一种减脂黑蒜萃取物浓缩汁及其制备方法与应用与流程

本发明涉及药品和食品领域,尤其涉及一种黑蒜萃取物及其制备方法与用途。

背景技术

肥胖症是遗传因素与环境因素共同作用所导致的营养代谢障碍性疾病，主要表现出机体能量摄入大于消耗的能量平衡状态.世界卫生组织将肥胖定义为一种危及人体健康的体内堆积脂肪过多或分布异常的疾病。肥胖是一种慢性的持续状态,以身体脂肪过多为特点.它是慢性疾病发生的主要诱因，可以诱发与心血管疾病相关的多种代谢功能异常，会增加2型糖尿病、冠心病、中风、充血性心力衰竭、高血压、脂质异常血症、睡眠时呼吸暂停综合症及某些癌症（如卵巢癌、胸腺癌和结肠癌）等的发病率和死亡率。而目前的减肥产品，大多药效不佳或者有副作用，所以，我们需要一些健康的减肥产品。

黑蒜是用新鲜的生蒜为原料，不加任何添加成分，经过清洗、酶化、熟化、干燥等过程加工而成的一种新型大蒜制品，是一种新型的健康食材。黑蒜最早始于21世纪初期的日本青森县。历经了国内外学者和企业家近10年的不懈努力，迄今黑蒜已成为风靡世界的具有多种保健效果的新型食品。与生大蒜相比较，黑蒜具有如下主要特点：（1）口感变化：经过发酵的黑蒜，口感发生了巨大的变化，由辛辣生脆变为酸甜绵软，并除去了令人讨厌的气味和刺激性。（2）营养变化：实验表明，经发酵的黑蒜水分降低、生物多酚提高7-10倍、蛋白质及游离的氨基酸显著提高，是大蒜的1.5倍、可溶性果糖提高60倍、大蒜的主要功能成分蒜氨酸基本保持不变。（3）功能变化：实验表明，经发酵的黑蒜具有强抗氧化性、延缓衰老、预防癌症、强力杀菌、降低血糖、降血脂、保肝、预防心脑疾病等功效，但是鲜有人报道它的减肥功效。酚类化合物，作为植物性功能成分的重要成员，通过体内、体外大量研究表明它具有一定的降脂减肥作用。而黑蒜所含的多酚类物质含量比普通大蒜高出5倍以上，多酚含量丰富，理论上说应该具有一定的降脂减肥功效。

技术实现要素：

本发明的目的之一是提供一种黑蒜萃取物浓缩汁及其制备方法。目的之二是提供这种黑蒜萃取物浓缩汁在减肥药品和保健品中的应用。

本发明技术方案如下。

一种减脂黑蒜萃取物浓缩汁的制备方法，通过以下制备方法获得：将干燥后的黑蒜蒜瓣，用乙醇和水的混合物进行萃取，超声，离心取上清液得到初萃取物；将沉淀中再加入乙醇和水的混合物进行萃取，超声，离心取上清液得到次萃取物；合并两次的萃取物，用旋转蒸发仪去除残留酒精；最后再真空干燥、冷冻干燥，制成黑酸萃取物浓缩汁。

上述方法中，乙醇和水的混合物体积比例为1:1-5，黑蒜蒜瓣与乙醇和水的混合物的料液体积比为1:10-20，超声时间为30-60min，离心转速为2000-6000r/min，旋转蒸发仪设置的温度为30-100℃，转速为20-150r/min。

一种减脂黑蒜萃取物浓缩汁的制备方法，具体步骤如下：

（1）将黑蒜蒜瓣放入干燥箱干燥2-5h，然后用乙醇和水的混合物进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30-60min，离心取上清液得到初萃取物；所述乙醇和水的混合物体积比比例为1:1-5，黑蒜蒜瓣与乙醇和水的混合物的料液体积比为1:10-20；离心转速为2000-6000r/min；

（2）将步骤（1）中离心后的沉淀中再加入乙醇和水的混合物进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30-60min，离心取上清液得到次萃取物；所述沉淀与混合物体积比为1:1-5；

（3）合并两次的萃取物，用旋转蒸发仪去除残留酒精；最后再真空干燥、冷冻干燥，制成黑酸萃取物浓缩汁。

上述方法中，步骤（3）中，旋转蒸发仪设置的温度为30-100℃，转速为20-150r/min。

本发明用不同极性物质溶剂进行萃取，用以提取出可水溶性和脂溶性的物质，具有主要的减脂作用。依照前述步骤萃取的黑蒜萃取物,即溶解于酒精和水中的初萃取物和次萃取物，应用在减肥药物或者保健食品中。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

1、所用的黑蒜为黑蒜是用新鲜的生蒜为原料，不加任何添加化学成分，对人体不会产生不良副作用，且其生物活性增强了。

2、本发明萃取溶剂选择酒精和水，能够将水溶性和脂溶性的活性成分全部都萃取出来，而且酒精成本低易挥发，不会因有机化学试剂的残留从而影响食用安全性。

3、本发明采用的黑蒜浓缩汁制备方法，科学有效，简单易行，具有可重复性和扩大生产性。

4、本发明所制备的黑蒜浓缩汁，能够充分萃取出黑蒜中的有效活性成分，具有很好的减脂功能，可以作为功能性减肥产品。

5、本发明采用中药减肥的原理，以一种温和，无毒副作用，整体调节的方式，让身体处于一个自我调节的平衡稳态，从而避免了其他减肥药物造成的代谢紊乱的情况。

附图说明

图1为黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞的油红o染色图；

图2为不同浓度黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞的上清液中甘油含量图；

图3为不同浓度黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞中甘油三酯含量图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步地具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

实施例1

一、黑蒜萃取物的制备

1、将黑蒜蒜瓣放入干燥箱干燥2h，用乙醇和水的混合物进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30min，离心取上清液得到初萃取物，其中乙醇和水的混合物体积比为1:1，黑蒜蒜瓣与乙醇和水的混合物的料液体积比为1:10，离心转速为4000r/min，。

2、将步骤（1）中离心后的沉淀中再加入乙醇和水的混合物（体积比为1:1）进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30min，离心取上清液得到次萃取物；

3、合并两次的萃取物，用旋转蒸发仪去除残留酒精；最后再真空干燥、冷冻干燥，制成黑酸萃取物浓缩汁。其中旋转蒸发仪设置的温度为40℃，转速为80r/min。

二、体外构建成熟脂肪细胞模型

小鼠前脂肪细胞3t3-l1生长至完全汇合后开始计时，接触抑制2d即诱导分化0d开始。诱导分化0d起加入诱导分化培养基ⅰ，2d后更换新的诱导分化培养基ⅰ，继续培养2d后换成诱导分化培养基ⅱ，2d后更换新的诱导分化培养基ⅱ，继续培养2d，完成诱导分化过程，该方法称之为“鸡尾酒诱导法”。其中诱导分化培养基ⅰ的成分：高糖型dmem培养基含10%胎牛血清、100u/ml青霉素和100mg/l链霉素混合液，人胰岛素10mg/l，ibmx0.5mmol/l，dex1.0μmol/l，吲哚美辛0.1mmol/l。诱导分化培养基ⅱ，成分：高糖型dmem培养基含10%胎牛血清、100u/ml青霉素和100mg/l链霉素混合液，人胰岛素10mg/l。

三、黑蒜萃取物对成熟脂肪细胞的减脂作用

将黑蒜萃取物，制备成不同的浓度（0.625-10mg/ml），将其加入诱导成熟后的脂肪细胞，作用24h后，分别进行油红o染色、细胞内甘油三酯浓度的测定和培养基上清液中甘油浓度的测定，以此来判断不同浓度黑蒜萃取物对于脂肪积聚和分解的作用。

图1为黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞的油红o染色图（左边为加黑蒜萃取物前的图片，右边为加黑蒜萃取物后的图片）。先将的3t3-l1前脂肪细胞用“鸡尾酒”法诱导为成熟的脂肪细胞，再加入黑蒜萃取物溶液共同孵育24h，最后进行油红o染色。由图中可以看出，加入黑蒜萃取物溶液后，可以明显抑制脂肪细胞中甘油三酯的堆积，说明黑蒜萃取物溶液具有减脂的作用。

图2为不同浓度黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞的上清液中甘油含量图（甘油三酯分解情况）。先将的3t3-l1前脂肪细胞用“鸡尾酒”法诱导为成熟的脂肪细胞，再加入不同浓度黑蒜萃取物溶液共同孵育24h，然后取上清液，用甘油试剂盒检测上清液中甘油的含量，从而间接检测甘油三酯的分解情况。由图中可以看出，黑蒜萃取物浓度越大，上清液中甘油含量越高，且具有显著性，这说明黑蒜萃取物可以促进甘油三酯的分解，而且该效果具有浓度依赖性。

图3为不同浓度黑蒜萃取物对诱导成熟的3t3-l1脂肪细胞中甘油三酯含量图（甘油三酯积聚情况）。先将的3t3-l1前脂肪细胞用“鸡尾酒”法诱导为成熟的脂肪细胞，再加入不同浓度黑蒜萃取物溶液共同孵育24h，然后将细胞消化下来，用甘油三酯试剂盒检测细胞中甘油三酯的含量。由图可知，黑蒜萃取物浓度越大，细胞中甘油三酯含量越少，且具有显著性，这说明黑蒜萃取物可以有效减少甘油三酯在体内的积聚，而且该效果也成浓度依赖性，这与上清液甘油检测的结果一致。

实施例2

1、将黑蒜蒜瓣放入干燥箱干燥3h，用乙醇和水的混合物进行萃取，将浸提液放入超声器中超声40min，离心取上清液得到初萃取物，其中乙醇和水的混合物体积比为1:1.5，黑蒜蒜瓣与乙醇和水的混合物的料液体积比为1:20，离心转速为4000r/min，。

2、将步骤（1）中离心后的沉淀中再加入乙醇和水的混合物（体积比为1:1.5）进行萃取，将浸提液放入超声器中超声40min，离心取上清液得到次萃取物；

3、合并两次的萃取物，用旋转蒸发仪去除残留酒精；最后再真空干燥、冷冻干燥，制成黑酸萃取物浓缩汁。其中旋转蒸发仪设置的温度为40℃，转速为100r/min。

实施例3

1、将黑蒜蒜瓣放入干燥箱干燥5h，用乙醇和水的混合物进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30min，离心取上清液得到初萃取物，其中乙醇和水的混合物体积比为1:1，黑蒜蒜瓣与乙醇和水的混合物的料液体积比为1:20，离心转速为4000r/min，。

2、将步骤（1）中离心后的沉淀中再加入乙醇和水的混合物（体积比为1:1）进行萃取，将浸提液放入超声器中超声30min，离心取上清液得到次萃取物；

3、合并两次的萃取物，用旋转蒸发仪去除残留酒精；最后再真空干燥、冷冻干燥，制成黑酸萃取物浓缩汁。其中旋转蒸发仪设置的温度为50℃，转速为120r/min。

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。