本发明属于医药技术领域，尤其涉及追风伞在制备促进血小板在关节滑膜聚集的药物中的应用。
背景技术：
追风伞，为报春花科植物狭叶排草的全草。又名，"追风伞"又叫是"马比木"。马比木是一种中草药，具有祛风除湿，理气散寒的功能。
《贵州民间方药集》、《贵阳民间药草》以及《贵州草药》均有记载，也异名为惊风伞、一把伞或公接骨丹。狭叶排草多年生草本，高约30厘米。植物形态须根淡黄色。茎丛生，不分枝，近基部红色，有柔毛。上部绿色，节稍膨大，有短柔毛。茎下部叶退化，很小，如鳞片状，对生；茎顶叶轮生，多为4-7片，大小不等，圆形至倒卵形，长4-14厘米，宽2-10厘米，先端急尖，全缘，稍成皱波状，基部阔楔形至狭楔形，上面光绿，下面淡绿；叶柄无，或极短，枣红色。生于低山区阴湿林下及沟边。分布四川、贵州等地。
据《贵州草药》记载，追风伞性温，味苦辛。具有祛风，活血功效，用于治疗风湿痹痛，半身不遂，小儿惊风等症状。
目前，多是在药方中将惊风伞与其他组分配伍使用用于治疗上述病症，对于追风伞提取产物分离鉴定以及从分子水平进行机理等方面研究较少，尚未发现追风伞其他的用途的报道，严重影响了追风伞进一步推广应用。
目前，在治疗关节损伤组织的修复与再生时，通常采用富血小板血浆。富血小板血浆是从关节损伤患者自身抽取新鲜血液后，通过密度梯度离心法将血小板从全血中分离出来的浓缩物。富血小板血浆制备后，通过注射器尽快注入关节腔中。然而富血小板血浆在制作方面的工序较多，较为繁琐，而且通过注射的方式给药，需要专门技术人员的操作，对于患者带来较多的不便。
技术实现要素：
鉴于现有技术所存在的问题，本发明提供追风伞及其提取物新的用途。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
追风伞在制备促进血小板在关节滑膜聚集的药物中的应用。追风伞可以单独制备或与其他组分联合制备用于促进血小板在关节滑膜聚集的药物。
追风伞在作为富血小板血浆替代品的应用。通过本研究可以发现追风伞口服后可以产生类似于富血小板血浆的作用，具有成本低，不需要复杂设备以及专门技术人员，便于应用等优点。
追风伞在上调整合素β、整合素α亚单位2b和/或血小板糖蛋白ibβ链表达水平中的应用。具体的，追风伞在上调整合素β、整合素α亚单位2b和/或血小板糖蛋白ibβ链在关节滑膜的表达水平中的应用。具体的，追风伞可以制备成药物用于上调上述蛋白质的表达水平。
追风伞在制备促使损伤组织的修复与再生的药物中的应用。具体的，追风伞可以单独制备或与其他组分联合制备用于修复关节损伤的药物。更为具体的，追风伞可以作为制备促进关节滑膜组织修复与再生的药物进行应用。
具体的，追风伞可以为报春花科植物狭叶落地梅lysimachiaparidiformisfranch.var.stenophyllafranch.的干燥全草。
追风伞提取物在制备促进血小板在关节滑膜聚集的药物中的应用。追风伞提取物可以单独制备或与其他组分联合制备用于促进血小板在关节滑膜聚集的药物。
追风伞提取物在作为富血小板血浆替代品的应用。通过本研究可以发现追风伞提取物口服后可以产生类似于富血小板血浆的作用，具有成本低，不需要复杂设备以及专门技术人员，便于应用等优点。
追风伞提取物在上调整合素β、整合素α亚单位2b和/或血小板糖蛋白ibβ链表达水平中的应用。具体的，追风伞提取物可以在上调整合素β、整合素α亚单位2b和/或血小板糖蛋白ibβ链在关节滑膜的表达水平中的应用。具体的，追风伞提取物可以制备成药物用于上调上述蛋白质的表达水平。
追风伞提取物在制备促使损伤组织的修复与再生的药物中的应用。具体的，追风伞提取物可以单独制备或与其他组分联合制备用于修复关节损伤的药物。更为具体的，追风伞可以作为制备促进关节滑膜组织修复与再生的药物进行应用。
追风伞提取物以追风伞为原料提取，追风伞为报春花科植物狭叶落地梅lysimachiaparidiformisfranch.var.stenophyllafranch.的干燥全草。
追风伞提取物可以通过以下方法提取：将追风伞粉碎，运用回流提取法采用蒸馏水对追风伞进行回流提取，收集提取液，浓缩、冷冻干燥，得到追风伞提取物。具体的，追风伞提取物通过以下方法提取：将追风伞粉碎，运用回流提取法采用蒸馏水对药材进行回流提取，收集提取液，浓缩、冷冻干燥，得到追风伞提取物。
在具体实施的过程中，追风伞提取物可以通过以下方法提取：追风伞粉碎，每次使用3-20倍质量的蒸馏水(即每次使用的蒸馏水的质量是追风伞质量的3-20倍)，运用回流提取法对追风伞进行回流提取0.5-4小时，总共提取1-5次，合并提取液，将提取液浓缩成浓缩液，浓缩液的体积为合并后的提取液的体积的1％-10％，，将浓缩液进行冷冻干燥，得到追风伞提取物。
附图说明
图1为采用正离子扫描模式扫描追风伞提取物的色谱图；
图2为采用负离子模式扫描追风伞提取物的色谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
追风伞为报春花科植物狭叶落地梅lysimachiaparidiformisfranch.var.stenophyllafranch.的干燥全草。
1、追风伞提取物的制备
追风伞药材2000克，进行粉碎，每次使用10倍量的蒸馏水，运用回流提取法对药材进行回流提取2个小时，总共提取3次，合并提取液，将提取液浓缩至2升，浓缩液进行冷冻干燥，得到253克的追风伞提取物。
2、追风伞提取物色谱轮廓的测定
(1)液相条件：岛津超高效液相色谱仪30a(日本岛津公司)，配备acquityuplctmhsst3色谱柱(100mm×2.1mmi.d.，1.8μm)(美国waters集团公司)。流动相a为蒸馏水(含0.1％甲酸，w/w)，流动相b为乙腈(含0.1％甲酸，w/w)。柱温为40℃，流速为0.4ml/min，进样量为5μl。梯度洗脱方法见表1。色谱仪流出液不经分流直接注入质谱仪进行正负离子扫描分析。
表1uplc流动相梯度洗脱方法
a为0.1％甲酸-水；b为0.1％甲酸-乙腈。
(2)质谱条件：使用absciextripletof4600质谱仪(美国absciex集团公司)。
①正离子扫描模式：
离子喷雾电压：5.5kv，离子源温度：600℃，解簇电压(dp)：100v，碰撞能量(ce)：35ev。氮气为雾化气和辅助气：雾化气为55psi，辅助气为55psi，气帘气为35psi。在m/z：100-1000amu质量范围esi正离子模式下进行全扫描，积累时间为160ms。ida采用标准：每个分析物，超过100cps的八个最强的碎片离子在100-1000amu质量范围内进行子离子扫描，累积时间为100ms。碰撞电压差为15ev，动态背景扣除dbs开启。自动校准系统(cds)对ms和ms/ms自动进行调谐和校正。数据获取和处理分析采用
②负离子扫描模式：
离子喷雾电压：4.0kv，离子源温度：600℃，解簇电压(dp)：100v，碰撞能量(ce)：35ev。氮气为雾化气和辅助气，雾化气为65psi，辅助气为65psi，气帘气为35psi。在m/z：100-1000amu质量范围esi正离子模式下进行全扫描，积累时间160ms。ida采用标准：每个分析物，超过100cps的八个最强的碎片离子在100-1000amu质量范围内进行子离子扫描，累积时间为100ms。碰撞电压差为15ev，动态背景扣除dbs开启。自动校准系统(cds)对ms和ms/ms自动进行调谐和校正。数据获取和处理分析采用采用
(3)化学成分鉴定
将成分列表导入masterview软件，给予其相应加合形式(pos：+h、+nh4、+na、+k、2m+h等；neg：-h、+cl、+fa-h等)，建立了目标性成分筛选列表。结合ida模式采集的二级数据进行结构匹配，以文献报道、网络质谱数据库的信息与对比分析得分为标准。
实验结果：
追风伞提取物的色谱图轮廓分别如图1和图2所示。
图1为追风伞提取物的正离子模式色谱图轮廓图,图2为追风伞提取物的正离子模式色谱图轮廓图。其中，各成分为：
成分1：格链孢醇，离子峰强度为1500-3000；
成分2：芹菜素，离子峰强度为9000-13000；
成分3：7-羟基香豆精，离子峰强度为9000-13000；
成分4：莰酮，离子峰强度为500-2000；
成分5：木犀草素，离子峰强度为20000-35000；
成分6：异鼠李素-3-o-β-d-葡萄糖苷，离子峰强度为40000-60000；
成分7：5-甲基山奈酚，离子峰强度为4000-8000；
成分8：刺槐素，离子峰强度为500-2000；
成分9：2,5-二羟基苯甲酸甲酯，离子峰强度为1500-3000；
成分10：原儿茶酸，离子峰强度为30000-60000；
成分11：华中冬青素，离子峰强度为3000-6000。
3、动物分组与给药方法
雄性sd大鼠(200g)，随机分为空白对照组、追风伞低剂量组、追风伞中剂量组、追风伞高剂量组。追风伞提取物的给药剂量是0.01g/kg-0.60g/kg，每天口服给药一次，连续3-90天。空白对照组给予等量生理盐水3-90天，每天一次。
实施例1
雄性sd大鼠购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，空白对照组的雄性sd大鼠的数量为10只，追风伞低剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞中剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞高剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只。追风伞低剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.01-0.02g/kg、追风伞中剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.03-0.04g/kg、追风伞高剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.05-0.06g/kg，每天口服给药一次，连续3天。空白对照组给予等量生理盐水3天，每天口服一次。
实施例2
雄性sd大鼠购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，空白对照组的雄性sd大鼠的数量为10只，追风伞低剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞中剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞高剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只。追风伞低剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.01-0.02g/kg、追风伞中剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.03-0.04g/kg、追风伞高剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.05-0.06g/kg，每天口服给药一次，连续30天。空白对照组给予等量生理盐水30天，每天口服一次。
实施例3
雄性sd大鼠购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，空白对照组的雄性sd大鼠的数量为10只，追风伞低剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞中剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只、追风伞高剂量组的雄性sd大鼠的数量为10只。追风伞低剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.01-0.02g/kg、追风伞中剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.03-0.04g/kg、追风伞高剂量组的追风伞提取物的给药剂量为每次0.05-0.06g/kg，每天口服给药一次，连续90天。空白对照组给予等量生理盐水90天，每天口服一次。
4、样本收集与处理
在末次给药的24h后，收集各组大鼠的膝关节滑膜组织，样本中加入适量裂解液(7m尿素，2m硫脲)，涡旋混匀。超声60s，振幅22％。室温提取30分钟。15000g，4℃离心20min，小心取出上清液。收集上清液，分装后冻存于-80℃中。
5、蛋白质组学分析
(1)液相条件：1000system高效液相色谱仪(美国thermoscientic公司)，配备easy-spraycolumn色谱柱(12cmx75μm，c18，3μm)(美国thermoscientic公司)。流动相a为超纯水(含0.1％甲酸，w/w)，流动相b为乙腈(含0.1％甲酸，w/w)。上样体积为10μl，装载泵流速350nl/min，15分钟，分离流速350nl/min，分离梯度如表2所示。
表2高效液相流动相梯度洗脱方法
(2)质谱条件：使用q-exactive质谱系统(美国thermoscientic公司)。
离子源参数：sprayvoltage：2.1kv；capillarytemperature：250℃；ionsource：easy-spraysource；dp：100。
fullms：resolution：70000fwhm；fullscanagctarget：1e6；fullscanmax.it：60ms；scanrange：350-1800m/z；
dd-ms2：resolution：17500fwhm；agctarget：5e6；maximumit：70ms；intensitythreshold：5.00e+03；fragmentationmethods：hcd；nce：29％；topn：20。
(3)检索鉴定参数：使用maxquant软件进行蛋白质的检索鉴定。
检索参数设置如下：
6、统计学分析：差异蛋白的筛选标准：p-value＜0.05，foldchange＞2.0或＜0.5，得到差异蛋白的分析结果。
实验结果：
通过蛋白质组学研究，可以发现关节滑膜组织中3390个蛋白质的表达情况，运用统计学方法在这些大量数据中进行分析筛选，发明人在研究中意外的发现：如表3所示，经追风伞干预后，整合素β、整合素α亚单位2b、血小板糖蛋白ibβ链在大鼠关节滑膜的表达水平均是显著上调的。这三个蛋白质在血小板表面是特异性表达的且含量丰富，它们的表达水平可以代表血小板的数量。由此观之，追风伞可以促使血小板在大鼠关节滑膜大量聚集。血小板在关节滑膜聚集以后，可以释放多种生长因子，从而进一步促使损伤组织的修复与再生。本发明的研究可以进一步扩展追风伞的运用范围，提高追风伞的价值。
表3追风伞干预大鼠关节滑膜的差异蛋白
富血小板血浆可以用于关节损伤组织的修复与再生。富血小板血浆是从关节损伤患者自身抽取新鲜血液后，通过密度梯度离心法将血小板从全血中分离出来的浓缩物。富血小板血浆制备后，通过注射器尽快注入关节腔中。通过本研究可以发现追风伞口服后可以产生类似于富血小板血浆的作用。然而富血小板血浆在制作方面的工序较多，较为繁琐，而且通过注射的方式给药，需要专门技术人员的操作，对于患者带来较多的不便。因此追风伞在运用方面要比富血小板血浆治疗具有更多的优势，更为简便。
发明人又进行了多次的实验，例如，分别采用以下方式提取追风伞提取物：
方式一，将追风伞粉碎，每次使用3倍质量的蒸馏水，运用回流提取法对追风伞进行回流提取0.5小时，总共提取1次，合并提取液，将提取液浓缩成浓缩液，浓缩液的体积为合并后的提取液的体积的1％，将浓缩液进行冷冻干燥，得到追风伞提取物。
方式二，将追风伞粉碎，每次使用20倍质量的蒸馏水，运用回流提取法对追风伞进行回流提取4小时，总共提取5次，合并提取液，将提取液浓缩成浓缩液，浓缩液的体积为合并后的提取液的体积的10％，将浓缩液进行冷冻干燥，得到追风伞提取物。
分别将上述方式提取的追风伞提取物用于上述各实施例的实验验证，结果表明，采用上述方式获得的追风伞提取物与上述实施例得出的结论一致，追风伞可以促使血小板在大鼠关节滑膜大量聚集，血小板在关节滑膜聚集以后，可以释放多种生长因子，从而进一步促使损伤组织的修复与再生。
另外，发明人还意外的发现，经追风伞干预后，除上述蛋白质外，40s核糖体蛋白s30、40s核糖体蛋白s6、60s核糖体蛋白l13a、60s核糖体蛋白l14、60s核糖体蛋白l15、60s核糖体蛋白l28、60s核糖体蛋白l34、60s核糖体蛋白l39、60s核糖体蛋白l7a、翻译起始因子β亚基eif-2b、真核翻译起始因子4b、核帽结合蛋白亚基1和蛋白质peleta同源物的表达水平也发生变化。如表4所示，其中2种40s核糖体蛋白(40s核糖体蛋白s30和40s核糖体蛋白s6)及7种60s核糖体蛋白(60s核糖体蛋白l13a、60s核糖体蛋白l14、60s核糖体蛋白l15、60s核糖体蛋白l28、60s核糖体蛋白l34、60s核糖体蛋白l39和60s核糖体蛋白l7a)的表达水平均是上调的。细胞质核糖体主要由40s核糖体蛋白及60s核糖体蛋白组成。细胞质核糖体是真核细胞基因表达过程中，将mrna翻译成蛋白质的主要场所。另外，追风伞还能诱导2种翻译起始因子(翻译起始因子β亚基eif-2b和真核翻译起始因子4b)的表达水平上调，而蛋白质的生物合成过程需要翻译起始因子的激活。恰当的mrna模板是正常蛋白质合成所必须的，核帽结合蛋白亚基1可以促使mrna的生物合成，而蛋白质peleta同源物可以对mrna的质量进行控制，以确保mrna的正确表达。综上所述，追风伞对这些蛋白质表达的上调可以确保关节滑膜细胞基因表达过程的正常运行，而基因表达过程的正常运转是组织修复和再生的基本保证。
表4蛋白质组学实验结果
目前治疗关节疾病的药物主要是通过抗炎、镇痛、免疫调节、抗感染的方式来进行治疗的。追风伞可以激活基因表达过程中与转录与翻译相关的蛋白质，确保关节滑膜细胞基因表达过程的正常运行，而基因表达过程的正常运转是组织修复和再生的基本保证。因此，追风伞具有促进关节滑膜组织修复与再生的作用，可以用于关节损伤的修复。本发明意外的发现了追风伞的新用途，有利于追风伞更广泛的开发利用，提高追风伞的应用价值。
发明人又进行了多次的实验，例如，分别采用以下方式提取追风伞提取物：
方式一，将追风伞粉碎，每次使用3倍质量的蒸馏水，运用回流提取法对追风伞进行回流提取0.5小时，总共提取1次，合并提取液，将提取液浓缩成浓缩液，浓缩液的体积为合并后的提取液的体积的1％，将浓缩液进行冷冻干燥，得到追风伞提取物。
方式二，将追风伞粉碎，每次使用20倍质量的蒸馏水，运用回流提取法对追风伞进行回流提取4小时，总共提取5次，合并提取液，将提取液浓缩成浓缩液，浓缩液的体积为合并后的提取液的体积的10％，将浓缩液进行冷冻干燥，得到追风伞提取物。
分别将上述方式提取的追风伞提取物用于上述各实施例的实验验证，结果表明，采用上述方式获得的追风伞提取物均可得到与上述实施例一致的结论，追风伞可以激活基因表达过程中与转录与翻译相关的蛋白质，确保关节滑膜细胞基因表达过程的正常运行，从而促进关节滑膜组织修复与再生，可以用于关节损伤的修复。
综上所述，发明人从不同角度的研究均发现了追风伞提取物可以用于修复关节损伤，即对关节损伤组织进行修复再生。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。