本发明涉及一种医药技术，尤其涉及的是一种二仙汤在制备抗抑郁药物中的应用。
背景技术：
抑郁症又称抑郁障碍，以显著而持久的心境低落为主要临床特征，是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称，情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为；甚至发生木僵；部分病例有明显的焦虑和运动性激越；严重者可出现幻觉、妄想等精神病性症状。每次发作持续至少2周以上、长者甚或数年，多数病例有反复发作的倾向，每次发作大多数可以缓解，部分可有残留症状或转为慢性。
抗抑郁药(antidepressivedrugs)是指一组主要用来治疗以情绪抑郁为突出症状的精神疾病的精神药物。抗抑郁药于20世纪50年代问世，在此前抑郁性疾病并无合适的药物治疗。20世纪50年代以后，抗抑郁药成为抑郁病人的首选治疗手段。目前，几乎所有抗抑郁药物的作用机制主要涉及单胺类神经递质的传递，副作用相对较多，疗效明确，但不尽如人意，如部分患者对几乎所有抗抑郁药物均无效，几乎所有抗抑郁药的起效时间均比较长，需时至少2周才起效等。
pc12细胞株为大鼠嗜铬细胞克隆化细胞株,分化的pc12细胞有典型的神经细胞特征,其胞膜上gc受体表达丰富。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于：传统二仙汤制剂在抗抑郁症药物制备中没有公开过，提供了一种二仙汤在制备抗抑郁药物中的应用。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的，本发明的一种二仙汤的应用，为如下(1)或(2)或(3)：
(1)制备抗抑郁药物；
(2)制备预防抑郁症的药物；
(3)制备治疗抑郁症的药物；
所述二仙汤的成分为：仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏、知母、当归。
所述二仙汤为重量比3～5:3～5：2～4：2～4：1～3：1～3的仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏、知母。
所述二仙汤的制备过程如下：将仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏、知母按比例混匀后用双蒸水浸泡2～3h，武火煮沸后文火煎煮20～40min，煎煮两次，第一煎加入饮片量8倍水，第二煎加入饮片量6倍水，过滤取汁，离心取上清液，合并两次煎液，将煎煮合并的汤剂减压浓缩至浸膏状，-80℃冷冻24h，然后干燥48h，获得二仙汤粉末。
一种抗抑郁药物，所述药物为所述的二仙汤。
一种预防抑郁症的药物，所述药物为所述的二仙汤。
一种治疗抑郁症的药物，所述药物为所述的二仙汤。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明保护的是传统药物二仙汤在抗抑郁药物中的应用，二仙汤药物具有抗抑郁特性，而且起效时间很快，对抗抑郁的药物研发以及预防和治疗抑郁症有着重大的应用价值。
附图说明
图1是二仙汤的体外细胞实验结果；
图2是二仙汤对行为绝望模型小鼠的抗抑郁影响在悬尾测试中的表现；
图3是二仙汤对行为绝望模型小鼠的抗抑郁影响在强迫游泳测试中的表现；
图4是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在糖水偏好实验中的表现；
图5是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在强迫游泳测试中的表现；
图6是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在悬尾测试中的表现；
图7是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在旷场试验中总穿越格数的表现；
图8是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在旷场试验中直立次数的表现；
图9是二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响在旷场试验中理毛次数的表现。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
在本实施例的定量试验，均设置三次重复实验，所有结果以p＜0.05作为差异显著性标准。
一、二仙汤的体外细胞实验：对pc12神经细胞的保护作用
1、实验材料
pc12细胞(中国科学院上海细胞库)；dmso(美国sigma公司)；dmem(南京凯基生物科技发展有限公司)；皮质酮(江苏佳尔科药业集团有限公司)；mtt(上海碧云天生物技术有限公司)；盐酸氟西汀(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；仙茅、仙灵脾、当归、巴戟天、黄柏、知母(产地湖北)。
2、实验方法
pc12细胞用含5％胎牛血清及5％马血清的dmem培养液(含青霉素100iu/ml和链霉素100ug/ml,ph7.4)培养。将细胞稀释为每毫克悬液含2×105个细胞，接种于96孔培养板，每孔100ul，放入co2孵箱，37℃，5％co2条件下培养1d，待细胞长满至30％即可用于实验。轻轻吸取细胞液，加入含有相应浓度的二仙汤药物(100、200、400mg/ml生药含量)，仙茅提取物250mg/ml，及2×10-4mol/l皮质酮的无血清dmem，37℃、5％co2培养48h(正常对照组不加药物及皮质酮，模型对照组只加皮质酮)，中止培养前4h每孔加入mtt(浓度为5mg/ml)20ul，继续培养4h后弃掉培养基，每孔加入150ul的dmso，震荡摇匀，使甲瓒颗粒充分溶解。酶联免疫检测仪检测波长490nm吸光度值。
仙茅提取物的制备方法如下：
将仙茅粉碎成过20～30目筛的粗粉，用10倍仙茅重量的、体积浓度为80％的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩到60℃相对密度为1.20～1.30的浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散成含生药量0.5g/ml，得分散液，分散液上ab-8型大孔吸附树脂，上柱量与树脂体积的比例为1：12，树脂柱径高比为1：12；先用4倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；再用4倍柱体积的体积浓度为10％的乙醇洗脱，弃去体积浓度为10％的乙醇洗脱液；最后用10倍柱体积的体积浓度为75％的乙醇洗脱，收集体积浓度为75％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，60℃干燥粉碎，得仙茅提取物。
3、实验结果
结果显示浓度为100、200、400mg/ml的二仙汤及仙茅提取物均有不同程度对pc12神经细胞皮质酮(cort)诱导损伤具有保护作用，细胞存活率明显升高。结果如图1所示。与正常组比较，###p＜0.001，与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01,**p＜0.001(
二、二仙汤对行为绝望模型小鼠的抗抑郁影响
1、实验材料
1.1实验动物
km小鼠，雄性，18-22g，spf级，由安徽医科大学实验动物中心提供。
1.2药品与试剂
仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏、知母(产地湖北)
盐酸氟西汀(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)。
1.3实验仪器
scientz-18sn冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)
多功能电磁炉(广东美的生活电器制造有限公司)
贝克曼离心机(美国贝克曼库尔特公司)
旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)
2、实验方法
2.1取仙茅4份，仙灵脾4份、巴戟天3份、当归3份、黄柏2份、知母2份，混匀后用双蒸水浸泡2h，武火煮沸，文火煎煮30min(第一煎加入饮片量8倍水，第二煎加入饮片量6倍水)，双层纱布滤过取汁，趁热离心取上清液，合并两次煎液。将煎煮合并的汤剂使用旋转蒸发仪减压浓缩至浸膏状，保存于-80℃冰箱冷冻24h，然后使用冷冻干燥仪进行干燥48h，获得二仙汤粉末。
2.2分组及给药
取60只spf级雄性昆明小鼠，体重18～22g，置于动物房适应性饲养一周。按体重随机分组：模型组、阳性对照组(3mg/kg/d盐酸氟西汀)、低中高剂量组(1.0g/kg/d、2.0g/kg/d、4.0g/kg/d生药含量，给药体积为0.1ml/10g)、仙茅提取物组300mg/kg/d，每组10只小鼠，从第一天开始给药两周(每周称量小鼠体重，以便调整用药剂量)。
2.3强迫游泳试验(fst)
末次给药24h前进行15min的游泳训练，末次给药1h后将小鼠单个放入高20cm、直径15cm、水深10cm、水温25℃的圆柱形玻璃容器中。观察7min，记录后5min内小鼠的不动时间(小鼠静止不动或仅有微小的动作以保持身体平衡视为不动)。
2.5悬尾实验(tst)
末次给药1h后将小鼠尾部距末端2cm处用胶布固定倒悬于装置为长20cm×宽25cm×高25cm上部敞口箱的上方横杆上，悬挂观察6min，记录后4min内小鼠的不动时间(小鼠身体垂直向下放弃挣扎视为不动)。
3、实验结果
由图2和图3可知，二仙汤及仙茅提取物显著缩短了小鼠的强迫游泳不动时间(p＜0.05,x±s,n＝10)和悬尾试验不动时间(p＜0.05,
三、二仙汤对慢性温和刺激模型大鼠的影响
1、实验材料
1.1实验动物
sd大鼠，成年雄性，180-220g，spf级，由安徽医科大学实验动物中心提供。
1.2药品与试剂
仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归、黄柏、知母(产地湖北)
盐酸氟西汀(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)。
1.3实验仪器
scientz-18sn冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)
多功能电磁炉(广东美的生活电器制造有限公司)
贝克曼离心机(美国贝克曼库尔特公司)
旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)
2、实验方法
2.1取仙茅4份，仙灵脾4份、巴戟天3份、当归3份、黄柏2份、知母2份，混匀后用双蒸水浸泡2h，武火煮沸，文火煎煮30min(第一煎加入饮片量8倍水，第二煎加入饮片量6倍水)，双层纱布滤过取汁，趁热离心取上清液，合并两次煎液。将煎煮合并的汤剂使用旋转蒸发仪减压浓缩至浸膏状，保存于-80℃冰箱冷冻24h，然后使用冷冻干燥仪进行干燥48h，获得二仙汤粉末。
2.2配制中药液
将二仙汤加生理盐水制成相当于含生药1g/ml的中药液。
2.3分组及给药
70只sd雄性大鼠，体重180-220g，适应性饲养一周后随机分为7组：正常组、模型组、氟西汀组(2.1mg/kg/d盐酸氟西汀)、仙茅提取物组210mg/kg/d、二仙汤低中高浓度组(0.7g/kg/d、1.4g/kg/d、2.1g/kg/d生药含量)，每组10只。正常组大鼠不给任何刺激。其他各组大鼠接受21d慢性温和性不可预见性应激刺激。给药体积均为0.1ml/10g。对照组给予等体积的生理盐水。连续给药21d。
2.4慢性温和刺激
刺激方法包括：禁食(24h)、禁水(24h)、通宵照明(24h)、间歇照明(每2h交替开关灯)、45度斜笼、湿笼(每100g垫料中加入200ml水)、噪音、频闪(150flash/min)刺激等。所有刺激因素随机安排到21d内，每天随机安排1种刺激方式且每连续两天不重复，以保证大鼠对刺激的不可预知性，以避免发生适应性。
2.5糖水偏爱实验(spt)
大鼠禁食禁水12h后，每只大鼠笼放置1％蔗糖水和自来水各一瓶，位置随机放置，计算大鼠24h内糖水和自来水的消耗量，糖水偏爱比以糖水体积和液体消耗总体积的百分比表示，如图4所示。
2.6强迫游泳实验(fst)
末次给药24h前进行15min的游泳训练，末次给药1h后将大鼠单个放入高60cm、直径25cm、水深30-40cm、水温25℃的圆柱形玻璃容器中。观察7min，记录后5min内大鼠的不动时间(大鼠静止不动或仅有微小的动作以保持身体平衡视为不动)，如图5所示。
2.7旷场实验(oft)
12h不接受刺激，旷场区域为长度100cm×宽度100cm×高度30cm，底部的黑色木板用6mm白色直线划分为16个面积大小相等的正方形，场地用低照度的45w灯泡照明，室内安静隔音，将大鼠放置在旷场中央，让大鼠自由活动5min，记录大鼠的直立次数、理毛次数、水平运动。每只大鼠检测完用75％乙醇清洗旷场并吹干，如图7、图8和图9所示。
对比各个实验结果，对于抗抑郁性能方面，二仙汤组内各个组分相互作用，不止是仙茅提取物起到作用。
2.8悬尾实验(tst)
末次给药1h后将大鼠尾部距末端3cm处用胶布固定倒悬于离地约5cm的上部敞口箱中，悬挂观察6min，记录后4min内大鼠的不动时间(大鼠身体垂直向下放弃挣扎视为不动)，如图6所示。
3、实验结果：与正常组比较，##p＜0.01，###p＜0.001，与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01,**p＜0.001，(x±s,n＝10)。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。