刺激细胞水通道蛋白生成的保湿修护组合物的制作方法

本发明属于化妆品产品技术领域，具体涉及一种刺激细胞水通道蛋白生成的保湿修护组合物。

背景技术

皮肤的衰老与皮肤含水量、角质层的水合能力及屏障功能有关。水通道蛋白(aqp)是上世纪90年代发现的一类能快速转运水的膜整合蛋白。目前发现aqp在哺乳动物中有13个亚型，不同aqp亚型的分布具有组织、细胞、亚细胞特异性。皮肤上主要分布的水通道蛋白是aqp3，它属于水-甘油通道蛋白亚家族。目前发现aqp3参与多种生理、病理过程，它与尿液的浓缩、气道表面的液体平衡、肠道水的吸收均有密切关系。而在皮肤的病理生理过程中，aqp3同样可以转运水、甘油到达表皮，因此对于表皮的屏障作用、水的保存有很大的意义。有研究者发现，哺乳动物皮肤aqp3的缺失可导致皮肤干燥，角质层水合作用下降，皮肤弹性下降，皮肤屏障修复延迟,生物合成功能受损以及伤口愈合延迟。因此我们很有必要去开发一款可刺激水通道蛋白3(aqp3)生成，同时保湿修护皮肤的产品，作为我们最基础的皮肤护理。

技术实现要素：

本发明的一个目的在于提供一种刺激细胞水通道蛋白生成的保湿修护组合物，该保湿修护组合物首先通过刺激细胞水通道蛋白的生成、增加表皮的水分流通，同时增强表皮保留水分的能力，来减少透皮水分流失，使皮肤湿润、角质层角化正常，再通过添加有效的修护成分，从而达到保湿、修护，恢复表皮屏障的功效。

本发明的另一个目的在于提供所述的保湿修护组合物在制备具有保湿修护效果的化妆品中的应用。

本发明的再一个目的在于提供包含所述的保湿修护组合物的化妆品。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

一种刺激细胞水通道蛋白生成的保湿修护组合物，其特征在于，该保湿修护组合物的活性组分由水解三色堇提取物、透明质酸钠、生物糖胶-1、神经酰胺3和三肽-1铜组成。

本发明通过两个必要的因素改善人体肌肤保湿修护效果：1、表皮的水分流通(利用天然植物提取液水解三色堇提取物刺激皮肤水分通道的合成)，2、表皮保留水分的能力(通过内促进、外补充透明质酸)。同时通过保湿修护成分生物糖胶-1、神经酰胺3和三肽-1铜的协同作用，从而达到安全、有效的保湿修护效果。

所述保湿修护组合物，含有如下质量百分含量的组分：

余量为化妆品外用剂型的常用基质、去离子水、纯化水和蒸馏水中的一种或几种。

优选地，所述保湿修护组合物，含有如下质量百分含量的组分：

余量为化妆品外用剂型的常用基质、去离子水、纯化水和蒸馏水中的一种或几种。

本发明中，所述水解三色堇提取物、透明质酸钠、生物糖胶-1、神经酰胺3及三肽-1铜可为市售产品，也可按照现有技术的记载自行制备，各提取物应符合相关质量标准要求。

所述化妆品外用剂型的常用基质为本领域技术人员公知的可应用于化妆品的常用基质，为美容上可接受的，优选地，化妆品外用剂型的常用基质包括乳化剂、油脂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、多元醇、防腐剂、螯合剂、香精中的一种或多种。

作为本发明的一种优选的实施方式，所述水解三色堇提取物为市售水解三色堇提取物，更优选的，其固形物含量优选为28～42g/l；

本发明中的水解三色堇提取物是一种来自野生三色堇富含寡糖的活性成分，拉丁名是violatricolor，它通过两种调节机制，发挥对角质层水分内稳定的调节功能：1、流通：通过刺激嵌入在细胞膜脂质层内的水分流通——水通道蛋白-3的合成，来改善真皮到表皮的水循环。2、驻留：通过促进补充表皮透明质酸和受体蛋白cd44(存在于角质形成细胞表面的一种跨膜糖蛋白，是透明质酸在角质形成细胞表面的重要受体，能够将其固定在细胞外基质中，发挥生物学效应)的合成，来提高表皮水分的键合能力。因此水解三色堇提取物能够发挥对表皮的强效保湿。

作为本发明的一种优选的实施方式，所述的透明质酸钠为市售透明质酸钠纯粉末，是一种宽谱的透明质酸钠，分子量为50～3000kda，含量≥93％。

透明质酸钠为透明质酸的钠盐，是一个完整分子量宽度的透明质酸钠，因此它不是关注于某一特定分子量的功效而是关注完整分子量宽度的相互协同作用，如同我们人体天然的透明质酸一样，更高效、更安全，作用于皮肤时具有特定的细胞学过程(稳态或应激态)。皮肤因透明质酸同他们的细胞受体cd44的特殊相互作用表现出一种规律，这种规律使得细胞具有“感知”微环境的能力并通过信号传导或细胞骨架动态调节来回应外界刺激。

透明质酸分子中含有的羧基、羟基，使其在水溶液中形成分子内和分子间氢键同时还具有螺旋形空间构象，这种化学结构使其具有很强的吸水性，透明质酸可以保留比自身重500～1000倍的水分。透明质酸(ha)是一种粘多糖，可在真皮细胞间质中找到，起到绑定水分和电解调控的作用。也能促进角质形成细胞(kc)新陈代谢，并在细胞外分泌，能够促使水和养分扩散。透明质酸(ha)并不单纯充盈空间，同时也锚定受体蛋白cd44(细胞粘附分子)。透明质酸(ha)参与角质形成细胞(kc)增殖和分化，在基底层，透明质酸活化角质形成细胞(kc)和板层体的形成。ha-cd44的交互作用促进了角质形成细胞终生的持续再生，从柱状基底细胞分裂时，并中止于角质细胞扁平化。透明质酸(ha)是一个关键的水相关分子，与皮肤的防水屏障有关。

作为本发明的一种优选的实施方式，所述的生物糖胶-1为市售的生物糖胶-11.1％的线性聚多糖水溶液，是高分子(10⁶道尔顿)多糖粘性溶液。

生物糖胶-1，一种天然来源的聚合物，由玉米与大豆经过细菌发酵所获得，拥有独特的结构，富含l-岩藻糖、d-半乳糖和半乳糖醛酸的单糖结构。具有保湿成膜性，保湿效果缓慢增加，3个小时后达到其最大值，与1个小时后达到保湿最大值的透明质酸形成互补，延长保湿的时间。可促进角质细胞的分化，促进兜甲蛋白、外皮蛋白的表达，因此有重组皮肤屏障的功能。角质细胞表面上存在岩藻糖受体，而生物糖胶-1富33％的岩藻糖，含因此生物糖胶可以有效固定在细胞受体上，因此它能够参与细胞间的沟通与协同作用，所以可以起到炎症信使消除剂的作用，达到缓解发炎、过敏反应的效果。

作为本发明的一种优选的实施方式，所述的神经酰胺3为市售的神经酰胺含量47％的粉末，是一种基于崭新的固体脂质分离分解技术的水分散性神经酰胺粉末。

该成分是通过酵母发酵而生成的天然神经酰胺，安全高效，是皮肤脂质的成分，与皮肤有高亲和力。神经酰胺是健康皮肤角质层中必要的组成成分，在细胞间脂质的含量高达40-50％，填充在细胞之间间隙中，起着粘合剂作用，使皮肤内水份不能透出去，而过剩异物也不能透进来，具有屏障保护机能。在皮肤屏障功能调控中起着主导作用，是一种与保持肌肤娇嫩、柔软有重大关系物质。维持皮肤屏障功能，能明显增强角化细胞之间的粘着力，改善皮肤的干燥程度，减少皮肤的脱屑现象。

神经酰胺具有很强缔合水分子能力，它通过在角质层中形成网状结构维持皮肤水分。因此，神经酰胺具有防止皮肤水分丢失作用。神经酰胺结构中含有大量亲水性基团，对水有较好亲和作用。神经酰胺可促进表皮水合作用，增进表皮细胞凝聚力，防止皮肤干燥脱屑，使肌肤光滑有弹性；能在角质细胞中形成床板双层结构，有效防止表皮水分散发；能渗透至表皮深处，促使干性皮肤重新获得对水分保持能力，具有突出保湿效果。

作为本发明的一种优选的实施方式，所述的三肽-1铜为肽纯度>98％的蓝色至紫色粉末。

三肽-1铜为市售产品，是通过将铜离子与ghk(三肽gly-l-his-l-lys)链接而成。皮肤伤口愈合、基质更新修复、自由基清除等过程中多种酶的活性都与铜离子息息相关。铜离子无法单独透过皮肤屏障，通过与ghk链接而成的铜肽，即可将铜导入肌肤，完美发挥基活肤功效。ghk除了具有运载铜离子的功效，本身还是一种信号肽，可以刺激成纤维细胞生成胶原蛋白和粘多糖。粘多糖是人皮肤真皮的主要基质成分之一，粘多糖的亲水性极强，对保持皮肤中水分具有重要意义，所以其生理功能之一是使水分进入细胞间隙，并与蛋白质结合而形成蛋白凝胶，将细胞粘在一起，发挥正常的细胞代谢作用，起到保持细胞水分，保护细胞不受病原菌的侵害等作用。因此三肽-1铜具有抑制炎症，减少细胞外基质(ecm)损失，促进ecm生成，抗氧化，促进皮肤自我修复更新的功效。

另一方面，本发明还提供所述的保湿修护组合物在制备具有保湿修护效果的化妆品中的应用。

本发明还提供一种化妆品，包含所述的保湿修护组合物。

所述化妆品的剂型为膏霜状、乳液状、凝胶状或水剂状。

本发明的保湿修护组合物可直接施用于皮肤表面，也可以进一步用于生产化妆品再施用于皮肤表面。

在生产制备膏霜状、乳液状、凝胶状或水剂状等剂型的化妆品时，化妆品中的其他组分可以按照本领域的常规操作进行，在生产时将本发明的保湿修复组合物添加到化妆品中。

本发明具有以下优点：本发明含有能刺激水通道蛋白-3合成、促进表皮透明质酸合成的水解三色堇提取物，与皮肤的防水屏障有关的透明质酸钠，有重组皮肤屏障的舒缓功能的生物糖胶-1，维持皮肤屏障功能、改善皮肤干燥的神经酰胺3，抑制炎症、促进皮肤自我修复更新的三肽-1铜，通过五种活性成分协同作用达到刺激细胞水通道蛋白生成、保湿修护皮肤屏障的功效。

附图说明

图1是实施例7对干燥引起的细纹和起屑的抚平作用图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明公开的一种刺激细胞水通道蛋白生成的保湿修护组合物，该保湿修护组合物的活性组分由水解三色堇提取物、透明质酸钠、生物糖胶-1、神经酰胺3和三肽-1铜组成。通过各活性组分的协同增效作用，有效刺激细胞水通道蛋白生成，达到高保湿、修护皮肤屏障的极佳功效。

本发明中，水解三色堇提取物、透明质酸钠、生物糖胶-1、神经酰胺3及三肽-1铜可为市售产品，也可按照现有技术的记载自行制备，各提取物应符合相关质量标准要求。

一种保湿修护组合物，组分及其质量百分含量为：

一种保湿修护组合物，组分及其质量百分含量为：

本发明的保湿修护组合物可直接施用于皮肤表面，也可以进一步用于生产化妆品再施用于皮肤表面。

实施例1

保湿修护霜：

组成上述保湿修护霜的组分及其质量百分含量为：

油相：

水相：

乳化后低温添加(45℃)：

将油相、水相分别加热到78℃后，两相混合均质10分钟，搅拌降温，降温到45℃加入水解三色堇提取物、生物糖胶-1、10％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂(本领域常规使用防腐剂)、香精(本领域常规使用香精)，搅拌均匀，35℃放置后成白色细腻均匀的膏体。

水解三色堇提取物为市售法国茜莱博(silab)公司的水解三色堇提取物的固形物含量为28～42g/l，此处仅为列举，并非为限定。

透明质酸钠为市售意大利roelmihcps.r.l的一种宽谱的透明质酸钠粉末，分子量为50～3000kda，含量≥93％，此处仅为列举，并非为限定。生物糖胶-1为市售法国素莱碧雅(solabia)公司的为生物糖胶-11.1％的线性聚多糖水溶液，此处仅为列举，并非为限定。

神经酰胺3为市售韩国斗山(doosan)公司的ds-hydroceramide50，为神经酰胺含量47％的粉末，此处仅为列举，并非为限定。

三肽-1铜为市售深圳维琪(winkey)公司的铜肽，为肽纯度>98％的蓝色至紫色粉末，易溶于水，此处仅为列举，并非为限定。

实施例2

保湿修护乳：

组成上述保湿修护乳的组分及其质量百分含量为：

油相：

水相：

乳化后低温添加(45℃)：

将油相、水相分别加热到78℃后，两相混合均质数分钟，搅拌降温，降温到45℃加入水解三色堇提取物、生物糖胶-1、10％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂、香精，搅拌均匀，35℃放置后成白色细腻均匀的乳液。

实施例3

保湿修护凝胶

组成上述保湿修护凝胶的组分及其质量百分含量为：

上述保湿修护凝胶的制备方法，包括下列步骤：

(1)将stabylen30与pnc400、去离子水混合加热至75℃后，均质使其溶解，得均匀的凝胶基质；

(2)将丁二醇与透明质酸钠分散均均，边搅拌边加入凝胶基质中，搅拌分散均匀；

(3)搅拌降温，降温到45℃将水解三色堇提取物、生物糖胶-1、1％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂与凝胶基质混合搅拌均匀，去离子水加至全量；

(5)将上述凝胶进行检验，合格后，再进行灌装即得保湿修护凝胶。

实施例4

保湿修护水

组成上述保湿修护水的组分及其百分数含量为：

上述保湿修护水产品的制备方法，包括下列步骤：

(1)将丁二醇与透明质酸钠分散均均，边搅拌边加入75℃水中，搅拌分散均匀。

(2)搅拌降温，降温到45℃将水解三色堇提取物、生物糖胶-1、1％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂加入搅拌均匀，去离子水加至全量；

(3)将上述爽肤水进行检验，合格后，再进行灌装即得保湿修护水。

实施例5

保湿修护精华

组成上述保湿修护的组分及其百分数含量为：

上述保湿修护精华产品的制备方法，包括下列步骤：

(1)将丁二醇与汉生胶、透明质酸钠分散均均，边搅拌边加入75℃水中，搅拌分散均匀。

(2)搅拌降温，降温到45℃将水解三色堇提取物、生物糖胶-1、1％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂加入搅拌均匀，去离子水加至全量；

(3)将上述精华进行检验，合格后，再进行灌装即得保湿修护精华护肤品。

实施例6

保湿修护精华

组成上述保湿修护精华的组分及其百分数含量为：

上述保湿修护精华产品的制备方法，包括下列步骤：

(1)将丁二醇与汉生胶、透明质酸钠分散均均，边搅拌边加入75℃水中，搅拌分散均匀。

(2)搅拌降温，降温到45℃将水解三色堇提取物、生物糖胶-1、1％神经酰胺3水溶液和三肽-1铜、防腐剂加入搅拌均匀，去离子水加至全量；

(3)将上述精华进行检验，合格后，再进行灌装即得保湿修护精华护肤品。

实施例7

试用观察

采用本发明制备的保湿修护化妆品及对照样进行疗效观察

样品：实施例5

对照样：将实施例5中的三色堇提取物、透明质酸钠、生物糖胶-1、神经酰胺3和三肽-1铜去掉。

一、体外试验

1、对合成水通道蛋白-3(aqp3)的影响

对人体角质细胞培养基进行的蛋白质印迹法(基本原理是将电泳分离后的细胞或组织蛋白从凝胶转移到固相支持物上,然后用特异性抗体对相应抗原进行着色,随后通过分析着色的位置和着色深度来反映蛋白质表达情况)研究，将本发明化妆品与对照样对比，刺激水通道蛋白-3的合成达到45％，从而改善了从真皮到角质层的水循环。

2、对合成透明质酸的影响

透明质酸合成的分析：根据ha与ha健合蛋白的特定键合，用改良elisa法(酶标记免疫吸附测定法)对人体角质细胞开展研究。将本发明化妆品与对照样对比，显著提高上层培养物中透明质酸的含量达23％。

二、人体试验

1、保湿性测试：

①皮肤水分含量值(mmv)

志愿者30人，分别在左右手前臂内侧标记4×4cm2试验区域，同一手臂同时标记2个区域，区域间隔2cm。使用皮肤水分含量测试仪进行受试区域和对照区域的测量，每个区域平行测定3次。先测量各测试区域的空白值，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试样均匀涂布于试验区内。涂抹24小时、28天分别测定受试区域和空白对照区域的水分含量值。

人体检测结果表明：

使用本发明化妆品与对照样24小时后，皮肤角质层水分含量测试结果表明，本发明化妆品与对照样对比皮肤基础水分含量提高9％，88％的志愿者都观察到了这个效果。使用本发明化妆品与对照样4周后，皮肤角质层水分含量测试结果表明，本发明化妆品与对照样对比皮肤基础水分含量提高13％，60％的志愿者都观察到了这个效果。

②经表皮水分散失值(tewl)

tewl值是皮肤屏障好坏的一个重要标志，皮肤的tewl值越低，说明皮肤的屏障功能就越好，反之，则越差。

志愿者30人，分别在左右手前臂内侧标记4×4cm2试验区域，同一手臂同时标记2个区域，区域间隔2cm。使用皮肤水分散失测定仪进行受试区域和对照区域的测量，每个区域平行测定3次。先测量各测试区域的空白值，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试样均匀涂布于试验区内。涂抹24小时、28天分别测定受试区域和空白对照区域的tewl值。

人体检测结果表明：

使用本发明化妆品与对照样24小时后，tewl值测试结果表明，本发明化妆品与对照样对比tewl值减少了8.4％。使用本发明化妆品与对照样4周后，tewl值测试结果表明，本发明化妆品与对照样对比tewl值减少了13.4％，60％的志愿者都观察到了这个效果。

2、由于皮肤干燥所引起的骚痒

志愿者30人，分别使用本发明化妆品与对照样，连续使用28天后，65％的志愿者明显感觉皮肤保湿了，发痒证状明显减少了。

3、对干燥引起的细纹和起屑的抚平作用

选取30名自我报告肌肤干燥的志愿者，在前臂内侧使用本发明化妆品，通过50倍成像系统分别在使用前、使用28天后采集肌肤图片数据，直观评价本发明化妆品对干燥肌肤长期使用可以有效抚平细纹和起屑，持久养润、充盈的作用。

虽然本发明已以实施例公开如上，但其并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更改与润饰，均应属于本发明的保护范围。