-292)，特别是化合物9和nv556,10(参见图2)。其中第一个化合物9描述于wo2011/098805中，并且显示对三种癌细胞系huh7、hepg2和cem具有有限的作用。事实上，据称“在测试的四种细胞系中，有三种的细胞毒性比sanglifehrina低”。

亲环蛋白抑制剂和癌症

亲环蛋白是最重要的蛋白质类别之一，因为它们通过以适当的方式折叠客户端肽来保证整个蛋白质组的正确功能。由于这个原因，癌细胞过度表达编码亲环蛋白的基因，因此具有非常有效的蛋白质折叠机制，能够维持其显著的增殖速率(lavin等人，currmolpharmacol.2015；9(2):148-64)。靶向亲环蛋白具有至少两个优点：它解决了癌细胞中的过多细胞功能，并且对正常细胞具有最小的毒性。

由于大多数抗癌药物通过直接靶向蛋白质或引起需要其干预的细胞损伤起作用，因此癌细胞通过合成更多这些蛋白质来应对这些作用机制，依靠亲环蛋白折叠它们(obacz等人，scisignal.2017年3月14日；10(470),mcconkey,biochembiophysrescommun.2017年1月15日；482(3):450-453,vahid等人,recentpatanticancerdrugdiscov.2017；12(1):35-47。

很长时间已知亲环蛋白在许多癌症中过度表达，并且亲环蛋白a是恶性转化和转移的关键决定因素(nigro等人，2013，celldeathanddisease4，e888；doi:10.1038/cddis.2013.410)。还指出，csa和sanglifehrina(sfa)增加顺铂在多形性胶质母细胞瘤中的化疗效果(han等人，oncolrep2010；23:1053-1062)。cypa过表达也被证明可以减少顺铂诱导的细胞死亡，而cypa敲除降低细胞存活率(choi等人，cancerres2007；67：3654-3662)。还使用亲环蛋白敲除进行了体内研究，导致显著效果(howard等人，cancerres2005；65:8853-8860)。与用空载体转染的细胞相比，还观察到cypa的过表达在scid小鼠中产生更快生长的异种移植物。肿瘤内注射pgenesil-2-cypa-shrna也减少了裸鼠的肿瘤发展(li等人，molcellproteomics2008；7：1810-1823)。

亲环蛋白d(cypd)的遗传缺失或药理学抑制有效地防止异种移植物和k-ras肺癌小鼠模型中的ras依赖性肿瘤形成和乳腺肿瘤生长(bigi等人，oncogene.2016年9月29日；35(39):5132-43)。已证实cypd与p53相互作用，p53充当肿瘤抑制蛋白。tp53外显子-6截短突变以高于预期频率发生并产生缺乏典型p53肿瘤抑制活性的蛋白质。这些突变体可定位于线粒体，通过结合和激活线粒体内孔通透性调节因子cypd来促进肿瘤表型(shirole等人，elife.2016；5:e17929)。

然而，尽管文献中普遍存在表明亲环蛋白在癌症中的相关性，但很少或没有证据表明任何有效的和特异性的亲环蛋白抑制剂在临床环境中导致对癌症的有效体内作用。

本发明人惊奇地发现某些sanglifehrin大环类似物比其他亲环蛋白抑制剂更有效地抑制癌细胞生长，可能通过与其他亲环蛋白抑制剂完全不同的机制，特别是基于环孢菌素a的那些。

因此，本发明提供了sanglifehrin大环类似物的药物用途，这些sanglifehrin大环类似物具有更有效的癌细胞生长抑制作用。这些化合物可用于药物，特别是用于治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤。本发明特别提供了sanglifehrin大环酯在治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤中的用途。

本发明提供了sanglifehrin大环类似物在药物中的新的且令人惊讶的用途，特别是sanglifehrin大环酯的用途，特别是在治疗癌症或b细胞恶性肿瘤中的用途。特别地，本发明提供了sanglifehrin大环类似物在治疗癌症和b细胞恶性肿瘤中的用途。在进一步优选的实施方式中，本发明提供了sanglifehrin大环类似物在治疗肝癌、特别是肝细胞癌(hcc)中的用途。在本发明的一个具体方面，sanglifehrin类似物是sanglifehrin大环酯。

技术实现要素：

本发明涉及sanglifehrin大环类似物，特别是sanglifehrin大环酯的药物用途，特别是在治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤中的药物用途。特别地，本发明涉及sanglifehrin大环类似物用于治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤的用途。在一个实施方式中，本发明涉及sanglifehrin大环酯在治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤中的用途。本发明还特别提供了sanglifehrin大环类似物在治疗肝癌中的用途，以及sanglifehrin大环类似物或sanglifehrin大环酯在治疗hcc中的用途。本发明还涉及一种sanglifehrin大环类似物与一种或多种属于本文提及的药物物质的药物的组合。

定义

本文使用的冠词“一个”和“一种”用于是指该冠词的一个或多于一个(即，至少一个)的语法对象。举例来说，“类似物”表示一种类似物或多于一种类似物。

如本文所用，术语“癌症”是指皮肤或身体器官中细胞的恶性或良性生长，例如但不限于乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胰腺癌、脑癌、胃癌或肠癌。癌症倾向于渗入邻近组织并扩散(转移)到远处器官，例如骨、肝、肺或脑。如本文所用，术语癌症包括转移性肿瘤细胞类型，例如但不限于黑素瘤、淋巴瘤、白血病、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和肥大细胞瘤以及组织癌的类型，例如但不限于结直肠癌、前列腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、胃癌、胶质母细胞瘤、原发性肝癌和卵巢癌。

如本文所用，术语“肝癌”是指肝脏中细胞的恶性或良性生长，其包括原发性和继发性(转移性)肿瘤。原发性肝癌包括但不限于，肝细胞癌(肝细胞癌症)、肝内胆管癌(外周胆管癌)、胆管囊腺癌、联合肝细胞和胆管癌、肝母细胞瘤和未分化癌。术语“肝肿瘤”也用于描述上述一组疾病，这些术语在本文中可互换使用。

如本文所用，术语“b细胞恶性肿瘤”包括一组病症，包括慢性淋巴细胞白血病(cll)、多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤(nhl)。它们是血液和血液形成器官的肿瘤性疾病。它们导致骨髓和免疫系统功能障碍，使宿主极易感染和出血。

如本文所用，术语“对一种或多种现有抗癌剂具有抗性的癌症或b细胞恶性肿瘤”是指至少一种通常使用的疗法无效的癌症或b细胞恶性肿瘤。这些癌症的特征在于能够在施用至少一种肿瘤剂后存活，其中正常细胞对应物(即，相同来源的生长调节细胞)将显示细胞毒性、细胞死亡或细胞静止的迹象(即，不会分裂)。特别地，这包括多重耐药性(mdr)癌症或b细胞恶性肿瘤，具体实例是表达高水平p-gp的癌症和b细胞恶性肿瘤。这种抗性癌症或b细胞恶性肿瘤的鉴定在医生或其他类似技术人员的能力和常规活动范围内。

如本文所用，术语“sanglifehrin大环类似物”是指根据下式(i)的化合物或其药学上可接受的盐。

其中，r1代表or3或nr3r4，r2代表h或f；

且其中r3和r4独立地代表氢、烷基、烯基、环烷基、环烯基、芳基或杂芳基、其中任何基团可任选地被单环芳基或单环杂芳基取代；

且其中r3和r4的不是芳基或杂芳基的一部分的一个或多个碳原子任选被选自o、n和s(o)p的杂原子取代，其中p代表0、1或2，并且其中r3和r4的一个或多个碳原子任选被羰基取代；

或r3和r4连接使得nr3r4代表含有特定氮原子的饱和或不饱和杂环，并且其中所述环的一个或多个碳原子任选被选自o、n和s(o)p的另外杂原子取代，其中p代表0、1或2，并且其中所述环的一个或多个碳原子任选被羰基取代，并且该杂环可任选地与芳基或杂芳基环稠合；

并且其中r3和r4基团的一个或多个碳原子可任选被一个或多个卤素原子取代，

或其药学上可接受的盐。

这些化合物也称为“本发明的化合物”，且这些术语在本申请中可互换使用。新的sanglifehrin大环类似物也是本发明的一部分。

如本文所用，术语“sanglifehrin大环酯”是指根据式(i)的化合物，其中r1＝or3且其中r2＝f；或其药学上可接受的盐。在另一种格式中，这可以描述为下式ii：

在本申请中，术语“sanglifehrin大环类似物”包括sanglifehrin大环酯。

sanglifehrin大环类似物的药学上可接受的盐包括由药学上可接受的无机或有机酸或碱形成的常规盐以及季铵酸加成盐。合适的酸盐的更具体实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、甾体酸(steroic)、丹宁酸等。其他酸，例如草酸，虽然本身不是药学上可接受的，但可以用于制备用作获得本发明的化合物及其药学上可接受的盐的中间体的盐。合适的碱性盐的更具体实例包括钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、n,n’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、n-甲基葡糖胺和普鲁卡因盐。下文提及根据本发明的化合物包括sanglifehrin大环类似物和sanglifehrin大环酯及其药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“烷基”是指仅由sp³碳原子组成的任何直链或支链，被氢原子完全饱和，诸如例如直链烷基的-cnh2n+1，其中n可以在1至10的范围内，诸如例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、辛基、壬基或癸基。本文使用的烷基可以进一步被取代。

如本文所用，术语“环烷基”是指具有通式–cnh2n-1的环状/环结构碳链，其中n在3-10之间，诸如例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基、二环[3.2.1]辛基、螺[4,5]癸基、去三甲蒎烷基、降冰片基、蒈烷基、金刚烷基等。如本文所用的环烷基可进一步被取代。

如本文所用，术语“烯基”是指由碳和氢原子组成的直链或支链，其中至少两个碳原子通过双键连接，诸如例如具有2至10个碳原子和至少一个双键的c2-10烯基不饱和烃链。c2-6烯基包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、异丙烯基、正丁烯基、正戊烯基、正己烯基等。如本文所用的烯基可进一步被取代。

如本文所用，术语“环烯基”是指具有通式–cnh2n-1的环状/环结构碳链，其中n在3-10之间，其中至少两个碳原子通过双键连接。如本文所用的环烯基可进一步被取代。

本上下文中的术语“c1-10烷氧基”表示单独或组合使用的基团-o-c-1-10烷基、其中c1-10烷基如上所定义。直链烷氧基的实例是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。支链烷氧基的实例是异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基和异己氧基。环状烷氧基的实例是环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。

如本文所用，术语“c3-7杂环烷基”表示完全饱和的杂环，如环状烃，其在环中独立地含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子。杂环的实例包括但不限于、吡咯烷(1-吡咯烷、2-吡咯烷、3-吡咯烷、4-吡咯烷、5-吡咯烷)、吡唑烷(1-吡唑烷、2-吡唑烷、3-吡唑烷、4-吡唑烷、5-吡唑烷)、咪唑烷(1-咪唑烷、2-咪唑烷、3-咪唑烷、4-咪唑烷、5-咪唑烷)、噻唑烷(2-噻唑烷、3-噻唑烷、4-噻唑烷、5-噻唑烷)、哌啶(1-哌啶、2-哌啶、3-哌啶、4-哌啶、5-哌啶、6-哌啶)、哌嗪(1-哌嗪、2-哌嗪、3-哌嗪、4-哌嗪、5-哌嗪、6-哌嗪)、吗啉(2-吗啉、3-吗啉、4-吗啉、5-吗啉、6-吗啉)、硫代吗啉(2-硫代吗啉、3-硫代吗啉、4-硫代吗啉、5-硫代吗啉、6-硫代吗啉)、1,2-氧硫杂环戊烷(3-(1,2-氧硫杂环戊烷)、4-(1,2-氧硫杂环戊烷)、5-(1,2-氧硫杂环戊烷))、1,3-二氧杂环戊烷(2-(1,3-二氧杂环戊烷)、3-(1,3-二氧杂环戊烷)、4-(1,3-二氧杂环戊烷))、四氢吡喃(2-四氢吡喃、3-四氢吡喃、4-四氢吡喃、5-四氢吡喃、6-四氢吡喃)、六氢吡嗪(1-(六氢吡嗪)、2-(六氢吡嗪)、3-(六氢吡嗪)、4-(六氢吡嗪)、5-(六氢吡嗪)、6-(六氢吡嗪))。

如本文所用，术语“c1-10烷基-c3-10环烷基”是指通过具有指定碳原子数的如上定义的烷基连接的如上定义的环烷基。

如本文所用，术语芳基旨在包括碳环芳环体系。芳基还旨在包括下面列举的碳环体系的部分氢化衍生物。

如本文所用，术语“杂芳基”包括含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子的杂环不饱和环体系，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基，并且还旨在包括下面列举的杂环体系的部分氢化衍生物。

如本文所用，术语“芳基”和“杂芳基”是指芳基，其可以是任选未取代的或单-、二-或三-取代的，或杂芳基，其可以是任选未取代的或单-，二-或三-取代的。“芳基”和“杂芳基”的实例包括但不限于苯基、联苯基、茚基、萘基(1-萘基、2-萘基)、n-羟基四唑基、n-羟基三唑基、n-羟基咪唑基、蒽基(1-蒽基、2-蒽基、3-蒽基)、菲基、芴基、并环戊二烯基、薁基、联亚苯基、噻吩基(1-噻吩基、2-噻吩基)、呋喃基(1-呋喃基、2-呋喃基)、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、吡喃基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、四唑基、噻二嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(硫茚基)、吲哚基、噁二唑基、异噁唑基、喹唑啉基、芴基、呫吨基、异茚满基、二苯甲基、吖啶基、苯并异噁唑基、嘌呤基、喹唑啉基、喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、氮杂环庚烯基、二氮杂环庚烯基、吡咯基(2-吡咯基)、吡唑基(3-吡唑基)、5-噻吩-2-基-2h-吡唑-3-基、咪唑基(1-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、三唑基(1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-2-基、1,2,3-三唑-4-基、1,2,4-三唑-3-基)、噁唑基(2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基)、噻唑基(2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、吡啶基(2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基)、吡嗪基、哒嗪基(3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基)、异喹啉基(1-异喹啉基、3-异喹啉基、4-异喹啉基、5-异喹啉基、6-异喹啉基、7-异喹啉基、8-异喹啉基)、喹啉基(2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、7-喹啉基、8-喹啉基)、苯并[b]呋喃基(2-苯并[b]呋喃基、3-苯并[b]呋喃基、4-苯并[b]呋喃基、5-苯并[b]呋喃基、6-苯并[b]呋喃基、7-苯并[b]呋喃基)、2,3-二氢-苯并[b]呋喃基(2-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、3-(2,3)-二氢-苯并[b]呋喃基)、4-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、5-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、6-(2,3-二氢)-苯并[b]呋喃基)、7-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基))、苯并[b]噻吩基(2-苯并[b]噻吩基、3-苯并[b]噻吩基、4-苯并[b]噻吩基、5-苯并[b]噻吩基、6-苯并[b]噻吩基、7-苯并[b]噻吩基)、2,3-二氢-苯并[b]噻吩基(2-(2,3-二氢)-苯并[b]噻吩基)、3-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、4-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、5-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、6-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、7-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基))、吲哚基(1-吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基)、吲唑基(1-吲唑基、2-吲唑基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、6-吲唑基、7-吲唑基)、苯并咪唑基(1-苯并咪唑基、2-苯并咪唑基、4-苯并咪唑基、5-苯并咪唑基、6-苯并咪唑基、7-苯并咪唑基、8-苯并咪唑基)、苯并噁唑基(1-苯并噁唑基、2-苯并噁唑基)、苯并噻唑基(1-苯并噻唑基、2-苯并噻唑基、4-苯并噻唑基、5-苯并噻唑基、6-苯并噻唑基、7-苯并噻唑基)、咔唑基(1-咔唑基、2-咔唑基、3-咔唑基、4-咔唑基)。部分氢化衍生物的非限制性实例是1,2,3,4-四氢萘基、1,4-二氢萘基、吡咯啉基、吡唑啉基、吲哚啉基、噁唑烷基、噁唑啉基、氧杂环庚烯基等。

如本文所用，术语“酰基”是指羰基–c(＝o)r，其中r基团是任何上述定义的基团。具体实例是甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、苯甲酰基等。

应用于任何基团的“任选取代的”是指如果需要，所述基团可以被一个或多个取代基取代，所述取代基可以相同或不同。“任选取代的烷基”包括“烷基”和“取代的烷基”。

“取代的”和“任选取代的”部分的合适取代基的实例包括卤素(氟、氯、溴或碘)、c1-6烷基、c3-6环烷基、c3-6环烯基羟基、c1-6烷氧基、氰基、氨基、硝基、c1-6烷基氨基、c2-6烯基氨基、二c1-6烷基氨基、c1-6酰基氨基、二c1-6酰基氨基、c1-6芳基、c1-6芳基氨基、c1-6芳酰基氨基、苄基氨基、c1-6芳基酰胺基、羧基、c1-6烷氧基羰基或(c1-6芳基)(c1-10烷氧基)羰基、氨基甲酰基、单-c1-6氨基甲酰基、二-c1-6氨基甲酰基或上述任何一种，其中烃基部分本身被卤素、氰基、羟基、c1-2烷氧基、氨基、硝基、氨基甲酰基、羧基或c1-2烷氧基羰基取代。在含有氧原子如羟基和烷氧基的基团中，氧原子可以用硫代替，以制备诸如硫代(sh)和硫代-烷基(s-烷基)的基团。因此，任选的取代基包括诸如s-甲基的基团。在硫代-烷基中，硫原子可以进一步氧化以形成亚砜或砜，因此任选的取代基包括诸如s(o)-烷基和s(o)2-烷基的基团。

取代可以采取双键的形式，并且可以包括杂原子。因此，具有羰基(c＝o)而不是ch2的烷基可以被认为是取代的烷基。

因此，取代的基团包括例如cfh2、cf2h、cf3、ch2nh2、ch2oh、ch2cn、ch2sch3、ch2och3、ome、oet、me、et、-och2o-、co2me、c(o)me、i-pr、scf3、so2me、nme2、conh2、conme2等。在芳基的情况下，取代可以是来自芳环中相邻碳原子的环的形式，例如环状缩醛，例如o-ch2-o。

发明描述

本发明涉及sanglifehrin大环类似物在医学中的用途，特别是在治疗癌症和/或b细胞恶性肿瘤中的用途。在一个实施方式中，本发明提供了sanglifehrin大环酯或其药学上可接受的盐在治疗癌症或b细胞恶性肿瘤中的用途。

本发明还提供了sanglifehrin类似物，即与其他相关的sanglifehrin类似物或其药学上可接受的盐相比具有增加的细胞抑制活性的sanglifehrin类似物在治疗其中细胞生长的抑制很重要的医学病症中的用途。本发明还提供了sanglifehrin大环酯或其药学上可接受的盐在治疗肝癌中的用途。优选地，本发明提供了一种治疗癌症或b细胞恶性肿瘤的方法，其包括给患者施用有效量的sanglifehrin类似物。在一个实施方式中，本发明提供了一种治疗肝癌的方法，其包括向患者施用有效量的sanglifehrin类似物。在一个具体方面，sanglifehrin类似物是sanglifehrin大环酯。

从本文的实施例可以看出，通过将sanglifehrin类似物与另一种药物物质一起施用可以获得协同效应。在实施例4和8中，证明了sanglifehrin类似物和阿霉素(即，遗传毒物的实例)之间以及sanglifehrin类似物和索拉非尼(即，酪氨酸激酶抑制剂的实例)之间的协同效应。预期使用治疗组内的其他药物物质也可获得协同效应(见下文)，并且在sanglifehrin类似物和属于相关治疗组的其他药物物质之间也观察到协同效应。

因此，本发明还涉及sanglifehrin类似物和下文提到的一种或多种药物物质的组合，以及这些组合的用途，并且涉及含有这种组合的药物组合物或试剂盒。此外，sanglifehrin类似物可以与另一种治疗剂共同施用，用于治疗癌症或b细胞恶性肿瘤。优选的药物物质包括但不限于，

i)酪氨酸激酶抑制剂如索拉非尼、瑞格非尼、阿卡替尼(acalabrutinib)、阿法替尼、阿来替尼、阿西替尼、博舒替尼、布加替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克唑替尼、达沙替尼、恩曲替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、拉帕替尼、乐伐替尼、米哚妥林、来那替尼、尼洛替尼、尼达尼布、奥希替尼、帕唑帕尼、帕纳替尼、芦可替尼、舒尼替尼、凡德他尼。

ii)其它激酶的抑制剂，例如pi3k抑制剂如库潘尼西(copanlisib)，mek抑制剂如达拉非尼、曲美替尼、考比替尼、维罗非尼，周期素依赖性激酶抑制剂如帕博西尼、瑞博西尼等。

iii)抗受体抗体，例如贝伐单抗、西妥昔单抗、耐昔妥珠单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗等。

iv)遗传毒物如白消安环磷酰胺、氮芥、苯丁酸氮芥、卡莫司汀、阿霉素、尿嘧啶氮芥、苯达莫司汀、异环磷酰胺、美法仑、米托蒽醌、洛莫司汀、顺铂、卡铂、奥沙利铂、吡铂等。

v)影响dna合成、dna结构或拓扑异构酶的抑制剂，例如5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、伊立替康、拓扑替康、喜树碱、依托泊苷、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、曲贝替定等。

vi)免疫检查点抑制剂如帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗等。

vi)激素疗法，例如他莫昔芬、阿那曲唑、来曲唑、依西美坦、戈舍瑞林、曲普瑞林、组氨瑞林、阿比特龙、地加瑞克、亮丙瑞林、氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特、恩杂鲁胺等。

此外，sanglifehrin大环类似物或sanglifehrin大环酯可以与其他疗法组合施用，包括但不限于放射疗法或手术。

特别感兴趣的是酪氨酸激酶抑制剂、遗传毒物和/或免疫检查点抑制剂。

在优选的实施方式中，sanglifehrin大环类似物是sanglifehrin大环酯。

在另一个优选的实施方式中，sanglifehrin大环类似物具有式(i)的结构，其中，r1代表or3，且r2代表f；

在更优选的实施方式中，r3代表烷基、烯基、环烷基、环烯基、烷基环烷基、烷基环烯基、烯基环烷基、烯基环烯基、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、烯基芳基或烯基杂芳基。

在优选的实施方式中，r3代表烷基或烯基。优选的烷基或链烯基是具有1-10个碳原子，特别是1-6个碳原子的直链或支链烷基烯基。

在另一个优选的实施方式中，sanglifehrin大环类似物具有式(i)的结构，其中，r1代表nr3r4，r2代表f；

在另一个优选的实施方式中，r3和r4表示烷基或环烷基，其任选被单环芳基或单环杂芳基取代。

sanglifehrin大环类似物可能具有以下结构之一：

从本文的实施例中可以看出，感兴趣的特定化合物是

sanglifehrin大环类似物可以通过任何常规和合适的施用途径施用。它可以单独施用或作为治疗方案的一部分与其他药物一起施用。在本发明的上下文中，包括共同施用以表示向患者递送两种或多种治疗剂的任何手段作为相同治疗方案的一部分，这对于技术人员是显而易见的。虽然两种或多种药剂可以在单一制剂中同时施用，但这不是必需的。药剂可以不同的制剂和在不同的时间施用。

制剂可以方便地以合适的剂型存在，包括单位剂型，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。这些方法包括使活性成分(本发明的化合物)与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，制剂通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合在一起来制备，然后，如果需要，使产品成形。

如前所述，sanglifehrin大环类似物可以药物组合物的形式存在，其可以含有一种或多种本文提到的其他药物物质，或者它可以包含一种或多种组分的药物试剂盒的形式提供，其中一种包含sanglifehrin大环类似物，且另一种包含本文所述的另一种药物物质。特别感兴趣的是前面提到的药物物质的组合。

sanglifehrin类似物通常通过任何常规途径施用，例如但不限于口服、肠胃外、局部、通过粘膜如颊、舌下、透皮、阴道、直肠、鼻或眼以包含活性成分的药物制剂的形式，任选地以药学上可接受的剂型的无毒有机或无机、酸或碱加成盐的形式。取决于病症和待治疗的患者，以及施用途径，组合物可以不同的剂量和/或频率施用。

适用于注射用途的本发明的药物组合物包括无菌水溶液或分散液。此外，组合物可以是无菌粉末的形式，用于临时制备这种无菌可注射溶液或分散液。在所有情况下，最终的可注射形式必须是无菌的并且必须是有效的流体以便于注射。

药物组合物在制造和储存条件下必须是稳定的；因此，优选应该保存以防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油及其合适的混合物。

例如，sanglifehrin类似物可以片剂、胶囊、胚珠、酏剂、溶液或悬浮液的形式口服、颊或舌下施用，其可含有调味剂或着色剂，用于立即、延迟或控制释放的应用。

适用于口服施用的sanglifehrin类似物的溶液或悬浮液也可含有一种或多种溶剂，包括水、醇、多元醇等，以及一种或多种赋形剂，例如ph调节剂、稳定剂、表面活性剂、增溶剂、分散剂、防腐剂、香料等。具体实例包括赋形剂，例如n,n-二甲基乙酰胺，分散剂，例如聚山梨醇酯80、表面活性剂和增溶剂、例如，聚乙二醇、phosal50pg(其由磷脂酰胆碱、大豆脂肪酸、乙醇、单甘酯/双甘酯、丙二醇和抗坏血酸棕榈酸酯组成)。

这种片剂可含有赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖(例如，乳糖一水合物或无水乳糖)、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸、丁基化羟基甲苯(e321)、交聚维酮、羟丙甲纤维素、崩解剂如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐、和造粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、羟丙基纤维素(hpc)、聚乙二醇8000、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，可以包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。

类似类型的固体组合物也可用作明胶胶囊中的填充剂。就此而言，优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮液和/或酏剂，本发明的化合物可与各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料、乳化剂和/或悬浮剂以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油及其组合混合。

片剂可以通过压缩或模塑制成，任选地含有一种或多种辅助成分。压缩片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒，任选地与粘合剂(例如，聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂混合来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备。片剂可以任选地包衣或刻痕，并且可以配制成使其中的活性成分缓慢或控制释放，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线。

适合于口服施用的根据本发明的制剂可以离散单位形式提供，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，每个含有预定量的活性成分；多单位形式，例如以片剂或胶囊剂的形式：以粉末或颗粒形式；以水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液形式；或者以水包油液体乳液或油包水液体乳液形式。活性成分也可以大丸剂、药糖剂或糊剂形式提供。

适于在口腔中局部施用的制剂包括含有调味基础的活性成分的锭剂，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；含片，包括惰性基质中的活性成分，如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；和嗽口水，其包含在合适的液体载体中的活性成分。

应当理解，除了上面特别提到的成分之外，本发明的制剂可以包括关于所讨论制剂类型的本领域中常规的其他试剂，例如适合于口服施用的那些可以包括调味剂。

适于局部施用的药物组合物可以配制成软膏剂、乳膏剂、乳液、悬浮液、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、浸渍敷料剂、喷雾剂、气雾剂或油剂、透皮装置、散布剂(dustingpowder)等。这些组合物可通过含有活性剂的常规方法制备。因此，它们还可以包含相容的常规载体和添加剂，例如防腐剂，有助于药物渗透的溶剂，乳膏或软膏中的润肤剂和用于洗剂的乙醇或油醇。这些载体可以占组合物的约1％至约98％存在。更常见的是，它们将占组合物的约80％。仅作为说明，通过将足量的含有约5-10wt％的化合物的亲水性材料和水混合，制备乳膏或软膏，以足够的量产生具有期望稠度的乳膏或软膏。

适于透皮施用的药物组合物可以离散贴剂形式提供，旨在与受体的表皮保持长时间的紧密接触。例如，可通过离子电渗疗法从贴剂递送活性剂。

对于外部组织(例如，口腔和皮肤)的应用，组合物优选以局部软膏或乳膏形式施用。当配制成软膏时，活性剂可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。

可替代地，可以将活性剂配制成具有水包油乳膏基质或油包水基质的乳膏。

对于肠胃外施用，使用活性成分和无菌载体制备流体单位剂型，例如但不限于水、醇、多元醇、甘油和植物油，优选为水。取决于所使用的载体和浓度，活性成分可以悬浮或溶解在载体中。在制备溶液时，可将活性成分溶解在注射用水中并过滤灭菌，然后填充到合适的小瓶或安瓿中并密封。

有利地，诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂的试剂可以溶解在载体中。为了增强稳定性，可以在填充到小瓶中之后冷冻组合物并在真空下除去水。然后，将干燥的冻干粉末密封在小瓶中，并且可以提供附带的注射用水的小瓶以在使用前重构液体。

胃肠外悬浮液以与溶液基本相同的方式制备，不同之处在于活性成分悬浮在载体中而不是溶解，并且不能通过过滤完成灭菌。活性成分可以在悬浮于无菌载体中之前通过暴露于环氧乙烷来灭菌。有利地，组合物中包含表面活性剂或润湿剂以促进活性成分的均匀分布。

还可以使用本领域已知的医疗装置施用sanglifehrin类似物。例如，在一个实施方式中，本发明的药物组合物可以与无针皮下注射装置一起施用，例如u.s.5,399,163；u.s.5,383,851；u.s.5,312,335；u.s.5,064,413；u.s.4,941,880；u.s.4,790,824；或u.s.4,596,556中公开的装置。可用于本发明的众所周知的植入物和模块的实例包括：us4,487,603，其公开了一种用于以受控速率分配药物的可植入微输液泵；us4,486,194，其公开了一种通过皮肤施用药物的治疗装置；us4,447,233，其公开了一种用于以精确输注速率递送药物的药物输注泵；us4,447,224，其公开了一种用于连续药物递送的可变流量可植入输注装置；us4,439,196，其公开了一种具有多室隔室的渗透药物递送系统；和us4,475,196，其公开了一种渗透性药物递送系统。

本发明的化合物的待施用的剂量将根据具体化合物、所涉及的疾病、受试者、疾病的性质和严重程度以及受试者的身体状况和所选择的施用途径而变化。适当的剂量可由本领域技术人员容易地确定。

取决于施用方法，组合物可含有0.1wt％、5-60wt％，或10-30wt％的本发明的化合物。

本领域技术人员将认识到，本发明的化合物的各个剂量的最佳量和间隔将由所治疗病症的性质和程度，施用的形式、途径和部位，以及所治疗的特定受试者的年龄和状况确定，并且医生将最终确定要使用的适当剂量。该剂量可以按适当的频率重复进行。如果产生副作用，则可以根据正常的临床实践改变或减少剂量的量和/或频率。

附图说明

图1：环孢菌素a和类似物的结构。

图2：sanglifehrina和类似物的结构。

图3：体外评价sanglifehrin大环类似物nv556和基于环孢菌素的亲环蛋白抑制剂环孢菌素a(csa)和阿拉泊韦(alv)对肝细胞癌细胞系hepg2的抗癌活性。在测试化合物存在下孵化4天后，从一式三份样品中测定活细胞计数。

图4：显示了在单层增殖测试中体外评价sanglifehrin大环类似物与抗癌药索拉非尼对sk-hep-1肿瘤细胞系的联合抗癌活性的结果。

图5：显示了在单层增殖测试中体外评价sanglifehrin大环类似物与抗癌药阿霉素对sk-hep-1肿瘤细胞系的联合抗癌活性的结果。

图6：显示了sanglifehrin大环类似物对皮下植入到小鼠中的huh-7肿瘤细胞系的抗癌活性的体内评价结果。

图7：显示了通过在单层增殖测试中以不同剂量使用化合物1和激酶抑制剂索拉非尼同时处理hepg2肿瘤细胞系的协同生长抑制作用。

具体实施方式

实施例

材料与方法

材料

除非另有说明，否则以下实施例中使用的所有试剂均来自商业来源。

化合物生成

使用wo2011/098809、wo2011/144924、wo2011/098808、wo2012/085553、wo2011/098805、wo2012/131371和wo2012/131377中描述的方法生成本发明的化合物。

抗癌活性的体外生物测定

将细胞接种在96孔板中，加入测试化合物或dmso，并将板孵化另外4天或7天(钙黄绿素am测定)。在使用胰蛋白酶处理分离后，通过台盼蓝拒染、流式细胞术、通过添加atp测量试剂(celltiterglo)或根据制造商的说明直接制备的钙黄绿素am间接地测量atp含量，测定活细胞计数。

通过下述公式计算atp测试中的百分比抑制：

生长抑制％：100-100x(实验-空白)/(dmso-空白)

xlfit软件((适配型号：剂量反应一个位点/f(x)205[拟合＝(a+((b-a)/(1+((c/x)^d))))])用于曲线拟合和ic50计算)用于曲线拟合和ic50计算。

抗癌活性的体内评估

将huh-7(人肝肿瘤)细胞或另一细胞系在dmem(低葡萄糖)+2mm的l-谷氨酰胺中培养，加入胎牛血清至终浓度为10％。通过除去并丢弃培养基来对细胞系进行传代培养。用0.25％(w/v)胰蛋白酶-0.53mm的edta溶液短暂冲洗细胞层以除去含有胰蛋白酶抑制剂的所有痕量血清。之后，将2.0至3.0ml的胰蛋白酶-edta溶液加入烧瓶中，并在倒置显微镜下观察细胞层直至分离。在加入6.0至8.0ml的完全生长培养基后，通过温和移液吸出细胞。使用1:1至1:2的传代培养比，并将培养烧瓶在37℃下孵化，每周更新培养基2-3次。

将体重为约18-20g的6-8周的balb/c裸雌性小鼠维持在无特定病原体的环境和个体通气笼中(每笼4-6只小鼠)。在动物接收和肿瘤接种之间使用大约一周的适应期，以使动物适应实验室环境。所有笼子、草垫和水在使用前都要进行消毒。用含有50％基质胶的0.2ml基础培养基混合物中的huh-7肿瘤细胞(1x10⁶个细胞/小鼠)在右侧腹皮下接种小鼠。当平均肿瘤大小达到约150mm³-180mm³时开始治疗。测定体重并用卡尺每周测量两次肿瘤大小。

在上海chempartner进行单层增殖测试中的一组人肿瘤细胞系中的抗癌活性化合物的体外评估。所选细胞系的特征总结在表1中。

表1测试细胞系

实施例1.化合物1的生成

在室温下，向化合物2(hansson等人，2015，chemistry&biology22,285-292和wo2012/131377,50mg,0.066mmol)、叔丁基二乙基磷酰乙酸酯(50mg,0.198mmol)和licl(8.3mg,0.198mmol)在ch3cn(1ml)中的混合物滴加dbu(20mg,0.132mmol)的ch3cn(0.2ml)的溶液。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水稀释并用etoac萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过柱色谱法将残余物纯化两次(第一次使用石油醚/etoac作为洗脱剂，然后使用dcm/meoh)，得到化合物1，为浅黄色固体。

实施例2.用于抗癌活性的体外生物测定

体外评价sanglifehrin大环类似物nv556和基于环孢菌素的亲环蛋白抑制剂环孢菌素a(csa)和阿拉泊韦(alv)对肝细胞癌细胞系hepg2的抗癌活性。在测试化合物存在下孵化4天后，从一式三份样品中测定活细胞计数。结果如图3所示。

实施例3.用于抗癌活性的体外生物测定

如上述一般方法中所述，在单层增殖测定中对一组11种人肿瘤细胞系中的sanglifehrin大环类似物(nv556)进行抗癌活性的体外评价。数据是来自两个独立实验的平均值，测试10个浓度(3nm-25μm)，一式两份。

实施例4.用于抗癌活性的体外生物测定

如上述一般方法中所述，在单层增殖测定中体外评价sanglifehrin大环类似物与抗癌药索拉非尼或阿霉素对sk-hep-1肿瘤细胞系的组合抗癌活性。结果显示在图4和5中。

从数据可以看出，nv556和索拉非尼或nv556和阿霉素的组合在一定浓度范围内比单独的任一种化合物显示出更强的细胞数减少。

实施例5.用于抗癌活性的体外生物测定

与nv556(10)7天增殖测定相比，体外评价sanglifehrin大环类似物(1)对人肝细胞癌细胞系的抗癌活性。如方法部分所述，通过钙黄绿素am染色测定细胞数。数据来自一个实验，每个细胞系测试9种浓度的每种化合物的重复样品。两种化合物都包括在每个实验中。

从数据可以看出，在所有情况下，化合物1比nv556(10)更有效(3-10倍)。

实施例6.用于抗癌活性的体外生物测定

在7天增殖测定中，与亲环蛋白抑制剂阿拉泊韦和激酶抑制剂索拉非尼相比，体外评价sanglifehrin大环类似物(1)对人肝细胞癌细胞系的抗癌活性。如方法部分所述，通过钙黄绿素am染色测定细胞数。数据来自一个单独的实验或两个独立实验的手段，测试9种浓度的每种化合物的重复样品。在每个实验中包括所有三种化合物。

从数据可以看出，化合物1在所有情况下比阿拉泊韦更有效(3-1000倍)，在8/9案例中比索拉非尼更有效(3-600倍)。

实施例7.抗癌活性的体内评估

评估nv556对裸鼠中的人huh-7肝细胞癌细胞生长的抗癌作用。在右侧腹皮下注射肿瘤细胞，当肿瘤大小达到150mm³-180mm³时，开始用nv556(10)处理。通过口服灌胃(po)或腹膜内注射(ip)以100mg/kg(n＝8)的剂量每日施用一次nv556。双周肿瘤测量结果(平均值和标准误差)如图6所示。

实施例8.化合物1与索拉非尼的体外组合。

为了测试与索拉非尼的潜在协同活性，在7天增殖测定(钙黄绿素am测定，在方法部分中描述的)中加入一系列浓度的化合物1(a)连同一系列浓度的索拉非尼(b)对抗肝癌细胞系hepg2。数据来自一个单一的实验，代表测试重复样品的两个独立实验。将数据绘制在标准化的等效线图中(chou和martin，用于药物组合的compusyn：pc软件和用户指南：用于定量药物组合中的协同作用和拮抗作用以及ic50和ed50和ld50值的测定的计算机程序，combosyninc,paramus,(nj),2005)，并显示在图7中。斜边下方左下方的值表示协同作用。