本发明属于口腔护理产品技术领域，具体地，涉及微生物制剂新型发酵产品，更具体地，涉及一种改善口腔健康的有益菌组合物。
背景技术：
口腔健康是人体健康的重要组成部分，而且口腔健康会直接或间接影响全身健康，世界卫生组织(WHO)将牙齿健康确定为人体健康的十大标准之一。口腔健康是指具有良好的口腔卫生，健全的口腔功能及没有口腔疾病，而口腔卫生的重点在于控制菌斑，消除污垢和食物残渣，增强生理刺激，使口腔和牙颌系统有一个清洁健康的环境，从而发挥其生理功能，维护口腔健康。
两个全球主要的口腔疾患为：1、蛀牙(龋齿)，细菌感染导致脱矿质和破坏牙齿的硬组织；2、牙周病，疾病组合，影响一种或多种牙周组织，迄今为止最常见的是斑块诱导炎症性疾病(牙龈炎，牙周炎)。此外，还有其他常见口腔菌群相关的口腔问题，如口臭、耳鼻喉感染(咽炎/中耳炎)等。其中，龋齿是发生于牙硬组织的细菌感染性疾病，在囗腔疾病中发病率最高，产酸性和耐酸性的变形链球菌是龋病的主要致病菌。
使用牙膏、漱囗水等产品对口腔进行护理，其原理在于清除口腔中所有的微生物，对口腔进行彻底的“清洗”。而用于改善口腔环境的益生菌的机理包括：竞争粘附位点总数、竞争营养物质和生长因子，产生酸性抗微生物化产物，增强宿主免疫反应，抑制病原菌诱导的促炎细胞因子，从而可以抑制有害菌粘附和生长。
中国专利公布CN107897881A公开了一种用于改善口腔健康的益生菌组合物，该组合物中包含酵母、瑞士乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和长双歧杆菌，每克所述组合物中活菌数为50亿CFU，其中，酵母5.2亿CFU、瑞士乳杆菌26.8亿CFU、鼠李糖乳杆菌14.4亿CFU、长双歧杆菌3.6亿CFU，该发明所公开的用于改善口腔健康的益生菌组合物所选用的益生菌原料，均为食品原料，产品可直接食用，食用后，能够在完成调节口腔菌群平衡的同时，改善肠道菌群，进一步改善由于肠道健康问题引起的口臭等口腔健康问题。
中国专利公布CN102245191A公开了用于改善口腔健康的组合物和方法，该组合物包含治疗有效量的有益菌，其中所述的有益菌包括至少一种通常选自如下的细菌：唾液链球菌，罗伊乳杆菌，植物乳杆菌299或299v，唾液链球菌K12，罗伊乳杆菌ATCC55730，约氏乳酸杆菌La1，鼠李糖乳杆菌GG,嗜热链球菌NCC1561,乳酸乳球菌NCC22Il(Pelargonstrain)和乐托尔。本发明通过使用天然存在于口腔或胃肠道中的益生菌，有效抑制了低厌氧菌革兰氏阴性菌，增加了正常菌群的存在，能够保持口腔健康，并降低与口腔健康有关的吸入性肺炎、社区获得性肺炎和医院肺炎的发病率。
但是，上述发明制品或是对口腔中有害细菌的杀灭效果有限，或是功能单一，不能同时为使用者提供人体所需的其他营养或活性物质。
叶酸是一种水溶性维生素，具有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，人类如果缺叶酸可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症，对孕妇尤其重要。维生素C为抗体及胶原形成、脂肪及蛋白合成等生理过程所必须的物质，同时，维生素C还具备抗氧化、抗自由基、抑制络氨酸酶形成的作用，进而具有美白、淡斑的功效。
虽然目前市面上有一些含有叶酸和维生素C的用于改善口腔环境的产品，但是，在这些产品的制备过程中，生产者很少考虑到叶酸的稳定性和维生素C对叶酸吸收的抑制。
所以，本领域需要开发一种既能够长时间有效维持口腔健康，又能为使用者提供有益的健康保健成分(尤其是维生素C和叶酸)的口腔健康保健品。
技术实现要素：
本发明提供了一种能够有效改善口腔健康的组合物，该组合物能够有效杀灭口腔中的有害细菌，长时间保持口腔健康。
说明：本发明中所述各种组份的添加量，均是指重量份。
本发明所述叶酸的生物有效性，或称生物利用度，在药理学上是指所服用药物的剂量部分能到达体循环，是药物的一种药物动力学特性。
本发明公开了一种组合物：该组合物含有鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188。
所述鼠李糖乳杆菌R11的重量份为1-20份，唾液链球菌blis K12的重量份为1-20份，罗伊氏乳杆菌HA188的重量份为1-20份。
优选地，所述鼠李糖乳杆菌R11的重量份为1-15份，唾液链球菌blis K12的重量份为1-15份，罗伊氏乳杆菌HA188的重量份为1-15份。
更进一步优选地，所述鼠李糖乳杆菌R11的重量份为1-10份，唾液链球菌blis K12的重量份为1-10份，罗伊氏乳杆菌HA188的重量份为1-10份。
所述唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188添加的重量比为2.6-15:4；优选地，所述唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188添加的重量比为2.6-10:4；更优选地，所述唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188添加的重量比为3-8:4。
在一些优选的实施例中，所述组合物中还含有重量份为1-20的瑞士乳杆菌Lafti L10、重量份为1-20的布拉迪酵母、重量份为0.001-0.02的叶酸类化合物、重量份为0.001-1的辅酶Q10、重量份为0.001-4的维生素C、重量份为1-200的低聚果糖、重量份为1-100的低聚木糖和重量份为1-300的低聚半乳糖。
在一些更优选的实施例中，所述组合物中还含有重量份为1-10的瑞士乳杆菌Lafti L10、重量份为1-10的布拉迪酵母、重量份为0.001-0.01的叶酸类化合物、重量份为0.001-0.5辅酶Q10、重量份为0.001-3的维生素C、重量份为1-150的低聚果糖、重量份为1-50的低聚木糖、重量份为1-200的低聚半乳糖。
在一些更优选的实施例中，所述组合物中还含有重量份为1-20的瑞士乳杆菌Lafti L10、重量份为1-20的布拉迪酵母、重量份为0.001-0.02的叶酸类化合物、重量份为0.001-1的辅酶Q10、重量份为0.001-4的维生素C、重量份为1-200的低聚果糖、重量份为1-100的低聚木糖、重量份为1-300的低聚半乳糖，且低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11的重量比为20-100:4。
优选的，所述叶酸类化合物为叶酸、甲酰四氢叶酸、(6S)-5-甲基四氢叶酸、L-甲基叶酸、叶酸可药用盐、叶酸或叶酸可药用盐的活性代谢产物和可在体内代谢和/或生成叶酸的物质中的一种或多种。
一种具有改善口腔健康作用的口服制剂，包括上述任意一项技术方案所述的组合物和辅料。
优选的，所述口服制剂为保健品，包括上述任意一项技术方案所述的组合物和保健品领域可接受的辅料。
优选的，所述口服制剂为药品，包括上述任意一项技术方案所述的组合物和药品领域可接受的辅料。
优选的，所述口服制剂为食品，包括上述任意一项技术方案所述的组合物和食品领域可接受的辅料。
优选的，所述口服制剂为口服液体制剂或口服固体制剂。
优选的，所述口服固体制剂包括上述任意一项技术方案所述的组合物和常规使用的辅料，所述辅料选自二氧化硅、硅酸钙、磷酸氢钙中的一种或多种。
本发明还公开了该组合物的制备方法：
(1)将配方量的低聚果糖、低聚木糖和低聚半乳糖分别过筛，备用；
(2)从步骤(1)所得产品中称取和配方量维生素C、叶酸类化合物、辅酶Q10三者的重量和相等的低聚果糖，并将其和维生素C、叶酸类化合物、辅酶Q10混合均匀，得到第一预混粉；
(3)将步骤(2)所得的第一预混粉和等重量的步骤(1)所得的低聚果糖进行混合，得到第二预混粉；
(4)将步骤(3)所得的第二预混粉和其5倍重量的步骤(1)所得的低聚果糖混合，得到复合粉1；
(5)将配方量的鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12、罗伊氏乳杆菌HA188、瑞士乳杆菌Lafti L10、布拉迪酵母、配制复合粉1之后剩余的步骤(1)中的低聚果糖、步骤(1)中的低聚木糖、步骤(1)中的低聚半乳糖和步骤(4)制备的复合粉1混合均匀，制得组合物产品。
本发明还公开了该组合物在制备改善口腔健康产品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明通过将鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12、罗伊氏乳杆菌HA188以特定比例进行组合，使各种物质之间发挥了相互增效的作用，得到一种改善口腔健康效果较好的产品。
(2)本发明制备的组合物，既能通过有益菌改善口腔健康，又能为使用者补充叶酸。叶酸作为一种水溶性B族维生素，是人体许多生理过程中必不可少的物质，但人类不能靠自身合成叶酸，因此在组合物中添加叶酸能够有效促进人体健康。
(3)叶酸对光非常敏感，在紫外光照射下易降解，失去活性，本发明出乎意料的发现，通过严格控制罗伊氏乳杆菌HA188与唾液链球菌blis K12的用量比，能够减弱组合物中叶酸的降解。
(4)根据公知常识可知，维生素C与叶酸同服时，维生素C可抑制叶酸在胃肠中的吸收并加速叶酸的排出。但是，本发明通过在组合物中同时添加低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11，并控制两者的比例，减弱了维生素C对叶酸吸收的抑制，提高叶酸的生物有效性，能够同时给使用者补充维生素C和叶酸。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
基础实施例
一种组合物：所述组合物含有鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188，其中，鼠李糖乳杆菌R11的重量份为1-20份，唾液链球菌blis K12的重量份为1-20份，罗伊氏乳杆菌HA188的重量份为1-20份。
在一些优选的实施例中，所述组合物中还含有重量份为1-20的瑞士乳杆菌Lafti L10、重量份为1-20的布拉迪酵母、重量份为0.001-0.02的叶酸、重量份为0.001-1的辅酶Q10、重量份为0.001-4的维生素C、重量份为1-200的低聚果糖、重量份为1-100的低聚木糖和重量份为1-300的低聚半乳糖，且低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11的重量比为20-100:4。
所述组合物的制备方法：
(1)将配方量的低聚果糖、低聚木糖和低聚半乳糖分别过筛，备用；
(2)从步骤(1)所得产品中称取和配方量维生素C、叶酸、辅酶Q10三者的重量和相等的低聚果糖，并将其和维生素C、叶酸、辅酶Q10混合均匀，得到第一预混粉；
(3)将步骤(2)所得的第一预混粉和等重量的步骤(1)所得的低聚果糖进行混合，得到第二预混粉；
(4)将步骤(3)所得的第二预混粉和其5倍重量的步骤(1)所得的低聚果糖混合，得到复合粉1；
(5)将配方量的鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12、罗伊氏乳杆菌HA188、瑞士乳杆菌Lafti L10、布拉迪酵母、配制复合粉1之后剩余的步骤(1)中的低聚果糖、步骤(1)中的低聚木糖、步骤(1)中的低聚半乳糖和步骤(4)制备的复合粉1混合均匀，制得组合物产品。
所述混合物在制备改善口腔健康的口服制剂中的应用。
通过调整基础实施例中鼠李糖乳杆菌R11的添加量、唾液链球菌blis K12的添加量、罗伊氏乳杆菌的添加量、唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188添加的重量比、叶酸的添加量、维生素C的添加量、低聚果糖的添加量、低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11添加的重量比得到了表1中实施例1-4、表3中的实施例5-11、表1中的对比例1-2和表4中的对比例3-5。
叶酸残留率的计算：在中心波长为365nm，功率为4W的紫外灯下照射240min，采用高效液相色谱法测定叶酸的含量，并计算叶酸残留率，其中叶酸残留率的计算公式如下:
叶酸的生物有效性检测方法：使用13C稳定性同位素标记组合物中的叶酸，让具有相同γ-谷氨基羧肽酶水解基因多型性的实验对象每天口服6g实验样品，并用UPLC-MS-MS方法测定实验样品中和实验对象服用实验样品1h后血浆中13C稳定性同位素标记的叶酸的含量，其中叶酸的生物有效性的计算公式如下：
对口腔健康改善效果的测定方法：选择健康的学龄儿童(7-14岁)分为对照1-5组、测试1-11组，对照1-5组服用对比例1-5所述的产品、测试1-11组服用实施例1-11所述的产品，其中每组均为50人。每日午饭后给予6g上述的产品，加水调为液体，所有人将调和后的液体倒入口中，漱口1min，吞下液体，2周后，对受试者口腔中变形链球菌的情况进行分析，统计结果如表2和表5所示。
结合表1中实施例1-4和比例1-2以及表2中的测试结果可知，服用实施例1-4所述产品的测试组的口腔改善效果明显优于服用对比例1-2所述产品的对照组的口腔改善效果。其中，对比例1(对照1组)中没有添加鼠李糖乳杆菌R11，对比例2(对照2组)中只添加了鼠李糖乳杆菌R11，而实施1-4组均添加了鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188，也就是说，同时添加鼠李糖乳杆菌R11、唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188能够使各个组分之间发挥正向相互作用，明显提高组合物的口腔保健功效。
表1
表2
将表3实施例5-11中的实验数据和表4对比例3-4的实验数据进行比较，可以发现实施例5-11中叶酸的残留率均明显高于对比例3-4中叶酸的残留率，进一步将实施例8和对比例3-4的实验数据进行比较：实施例8和对比例3-4的区别仅在于唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188添加量的不同，由此可见是唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188的添加量影响了叶酸的残留率，在其他条件符合本申请的要求，唾液链球菌blis K12或罗伊氏乳杆菌HA188的添加量不符合本申请的要求时，组合物中叶酸的稳定性明显降低。
表3实施例6-8中叶酸的残留率约为12％，而实施例5和实施例9-11中叶酸的残留率高达24％。将实施例8和实施例5进行比较，可以发现，在其他量保持不变的情况下，调整唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188的重量比能够明显提高组合物中叶酸的残留率。进一步观察实施例5-11中唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188的重量比可以发现，将唾液链球菌blis K12和罗伊氏乳杆菌HA188的重量比控制在2.6-15:4的范围内时，能明显提高组合物中叶酸的残留率。
将表3实施例5-11的实验数据和表4中对比例5的实验数据进行比较可以发现，实施例中叶酸的生物有效性明显高于对比例5中叶酸的生物有效性，进一步将实施例8和对比例5的实验数据进行比较：实施例8和对比例5的区别仅在于低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11添加量的不同，由此可见是低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11添加量影响了叶酸的生物有效性，在其他条件符合本申请的要求，低聚果糖或鼠李糖乳杆菌R11的添加量不符合本申请的要求时，组合物中叶酸的生物有效性明显降低。
表3实施例6和实施9中叶酸的生物有效性明显低于实施5、实施例7-8和实施例10-11中叶酸的生物有效性。将实施例5和实施例9进行比较可以发现，在其他量相同的情况下，通过调整低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11的重量比能够明显提高组合物中叶酸的生物有效性。进一步观察实施例5-11中低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11的重量比，可以发现，只有将低聚果糖和鼠李糖乳杆菌R11的重量比控制在20-100:4的范围内时，才能明显提高组合物中叶酸的生物有效性。
表3
表4
表5