本发明涉及一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法。
背景技术：
白鲜（dictamnusdasycarpusturcz.）隶属于芸香科（rutaceae）白鲜属（dictamnusl.），为多年生的草本植物，植物体具有浓烈的特殊香味，主要分布于欧洲和亚洲部分地区。该属全世界约5种，中国植物志记载1种。据历代本草及《中国药典》2010版一部收载记录，中药白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜的干燥根皮，是中国常用中药，又名北鲜皮、野花椒根皮、臭根皮等。现代药理学研究表明，中药白鲜皮具有清热燥湿、祛风止痒以及解毒等功效，用以治疗黄水淋漓、湿疹、风湿热痹、疥癣疮癞、黄疸尿赤等症，从而引起广泛关注。
目前，从白鲜根皮以及地上部分已分离鉴定出多种化学成分，包括挥发油类、生物碱类、柠檬苦素类、多糖化合物以及香豆素、黄酮类、甾体类等成分。白鲜皮中所含的生物碱为呋喃喹啉类生物碱，主要有白鲜碱、茵芋碱、葫芦巴碱、胆碱、γ-崖椒碱、异斑佛林草碱、7,8-dimethoxymyrtopsine、o-ethylnor-γ-fagarine、platydesmine、o-ethylnordictamine、o-ethylnorskimmianin、7,8-dimethoxyplatydesmine等，其中白鲜碱为白鲜皮的指标成分之一。此外，柠檬苦素类化合物是白鲜属植物中分布最为广泛的一类化合物，为白鲜皮中一大类重要活性成分。
白鲜植物体挥发油类物质如倍半萜类化合物等具有抗肿瘤增生及细胞毒性活性，其对6种肿瘤细胞株的生长具有明显的抑制作用，如人类乳房肿瘤细胞株（mcf-7，zr-75-30和mda-mb-435s）、人类肝脏癌细胞株（bel-7402和hepg2）以及人类肾上腺细胞细胞株（achn）。另外，白鲜皮中挥发油类还具有强烈的抑制耐甲氧西林金葡菌及金黄色葡萄球菌atcc25923的活性。生物碱具有强心、抗炎、收缩血管平滑肌、抗病原微生物等作用。其中，白鲜碱为其重要活性成分，具有抗菌、抗病毒和皮肤湿疹、皮肤瘙痒和体外抗癌活性等多种生物活性。白鲜皮中的柠檬苦素类化合物梣酮具有体外抗癌活性，并可作为一种新型的肝病治疗药物，具有良好的保肝降酶和抑制肝纤维化等作用。药理实验表明，白鲜皮粗多糖能明显增加正常小鼠胸腺和脾脏的重量，提高网状内皮系统吞噬功能，具有抗疲劳、耐缺氧、提高机体抗应激能力，能显著促进小鼠胆汁分泌，加速肝内毒物排泄，从而保护肝脏。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法。
本发明通过下面技术方案实现：
一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法，包括如下步骤：将白鲜的干燥根皮粉碎，先用体积分数为85-95%乙醇浸泡2-4d，再于60-70℃热回流提取1-3次，每次80-100min，合并提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；将浸膏以适量水溶解后用大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、体积分数10%、35%、55%、85%、95%的乙醇梯度洗脱，收集85%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、45:1、22:1、5:1的氯仿-甲醇洗脱，收集22:1洗脱部分，浓缩即得。
优选地，所述的制备方法中，用体积分数为90%乙醇浸泡3d。
优选地，所述的制备方法中，于65℃热回流提取。
优选地，所述的制备方法中，热回流提取2次。
优选地，所述的制备方法中，每次90min。
优选地，所述的制备方法中，1kg白鲜根皮使用11-13l溶剂进行提取。
优选地，所述的制备方法中，将浸膏以适量水溶解后先使用棉花过滤再用大孔吸附树脂柱色谱分离。
优选地，所述的制备方法中，1g浸膏用7-9ml水溶解。
优选地，所述的制备方法中，所述大孔吸附树脂柱为ab-8型。
本发明技术效果：
本发明采用浸提和热回流结合的方法，可全面、有效的提取出白鲜根皮中具有抗肿瘤作用的成分，可以作为白鲜的有效部位应用于药品制备。
具体实施方式
下面结合实施例具体介绍本发明的实质性内容。
实施例1
一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法，包括如下步骤：将白鲜的干燥根皮粉碎，先用体积分数为90%乙醇浸泡3d，再于65℃热回流提取2次，每次90min，合并提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；将浸膏以适量水溶解后先使用棉花过滤再用ab-8型大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、体积分数10%、35%、55%、85%、95%的乙醇梯度洗脱，收集85%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、45:1、22:1、5:1的氯仿-甲醇洗脱，收集22:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg白鲜根皮使用12l溶剂进行提取，1g浸膏用8ml水溶解。
实施例2
一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法，包括如下步骤：将白鲜的干燥根皮粉碎，先用体积分数为85%乙醇浸泡2d，再于60℃热回流提取1次，每次80min，合并提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；将浸膏以适量水溶解后先使用棉花过滤再用ab-8型大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、体积分数10%、35%、55%、85%、95%的乙醇梯度洗脱，收集85%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、45:1、22:1、5:1的氯仿-甲醇洗脱，收集22:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg白鲜根皮使用11l溶剂进行提取，1g浸膏用7ml水溶解。
实施例3
一种具有抗肿瘤作用的白鲜提取物的制备方法，包括如下步骤：将白鲜的干燥根皮粉碎，先用体积分数为95%乙醇浸泡4d，再于70℃热回流提取3次，每次100min，合并提取液，提取液减压浓缩得到浸膏；将浸膏以适量水溶解后先使用棉花过滤再用ab-8型大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、体积分数10%、35%、55%、85%、95%的乙醇梯度洗脱，收集85%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、45:1、22:1、5:1的氯仿-甲醇洗脱，收集22:1洗脱部分，浓缩即得。
其中，1kg白鲜根皮使用13l溶剂进行提取，1g浸膏用9ml水溶解。
本发明采用浸提和热回流结合的方法，可全面、有效的提取出白鲜根皮中具有抗肿瘤作用的成分，可以作为白鲜的有效部位应用于药品制备。