本发明涉及口腔护理
技术领域：
，尤其是涉及一种口腔护理组合物及其在抑制牙龈出血上的应用。
背景技术：
：牙龈出血为常见的口腔问题，是牙周问题的征兆，常见原因是牙龈的慢性炎症：牙龈受到牙菌斑细菌感染及局部牙石刺激后，血管扩张，组织充血，牙龈质地变脆，引起牙龈软组织的炎症反应，稍受外力作用后即会出血。如果放任不管，牙龈炎会慢慢发展成牙周炎，牙根周围的牙槽骨会逐渐破坏，牙齿失去了支撑，慢慢松动移位乃至脱落，同时还会引发其他疾病。第四次全国口腔流行病学调查报告显示，我国35-44岁居民，牙龈出血的检出率高达87.4％，相比10年前，牙龈出血检出率上升了10.1％。中年人口腔或者牙周的健康存在很多问题，如果继续不重视牙周健康，将带动全身一系列健康问题，事实证明，在临床诊断中经常发现心血管病人或多或少有口腔疾病。口腔疾病已成为心脏疾病的一个危险诱因，口腔中的链球菌和牙周病原体可以导致动脉粥样硬化和心脏病的发作，由细菌感染引起的牙周病与周围血管疾病危险性增加有关，严重的牙龈疾病会增加罹患中风和心血管疾病风险。因此牙龈出血不容忽视。现有的口腔护理产品，多采用抑菌技术来抑制导致牙龈炎症的致病因素牙菌斑以间接发挥减少牙龈出血的效果。例如，目前市场上出现的一些产品，如云南白药，oral-b等，该类产品是用凝血剂氨甲环酸用于口腔护理产品，直接发挥减轻牙龈出血效果，但这类赖氨酸衍生物的止血剂在各国化妆品法规均有不同比例的用量限定，同时这类止血剂的用途存在潜在的血栓栓塞风险。因此，寻找一种可以抑制牙龈出血的天然，安全，优效的替代性口腔护理组合物是十分有价值的。积雪草(学名：centellaasiatica(l.)urban)具有悠久的应用历史，且在多国范围内应用普遍，主要含有三萜及其苷类、多炔类、挥发油、黄酮类、生物碱、氨基酸等主要有效成分。其药理作用包括抑制瘢痕增生及修复皮肤损伤、免疫调节与神经保护、抗溃疡及抗菌、消炎、镇痛、抗抑郁、抗肿瘤等。目前没有报道公开其具有止血作用。技术实现要素：本发明要解决的第一个技术问题是提供一种口腔护理组合物。本发明口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5；能有效解决牙龈出血的问题。本发明要解决的第二个技术问题是提供积雪草三萜类化合物在抑制牙龈出血上的应用。为解决上述第一个技术问题，本发明采用如下的技术方案：一种口腔护理组合物，包括积雪草三萜类化合物及可口腔可接受的载体；所述三萜类化合物包括积雪草苷(asiaticoside)、积雪草苷降解产物、羟基积雪草苷(madecassoside)、羟基积雪草苷降解产物中的一种或几种的组合。积雪草苷和羟基积雪草苷的结构如下：作为技术方案的进一步改进，所述羟基积雪草苷降解产物具有如下结构：优选地，所述羟基积雪草苷降解产物具有如下结构：优选地，所述羟基积雪草苷降解产物为羟基积雪草酸(madecassicacid)，结构式如下：作为技术方案的进一步改进，所述积雪草苷降解产物具有如下结构：优选地，所述积雪草苷降解产物具有如下结构：优选地，所述积雪草苷降解产物为积雪草酸(asiaticacid)，结构式如下：优选地，所述积雪草三萜类化合物在组合物中质量占比为0.01-3％。更优选地，所述积雪草三萜类化合物在组合物中质量占比为0.1-1％。作为技术方案的进一步改进，所述积雪草三萜类化合物至少包括羟基积雪草苷、积雪草苷中的一种。优选地，所述积雪草三萜类化合物至少包括羟基积雪草苷和积雪草苷。更优选地，所述羟基积雪草苷和积雪草苷的重量比为9:1-1:9。为解决上述第二个技术问题，本发明积雪草三萜类化合物在抑制牙龈出血上的应用。优选地，所述积雪草三萜类化合物包括积雪草苷、积雪草苷降解产物、羟基积雪草苷、羟基积雪草苷降解产物中的一种或几种的组合。优选地，所述积雪草三萜类化合物添加到牙膏、凝胶、漱口水或牙粉中。本发明所记载的任何范围包括端值以及端值之间的任何数值以及端值或者端值之间的任意数值所构成的任意子范围。如无特殊说明，本发明中的各原料均可通过市售购买获得，本发明中所用的设备可采用所属领域中的常规设备或参照所属领域的现有技术进行。与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：本发明口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5；能有效解决牙龈出血的问题。本申请首次发现积雪草三萜类化合物在抑制牙龈出血上有明显的作用。具体实施方式为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。本发明一种口腔护理组合物，包括积雪草三萜类化合物及可口腔可接受的载体；所述三萜类化合物包括积雪草苷(asiatieoside)、积雪草苷降解产物、羟基积雪草苷(madecassoside)、羟基积雪草苷降解产物中的一种或几种的组合。其中羟基积雪草苷和积雪草苷的结构式如下：当使用积雪草三萜类化合物时，本发明意外地发现其具有很好的止血功效，且优于现有的止血剂4-氨甲基苯甲酸和氨甲环酸。在本发明的某些实施例中，所述羟基积雪草苷降解产物具有如下结构：在本发明的某些实施例中，所述羟基积雪草苷降解产物具有如下结构：在本发明的某些实施例中，所述羟基积雪草苷降解产物为羟基积雪草酸，结构式如下：在本发明的某些实施例中，所述积雪草苷降解产物具有如下结构：在本发明的某些实施例中，所述积雪草苷降解产物具有如下结构：在本发明的某些实施例中，所述积雪草苷降解产物为积雪草酸，结构式如下：。在本发明的某些实施例中，所述积雪草三萜类化合物在组合物中质量占比为0.01-3％、或0.05-3％、或0.05-2.5％、或0.05-2％、或0.05-1.5％、或0.05-1％、或0.05-0.5％、或0.1-3％、或0.1-2.5％、或0.1-2％、或0.1-1.5％、或0.1-1％、或0.1-0.5％。在本发明的某些优选实施例中，所述积雪草三萜类化合物在组合物中质量占比为0.1-1％。在本发明的某些实施例中，所述积雪草三萜类化合物至少包括羟基积雪草苷、积雪草苷中的一种。在本发明的某些优选实施例中，所述积雪草三萜类化合物至少包括羟基积雪草苷和积雪草苷；所述积雪草苷和羟基积雪草苷重量比为9:1-1:9、或8:1-1:8、或7:1-1:7、或6:1-1:6、或5:1-1:5、或4:1-1:4、或3:1-1:3、或2:1-1:2。在本发明的某些实施例中，本发明提供了积雪草三萜类化合物在抑制牙龈出血上的应用。本申请首次发现积雪草三萜类化合物在抑制牙龈出血上有明显的作用。在本发明的某些实施例中，所述口腔护理组合物应用于牙膏、凝胶、漱口水或牙粉中。在本发明的某些实施例中，所述口腔护理组合物中可进一步包括保湿剂、调味剂和/或增稠剂等辅料。在本发明的某些实施例中，所述口腔护理组合物中可进一步包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂、抗结石剂和/或美白剂等活性成分。“保湿剂”是防止口腔护理组合物脱水变硬的成分。示例的保湿剂包括但不限于如甘油、丙二醇、山梨醇、低分子量的聚乙二醇等。按质量百分比计，保湿剂在口腔护理组合物中的含量通常为10-80％。“增稠剂”是一种增加溶液或液体/固体混合物的粘度，但基本上不会改变其性质的物质。加入增稠剂的目的是为了给产品提供骨架、流动性和稳定性。示例的增稠剂包括，但不限于，以下一种或多种:羟乙基纤维素、羧甲基纤维素及其盐(例如羧甲基纤维素钠)、角叉菜聚糖(carrageenan)、羧基乙烯基聚合物、黄原胶(xanthangμm)、卡拉胶、明胶、支链淀粉、海藻酸钠等。在某些实施方式中，所述增稠剂包括黄原胶、卡拉胶或羧甲基纤维素钠中的一种或多种。增稠剂在口腔护理组合物中的重量比例通常为0.2-2％。“表面活性剂”是在牙膏中起到乳化香精和起泡的目的，在某种程度上可以辅助羟基磷灰石-多羧基化合物复合物的充分和完全分散。示例的表面活性剂包括，但不限于，阴离子表面活性剂，例如十二烷基磺酸钠；两性表面活性剂，例如甜菜碱；氨基酸表面活性剂如月桂醇肌氨酸钠和非离子表面活性剂，例如聚氧乙烯与聚氧丙稀共聚物、聚乙二醇等。表明活性剂在口腔护理组合物中的重量比例通常为0.5-2.5％。根据本申请的某些实施方式，所述口腔护理组合物中可进一步包括抗菌剂、抗龋剂、抗敏剂、抗结石剂和/或美白剂等活性成分；“抗菌剂”是指能够在一定时间内，使口腔护理组合物中某些微生物的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。示例的抗菌剂包括但不限于：氯化亚锡、四氢姜黄素、氯化十六烷基吡啶、三氯生等。“抗龋剂”是指对龋病有抑制作用的物质，例如可以通过降低牙釉质羟基磷灰石的溶解度增强牙齿的抗龋能力的物质，或控制菌斑、抑制细菌生长的物质。示例的抗龋剂包括但不限于含磷试剂(磷酸钙、三偏磷酸钠、甘油磷酸镁、乳磷酸钙、酪蛋白酸钠等)、或精氨酸及其衍生物。优选地，在某些具体实施方式中，所述抗龋剂包括氟化物离子源。“抗敏剂”是指通过抑制神经冲动或能够封闭牙本质小管或降低其通透性，从而预防或治疗牙本质过敏症的物质。示例的抗敏剂包括但不限于：甘草酸二钾、氟化钾、硝酸钾、氯化钾等钾离子源。优选地，在某些具体实施方式中，所述抗敏剂包括钾离子源。“抗结石剂”是指能起到抗牙齿结石的作用的金属离子络合物。示例的抗结石剂包括但不限于：焦磷酸盐、三聚磷酸盐、六偏磷酸盐或柠檬酸盐。“美白剂”是指对牙齿能起到美白作用的物质。示例的美白剂包括但不限于：过氧化物漂白剂、木瓜蛋白酶、葡萄糖氧化酶。本发明中，抑制出血作用通过凝血四项表征。测试指标—凝血四项所使用的评价原料/活性成分凝血效果的指标；凝血四项包括：pt，tt，aptt，血小板聚集率。这四项指标也是医院中检测病人凝血功能是否正常的常用指标。一、凝血酶原时间(pt)·检测意义：pt主要反映外源性凝血系统状况。外源性凝血途径主要受组织因子途径抑制物(tfpi)调节。tfpi是存在于正常人血浆及血小板和血管内皮细胞中的一种糖蛋白。·样品准备原料/活性物样品用生理盐水溶解，并按对比例/实施例比例稀释，得样品待测液。牙膏样品：将1份牙膏样品与2份生理盐水混合，然后8000rpm离心20min获得上清液，得到样品待测样。对照组均使用生理盐水。然后，取血液(动物副产品)，与3.2％的柠檬酸钠按9：1的比例混合以便抗凝。3000rpm离心10min，取上清液到一个塑料管，即得到血浆。·检测方法在每个检测管中加入0.1ml实验血浆，加入0.05ml测试样品(用0.05ml生理盐水做阴性对照组)混合；将此混合液在37℃水浴下预热3min，然后在37℃下预热0.2ml促凝血酶原激酶thromboplastin，然后将此酶加入上述混合液混合，用秒表测量凝血时间；每个样平行5次，计算平均值。二.凝血酶时间(tt)·检测意义：tt：主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间，是检测凝血、抗凝及纤维蛋白溶解系统功能的实验。·样品准备原料/活性物样品用生理盐水溶解，并按对比例/实施例比例稀释，得样品待测液。牙膏样品：将1份牙膏样品与2份生理盐水混合，然后8000rpm离心20min获得上清液，得到样品待测样。对照组均使用生理盐水。然后，取血液(动物副产品)，与3.2％的柠檬酸钠按9：1的比例混合以便抗凝；3000rpm离心10min，取上清液到一个塑料管，即得到血浆。·检测方法每个管中加入0.1ml血浆，同样步骤加入0.05ml测试样品混合(生理盐水做阴性对照)；在37℃水浴下预热3min，然后加入0.1ml凝血酶thrombin，混合；用秒表测量凝血时间；每个样平行5次，计算平均值。三、活化部分凝血活酶时间时间(aptt)·检测意义：aptt：主要反映内源性凝血系统状况，常用于监测肝素用量。增高见于血浆因子ⅷ、因子ⅸ和因子xi水平减低：如血友病a、血友病b及因子xi缺乏症；降低见于高凝状态：如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况。·样品准备·原料/活性物样品用生理盐水溶解，并按对比例/实施例比例稀释，得样品待测液。牙膏样品：将1份牙膏样品与2份生理盐水混合，然后8000rpm离心20min获得上清液，得到样品待测样。对照组均使用生理盐水。然后，取血液(动物副产品)，与3.2％的柠檬酸钠按9：1的比例混合以便抗凝。3000rpm离心10min，取上清液到一个塑料管，即得到血浆。·检测方法每个管中加入0.1ml血浆，同样步骤加入0.05ml测试样品混合(生理盐水做阴性对照)；在37℃水浴下预热3min，然后加入已在37℃预热好的0.1ml活化部分凝血活酶悬浮液activatedpartialthromboplastinsuspension，混合；37℃水浴下预热5min，然后加入已在37℃预热好的0.1ml0.025mol/l的氯化钙溶液calciumchloridesolution，混合；用秒表测量凝血时间。每个样平行5次，计算平均值。四、血小板聚集率·检测意义血小板聚集率是血小板功能的一个检测指标；即血小板的聚集百分比及速率；血小板聚集率较高时，血小板容易聚集凝血，形成血栓；血小板聚集率较低时，不易聚集。·光学法测量聚集操作步骤富血小板血浆(prp)的要求：采血时将静脉血与3.2％或3.8％枸橼酸钠抗凝剂按9:1混合，采集后的标本应在0.5-2.5小时内检测完成。血浆的准备：准备prp：将抗凝标本按1000转/分离心10分钟，取上清液于塑料管内。准备ppp(乏血小板血浆)：将剩余的标本按3000转/分离心20分钟，取上清液于塑料管内。调整prp中的血小板数目为200,000-300,000/ul。样品准备：原料/活性物样品用生理盐水溶解，并按对比例/实施例比例稀释，得样品待测液。牙膏样品：将1份牙膏样品与2份生理盐水混合，然后8000rpm离心20min获得上清液，得到样品待测样。光学聚集的具体操作步骤如下：a.将选择好的反应杯加入编号为p/n313的磁棒放于育温孔，育温5分钟；b.加入500ul检测标本的prp在反应杯中(或250ulprp到编号为p/n312反应杯内，但需加橡皮垫)，育温5分钟；c.加入500ul的检测标本的ppp(乏血小板血浆)到另一反应杯中，不需要加磁棒，育温5分钟；d.打开加热盖将检测标本的prp放入prp位置，将检测标本的ppp放入ppp位置；e.关闭盖子，调整旋转速度为1000-1200转/分钟；f.按setbaselines按钮，电脑显示屏上自动设置100％的基线。松开按钮，自动设置0％基线；g.按照所用的试剂种类和方法学加试剂(加之前要记得用无尘吸水纸擦拭枪头保证结果准确)之后马上关闭盖子，防止外界光可能产生影响；h.让曲线运行6-9分钟至其比较平稳时在aggregoment菜单内选择stoptest；i.在edit菜单中选择setstarttimeandstoptime之后选择预编辑的chanal，然后图形中光标点住左边线左键点住拖动此线到开始加试剂的位置，之后光标点住右边线同样拖动至曲线开始趋于平稳的位置，最后done一下；j.在edit菜单中选择calculateresults，确认时间后便可计算出聚集率和坡度(坡度代表单位时间内聚集率的变化)；k.得到的结果可以通过file菜单中的save(保存)或print进行打印。结果标示：通常用聚集百分率和斜率来标识。结果的计算通过观察聚集曲线而获得，斜率代表每分钟的聚集速度。总结：pt/tt/aptt指标值越小，说明凝血效果越好。血小板聚集率指标越大，说明凝血效果越好。实施例1-5：一种口腔护理组合物，按下表配方配置.实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5积雪草苷0.010.1134生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％添加至100％添加至100％经检测，结论如下：实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5pt(s)13.912.7711.2710.1110.19tt(s)41.4239.0836.4933.1833.2aptt(s)24.925.0723.2520.3320.41血小板聚集率53.854.663.866.0566.17从实施例1-5可以看出，本发明口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5。当积雪草苷使用质量比为1-3％效果较佳，超过3％的用量，对凝血四项指标没有太大的帮助。实施例6-10一种口腔护理组合物，按下表配方配置：实施例6实施例7实施例8实施例9实施例10羟基积雪草苷0.010.1134生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％添加至100％添加至100％上述口腔护理组合物凝血四项经检测，结论如下：实施例6实施例7实施例8实施例9实施例10pt(s)13.7811.2411.8210.2710.25tt(s)41.0540.2334.0133.7933.82aptt(s)24.4324.0521.3719.4119.5血小板聚集率56.255.262.265.7765.81从实施例6-10可以看出，含有羟基积雪草苷的口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5。当积雪草苷使用质量比为1-3％效果较佳，超过3％的用量，对凝血四项指标没有太大的帮助。实施例11-13一种口腔护理组合物，按下表配方配置：实施例11实施例12实施例13积雪草酸0.010.11生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％上述口腔护理组合物凝血四项经检测，结论如下：实施例11实施例12实施例13pt(s)14.2112.6611.42tt(s)42.1540.4437.71aptt(s)25.3426.6125.07血小板聚集率54.1956.6359.68从实施例11-13可以看出，含有积雪草酸的口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5。实施例14-16一种口腔护理组合物，按下表配方配置：实施例14实施例15实施例16羟基积雪草酸0.010.11生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％上述口腔护理组合物凝血四项经检测，结论如下：实施例14实施例15实施例16pt(s)14.4212.3711.42tt(s)42.9540.2136.71aptt(s)24.4526.6122.07血小板聚集率55.5956.6359.68从实施例14-16可以看出，含有羟基积雪草酸的口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5。实施例17-20一种口腔护理组合物，按下表配方配置：实施例17实施例18实施例19实施例20积雪草苷0.060.10.90.94羟基积雪草苷0.940.90.10.06生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％添加至100％上述口腔护理组合物凝血四项经检测，结论如下：实施例17实施例18实施例19实施例20pt(s)11.929.889.6411.29tt(s)34.9831.7332.0634.45aptt(s)22.2119.7918.8123.21血小板聚集率62.2166.3667.7663.62从实施例17-20可以看出，口腔护理组合物凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)<12秒；凝血酶时间(tt)<36秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)<23.5秒；血小板聚集率≥62.0，因此，口腔护理组合物中含有积雪草苷和羟基积雪草苷时，凝血效果较佳；并当所述积雪草苷和羟基积雪草苷重量比为9:1-1:9时，具有最佳的凝血效果。实施例21一种口腔护理组合物，按下表配方按常规方法配置成牙膏。经检测，结论如下：实施例20pt(s)12.35tt(s)37.08aptt(s)24.41血小板聚集率56.29本实施例含有口腔护理组合物的牙膏凝血四项指标可达到：凝血酶原时间(pt)≤14.5秒；凝血酶时间(tt)≤42.5秒；活化部分凝血活酶时间时间(aptt)≤27.0秒；血小板聚集率≥53.5。对比例1-3一种口腔护理组合物，按下配方配置：对比例1对比例2对比例3氨甲环酸/1％/4-氨甲基苯甲酸//1％生理盐水添加至100％添加至100％添加至100％经检测，结论如下：当使用质量比1％的氨甲环酸、4-氨甲基苯甲酸或仅生理盐水时，凝血四项指标不能完全达到本发明要求的效果。显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。当前第1页1 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