本发明属于美容的
技术领域：
，尤其涉及一种美容组合物及其制备方法和应用。本申请要求2018年1月23日提交的中国专利(专利申请号为201810065315.2)的权益，在此将上述申请的全部内容引用并入本文。
背景技术：
：人体皮肤内有四种生物色素，其中黑素是决定皮肤颜色的关键性因素，黑素生成较多的人就表现为皮肤较暗、斑点较多。黑素在黑素细胞中的合成、转运及分泌是一个复杂精确的调控过程，而黑素合成是色素沉着过程的第一步。皮肤黑素的合成是酪氨酸通过酪氨酸酶作用而缓慢地氧化成多巴，多巴在多巴氧化酶的作用下，形成五色的中间产物，这种物质在酪氨酸酶的进一步影响下，聚合而氧化成棕色黑色素。由此可见，酪氨酸增多是皮肤色素沉着加深的物质基础；酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶，其活性强弱直接影响黑素的生成量，控制其活性可减少黑素生成，从而达到淡化色素沉着的目的。传统的皮肤美白剂往往是化学性物质，如具有增白作用的汞盐和祛斑作用的氢醌，虽有快速美白功效，但对皮肤有毒副作用，长期使用会引起接触性皮炎或永久脱色等不良反应。酒曲酸也用于美白，但具有细胞毒作用，并可增加卵巢细胞染色体互换及染色体畸变的发生率；酒曲酸衍生物美白作用更强，毒副作用较酒曲酸弱，但不良反应时有发生，目前的美白化妆品多以此为有效成分。熊果苷虽作用温和，但使用剂量过大却会产生与酒曲酸相似的毒副反应。皮肤局部注射或者外用皮质类固醇有一定美白作用，但会导致皮肤色素减退，但发生机制不明确，不宜用于面部皮肤，因为容易导致局部皮肤萎缩、毛细血管扩张、毳毛增多和色素沉着。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了一种美容组合物及其制备方法和应用，能有效解决当前的美白产品对皮肤具有毒副作用的技术缺陷。本发明提供了一种美白美容组合物，包括：款冬花提取物、茶多酚、脂肪干细胞的条件培养基和胶原多肽水凝胶；所述胶原多肽水凝胶是胶原蛋白经水解后的产物。作为优选，所述款冬花提取物在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为5-40μg/ml；所述茶多酚在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为10-50μg/ml；所述胶原多肽水凝胶在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为5-50μg/ml；其中，所述脂肪干细胞的条件培养基为将培养过5×107～5×108个脂肪干细胞的培养基除细胞取其上清液后得到。作为优选，所述款冬花提取物在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为20-40μg/ml；所述茶多酚在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为50μg/ml；所述胶原多肽水凝胶在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为5-10μg/ml；其中，所述脂肪干细胞的条件培养基为将培养过5×107～5×108个脂肪干细胞的培养基除细胞取其上清液后得到。作为优选，所述款冬花提取物在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为20μg/ml；所述茶多酚在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为50μg/ml；所述胶原多肽水凝胶在所述脂肪干细胞的条件培养基的浓度为10μg/ml；其中，所述脂肪干细胞的条件培养基为将培养过1×108个脂肪干细胞的培养基除细胞取其上清液后得到。需要说明的是，将培养过1×108个脂肪干细胞的培养基除细胞取其上清液后得到的脂肪干细胞的条件培养基，经过浓缩或稀释后添加到本发明的美容组合物中。需要说明的是，所述脂肪干细胞的条件培养基的用量为使得各种组分达到所述浓度的补足量。作为优选，所述脂肪干细胞的条件培养基为第二代脂肪干细胞的条件培养基、第三代脂肪干细胞的条件培养基、第四代脂肪干细胞的条件培养基或第五代脂肪干细胞的条件培养基中的一种或多种。需要说明的是，第二代脂肪干细胞的条件培养基、第三代脂肪干细胞的条件培养基、第四代脂肪干细胞的条件培养基或第五代脂肪干细胞的条件培养基具体为：脂肪干细胞分离后获得原代细胞，经过传代培养后获得p2至p5代的脂肪干细胞。作为优选，所述胶原多肽水凝胶是胶原蛋白经水解后的产物具体为所述胶原多肽水凝胶是胶原蛋白经蛋白酶水解后的产物。作为优选，所述脂肪干细胞的来源为动物。作为优选，所述脂肪干细胞的来源为人。本发明还提供了一种美容组合物的制备方法，包括以下步骤：将款冬花提取物、茶多酚、胶原多肽水凝胶与脂肪干细胞的条件培养基混合得到。作为优选，包括以下步骤：s101：将款冬花提取物、茶多酚与脂肪干细胞的条件培养基混合，得到混合物；s102：将混合物添加至胶原多肽水凝胶中，得到美容组合物。本发明还公开了美容组合物在皮肤美白和抗过敏中的应用。本发明的目的是提供一种毒副作用小的美容产品，本发明的美容组合物包括：款冬花提取物、茶多酚、脂肪干细胞的条件培养基和胶原多肽水凝胶，其中，脂肪干细胞的条件培养基作为溶解基质，加入款冬花提取物和茶多酚后形成具有抗过敏和美白作用的溶液，再与胶原多肽水凝胶混合，形成可涂布的面膜。其中，脂肪干细胞的条件培养基内含多种活性成分，能有效的促进皮肤修复，并能缓解黑色素生成，使得肤色变亮；款冬花提取物和茶多酚，能够直接作用于皮肤，起到抗氧化和抗炎作用，使得本发明也适用于过敏性皮肤；胶原多肽水凝胶使得本发明的美容组合物成膜性好。胶原多肽水凝胶亦称水解明胶，是胶原或明胶经蛋白酶等降解处理后的多肽混合物，明胶水解的衍生物。水解后肽键断裂，变为多肽，其分子量在500-20000da之间，蛋白含量达90％以上，水溶性强，粘度低，氨基酸组合与明胶基本相同，人体消化吸收率为100％。皮肤的表皮细胞能吸收胶原多肽水凝胶的小分子多肽，大分子多肽可在皮肤表面形成保护膜，起到保湿的作用。因此，与现有技术相比，本发明选用了纯天然可降解的胶原多肽水凝胶，其来源方便、在安全性高、效果明显。此外，联合脂肪干细胞的条件培养基、款冬花提取物和茶多酚，能从多方面去改善皮肤质地，且能适用于多类型肤质的人群，能有效改善过敏性皮肤质地，提亮肤色，还能有效缓解脸部炎症，改善肌肤。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示本发明的美容组合物的制备方法的流程图；其中，附图标记，1为脂肪干细胞的条件培养基、2为款冬花提取物和茶多酚、3为形成混合物、4为胶原多肽水凝胶、5为本发明的美容组合物。具体实施方式本发明提供了一种美容组合物及其制备方法和应用，用于解决当前的美白产品对皮肤具有毒副作用的技术缺陷。下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。其中，以下实施例所使用的原料均为市售或自制；专利1：cn201410570124，一种美白散及其制备方法；款冬花提取物购买于西安澳瑞特生物科技有限公司；专利2：cn201610135659，一种美白保湿爽肤水及其制备方法。实施例1本实施例为美容组合物的制备方法：将款冬花提取物、茶多酚、胶原多肽水凝胶与脂肪干细胞的条件培养基混合得到，其中，所述脂肪干细胞的条件培养基为将培养过脂肪干细胞的培养基除细胞取其上清液后得到。实施例2本实施例为脂肪干细胞的分离提取，实验步骤如下：1、将脂肪组织分装至50ml的离心管中，每管中加入等体积的0.5％的i型胶原酶，封口后，转移至恒温空气摇床中，37℃、100r消化1h。2、每管加入4ml的fbs，混匀终止消化，1500rpm/min离心5min。3、弃去上层液体，每管加入40mlpbs重悬细胞。4、步骤3的细胞离心后，在1500rpm/min离心5min，弃去上清，获得脂肪干细胞。加入含15％fbs的dmem-f12培养基重悬细胞，以1×105个/ml接种。5、轻轻前后摇动培养皿，使细胞悬液均匀分布于瓶底；将培养瓶做好标记并转移到37℃、5％co2、饱和湿度为95％的培养箱中培养。24h后首次换液，弃去悬浮细胞，随后每3天换一次液。实施例3本实施例为脂肪干细胞的培养，实验步骤如下：在倒置显微镜下观察脂肪干细胞，若细胞融合达80％，则对脂肪干细胞进行传代处理。弃去培养基，加入pbs溶液5ml，轻轻前后摇动培养瓶，弃去pbs溶液(该步骤重复2次)。每平皿加入2ml0.25％胰酶，把平皿移入co2培养箱内消化2min，消化后取出平皿放置于显微镜下观察细胞形态。80％脂肪干细胞皱缩变圆、漂浮脱落，往平皿中加入5ml质量百分比为15％fbs的dmem-f12，终止消化。吸取10ul细胞悬液进行细胞计数，计算出细胞总数。以细胞密度为5×104个/ml，计算出所需的质量百分比为15％fbs的dmem-f12培养基的体积重悬细胞，并接种至10cm的平皿上，10ml/平皿。轻轻前后摇动平皿，使细胞悬液均匀分布于瓶底。实施例4本实施例为脂肪干细胞的表面抗原检测，实验步骤如下：取不同代数的脂肪干细胞，吸去培养基，0.25％胰酶常规消化,制成1×105的细胞悬液，分别取抗人cd73、cd90、cd105、cd11b、cd19、cd34、cd45及hla-dr的单克隆抗体各5μl，加入细胞悬液500μl，室温下避光孵育20min，同时设立空白同型对照，1500r/min离心5min，弃上清，用含质量百分比为10％fbs的pbs洗涤2遍，用500μlpbs重悬后上机检测。从表1结果可知，p2至p5代鉴定为脂肪干细胞。表1不同代次脂肪干细胞的表面抗原代次cd73cd90cd105cd11bcd19cd34cd45hla-drp298.3％98.1％98.4％1.4％0.2％0.1％0.5％0.0％p397.8％96.8％97.5％1.0％0.1％0.3％0.3％0.1％p499.5％98.8％99.5％0.5％0.1％0.3％0.1％0.3％p599.8％99.5％97.4％0.5％0.1％0.1％0.2％0.1％实施例5请参阅图1，本实施例为美容组合物的具体制备步骤：脂肪干细胞的条件培养基收集：取p2～p5代脂肪干细胞，共收集5×107～5×108cells，用100ml的无酚红1640重悬细胞，待细胞生长至80％时候，换取无酚红1640基础培养基，每隔24h，收集上清；再加入新的无酚红1640基础培养基，共收集3次。添加款冬花提取物和茶多酚：按照表2的组分，在脂肪干细胞的条件培养基中，添加款冬花提取物和茶多酚，形成混合物；往胶原多肽缓慢加入混合物形成的溶液，得到实验组1-4，置于4℃备用，低温保存美容组合物，可避免其中的细胞因子的失活。表2不同组别的配方成分其中，选用了p2-p5代的脂肪干细胞，这些代数的脂肪干细胞保持着干细胞旺盛的分泌功能，能够分泌大量的细胞因子。实施例6本实施例为抑制酪氨酸酶活性检测，具体检测方法参照：欧喜燕，于秀华.白芷美白液体外抑制酪氨酸酶活性的实验研究[j]，长春中医药大学学报.2012.28(6)：960～961。抑制酪氨酸酶活性的结果如表3所示：表3不同组别对酪氨酸酶活性抑制作用(抑制率为平均值±标准差)组别抑制率(％)空白组0.00±0.00专利128.68±1.45*专利238.47±3.09*#实验组150.46±2.38*#◆实验组254.81±3.52*#◆实验组353.39±2.14*#◆实验组451.43±3.57*#◆*表示与空白组比较，p<0.001，具有极显著性差异。#表示与专利1比较，p<0.05，具有显著性差异。◆表示与专利1比较，p<0.001，具有极显著性差异。从表3可知，专利1、专利2、实验1～4组与空白组相比，均高于空白组的酪氨酸酶抑制率，p<0.001，具有极显著差异；说明了专利1、专利2和实验组1～4，均具有一定的美白作用；与专利1相比，专利2的酪氨酸酶抑制率达38.47％，高于专利1，且具有显著性差异，p<0.05；实验组1～4的酪氨酸酶抑制率均在50％以上，与专利1相比，具有极显著差异，p<0.001；从上述结果可知，实验组的酪氨酸酶活性抑制效果优于专利2和专利1。实施例7本实施例为抗过敏实验，实验步骤如下：抗过敏的检测方法参照：孙启中，陶欣艺，周勖，抗过敏中草药活性成分的药效评价[j]，江西师范大学学报(自然科学版).2012.36(6)：554～557.表4不同组别成分抑制肥大细胞脱落颗粒的比较组别组胺释放率(％)空白组100.00±0.67专利176.54±9.18*专利261.85±8.36*实验组133.76±2.55*◆#实验组231.92±4.71*◆#实验组328.40±3.83*◆#实验组426.85±3.19*◆#*表示与空白组比较，p<0.001，具有极显著性差异。◆表示与专利1比较，p<0.001，具有极显著性差异。#表示与专利2比较，p<0.001，具有极显著性差异。从表4可知，专利1、专利2、实验1～4组与空白组相比，均高于空白组的组胺释放率，p<0.001，具有极显著差异；说明了专利1、专利2和实验组1～4，均具有一定的抗炎作用。与专利1相比，专利2的组胺释放率为61.85％，低于专利1，但没有显著性差异，p>0.05。实验组1～4的组胺释放率均在33％以下，与专利1相比，具有极显著差异，p<0.001；实验组1～4的组胺释放率均在33％以下，与专利2相比，同样具有极显著差异，p<0.001；从上述结果可知，实验组1～4的抗炎效果优于专利2和专利1。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12