本发明涉及一种洋金花总生物碱的提取方法。
背景技术：
洋金花为茄科植物白曼陀罗的干燥花，有平喘止咳、镇痛、解痉的功效，其主要成分为莨菪烷型生物碱，具有很强的生理活性，除此以外还含有醉茄内酯类甾体和黄酮类主要成分，在提取中分离困难。如何充分提取生物碱有效成分、提高利用率，是提高其成品质量的关键。常见的洋金花生物碱的提取研究主要集中在浸渍提取、回流提取和微波提取(中成药，2012年5月第34卷第5期)，浸渍提取系依据游离生物碱除能溶于醇外，还可溶于氯仿、乙醚等有机溶剂，生物碱盐类尤其无机酸盐易溶于水，不溶于或难溶于常见的有机溶剂；利用生物碱的上述性质，将醇提取物用酸水溶解，去除不溶性杂质，用碱液碱化，使生物碱盐转变成游离碱，再用有机溶媒萃取，合并有机溶剂萃取液，浓缩即得总生物碱。在研究中发现，其提取率并不理想，近年来对于如何提高洋金花中生物碱的提取率的研究也并不是很多。
cn201610422547.x公开了一种洋金花中东莨菪碱的提取纯化方法，首先得到洋金花的浸提液；浸提液通过陶瓷膜过滤，纳滤膜浓缩，回收乙醇，得到混合物；混合物用稀盐酸溶解、抽滤后取滤液；滤液萃取后保留水溶液；水相调节ph后，再萃取四次取氯仿溶液；氯仿溶液干燥后回收氯仿，得到总生物碱；总生物碱用碱性氧化铝柱色谱进行分离后，回收氯仿，得到东莨菪碱。
cn201610756028.7公开了一种洋金花有效成分的微波提取最佳的方法，采用微波功率、微波辐射时间、溶剂用量、浸泡时间、萃取温度等参数，对洋金花干膏、总生物碱、东莨菪碱提取；采用酸性染料比色法、高效液相色谱法测定洋金花总生物碱、东莨菪碱的含量，用质量法测定干浸膏得率。洋金花微波提取的最佳工艺条件是用药材10倍量的体积分数为75%乙醇浸泡2.0h，在功率为730w，温度为65℃的微波条件下连续辐射25min。
有鉴于此，需要发明一种能够从洋金花中高纯度提取总生物碱的方法很有必要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种操作简单、萃取率高的洋金花总生物碱的提取方法。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过筛备用；
(2)将3~8g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、2~6peg300~1000和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3~5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入0.8~1.5g酸性纤维素酶和0.5~0.8g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在35~55℃之间搅拌1~4h，过滤，用ph2~3的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，加入乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至9~11，然后用氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(2)的ph值为3.5~4.5。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(2)中所述1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、peg和去离子水的质量比为5.5:4:200。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(3)中所述酸性纤维素酶的加入量为1.2g，所述酸性果胶酶的加入量为0.7g。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(4)中ph为10。
作为本发明进一步的改进，3次所述乙酸乙酯的用量与滤液的体积比分别为：2~3:2~2.5:1.5~2.5。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
本发明所提供的方案，利用酸溶碱沉的原理，提高了洋金花中总生物碱的提取率。通过在酸性条件下对洋金花进行破壁，配合1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和peg，保证酶的活性，同时可以有效保障活性成分的充分溶出，使破壁和提取同时进行，适宜的酸性环境，保证了生物碱的溶解性，更利于萃取分离。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。
实施例1
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏16.2g，总生物碱提取率为0.447%。
实施例2
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将3g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、2gpeg800和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏15.6g，总生物碱提取率为0.428%。
实施例3
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将8g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、6gpeg1000和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在40℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏16.4g，总生物碱提取率为0.449%。
实施例4
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg300和200g去离子水混合，用乳酸调ph至4.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入0.8g酸性纤维素酶和0.5g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在55℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至11，然后用氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏16.0g，总生物碱提取率为0.439%。
实施例5
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg600和200g去离子水混合，用乳酸调ph至5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.5g酸性纤维素酶和0.8g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在35℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至9，然后用氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏15.4g，总生物碱提取率为0.421%。
实施例6
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将8g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、2gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至4，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在35℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph3的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，干燥得到总生物碱干膏15.7g，总生物碱提取率为0.433%。
对比例1
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)取200g去离子水，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例2
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例3
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例4
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用盐酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例5
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg1500和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例6
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将10g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg300和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例7
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、8gpeg300和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例8
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例9
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将洋金花计入到200g去离子水中，加入1.2g纤维素酶和0.7g果胶酶，搅拌2.5小时，用盐酸调ph至3.5，加入5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和4gpeg400，搅拌过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例10
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入1%硫酸铵和2%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例11
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例12
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入3%硫酸铵，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
对比例13
一种洋金花总生物碱的提取方法，其包括如下步骤：
(1)将100g洋金花粉碎，过80目筛，备用；
(2)将5.5g1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐、4gpeg400和200g去离子水混合，用乳酸调ph至3.5，得到酸性浸提液；
(3)将步骤(2)得到的酸性浸提液加入到步骤(1)处理后的洋金花中，加入1.2g酸性纤维素酶和0.7g酸性果胶酶，混合均匀，保持温度在50℃之间搅拌2.5h，过滤，用ph2.5的盐酸水溶液洗滤渣，合并滤液；
(4)向滤液中加入3%nacl，分别用滤液2倍体积量乙酸乙酯萃取3次，去除乙酸乙酯相，生物碱富集相用氨水调节ph至10，然后用1.5倍体积量氯仿萃取3次，减压回收氯仿，得到总生物碱。
本发明实施例和对比例中使用的酸性纤维素为常规市售产品，本申请中用的是石家庄美施达公司产品，酸性果胶酶购自山东济宁佰一公司。
效果例1
总生物碱的含量测定，方法如下：
1.硫酸阿托品对照品溶液的配制：
取102℃干燥至恒定质量的硫酸阿托品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解定容到刻度，摇匀，即得0.1g/l的硫酸阿托品对照品溶液。
2.0.5g·ml-1酸性染料溴甲酚绿溶液的配制：
精密称取溴甲酚绿50mg，邻苯二甲酸氢钾1.021g，加0.2mol·l-1氢氧化钠溶液6.0ｍｌ使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过，即得0.5g·ml-1溴甲酚绿溶液。
3.硫酸阿托品酸性染料分光光度法标准曲线的制备：
精密吸取硫酸阿托品对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于分液漏斗中，各依次加入0.500g/l酸性染料溴甲酚绿溶液3.0ml，三氯甲烷10.0ml，用水补充至体积相等，振摇提取2min，静置5min，分取三氯甲烷层溶液，再加入0.5g无水硫酸钠，放置20min。取另一已精密加入三氯甲烷10.0ml的分液漏斗，精密加入水1.0ml，同法制成空白对照溶液，于波长420nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，求得回归方程y=0.0562x+0.0067，r=0.9999，表明硫酸阿托品在20~100μg范围内呈良好的线性关系。
4.提取物中总生物碱含量的测定方法
取总生物碱干膏0.2g，精密称定，加水10ml使溶解，调节ph至2～3，滤过，滤液用氨试液调ph至9~10，再用三氯甲烷提取4次，每次10ml，分取三氯甲烷，合并定容至100ml，摇匀，即得供试品溶液；再精密吸取上述供试品溶液1.0ml，按3项下操作，测定吸收值，计算总生物碱质量浓度及总生物碱提取率。
总生物碱提取率(%)=［(供试品中总生物碱质量浓度×100×干膏量)/干膏取样量］×100/药材量
由上表所示，不加入1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和peg300提取效果并不可观，单独加入1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐或peg300，总生物碱提取率较不加入有所提高，但是仍然不理想。1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和peg300在破壁前加入，能在有效在破壁过程中促进总生物碱的提取率。1-丁基-3-甲基咪唑乳酸盐和peg300的加入并非越多越好，从对比例6和7可以看出，提取率明显降低。peg分子量，对提取率也存在影响，当加入peg1500后，结果是令人失望的。用乳酸调节ph较盐酸效果更好，推测可能因为盐酸会影响酶的活性。硫酸铵和nacl一同使用，会提取率有促进作用。本发明所提供的方法，使得总生物碱的提取率有了明显提高。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。