本发明属于动物医学中兽药创制领域，具体来说是一种黄芩黄酮粗提物在制备兽药中的应用。
背景技术：
随着社会不断发展，消费者对食品的安全以及对环保意识在逐渐增强，目前我们所食用的动物性食品所残留的兽药问题以及兽药对自然环境的污染问题越来越受到重视。寻找安全、有效的代替抗生素防治养殖动物疾病的药物，显得具有重要意义。近年来，中草药凭借自身作用广泛以及毒副作用较低，而且不易产生耐药性的特点，在畜禽养殖行业中受到了大众的关注。
黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，为常用中药，含有多糖、黄酮、挥发油等多种成分，具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗肿瘤、阻止钙离子通道、抑制醛糖还原酶、抗病毒、抗过敏等多种药理作用，对免疫、心脑血管、消化、神经等系统均有保护作用。在中医临床上主要用于湿温、暑温胸闷呕恶、湿热痞满、泻痢、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、痈肿疮毒等病症。目前黄芩在动物治疗中的应用较少。
黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮结构的植物次级代谢产物，是一类广泛存在于植物中的活性物质，在医学上具有抗氧化、抗肿瘤、抗心血管病以及抗炎症等功能，具有广阔的应用前景。目前黄酮类物质在动物生产中的应用较少。
植物黄芩中含有大量黄酮类物质，可作为一种兽药的原料资源，对中兽药的发展和黄芩进一步的开发利用有很大帮助。
免疫细胞产生的细胞因子和免疫球蛋白是免疫细胞相互作用的重要信号及物质基础，在机体细胞免疫和体液免疫调控中发挥重要作用。免疫细胞种类多，分布广泛。血液中的成熟免疫细胞俗称白细胞，主要由单个核细胞构成，包括单核细胞、淋巴细胞和粒细胞。淋巴细胞包括t、b淋巴细胞，是最主要的免疫细胞，t淋巴细胞参与细胞免疫，b淋巴细胞参与体液免疫。
环磷酰胺常用于抗肿瘤的治疗，其最大的副作用就是免疫抑制，尤其是对体液免疫的抑制，所以，环磷酰胺常用于动物免疫抑制模型的建立。
技术实现要素：
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本发明目的在于提供一种黄芩的黄酮粗提物在制备兽药中增强动物机体免疫功能方面的应用，为兽药开发提供新的原料资源。
本发明通过如下技术方案予以实现：一种黄芩黄酮粗提物在制备兽药中的应用，所述黄芩黄酮粗提物用于增强动物机体免疫功能的兽药原料，所述黄芩黄酮粗提物从黄芩植物中提取得到，添加到兽药中的药物浓度为1.25~2.5mg/ml。
其中，所述黄芩黄酮粗提物通过如下步骤制备而成：
（1）将晒干的黄芩根茎粉碎后过40目筛，得到黄芩粉；
（2）取黄芩粉，按料液比1:60加60%乙醇浸泡，静置过夜，超声15min，70℃水浴锅水浴3小时；
（3）用真空泵抽滤除去药渣，再经减压旋转蒸发仪挥去乙醇，放70℃恒温干燥箱干燥，得到纯度为2.6%的黄芩黄酮粗提物，提取率为48%。
上述方案中，所述黄芩黄酮粗提物在猪淋巴细胞转化试验中显示具有提高机体免疫力的效果。
上述方案中，所述黄芩黄酮粗提物在提高大鼠免疫力检测实验中体现出增强动物机体免疫功能的效果。
上述方案中，所述黄芩黄酮粗提物的用途之一是作为一种中兽药原料，用于增强动物机体免疫功能。
本发明的有益效果是：
1.黄芩中黄酮粗提物的提取工艺简单，提取条件温和，所得黄酮粗提物的活性强。
2.猪淋巴细胞转化实验和提高大鼠免疫力检测实验显示所述的黄芩黄酮粗提物具有显著增强动物机体免疫功能的效果，开发成兽药使用安全方便，拓展中药黄芩的用途。
3.黄芩黄酮粗提物具有原料来源广、提高免疫力显著、药用安全、绿色等优点。
附图说明
图1为黄岑黄酮粗提物对大鼠wbc的影响。
图2为黄岑黄酮粗提物对大鼠gran的影响。
图3为黄芩黄酮粗提物对大鼠lym的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例中的“药物”与黄芩黄酮粗提物为同一所指。
实施例1
（1）将晒干的黄芩根茎粉碎后过40目筛，得到黄芩粉；
（2）取10g黄芩粉，加入600ml含量为60%的乙醇浸泡，静置过夜，超声15min，70℃水浴锅水浴3小时；
（3）用真空泵抽滤除去药渣，再经减压旋转蒸发仪挥去乙醇，放70℃恒温干燥箱干燥，得到4.8g纯度含量为26%的黄芩黄酮粗提物。
实施例2
黄芩黄酮粗提物对猪淋巴细胞转化实验
（1）无菌采集猪前腔静脉血20ml，装进含有肝素钠的抗凝管中；
（2）将抗凝血与稀释液按1:1进行稀释，将稀释液与淋巴细胞分离液按1:2的比例混匀分装到高压灭菌的离心管中，水平离心机1850r/min，30min进行离心；
（3）吸取中间白色絮状物的淋巴细胞层，置于干净的高压灭菌离心管中，加入清洗液混匀后1500r/min，10min离心；弃掉液体，加入1ml红细胞裂解液吹打均匀，静置3min，加入清洗液配平后1500r/min，10min离心；弃掉液体；
（4）完全培养基配制：1640培养基:胎牛血清:双抗比例为89%:10%:1%；
（5）取450μl淋巴细胞悬液到小离心管中，加入50μl台盼蓝染色计数，将细胞悬液稀释至2×105个，置于二氧化碳培养箱进行培养；
（6）将实施例1所得黄芩黄酮粗提物用完全培养基进行溶解，用微孔滤膜进行过滤，配制不同浓度梯度的药物；
（7）取96孔板，按不同药物梯度进行加样，每一浓度梯度为4的重复，对照孔设4个重复，每孔100μl；
（8）刀豆蛋白a（cona）实验：分为无细胞组，加含有20%cona的完全培养基100μl；有细胞组，加含有20%cona的细胞悬液100μl；
（9）无刀豆蛋白a（cona）实验：分为无细胞组，加入完全培养基100μl；有细胞组，加淋巴细胞细胞悬液100μl；
（10）置于二氧化碳培养箱进行培养43h。避光加5%的mtt溶液每孔20μl，二氧化碳培养箱培养4h，避光加二甲亚砜每孔100μl。紫外分光光度计570nm处测定od值；
（11）计算：转化率=（od实验组-od对照组）/od对照组×100%；结果大于1表示药物有免疫增强效果。
（12）结果：在药物浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml时，cona黄芩黄酮粗提物对应的转化率为：0.038、1.507、1.317。结果表明实施例1所得黄芩黄酮粗提物在1.25~5mg/ml的浓度条件下具有提高机体免疫力的效果。
实施例3
提高大鼠免疫力检测实验
实验第0天，将21只实验大白鼠分为黄芩组、环磷酰胺对照组、空白对照组，每个组各7只，分别采集每组老鼠血液，开展白细胞（wbc）、中性粒细胞（gran）、淋巴细胞（lym）测定后，除空白对照外，均注射环磷酰胺50mg/kg，1次/天，连用3天。第7天采集样品分别测定各组wbc、gran、lym指标，采样后当天黄芩组灌胃黄芩黄酮粗提物200mg/kg，其他组灌胃等量生理盐水，1次/天，连用28天，结果如图1-3所示，分别示出wbc、gran和lym的变化情况。
由以上结果可见黄芩组和环磷酰胺对照组3个免疫指标均呈现先下降后上升的趋势，0-7天下降，7-35天上升。黄芩组第7-14天，上升趋势明显，超过空白对照组，0天与第7天比较差异显著（p<0.05）、第7天与第14天比较差异极显著(p<0.01)。药物环磷酰胺对照组第7-35天呈现逐步上升的趋势，均没有超过空白对照组，0天与第7天比较差异显著（p<0.05）。到第28天各组的指标均趋于空白对照组，机体已恢复正常。可见在大鼠免疫抑制后灌胃黄芩黄酮粗提取，能快速激活体内的免疫系统，调节机体免疫功能。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由权利要求书及其等效物界定。