组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品的制作方法

文档序号:14929379发布日期:2018-07-13 17:51阅读:140来源:国知局
本发明涉及化妆品领域,特别涉及组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品。
背景技术
:痤疮是一种与内分泌功能失调有关的毛囊、皮脂腺慢性炎症性皮肤病,是皮肤科常见的病和多发病,其临床表现为颜面部白头或黑头粉刺,丘疹,脓包,结节,囊肿,凹陷或增生性瘢痕等,严重影响患者的生活质量。痤疮的发病机制可能与皮脂腺分泌增多,毛囊口上皮角化过度,痤疮丙酸杆菌活跃或体内雄性激素水平增高有关。痤疮临床发病于青春期,她将影响到个人外貌及自尊,甚至引发心里疾病,导致生活亚健康状态。痤疮发病率高,研发发现其普遍发生在16-19岁男孩和14-17岁女孩中,在不同种族12-24岁青少年发病率高达85%,虽然痤疮影响大多数是青少年,但它在成人中仍普遍存在,比如20-30岁范围内占40-50%,甚至报道10-20%的40岁以上人亦患有痤疮。由于痤疮患者以青春期男女较多,常可对容貌产生影响,而该人群更注重自己的外貌形象,故痤疮对患者的心理及生活质量产生较为严重的负面影响,造成患者正常生活,学习,工作,婚姻,社会交际,情绪,自信心等受到严重影响。国内外研究结果表明,痤疮会使患者产生情绪低落,焦虑,抑郁,精神紧张等不良的情绪,并因此产生严重的社会心理问题。最常见的是自尊心,自信心受损,产生尴尬,抑郁,紧张的心理,导致患者社交障碍和影响学习和工作,严重时甚至会导致患者产生自杀倾向。随着临床医学模式从单纯的生物医学模式向生物-社会-心理医学模式转变,痤疮不仅仅是单纯生理赏的疾病,它已称为一种严重影响个人心理健康的疾病,能影响患者的容貌,情感,社交,人际关系,就业等方面,引起患者意志力减弱,产生自杀心理,焦虑抑郁,精神恍惚等症状。目前针对痤疮的外用药物护理主要以下:2.1维a酸维a酸类药物外用治疗痤疮,可以消除皮脂腺堵塞,同事减少痤疮丙酸杆菌的菌群数量。但局部使用维a酸可引起不良反应,最常见的副作用对皮肤的刺激,包括干燥,红斑,刺痛,瘙痒等。2.1过氧化苯甲酰过氧化苯甲酰是一种特异性的微生物抑制剂,尤其对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有公安度选择性,可用于抑制毛囊内皮脂腺内的微生物并杀灭丙酸痤疮杆菌,从而改善炎症和非炎性皮损的星狂。但由于此成分对皮肤刺激性大,限制其应用。2.3光动力治疗光动力学是一种结合光,光敏剂和组织内分子氧,通过光动力学反应生成活性氧并选择性损伤靶向组织的治疗方法。人体对痤疮丙酸杆菌产生卟啉光吸收的最高峰为蓝光(415nm),其组织穿透力较弱,因此蓝光主要对于轻中度具有炎性皮损的痤疮患者有较好的治疗效果。红光(633nm)具有更强组织穿透力,不仅能刺激巨噬细胞释放细胞因子,达到一定的抗炎作用,还可以活化细胞中的纤维母细胞产生生长因子,诱导表达新胶原,促进对损伤组织的修复,因此,红光对深层次的皮损治疗效果较好。强脉冲光ipl所用原理是选择性光热解,常用的波长530-750nm,其靶组织主要是黑色素和血红蛋白,他们在吸收光子后被加热,破坏,最终被免疫细胞清除。ipl在临床应用于瘢痕,炎症,色素沉着的治疗,并具有创伤小,恢复快的有点。采用光动力学治疗痤疮,主要针对细菌消灭,炎症消除,存在不足,单次治疗成本高,治疗周期长,且需要每月到医院或专业机构进行为其4-6月治疗。2.4抗生素红霉素,氯霉素,克林霉素,可用酒精或丙二醇配制成适宜浓度的外用药,但注意抗生素的耐药性问题,应慎重使用抗生素。外用抗生素与外用维a酸一样,可以引起皮肤局部红肿,干燥脱皮和瘙痒症状。2.5雌激素女性痤疮患者可采用抗雄性技术治疗,其治疗药物包括避孕药,螺内酯,西咪替丁。避孕药由乙炔雌二醇和环丙孕酮组成,是抗雄激素最常见的药物。研究显示,避孕药联用降血糖药二甲双胍治疗多卵性综合症,结果表面治疗方案可改善雄激素过多症状,缩减卵巢体积,但长期使用避孕药会影响机体糖代谢,引发高胰岛素血症。螺内酯可选择性第破坏性腺和肾上腺的细胞色素p450酶系统,抑制雄激素生成酶活性,减少雄激素的产生。但螺内酯会产生高钾血症,肾功能损害和胃肠道反应等不良反应。西咪替丁具有较弱的抗雄激素作用,能竞争性阻断dht与受体结合,但不影响血清雄激素水平。但资料痤疮并不明显,且伴随精神紊乱,咽喉疼痛发热等不良反应。2.5护理产品市面上大多数针对青春痘护理的产品,绝大多数停留在清洁控油,化学剥离角质的应用层面,针对痤疮丙酸杆菌诱发炎症,细胞释放细胞因子,诱导免疫应答角度抑制痤疮导致的组织损伤与破坏。市面劣质化妆品,在配方中添加激素成分,严重破坏消费者皮肤屏障,导致激素脸的问题肌肤。因此,提供一种修复青春痘、促进愈合的组合物及化妆品具有重要的现实意义。技术实现要素:有鉴于此,本发明提供一种组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品。该组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品具有修复青春痘、促进愈合的功效。为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:本发明提供了一种组合物,包括如下组分:包括羟基乙酸、乳酸杆菌/梨汁发酵产物滤液、白柳树皮提取物、烟酰胺、辛酰基甘氨酸、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌、l-抗坏血酸磷酸酯镁和积雪草提取物。在本发明的一些具体实施方案中,以质量份计,所述组合物包括:在本发明的一些具体实施方案中,所述组合物还包括甘油、丙二醇、丁二醇、寡聚透明质酸、β-葡聚糖、甜菜碱、尿囊素、精氨酸、薄荷氧基丙二醇、peg-60氢化蓖麻油、乙基己基甘油、甘油辛酸酯、α-伞花烃-5-醇、黄藥树皮提取物、中国地黄根提取物、印度楝树叶提取物、黄芩根提取物、鱼腥草提取物、野大豆提取物中的一种或两者以上的混合物。在本发明的一些具体实施方案中,以质量份计,所述组合物包括:其中,以质量分数计,所述痤疮克星的组成为:本发明还提供了所述的组合物在制备治疗和/或预防皮肤屏障受损、青春痘发红发热炎、局部色素沉着、青春痘导致胶原蛋白降解与合成失衡形成的皮肤凹陷和疤痕的药物和/或化妆品中的应用。本发明还提供了所述的组合物在制备治疗和/或预防痤疮中的应用。本发明还提供了一种化妆品,包括所述的组合物以及化妆品中可接受的辅料。在本发明的一些具体实施方案中,以质量百分数计,所述化妆品包括:其中,所述痤疮克星的组成为:在本发明的一些具体实施方案中,以质量百分数计,所述化妆品包括:在本发明的一些具体实施方案中,以质量百分数计,所述化妆品包括:在本发明的一些具体实施方案中,以质量百分数计,所述化妆品包括:在本发明的一些具体实施方案中,所述化妆品为祛痘洁面乳、祛痘水、祛痘精华、祛痘膏或祛痘面膜。凡是化妆品中可接受的剂型均在本发明的保护范围之内,本发明在此不做限定。本发明还提供了所述的化妆品的制备方法,包括如下步骤:步骤1:称量去离子水;步骤2:分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸、烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌、辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;步骤3:分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;步骤4:降低搅拌速率至150~200r/min,温度降至45~55℃,称取积雪草提取物和痤疮克星,搅拌20~30min;步骤5:温度降低45~50℃,称量防腐剂phl和薄荷氧基丙二醇,搅拌10min冷却。本发明还提供了所述的化妆品或如所述的制备方法制得的化妆品在制备治疗和/或预防皮肤屏障受损、青春痘发红发热炎、局部色素沉着、青春痘导致胶原蛋白降解与合成失衡形成的皮肤凹陷和疤痕的药物和/或化妆品中的应用。本发明还提供了所述的化妆品或如所述的制备方法制得的化妆品在制备治疗和/或预防痤疮中的应用。本发明采用寡聚透明质酸、烟酰胺、吡咯烷酮羧酸锌进行皮肤屏障天然保湿因子外源性补充,降低水分散失,采用辛酰基甘氨酸修复皮肤酸性屏障,有效抑制微生物增殖生长。本发明采用的硅烷二醇水杨酸酯,保护角质细胞,稳固皮肤的第一道屏障;保护的酶环境,使催化细胞生存反应正常;保护蛋白质,皮肤结构保护、功能正常化。本发明采用薄荷氧基丙二醇降低皮表温度,给痤疮患者舒适愉悦的清凉感。本发明采用l-抗坏血酸磷酸酯镁还原黑色素中间体、采用烟酰胺抑制黑色素向角质形成细胞转移,采用羟基乙酸和硅烷二醇水杨酸酯、白柳树皮提取物和乳酸杆菌/梨汁发酵滤液协同作用温和剥离角质层,促进皮肤新陈代谢,有效抑制色素沉着。本发明采用积雪草提取物和l-抗坏血酸磷酸酯镁协同抑制基质金属蛋白酶mmp-2、mmp-9的活性,调节timp的活性,有效避免青春痘导致皮损愈合形成的凹陷和疤痕。本发明针对痤疮引起皮损后遗症问题,针对皮肤屏障受损、青春痘发红发热炎、局部色素沉着、青春痘导致胶原蛋白降解与合成失衡形成的皮肤凹陷和疤痕为靶点进行有效控制。本发明广泛应用于肌肤护理相关的产品中,如祛痘洁面乳,祛痘水,祛痘精华,祛痘膏,祛痘面膜等产品中。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示皮肤水分散失检测结果;图2示陈纤维细胞增殖检测结果;图3示细胞黑色素含量检测结果;图4示祛痘功效评价试验中一名参与评估人员皮肤3d图;其中,图a的日期为2017.05.08,图b的日期为2017.05.15,图c的日期为2017.05.22,图d的日期为2017.06.06。具体实施方式本发明公开了一种组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。本发明提供的组合物及含有该组合物的痤疮修复化妆品中所用原料、辅料及试剂均可由市场购得。其中,痤疮克星购自一丸公司;本发明中所述的痤疮克星成分组成:组分配比%水46.7975丁二醇40.3755羟基乙酸5.6peg-60氢化蓖麻油4乙基己基甘油1甘油辛酸酯1乳酸杆菌/梨汁发酵产物滤液0.7α-伞花烃-5-醇0.25黄藥树皮提取物0.125白柳树皮提取物0.05中国地黄根提取物0.04印度楝树叶提取物0.02黄芩根提取物0.018鱼腥草提取物0.016野大豆提取物0.008下面结合实施例,进一步阐述本发明:实施例1添加黄原胶0.2%,phl为1%,剩余添加去离子水至100%配制祛痘水组分进行功效评价,其配方工艺如下:1)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌、辛酰基甘氨酸和精氨酸加热至75℃,以180r/min,搅拌30min,以6000r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至68℃加入,以200r/min,搅拌30min,以8500r/min均质3min;4)降低搅拌速率至150r/min,温度降至55℃,分别称取积雪草提取物和痤疮克星搅拌20min;5)温度降低48℃,称量防腐剂phl和薄荷氧基丙二醇,搅拌10min冷却室温即可。实施例2添加黄原胶0.2%,phl为1%,剩余添加去离子水至100%配制祛痘水组分进行功效评价,其配方工艺如下:1)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌、辛酰基甘氨酸和精氨酸加热至80℃,以200r/min,搅拌30min,以7000r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至75℃加入,以250r/min,搅拌30min,以9000r/min均质3min;4)降低搅拌速率至200r/min,温度降至50℃,分别称取积雪草提取物和痤疮克星搅拌25min;5)温度降低50℃,称量防腐剂phl和薄荷氧基丙二醇,搅拌10min冷却室温即可。实施例3添加黄原胶0.2%,phl为1%,剩余添加去离子水至100%配制祛痘水组分进行功效评价,其配方工艺如下:1)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌,辛酰基甘氨酸和精氨酸加热至78℃,以150r/min,搅拌30min,以6500r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至60℃加入,以220r/min,搅拌30min,以8000r/min均质3min;4)降低搅拌速率至180r/min,温度降至45℃,分别称取积雪草提取物和痤疮克星搅拌30min;5)温度降低45℃,称量防腐剂phl和薄荷氧基丙二醇,搅拌10min冷却室温即可。对比例11)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)温度降低45~50摄氏度,称量防腐剂phl搅拌10min冷却室温即可。对比例2甘油2%丙二醇3%丁二醇3%寡聚透明质酸0.01%β-葡聚糖0.1%甜菜碱0.5%尿囊素0.15%烟酰胺2%辛酰基甘氨酸0.5%精氨酸0.5%1)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺,辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)称取黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;4)温度降低45~50℃,称量phl,搅拌10min冷却室温即可。对比例3甘油2%丙二醇3%丁二醇3%寡聚透明质酸0.01%β-葡聚糖0.1%甜菜碱0.5%尿囊素0.15%烟酰胺2%辛酰基甘氨酸0.5%精氨酸0.5%硅烷二醇水杨酸酯0.5%吡咯烷酮羧酸锌0.05%1)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌,辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)称取黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;4)温度降低45~50℃,称量phl,搅拌10min冷却室温即可。对比例41)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌,辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;4)降低搅拌速率至150~200r/min,温度降至45~55℃,称取痤疮克星,搅拌20~30min;5)温度降低45~50℃,称量防腐剂phl,搅拌10min冷却室温即可。对比例51)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌,辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;4)降低搅拌速率至150~200r/min,温度降至45~55℃,分别称取积雪草提取物和痤疮克星,搅拌20~30min;5)温度降低45~50℃,称量phl,搅拌10min冷却室温即可。对比例61)按照工艺配比称量其去离子水;2)分别称量甘油、丙二醇、丁二醇、甜菜碱、尿囊素、β-葡聚糖、寡聚透明质酸,烟酰胺、硅烷二醇水杨酸酯、吡咯烷酮羧酸锌,辛酰基甘氨酸和精氨酸,加热至75~80℃,以150~200r/min,搅拌30min,以6000~7000r/min均质3min;3)分别称取l-抗坏血酸磷酸酯镁,黄原胶,降温至60~75℃加入,以200~250r/min,搅拌30min,以8000~9000r/min均质3min;4)降低搅拌速率至150~200r/min,温度降至45~55℃,分别称取积雪草提取物和痤疮克星,搅拌20~30min;5)温度降低45~50℃,称量防腐剂phl和薄荷氧基丙二醇,搅拌10min冷却室温即可。实施例4经皮水分散失评价测试原理:该试验仪器的测量原理来源于fick菲克扩散定律:dm/dt=d.a.dp/dx。通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm内)由角质层水分散失在不同亮点形成的水蒸气压梯度,直接测出经皮散发的水分量。tewl值是皮肤屏障好坏的一个重要标志,皮肤的tewl值越低,说明皮肤的屏障功能越好,反之越差。(2)试验条件和志愿者要求测试环境条件:测试环境温度为22±1℃,湿度为50±5%,并且进行实时动态检测;志愿者要求:有效志愿者至少30人,年龄在16-65岁之间(妊娠或浦乳期妇女除外):前臂测试区域电容法皮肤水分测定意义的基础值在15-100之间:无严重系统疾病,无免疫缺陷或自身免疫性疾病者;无活动性过敏疾病者;既往对护肤类化妆品无严重过敏史者;近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者:为参加其他临床试验者;按规定使用受试药物且资料齐全;测试前所有自愿者应填写知情同意书;(3)测试前准备受试部位前2-3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前,受试者需要同意清洁双手前臂内测,用干的面巾纸擦拭干净。清洁后受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min,不能喝水,前臂暴露,呈测试状态放置,保持放松。(4)测试步骤实验中左右手臂内侧标记3*3cm2试验区域,同一手臂可以标记多个区域,区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用电容法皮肤测定仪进行受试区域和对照区域的测量。每个区域依照平行测定15次。先测量各测试区域的空白纸,然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量,使用乳胶指套将试验均匀涂布于试验区内。涂抹分别测量1,2小时,4小时,受试区域和空白对照区域的皮肤含水量(验证时按此时间测定),同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。测试结果:按实验设计分别测得各时段的tewl值。t%=(t0-t1)/t0*100%t%:皮肤水分散失减少百分率;t0:使用样品前初始皮肤水分散失值;t1:使用样品后皮肤水分散失值;注:水分散失值减少越大,意味着twel越小,皮肤屏障越完好,其具体数值如表1、图1所示。表1结论:本发明提供的化妆品水分散失降低达到13.93%-21.92%,可佐证本发明具有很好的修复皮肤屏障功能。实施例5细胞增殖评测实验原理:1)细胞计数方法细胞计数方法采用的是血细胞计数板,按白细胞计数方法进行计算.细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞着色(蓝色)。实验材料和方法:实验材料:dmem、dpbs、typsin-edta、petridish、96welldish、0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、普通显微镜、细胞计数板、移液枪、mtt、dmso实验方法:成纤维细胞培养:1)将培养好的成纤维细胞用typsin-edta处理后收集,用dmem悬浮后利用血细胞计数板计数后将悬浮液稀释到细胞的浓度为5×104cells/ml备用2)将准备好的细胞悬浮液分别分株到96welldish和6welldish中培养,其中96welldish接种量为100ul,6welldish接种量为2ml。3)在37℃,5%co2的培养箱中培养24小时。样品添加:1)待测样品用dmem培基稀释,稀释后的浓度分别为:1%(该浓度通过前面的mtt测试,结果为无毒)2)细胞培养24小时后,移除之前的dmem,然后用dpbs小心洗涤后3)按照顺序加入第一步准备的添加了待测样品的dmem培养基。4)在37℃,5%co2的培养箱中培养48小时。细胞计数:1)计数板处理用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后,用绸布擦净,另擦净盖玻片一张,把盖片覆在计数板上面。2)染色取6welldish培养的细胞,除去培养基后,利用typsin-edta消化,收集细胞后用dmem培养基悬浮。用移液枪吸取10ul0.4%台盼蓝染液和10ul细胞悬液混合均匀。从计数板边缘缓缓注入,使之充满计数板和盖片之间的空隙中。将计数板放在低倍镜下(10×10倍)观察计数。3)计数方法按图计算计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数。计数时,只计数完整的细胞,若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中,如果有细胞位于线上,一般计下线细胞不计上线细胞,计左线细胞不计右线细胞。镜下观察,凡折光性强而不着色者为活细胞,染上蓝色者为死细胞。4)计数的换算计完数后,换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01cm2,高为0.01cm,这样它的体积为0.0001cm3,即0.1mm3。由于1ml=1000mm3,所以每一大方格内细胞数×10000=细胞数/ml,故可按下式计算:细胞悬液细胞数/ml=4个大格细胞总数/4×10000如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。计数细胞后,计算可得到细胞悬液中细胞的浓度。以空白样为基准,计算出各个样品的细胞增殖率。成纤维细胞增值结果:见图2。结论:本发明提供的化妆品能够提升成纤维细胞增殖达42.42%~58.43%,与对比例相比具有显著差异(p<0.05),表明本发明提供的化妆品针对痤疮皮损具有较强的愈合恢复能力。实施例6细胞产生的黑色素量测试5.3.1实验材料:b16f10,dmem培养基,胰蛋白酶,dpbs,70%酒精,naoh,dmso5.3.2实验方法:(1)将b16f10细胞消化后,利用dmem培基分散细胞,利用hemacytometer来计数细胞,然后利用dmem来稀释细胞,稀释到浓度为5×104cells/ml。(2)稀释后的细胞溶液分别接种到6well中,每一孔为2ml,即1×105cells/well。(3)在37℃,5%co2的培养箱中培养24小时。(4)待测样品准备:待测样品用dmem培基稀释,稀释后的浓度分别为:50%(该浓度通过前面的mtt测试,结果为无毒)(5)细胞培养24小时后,观察细胞是否完全贴壁生长,如果细胞完全贴壁生长的话,将原培基移除,用dpbs洗涤。(6)将dpbs移除之后,分别加入前面准备好的样品。样品的溶度根据毒性测试的结果选择安全浓度100ppm(2ml/well)。(7)样品加入之后,放入37℃,5%co2的培养箱中培养48小时。(8)分别收集培基和细胞,分别测试细胞外与细胞内的黑色素的含量(9)培基部分:13500rpmx10mins离心后,取上层清液在波长415nm处测量吸光光度。(10)细胞部分:将b16f10细胞消化后收集起来,13500rpmx10mins离心后,移除上层清液。底部的b16f10细胞中加入0.3ml的10%dmso,1nnaoh溶液,80℃水浴中裂解1小时。(11)1小时后裂解液冷却至室温,13500rpmx10mins离心后收集上层清液(12)利用酶标仪在波长415nm处测量上层清液的吸光光度od。(13)配置黑色素标样,浓度为1.0到100.0ppm,分别测试标样的吸光光度,绘制出浓度与吸光光度的线性关系图(14)利用上述的线性关系图可以得出细胞内与细胞外黑色素的含量。5.3.3实验结果如图3、表2所示。其具体数值表如下:表2结论:本发明提供的化妆品在细胞内,细胞外均具有降低细胞内黑色素含量的功效,空白样黑色素含量高达257.38ppm,而实例样黑色素含量仅109.94ppm,降低了147.44ppm,表明本发明提供的化妆品能显著(p<0.05)抑制因痤疮炎症引起的细胞黑色素沉着。实施例7祛痘临床表征评价纳入标准:1)符合pillshuryi\ii级痤疮诊断标准:i级,颜面部,粉刺为主,少量丘疹,脓疱,总皮损<30个;ii级,颜面部,粉刺和中等丘疹、脓疱,总皮损数(30-50)个;2)无明确系统性疾病;3)受试者在整个测试期间,不食辛辣,甜食并忌酒等;4)测试前2周未使用过其它祛痘产品或接受其它治疗方法(如果酸,激光治疗等);5)整个观察测试期间不使用其它祛痘产品及接受其它治疗方法(包括光疗)排除标准:1)妊娠,拟妊娠,浦乳期妇女;2)直接参与此项研究的工作人员;3)面部有其它皮肤疾病,例如黄褐斑,脂溢性皮炎,酒糟鼻;样品试用:分别甄选符合i级、ii级标准人员、以及对各5名,早晚使用测试样品,每周一进行visa进行面部拍照评价,持续四周,根据治愈率进行祛痘功效评价。以其中一名参与评估人员皮肤3d图如图4所示。结论:本发明提供的化妆品给到痤疮患者,经过为期四周的评测,从皮肤3d图能够明显表征本发明具有较好的促进痤疮皮损愈合的功效。以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本
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的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12
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