本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种胞二磷胆碱注射液药物组合物、其制备方法和应用。
背景技术：
数据显示，截至2016年底，中国60岁及以上老年人口超过2.3亿，占总人口的16.7％；65岁及以上老年人口超过1.5亿，占总人口的10.8％。预计到2050年，中国老年人口将达到4.8亿，约占届时亚洲老年人口的五分之二、全球老年人口的四分之一，比现在美、英、德三个国家人口总和还要多，上述数据显示我国已提前进入了老龄化社会，对老年人的照料，让老年人过上一个幸福的晚年成为我国社会一个重要课题。
其中对于老年人的照顾成为最关键的问题，因为老年人随着年龄的增大，身体机能也在逐渐衰退，容易患上各种疾病像高血压、糖尿病、心脏病等慢性病；并且随着饮食结构的变化，不止老年人，现在越来越多年轻人患上高血糖、高血脂、脂肪肝等各种疾病，这些疾病除了它们自身对人身体健康造成伤害外，更重要的是，它们引发的并发症，有的会导致中风，有的会造成脏器受损，有的会对人体的神经系统造成严重伤害，这些都严重影响人们的生活质量，给个人、家庭和社会造成沉重的经济负担，严重影响了家庭幸福和社会和谐。
同时，老年人因为年纪较大，行动较为迟缓，机体反应和协调能力也较差，反应会比年轻人缓慢，容易摔倒，容易造成各种摔伤和碰伤，其中最为严重的头部的撞伤，会导致颅脑的急性损伤，轻则会脑震荡，造成意识行为障碍，重则会导致颅脑损伤，危及生命，治疗颅脑损伤有时仅仅依靠药物难以奏效，往往需要进行手术治疗，而手术又有很大的技术难度，易造成术后的后遗症，其中较为常见的有中枢神经急性损伤引发的意识和肢体行为的障碍；目前，对于这方面手术造成的中枢神经急性损伤引发的意识和肢体障碍和治疗药物还较少，而胞二磷胆碱是目前治疗术后中枢神经急性损伤引发的意识和肢体行为的障碍方面的主要药物之一，有较好的治疗效果，但是目前胞二磷胆碱药物的制剂，主要以西药制剂为主，较少联合中药使用的药物制剂，这限制了它疗效的提高和作用的进一步发挥。
技术实现要素：
针对目前，临床上仍然存在上述的问题，本发明目的在于提供一种胞二磷胆碱注射液及其制备方法和应用。
本发明通过将中药与胞二磷胆碱进行中西药联合使用，做成中西药制剂，能有助于进一步提高药物的治疗效果，有助于偏瘫和颅脑手术等中枢神经急性损伤导致的肢体功能性障碍和认知障碍患者的恢复，本发明通过中西药联用，可以发挥两者协同增效的作用，增强治疗效果，有助于患者更快恢复。
为了实现上述目标，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种胞二磷胆碱注射液药物组合物，以重量份数计包括45～150份胞二磷胆碱、0.2～0.5份活性炭、5～15份中药提取物和850～950份注射用水。
优选地，所述的胞二磷胆碱注射液，以重量份数计包括50～130份胞二磷胆碱、0.25～0.45份活性炭、7～12份中药提取物和870～920份注射用水。
优选地，所述的中药提取物，以重量份数计包含15～35份三七提取物、25～40份灵芝提取物和25～45份天麻提取物。
更优选地，所述的中药提取物，以重量份数计包含20～35份三七提取物、25～35份灵芝提取物和30～45份天麻提取物。
优选地，所述三七提取物按照下述方法制备：称量三七，用50％～80％乙醇回流提取3～6次，提取时间0.5～2小时过滤收集滤液，滤液回收乙醇，浓缩、干燥粉碎后得到三七提取物；所述的灵芝提取物按照下述方法制备：取灵芝，往里加入15～50倍量的水，提取5～12小时，提取温度50～75℃，回流提取2～5次；过滤去滤液，浓缩、干燥粉碎得到灵芝提取物；取天麻，将天麻进行粉碎，用无水乙醇进行回流提取2～6次，提取温度45～75℃，提取时间3～8小时，过滤取滤液，用石油醚对滤液进行萃取，取水相，再进行浓缩、干燥得到天麻提取物。
更优选地，所述三七提取物按照下述方法制备：称量三七，用65％乙醇回流提取4次，提取时间1小时过滤收集滤液，滤液回收乙醇，浓缩、干燥粉碎后得到三七提取物；所述的灵芝提取物按照下述方法制备：取灵芝，往里加入35倍量的水，提取6小时，提取温度65℃，回流提取3次；过滤去滤液，浓缩、干燥粉碎得到灵芝提取物；取天麻，将天麻进行粉碎，用无水乙醇进行回流提取3次，提取温度60℃，提取时间5小时，过滤取滤液，用石油醚对滤液进行萃取，取水相，再进行浓缩、干燥得到天麻提取物。
优选地，所述的胞二磷胆碱注射液的规格为2ml：0.1g和2ml：0.25g，包装规格为2ml×6支/盒×160盒/箱。
优选地，所述的胞二磷胆碱注射液药物组合物的制备方法，包含以下步骤：
S1.按处方准备和称量各种原料和准备灌装药液所需安瓿；
S2.进行药液配制，向浓配罐中加入总配置体积40％～60％的注射用水，加入处方量胞二磷胆碱，边加入边搅拌3～8分钟，至全部溶解；
S3.随后，再往里加入三七、灵芝和天麻提取物，搅拌至中药提取物完全溶解后，再加入处方量的活性炭，搅拌吸附5～15分钟，经0.8um钛棒过滤器和0.45um过滤器过滤至稀配罐；
S4.向浓配罐分次加入注射用水，通过输送泵注入稀配罐。补加注射用水至全量，最后搅拌回流7～15分钟。开启冷却水冷却至药液温度在25～50℃，调节药液PH值使其保持在5.0～9.0之间；
S5.随后，将上述药液通过0.22μm除菌滤器过滤后，进行灌装，灌装速度300～450支/分，灌装装量为2.00～2.25ml/支，整个灌装过程控制在10小时内完成，灌装时需往安瓿内充入的氮气，对药液进行保护；
S6.将灌装好的半成品进行灭菌，灭菌参数：蒸汽压力≥0.3MPa，压缩空气压力≥0.4MPa；灌封结束到灭菌过程不得超过3小时；
S7.灭菌完成后，再对半成品进行检漏、灯检、贴标和包装。
更优选地，所述的胞二磷胆碱注射液的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：S1.按处
方准备和称量各种原料和准备灌装药液所需安瓿；
S2.进行药液配制，向浓配罐中加入总配置体积45％～55％的注射用水，加入处方量胞二磷胆碱，边加入边搅拌4～7分钟，至全部溶解；
S3.随后，再往里加入三七、灵芝和天麻提取物，搅拌至中药提取物完全溶解后，再加入处方量的活性炭，搅拌吸附7～12分钟，经0.8um钛棒过滤器和0.45um过滤器过滤至稀配罐；
S4.向浓配罐分次加入注射用水，通过输送泵注入稀配罐。补加注射用水至全量，最后搅拌回流8～12分钟。开启冷却水冷却至药液温度在30～40℃，调节药液PH值使其保持在5.0～9.0之间；
S5.随后，将上述药液通过0.22μm除菌滤器过滤后，进行灌装，灌装速度350～450支/分，灌装装量为2.05～2.20ml/支，整个灌装过程控制在10小时内完成，灌装时需往安瓿内充入的氮气，对药液进行保护；
S6.将灌装好的半成品进行灭菌，灭菌参数：蒸汽压力≥0.3MPa，压缩空气压力≥0.4MPa；灌封结束到灭菌过程不得超过3小时；
S7.灭菌完成后，再对半成品进行检漏、灯检、贴标和包装。
优选地，所述的药液灌装的质量要求为：药液为无色或淡黄色澄明液体、药液中无肉眼可见异物和药液中胞二磷胆碱的含量应为标示量的90.0％～110.0％。
优选地，所述的胞二磷胆碱在制备急性颅脑外伤和脑部手术后的意识障碍治疗药物中的应用。
优选地，所述的胞二磷胆碱在制备脑中风所致的肢体功能障碍和其他中枢神经系统急性损伤引起的功能和意识障碍治疗药物中的应用。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1
一种胞二磷胆碱注射液，以重量份数计包括50份胞二磷胆碱、0.25份活性炭、5份中药提取物和950份注射用水。
一种胞二磷胆碱注射液的制备方法，包含以下步骤：
S1.按处方准备和称量各种原料和准备灌装药液所需安瓿；
S2.进行药液配制，向浓配罐中加入总配置体积40％的注射用水，加入处方量胞二磷胆碱，边加入边搅拌3分钟，至全部溶解；
S3.随后，再往里加入三七、灵芝和天麻提取物，搅拌至中药提取物完全溶解后，再加入处方量的活性炭0.25份，搅拌吸附5分钟，经0.8um钛棒过滤器和0.45um过滤器过滤至稀配罐；
S4.向浓配罐分次加入注射用水，通过输送泵注入稀配罐。补加注射用水至全量，最后搅拌回流7～15分钟。开启冷却水冷却至药液温度在30℃，调节药液PH值使其保持在5.2；
S5.随后，将上述药液通过0.22μm除菌滤器过滤后，进行灌装，灌装速度330支/分，灌装装量为2.05ml/支，整个灌装过程控制在10小时内完成，灌装时需往安瓿内充入的氮气，对药液进行保护；
S6.将灌装好的半成品进行灭菌，灭菌参数：蒸汽压力≥0.3MPa，压缩空气压力≥0.4MPa；灌封结束到灭菌过程不得超过3小时；
S7.灭菌完成后，再对半成品进行检漏、灯检、贴标和包装。
实施例2
一种胞二磷胆碱注射液，以重量份数计包括135份胞二磷胆碱、0.45份活性炭、13份中药提取物和850份注射用水。
一种胞二磷胆碱注射液的制备方法，包含以下步骤：
S1.按处方准备和称量各种原料和准备灌装药液所需安瓿；
S2.进行药液配制，向浓配罐中加入总配置体积60％的注射用水，加入处方量胞二磷胆碱，边加入边搅拌7分钟，至全部溶解；
S3.随后，再往里加入三七、灵芝和天麻提取物，搅拌至中药提取物完全溶解后，再加入处方量的活性炭0.45份，搅拌吸附13分钟，经0.8um钛棒过滤器和0.45um过滤器过滤至稀配罐；
S4.向浓配罐分次加入注射用水，通过输送泵注入稀配罐。补加注射用水至全量，最后搅拌回流7～15分钟。开启冷却水冷却至药液温度在48℃，调节药液PH值使其保持在8.5之间；
S5.随后，将上述药液通过0.22μm除菌滤器过滤后，进行灌装，灌装速度420支/分，灌装装量为2.20ml/支，整个灌装过程控制在10小时内完成，灌装时需往安瓿内充入的氮气，对药液进行保护；
S6.将灌装好的半成品进行灭菌，灭菌参数：蒸汽压力≥0.3MPa，压缩空气压力≥0.4MPa；灌封结束到灭菌过程不得超过3小时；
S7.灭菌完成后，再对半成品进行检漏、灯检、贴标和包装。
实施例3
一种胞二磷胆碱注射液，其特征在于，以重量份数计包括90份胞二磷胆碱、0.35份活性炭、10份中药提取物和900份注射用水。
S1.按处方准备和称量各种原料和准备灌装药液所需安瓿；
S2.进行药液配制，向浓配罐中加入总配置体积50％的注射用水，加入处方量胞二磷胆碱，边加入边搅拌5分钟，至全部溶解；
S3.随后，再往里加入三七、灵芝和天麻提取物，搅拌至中药提取物完全溶解后，再加入处方量的活性炭0.35份，搅拌吸附5～15分钟，经0.8um钛棒过滤器和0.45um过滤器过滤至稀配罐；
S4.向浓配罐分次加入注射用水，通过输送泵注入稀配罐。补加注射用水至全量，最后搅拌回流7～15分钟。开启冷却水冷却至药液温度在25～50℃，调节药液PH值使其保持在5.0～9.0之间；
S5.随后，将上述药液通过0.22μm除菌滤器过滤后，进行灌装，灌装速度300～450支/分，灌装装量为2.00～2.25ml/支，整个灌装过程控制在10小时内完成，灌装时需往安瓿内充入的氮气，对药液进行保护；
S6.将灌装好的半成品进行灭菌，灭菌参数：蒸汽压力≥0.3MPa，压缩空气压力≥0.4MPa；灌封结束到灭菌过程不得超过3小时；
S7.灭菌完成后，再对半成品进行检漏、灯检、贴标和包装。
1.胞二磷胆碱注射液对脊髓缺血再灌注损伤的影响
健康和生长情况大致相当的小白鼠50只，体重200g左右，随机分成5组，对照组、缺血再灌注损伤组、本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)，各组均采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型，并于灌注后的12、24、48和72小时4个时间点采用改良Tarlov法对小白鼠脊髓运动和感觉功能进行评分对比，对照组和缺血再灌注损伤组于术前3天每日清晨分别用生理盐水2ml灌胃，本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)于同一时段分别用0.4g/kg本实施例的胞二磷胆碱注射液、市售其它胞二磷胆碱药物和市售其它神经恢复治疗药物用生理盐水稀释至2ml灌胃(相关结果如表1所示)。
参照文献并结合Zivin改进法建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。所以术前动物禁食8h。采用10％水合氯醛经腹腔注射0.4ml/100g麻醉。大鼠仰卧位固定后，脱毛液腹部常规脱毛后消毒，然后沿腹白线剖开腹腔，用温盐水纱布包住肠管轻轻向左轻推，分离并暴露出腹主动脉，仔细辨认双侧肾动脉。对照组右肾下主动脉穿线，不结扎；本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1和阳性对照组2组在左右肾动脉之间以无创动脉夹夹闭腹主动脉，在钳夹点以下腹主动脉搏动消失并观察到后肢发绀开始计时。45min后松开动脉夹行血液灌注。检查动脉有无损伤及腹腔内有无出血后关闭腹腔，伤口外涂红霉素软膏。术中用烤灯维持肛温在36～38℃。
从表1的数据可以看出，各组以对照组参照进行相比，本实施例组的小白鼠肢体功能得分最高，明显高于其它各组，这表明本实施例的注射液对于小白鼠脊髓缺血再灌注损伤造成的肢体功能障碍的恢复能力最强，强于阳性对照组1和阳性对照组2的肢体功能恢复效果，这表明通过将胞二磷胆碱与中药制剂联合效果强于胞二磷胆碱的单独使用以及市售的一些其它的受损神经功能治疗的药物，胞二磷胆碱与中药制剂联合能够增强小白鼠脊髓受损导致的肢体功能障碍的恢复能力和治疗效果。
表1各组再灌注后对小白鼠肢体功能影响
a：P<0.01，与对照组比较；b：P<0.05，与缺血再灌注损伤组比较
2.TUNEL检测凋亡阳性细胞表达
健康和生长情况大致相当的小白鼠50只，体重200g左右，随机分成5组，对照组、缺血再灌注损伤组、本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)，各组均采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型，并于灌注后的12、24、48和72小时4个时间点采用改良Tarlov法对小白鼠脊髓运动和感觉功能进行评分对比，对照组和缺血再灌注损伤组于术前3天每日清晨分别用生理盐水2ml灌胃，本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)于同一时段分别用0.4g/kg本实施例的胞二磷胆碱注射液、市售其它胞二磷胆碱药物和市售其它神经恢复治疗药物用生理盐水稀释至2ml灌胃(相关结果如表2所示)。
表2各个时间节点TUNEL阳性细胞表达统计
a：P<0.01，与对照组比较；b：P<0.05，与缺血再灌注损伤组比较
TUNEL结果如表2数据所示，与对照组比较，缺血再灌注损伤组、本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)均可观察到阳性凋亡细胞数明显增多；与缺血再灌注损伤组相比，本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1和阳性对照组2各时点凋亡细胞数均减少，但是本实施例注射液组的阳性细胞减少数量最少，明显少于其它各组，表明它对阳性细胞的保护作用最强，对其减少的抑制作用较其它组更强。
3.免疫组化检测Bax、Caspase-9和Bcl-2
健康和生长情况大致相当的小白鼠40只，体重200g左右，随机分成8组，对照组、缺血再灌注损伤组、本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)，各组均采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注损伤模型，并于灌注后的12、24、48和72小时4个时间点采用改良Tarlov法对小白鼠脊髓运动和感觉功能进行评分对比，对照组和缺血再灌注损伤组于术前3天每日清晨分别用生理盐水2ml灌胃，本实施例的胞二磷胆碱注射液预先给药组、阳性对照组1(市售其它胞二磷胆碱药物预先给药组)和阳性对照组2(市售其它受损神经恢复治疗药物预先给药组)于同一时段分别用0.4g/kg本实施例的胞二磷胆碱注射液、市售其它胞二磷胆碱药物和市售其它神经恢复治疗药物用生理盐水稀释至2ml灌胃(相关结果如表3所示)。
表3各组Bax、Caspase-9和Bcl-2免疫组化阳性细胞变化情况
a：P<0.01，与对照组比较；b：P<0.01，与缺血再灌注损伤组比较
脊髓缺血再灌注损伤后，Bcl-2和bax表达均增加，这与有关研究相符。Bcl-2和bax二者的比值在一定程度上可反映细胞的凋亡趋势，Bax/Bcl-2比值升高，促进凋亡的发生，而Bcl-2/Bax比值增加，抑制细胞凋亡。脊髓缺血再灌注损伤后，Bcl-2和Bax表达均明显增加，提示脊髓缺血再灌注损伤有大量细胞凋亡存在，但Bcl-2/Bax比值降低，神经细胞向凋亡的方向进展。而Bcl-2能阻止线粒体穿透性转运孔开放，在抑制细胞凋亡的发生中起重要作用；相关研究也显示，激活caspase系统，使caspase增加，会促使脊髓神经细胞发生凋亡；从表3数据可以看出，与对照组相比，各组的Bax、Caspase-9和Bcl-2免疫组化阳性细胞变化情况中，本实施例注射液组中的Bcl-2增加最多、Bax/Bcl-2最小，Caspase-9增加数量也最少；这表明其相对于阳性对照组1和阳性对照组2有更强的抑制神经细胞凋亡的作用，抑制效果也最好，表明通过中西药制剂联用对于抑制神经细胞凋亡的能起到更好的效果。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。