一种组合物及其在制备养颜化妆品中的应用的制作方法

本发明涉及化妆品
技术领域：
，尤其涉及一种组合物(flomiracle)及其在制备养颜化妆品中的应用。
背景技术：
：爱美之心，人皆有之，人类对美的追求随着文明的进步不断提高。中国美容文化源远流长，最早可追溯到新石器时代，是人类生活不可或缺的组成部分。中华民族的美容文化中，除了爱大自然之美，也爱心灵美和容貌美。中医美容是以中医理论为基础，以一些具有中医特色的方法和方药为手段，通过调整脏腑功能、改善血液循环，从而实现清洁颜面，美化皮肤的目的。查阅经典古籍，诸多古代美女深谙养颜之道，经常使用具有养颜功效的产品。随着社会的进步及人民生活水平的提高，人们追求健康的意识日益增强，由于植物活性成分不仅副作用小而且功效较佳，以植物活性成分为主的美容产品越来越受到消费者的青睐。从天然植物或中药中分离，提取活性成分制作美容护肤品日益引起世界的瞩目。花是植物的繁殖器官，她艳丽多彩，千姿百态，气味芬芳，人人都爱。貌美如花，是中华民族对美的一种表达。中医认为，鲜花质地轻扬，易达到肌肤底层，促进血液循环，新陈代谢。现代药理学研究已经为花卉的美容护肤提供了科学依据：花卉中含有各种生物碱，酯类，有机酸，维生素和微量元素等，这些物质具有较好的护肤，养颜，美容作用。随着人们健康生活意识增强，人们越来越热衷于植物化妆品和回归自然的美容黄发，由此我们相信，花卉美容，萃百花精粹，以花养颜，大有可为。目前，市场上以植物为原料的化妆品的品种混乱，品质良莠不齐。分析原因，一方面是个别商家追求的是利益最大化，以假充真，以劣充好。更重要的原因是化妆品的配方没有经过更进一步的验证，各个组分之间不能很好的起到协同作用，因此，如何采用植物原料，特别是以花作为原料，开发具有良好功能的化妆品，提高化妆品的美容效果，仍是目前研究的热点。技术实现要素：有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种组合物(flomiracle)及其在制备养颜化妆品中的应用，该组合物具有平衡水油、抗炎、抗氧化以及美白、抗衰老的作用。本发明提供的组合物，由如下质量分数的组分组成：一些实施例中，所述组合物由如下质量分数的组分组成：另一些实施例中，所述组合物由如下质量分数的组分组成：另一些实施例中，所述组合物由如下质量分数的组分组成：本发明采用了金银花，密蒙花，接骨木花，玫瑰花，百合花，天女木兰花，山茶花，天山雪莲花、牡丹花和桃花为“以花养颜”组方，从皮肤光保护、抑制炎症因子，控油、保湿、抑制酪氨酸酶活性，提亮肤色，抗氧化，抑制金属蛋白酶，促进胶原蛋白增生，加速血液循环，促进新陈代谢，提升肌肤天然防御能力。本发明还提供了一种精华液，其由甘油、丁二醇、丙二醇、β-葡聚糖、寡聚透明质酸钠、海藻糖、烟酰胺、肌醇、肌肽、熊果苷和本发明所述的组合物组成。本发明将天金银花提取物，密蒙花提取物，接骨木花提取物，玫瑰花提取物，百合花提取物，天女木兰花提取物，山茶花提取物，天山雪莲花提取物、牡丹花提取物和桃花提取物进行复配，所得组合物用于制备化妆品的精华液。实验表明，该精华液能够具有68.9％的油脂含量抑制率；降低6.63％～11.9％的水分散失；将皮肤含水量提高34.03％～56.69％；抑制8.6％～12.17％的炎症因子释放；相对于空白对照，本发明组合物能够将成纤维细胞的增殖率提高16.84％～26.79％；且能够抑制82.82％～91.29％的酪氨酸酶活性，自由基清除率可达54.19％～65.46％，相对空白对照38.38％，组合物的自由基清除率提升了15.81％～27.08％。以上结果说明，各提取物相互复配，共同起到了良好的增效协同作用，从而实现有效的护理肌肤的作用。该精华液中，甘油、丁二醇、丙二醇等组分，能够配合本发明提供的组合物，进一步提高组合物水油平衡、减少水分散失、提高皮肤含水量、抑制炎症因子表达、促进成纤维细胞增殖、降低酪氨酸酶活性以及清除自由基的作用。具体的，本发明提供的精华液由如下质量分数的组分组成：一些实施例中，本发明提供的精华液由如下质量分数的组分组成：一些实施例中，本发明提供的精华液由如下质量分数的组分组成：一些实施例中，本发明提供的精华液由如下质量分数的组分组成：本发明提供的精华液中，还包括水、防腐剂和增稠剂。所述防腐剂为phl；所述增稠剂为黄原胶。所述精华液中，所述水的质量分数为77.61％～85.11％。其中，所述防腐剂的质量分数为1％，所述增稠剂的质量分数为0.15％。本发明所述精华液在制备控油化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够抑制皮肤油脂的过量产生。本发明所述精华液在制备保湿化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够抑制皮肤水分的散失。本发明所述精华液在制备补水化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够提高皮肤的含水量。本发明所述精华液在制备抗炎化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够抑制no的释放。本发明所述精华液在制备抗衰老化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够提高成纤维细胞的增殖率。本发明所述精华液在制备美白化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够抑制酪氨酸酶的活性。本发明所述精华液在制备抗氧化化妆品中的应用。实验表明，本发明提供的精华液能够清除自由基。本发明所述精华液的制备方法包括：75℃～80℃，将甘油、丁二醇、丙二醇、寡聚透明质酸钠、海藻糖、β-葡聚糖、烟酰胺、肌醇、增稠剂和水混合，500r/min～600r/min搅拌30min；降温至55℃～60℃，加入肌肽、熊果苷、密蒙花提取物、牡丹花提取物、金银花提取物、接骨木花提取物、天女木兰花提取物、桃花提取物、百合花提取物、玫瑰花提取物、山茶花提取物、天山雪莲花提取物、300r/min～350r/min搅拌15min；降温至45℃～50℃，加入防腐剂，150r/min～200r/min搅拌10min；冷却至室温。所述室温为18℃～30℃。本发明还提供了一种化妆品，包括本发明所述精华液。该化妆品的功能包括水油平衡、抗炎、抗氧化、美白和/或抗衰老。本发明所述的化妆品包括面贴膜或眼贴膜。化妆品为面膜，其中还包括面膜基质。本发明将金银花提取物，密蒙花提取物，接骨木花提取物，玫瑰花提取物，百合花提取物，天女木兰花提取物，山茶花提取物，天山雪莲花提取物、牡丹花提取物和桃花提取物进行复配，所得组合物用于制备化妆品的精华液。该精华液能够抑制炎症因子，控油、补水、保湿、抑制酪氨酸酶活性，提亮肤色，抗氧化，促进细胞增殖、提升肌肤天然防御能力。附图说明图1示各样品对皮肤油脂含量的影响；图2示各样品对皮肤水分散失量的影响；图3示各样品对皮肤水分含量的影响；图4示各样品对no释放量的影响；图5示各样品对细胞增殖率的影响；图6示各样品对酪氨酸酶活性的影响；图7示各样品对自由基的清除率。具体实施方式本发明提供了一种组合物及其在制备养颜化妆品中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明采用的原料皆为普通市售品，皆可于市场购得。金银花，又名忍冬花，为忍冬科半常绿缠绕灌木。本发明提供的金银花提取物主要含绿原酸、异绿原酸、木犀草素和皂苷，能够有效抑制金黄色葡球菌，大肠杆菌，绿脓杆菌等，且能够提升1l-4水平，激活神经钙蛋白，增强巨噬细胞功能，保护胶原蛋白。本发明采用湖南隆回花瑶地区小沙江金银花三青期，即采用绿蕾制备忍冬花提取物，且采摘时间为上午9:00至11：00；提取物的制备采用水提法。经检测，该提取物中绿原酸与异丙绿原酸活性组分含量较高，具有优异的抗菌，抗炎和抗氧化性能。百合为百合科植物，白花百合的花瓣因其所具有的柔肤及治愈功效而为人们所使用。本发明采用白花百合的花朵为原料，以水浸提法进行提取，制备百合提取物，百合提取物中主要的活性成分为多糖，单宁，皂苷。玫瑰花是蔷薇科植物玫瑰的花蕾。经研究表明，玫瑰花所含营养成分有：黄酮、有机酸、酚类、鞣质、生物碱、糖、氨基酸和蛋白质及多种矿物质元素。本发明采用玫瑰的花朵为原料，以水浸提法进行提取，制备玫瑰提取物，该提取物中主要成分为：玫瑰多糖，玫瑰多酚，玫瑰黄酮。茶花(camelliasp.)又名山茶花，是山茶科、山茶属多种植物和园艺品种的通称。本发明以山茶花的花朵为原料，以水浸提法进行提取，制备的山茶花提取物中主要成分为茶皂素，茶多酚，儿茶素。密蒙花，别名蝴蝶木，密蒙花提取物的主要成分是毛蕊花苷，松果菊苷。本发明以密蒙花的花朵为原料，提取物的制备采用水提法。该提取物能够全面抵御红外光，紫外光，蓝光引起的脂质氧化，细胞dna损伤，细胞外基质瓦解，预防色素沉着，构建360度日光防护；牡丹花属毛莨科芍药属灌木，牡丹鲜花中富含多种营养成分，包括多酚类物质，蛋白质，氨基酸，和人体所需的微量元素。本发明以牡丹花的花瓣为原料，提取物的制备采用水提法，提取物的主要成分为蛋白质、维生素vb2、类胡萝卜素、微量元素，该提取物通过提供丰富蛋白质和氨基酸，促进机体糖代谢和蛋白质代谢，通过维生素vb2参与多种氧化酶反应，通过类胡萝卜素预防干燥，角化增生，通过微量元素，促进多种辅酶合成。天女木兰(magnoliasieboldii)又称天女花、小花木兰、天女花或山牡丹。天女木兰提取物主要活性组分为厚朴酚，抗氧化，主要抑制多巴自动氧化，抑制炎症后的色素沉着。黑色素有黑色素细胞中酪氨酸在络氨酸酶作用下合成黑色素小体，然后转移至角化细胞，黑素小体，在角化细胞作用下被分解，并分散到表皮中，大量的黑色素累积形成色素沉着。所述天女木兰花提取物的制备以天女木兰花的花朵为原料，采用水浸提法进行提取。桃花是蔷薇科落叶乔木桃树的花，其美容养颜和保健功效在中国传统医疗实践中得到了广泛应用。桃花提取物的有效成分为桃花多糖、芦丁、鞣花酸，其中，多糖消除羟基自由基和超阴离子自由基；芦丁、鞣花酸，消除活性氧，螯合铜离子，抑制酪氨酸酶活性，提亮美白肌肤。所述桃花提取物的制备以桃花为原料，采用水浸提法进行提取。接骨木(sambucusnigra)为忍冬科植物，接骨木的花期为每年6～7月，花色黄白，带有麝香葡萄优雅甜香味。本发明采用接骨木的花朵为原料，采用以水浸提法进行提取，所得提取物的活性成分主要为花色素，单宁，黄酮。雪莲又名雪莲花，属于菊科风毛菊属，因其顶形似莲花，故得名雪莲花.叶密集，最上部叶苞叶状，膜质，淡黄色，包围总花序，小花紫色。所述雪莲花提取物，以雪莲的小紫花为原料，以醇浸提法进行提取，所得提取物的活性成分主要为雪莲内酯，黄酮类芦丁。甘油又称丙三醇，具有吸水作用，用作保湿剂。丁二醇是多元醇的一种，在化妆品中常做为保湿剂或溶剂使用，本发明采用的丁二醇为1,3丁二醇丙二醇具有保湿和抗菌的作用，本发明采用的丙二醇为1,2-丙二醇β-葡聚糖是又称右旋糖酐，主要由d-葡萄吡喃糖以α，1→6键连接，支链点有1→2、1→3、1→4连接。本发明采用的β-葡聚糖的分子量为6万-50万。寡聚透明质酸钠是由透明质酸降解制备的分子量极低的透明质酸分子，具有皮肤保湿的功能。本发明采用的寡聚透明质酸钠的分子量为10000。海藻糖，为无水海藻糖，又称漏芦糖、蕈糖等，具有细胞保护的功能。烟酰胺，又称尼克酰胺，是烟酸的酰胺化合物，在化妆品中作为营养性添加剂。肌醇又名肌糖、环己六醇或纤维醇(肌糖)，参与体内新陈代谢活动。肌肽(l-carnosine)，学名β-丙氨酰-l-组氨酸，是由是一种由β-丙氨酸和l-组氨酸两种氨基酸组成的二肽，实可清除在氧化应激过程中使细胞膜的脂肪酸过度氧化而形成的活性氧自由基(ros)以及α-β不饱和醛。熊果苷又名熊果素，能够减少皮肤色素沉积，祛除色斑和雀斑，同时还有杀菌、消炎的作用。其可提取自植物，也可通过人工化学合成。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1～3配方如表1表1实施例1～3配方1)按照配方配比称量甘油，丁二醇，丙二醇，寡聚透明质酸钠，海藻糖，β-葡聚糖、烟酰胺，肌醇，黄原胶和去离子水，将温度升高至75～80℃，以500～600r/min，搅拌30min，直至组分全部溶解；2)将温度降低至55～60℃，加入肌肽，熊果苷、金银花提取物，密蒙花提取物，接骨木花提取物，玫瑰花提取物，百合花提取物，天女木兰花提取物，山茶花提取物，天山雪莲花提取物、牡丹花提取物和桃花提取物，以300～350r/min搅拌15min，直至全部均匀混合；3)将温度降低45～50℃，添加防腐剂phl，以150～200r/min搅拌10min，冷却到室温即可。对比例1～3配方如表2表2对比例1～6配方1)按照配方配比称量甘油，丁二醇，丙二醇，寡聚透明质酸钠，海藻糖，β-葡聚糖、烟酰胺，肌醇，黄原胶和去离子水，将温度升高至75～80℃，以500～600r/min，搅拌30min，直至组分全部溶解；2)将温度降低至55～60℃，加入肌肽，熊果苷、金银花提取物，密蒙花提取物，接骨木花提取物，玫瑰花提取物，百合花提取物，天女木兰花提取物，山茶花提取物，天山雪莲花提取物、牡丹花提取物和桃花提取物，以300～350r/min搅拌15min，直至全部均匀混合；3)将温度降低45～50℃，添加防腐剂phl，以150～200r/min搅拌10min，冷却到室温即可。功效评测1控油功效评价1.1测试原理本专利采用德国ck的皮肤油脂测试仪sebumetersm815进行吸油纸使用效果的功效评定。油份测试采用的是世界公认的sebumeter法，它是基于光度计原理，一种0.1mm厚的特殊消光胶带吸收人体皮肤上的油脂后，就会变成一种半透明的胶带，它的透光量就会发生变化，吸收的油脂越多，透光量就会越大，这样就可以测量出皮肤油脂的含量。最大的优点是测试探头体积小，使用方便，可测试皮肤的任何部位。这是一种油脂腺分泌物的间接测量法，结果可以用来区分不同的皮肤类型，使准确地了解由内部和外部原因而引起的油脂变化成为可能。1.2测试方法本专利此次测试选择30名测试对象，3人一组分成10组，分别在额头画出3个尺寸为3cm×3cm区域，分别针对空白样(不擦拭样品)、对照样和专利样进行皮肤油脂含量评测，每个对照样取三人平均值计算油脂含量增量百分比进行相关评判。(1)选择的测试对象肌肤健康，年龄18-30岁，经测试对象知情，同意，受试对象洁面15分钟后，测定其额头油脂含量作为初始值。(2)在受试者额头空白区不涂抹样品，对照样区、专利样区称取0.5ml精华液以3cm×3cm无纺布膜布浸润覆盖肌肤20min后，取下无纺布，静待10分钟，分别针对三个区域进行油脂含量测定，每30min测试一次，持续评测2h；(3)测试环境：测试环境温度t＝25℃，湿度h＝50；(4)测试时间：在测试前进行洁面，15分钟测试初始油脂含量，分别测试30min,60min,90min,150min、180min测试油脂含量数据；(5)测试部位：额头标注空白，对照样，专利样的测试区域。1.3功效评测结果如图1和表3：表3皮肤油脂含量增加(％)30min60min90min120min150min180min空白0128.95231.58371.05421.05447.37对比例10126.67226.67343.33373.33406.67对比例20120.59235.29338.24379.41405.88对比例3082.14207.14292.86321.43385.71对比例40116.67179.17225.00300.00345.83对比例5084.62161.54211.54292.31334.62对比例60102.94235.29308.82320.59376.47实施例1032.35132.35208.82223.53297.06实施例2048.48103.03169.70212.12248.48实施例3036.3675.76160.61196.97230.30由图1和表3可知：经过3小时评测，使用本发明的组方的三个受试的组油脂含量为272.73～358.82，相对空白样油脂含量为460.53，使用本发明组方的受试者的油脂含量降低68.9％。其中，实施例1～3的抑油效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的抑油效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的抑油效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。2经皮水分散失评价2.1测试原理该试验仪器的测量原理来源于fick菲克扩散定律：dm/dt＝d.a.dp/dx。通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm内)由角质层水分散失在不同亮点形成的水蒸气压梯度，直接测出经皮散发的水分量。tewl值是皮肤屏障好坏的一个重要标志，皮肤的tewl值越低，说明皮肤的屏障功能越好，反之越差。2.2试验条件和志愿者要求测试环境条件：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％，并且进行实时动态检测；志愿者要求：有效志愿者至少30人，年龄在16-65岁之间(妊娠或浦乳期妇女除外)：前臂测试区域电容法皮肤水分测定意义的基础值在15-100之间：无严重系统疾病，无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者：为参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有自愿者应填写知情同意书；2.3测试前准备受试部位前2-3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，用干的面巾纸擦拭干净。清洁后受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。2.4测试步骤实验中左右手臂内侧标记3×3cm2试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用电容法皮肤测定仪进行受试区域和对照区域的测量。每个区域依照平行测定15次。先测量各测试区域的空白纸，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试验均匀涂布于试验区内。涂抹分别测量1，2小时，4小时，受试区域和空白对照区域的皮肤含水量(验证时按此时间测定)，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。2.5测试结果按实验设计分别测得各时段的tewl值，其皮肤水分散失减少计算公式如下：t％＝(t0-t1)/t0×100％t％:皮肤水分散失减少百分比；t0：使用产品前皮肤水分散失量；t1：使用产品后皮肤水分散失量；结果如表4和图2：表4皮肤水分散失量(％)0min30min60min90min对比例10.00-5.59-6.96-7.01对比例20.00-3.83-4.74-5.20对比例30.00-0.06-2.46-4.30对比例40.00-0.44-1.62-2.68对比例50.00-0.44-0.09-0.31对比例60.00-1.61-4.30-4.25实施例10.001.361.76-0.38实施例20.001.803.212.04实施例30.003.275.094.89注：表中负值代表相对于t0皮肤水分散失量升高；正值代表相对于t0皮肤水分散失量降低。结果显示：本发明组方，经过皮肤水分散失率评测，实施例1～3的受试组水分散失减少量为-0.38％-4.89％，相对空白样-7.01％的抑制效果，各实施例的效果更佳。其中，实施例1～3的保湿效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的保湿效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的保湿效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的保湿效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。3皮肤水分含量mmv测试方法3.1测试原理此方法采用电容法测试人体皮肤角质层的水分含量，它的原理是基于水和其他物质的介电常数差异显著，按照皮肤含水量不同，测得皮肤的电容值不同，其观测参数可代表皮肤水分值。3.2测试设备:德国ck公司多功能皮肤测试仪，型号cutometerdualmpa580，本专利选用皮肤水分含量测试探头和皮肤水分散失tewl测试探头。3.3试验条件和志愿者要求测试环境条件：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％，并且进行实时动态检测；志愿者要求：有效志愿者至少30人，年龄在16-65岁之间(妊娠或浦乳期妇女除外)：前臂测试区域电容法皮肤水分测定意义的基础值在15-100之间：无严重系统疾病，无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏疾病者；既往对护肤类化妆品无严重过敏史者；近一个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者：为参加其他临床试验者；按规定使用受试药物且资料齐全；测试前所有自愿者应填写知情同意书；3.4测试前准备受试部位前2-3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，用干的面巾纸擦拭干净。清洁后受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。3.5测试步骤实验中左右手臂内侧标记3×3cm2试验区域，同一手臂可以标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用电容法皮肤测定仪进行受试区域和对照区域的测量。每个区域依照平行测定15次。先测量各测试区域的空白纸，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试验均匀涂布于试验区内。涂抹分别测量1小时，2小时，4小时，受试区域和空白对照区域的皮肤含水量(验证时按此时间测定)，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。3.6测试结果按实验的设计分贝测得各时间段的mmv值。其水分含量计算公式如下：w％＝(w1-w0)/w0×100％w％:皮肤水分含量增加百分比；w0:使用产品前皮肤水分含量；w1:使用产品后皮肤水分含量；结果如表5和图3：表5皮肤水分含量增加(％)0min30min60min120min对比例10.0089.1094.5278.46对比例20.00127.56114.2697.32对比例30.00147.21131.02102.68对比例40.00152.50121.36104.92对比例50.00153.49141.29109.93对比例60.00134.01124.7895.07实施例10.00154.37147.53112.49实施例20.00176.33159.95135.05实施例30.00174.74163.76147.60结果表明：经过2小时评测，本发明组方能够提升皮肤水分含量至112.49％～147.60％，相对空白样(提升78.46％),实例样相对空白样提升了水分含量34.03％～69.14％。经统计学分析，实施例1～3的补水效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的补水效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的补水效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。4lps诱导raw264.7细胞释放no抑制作用4.1实验原理：lps(脂多糖)：位于革兰氏阴性细菌细胞壁最外层的一层较厚(8-10nm)的类脂多糖类物质，由类脂a、核心多糖和o-特异侧链3部分组成。脂多糖是内毒素和重要群特异性抗原(o抗原)。脂多糖由三部分组成。脂质a(lipida)为构成内毒素活性的糖脂，以共价键联结到杂多糖链，有两部分：一是核心多糖，在有关的株内是恒定的；另一o特异性链(o-specificchain)是高度可变的。大肠杆菌的脂多糖在实验室免疫学中是常用的b细胞促分裂因子即多克隆活化因子(polyclonalactivator)。本实验利用lps诱导raw264.7细胞产生过敏反应，释放no(一氧化氮)。griessassay–no含量测试方法no在体内或水溶液中极易氧化成no2，在酸性条件下，no与重氮盐磺胺发生重氮反应，并生成重氮化合物，后者进一步与萘基乙烯基二胺发生耦合反应，该反应生成的产物浓度与no浓度具有线性关系，在540nm处有最大吸收峰。4.2实验材料和方法：4.2.1材料：dmem，fbs，lps，mtt，griessreagent4.2.2实验方法：raw264.7细胞培养将raw264.7细胞用移液枪吸取dmem培基吹散分散细胞，利用hemacytometer来计数细胞，然后利用dmem来稀释细胞，稀释到浓度为5×104cells/ml。稀释后的细胞溶液分别接种到96well中，每一孔为100μl，即5×103cells/well。在37℃，5％co2的培养箱中培养24小时。待测样品和空白样准备：待测样品用dmem培基稀释，稀释后的浓度分别为：1％(该浓度通过前面的mtt测试，结果为无毒)名称controlsample(实施例1～3，对比例1～6)样品组成lps10ppmlps10ppm+1％sample细胞培养24小时后，观察细胞是否完全贴壁生长，如果细胞完全贴壁生长的话，将原培基移除，用dpbs洗涤。将dpbs移除之后，分别加入前面准备好的样品。样品的溶度根据毒性测试的结果选择安全浓度1％(20μl/well)。样品加入之后，放入37℃，5％co2的培养箱中培养20小时。20小时后，移取50ul的培养基到新的96well上，加入相同体积的1％griessreagent，充分混合后，于暗处反应10分钟。利用elisareader在540nm处测试样品的吸光光度值。no抑制作用noinhibition％＝((〖od〗_control-〖od〗_sample)/〖od〗_control)*100％其中：〖od〗_control-空白样的吸光光度值〖od〗_sample-样品的吸光光度值4.3抑制炎症结果结果如图4，如图所示，本发明组方，使no的释放量减少16.79％～23.85％，相对空白样no释放量减少量为6.68％，抑制率提升了10.11％～17.17％。经统计学分析，实施例1～3的抗炎效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的抗炎效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的抗炎效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。5成纤维细胞增值率5.1实验原理:细胞计数方法：细胞计数方法采用的是血细胞计数板,按白细胞计数方法进行计算.细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色(蓝色)。5.2实验材料和方法实验材料:dmem、dpbs、typsin-edta、petridish、96welldish、0.4％台盼蓝溶液、无水乙醇或95％乙醇溶液、普通显微镜、细胞计数板、移液枪、mtt、dmso5.3实验方法：5.3.1成纤维细胞培养1)将培养好的成纤维细胞用typsin-edta处理后收集，用dmem悬浮后利用血细胞计数板计数后将悬浮液稀释到细胞的浓度为5×104cells/ml备用2)将准备好的细胞悬浮液分别分株到96welldish和6welldish中培养，其中96welldish接种量为100μl，6welldish接种量为2ml。3)在37℃，5％co2的培养箱中培养24小时。5.4.样品添加1)待测样品用dmem培基稀释，稀释后的浓度分别为：1％(该浓度通过前面的mtt测试，结果为无毒)2)细胞培养24小时后，移除之前的dmem，然后用dpbs小心洗涤后3)按照顺序加入第一步准备的添加了待测样品的dmem培养基。4)在37℃，5％co2的培养箱中培养48小时。5.5细胞计数1)计数板处理用无水乙醇或95％乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。2)染色取6welldish培养的细胞，除去培养基后，利用typsin-edta消化，收集细胞后用dmem培养基悬浮。用移液枪吸取10μl0.4％台盼蓝染液和10μl细胞悬液混合均匀。从计数板边缘缓缓注入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。将计数板放在低倍镜下(10×10倍)观察计数。3)计数方法按图计算计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。4)计数的换算计完数后，换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01cm2，高为0.01cm，这样它的体积为0.0001cm3，即0.1mm3。由于1ml＝1000mm3，所以每一大方格内细胞数×10000＝细胞数/ml，故可按下式计算：细胞悬液细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10000如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。计数细胞后，计算可得到细胞悬液中细胞的浓度。以空白样为基准，计算出各个样品的细胞增殖率。5.6成纤维细胞增殖结果结果如图5，如图所示：本发明组方能够促进细胞增殖率，其将细胞增值率提高至24.79％～34.74％，相对空白样7.95％的增殖率，提升了16.84％～26.79％，具有较好的促进细胞增殖，延缓衰老。经统计学分析，实施例1～3的促进细胞增殖的效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的促进细胞增殖的效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的促进细胞增殖的效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。6酪氨酸酶活性抑制效果测试6.1试剂：0.175mol/lpbs(ph6.8),1.5mmol/l酪氨酸,2000unit/ml酪氨酸酶6.2实验样品准备：利用pbs对料体进行稀释，稀释后的浓度分别为5％，10％，50％6.3测试方法：1)96wellplate上选取4个空，按照下图表格中各个物质的添加量进行添加2)震荡充分混合后放置于37℃的培养箱中反应3)25分钟后利用酶标仪在490nm波长处测试吸光度(ab，absorbance)4.)利用以下的公式计算酪氨酸酶活性的抑制效果：6.4实验结果结果如图6，如图所示，本发明组方对酪氨酸酶抑制率为82.82％～91.29％，空白样抑制率为69.25％，说明本发明的组方具有较好的抑制酪氨酸酶活性，有效抑制黑色素生成，提亮美白皮肤。经统计学分析，实施例1～3的抑制活性显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的抑制活性与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的抑制活性也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。7dpph法自由基清除能力测定7.1测试准备(1)dpph测试液配置准确称量1mgdpph，95％乙醇定容与50ml容量瓶，超声3min使之完全溶解。量取1ml溶液测量519nm处吸光度a，a值在0.6～0.8之间可用。(2)vc标准曲线测定vc用去离子水配置成0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mmol/l五个不同浓度。小试管中加入2mldpph溶液，100ulvc溶液，400ul95％乙醇，混合摇匀，静置5min，测a值(519nm)。空白对照为100ul去离子水。作图-1浓度-吸光度标准曲线。vc清除率＝(a0-ax)/a0a0：去离子水空白对照，ax：vc吸光度(3)样品测定样品溶液100ul，照(2)中步骤检测，为避免溶液颜色影响，设置不加dpph对照组，计算吸光度为样品吸光度减去对照组吸光度。每测一个用量需要测三个平行数据。而且在每测一个用量的三个平行数据后，都要重测一次a0。测得样品吸光度、清除率、对比vc抗氧化能力和样品总抗氧化能力如表-1。7.2实验结果如图7所示，由图可知，本发明组方对自由基的清除率可达57.34％～85.46％，相对空白样38.38％的清除率，本发明组方针对自由基清除率提升了18.96％～47.08％，说明本发明组方具有较好的自由基清除率，有效降低炎症因子，酪氨酸酶，延缓细胞衰老。经统计学分析，实施例1～3的补水效果显著优于各对比例(p<0.05)，与实施例3相比，提取物用量相当的5个对照(对照样2～6)中的补水效果与实施例3存在统计学差异(p<0.01)。其中，实施例3的补水效果也显著性的优于其他各实施例，该效果存在统计学意义，p<0.05。结果说明，本申请提供的组合物的效果显著优于缺少部分提取物或者提取物各组分配比不当的样品。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12