一种海洋生物肽祛痘修复面膜及其制备方法与流程

本发明属于化妆品
技术领域：
，具体涉及一种海洋生物肽祛痘修复面膜及其制备方法。
背景技术：
：痤疮(acnevulgaris)，又称粉刺(acne)，是一种最为常见的皮肤病，年龄在11～30岁之间的人群中有80％的人患此病，多发于面部、背部、胸等富含皮脂腺的部位。痤疮可以持续多年，导致容貌损毁或留下永久的瘢痕并对患者的心理成长造成严重的负面影响。病原学分析认为痤疮的严重程度与表皮的金黄色葡萄球菌和皮下的痤疮丙酸杆菌有关，如何有效的抑制和杀灭这两种细菌是治疗痤疮的关键。现代治疗痤疮主要以口服抗菌药物、激素以及维a酸类药物及外用消炎药为主，疗程比较长、病情易复发、且易产生不良反应等问题，而且易形成瘢痕或色素沉着。因此，研制一种更为安全、温和、持久且功效全面的产品已成为众望所归。技术实现要素：针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一款具有抗菌、消炎、治疗痤疮、美白、抗紫外线功效以及抗氧化等多重功效的海洋生物肽祛痘修复面膜。为了实现上述目的，本发明的技术方案为：一种海洋生物肽祛痘修复面膜，是由面膜基布和面膜基质溶液组成；所述的面膜基质溶液包括以下重量分数的组分：羟乙基纤维素0.1～0.3％，戊二醇1％-5％，丁二醇1％-5％，尿囊素0.1-0.3％，烟酰胺1％-3％，多肽组合物：深海鱼皮胶原蛋白肽0.1％-1％、海参胶原蛋白肽0.1％-1％、鱼籽多肽0.02％～0.2％，甘草酸二钾0.05％-0.2％，芦荟冻干粉0.1-0.5％，余量水。在上述方案的基础上，所述的面膜基质溶液包括以下重量分数的组分：羟乙基纤维素0.2％，戊二醇2％，丁二醇2％，尿囊素0.2％，烟酰胺3％，多肽组合物：深海鱼皮胶原蛋白肽0.5％、海参胶原蛋白肽0.5％、鱼籽多肽0.1％，甘草酸二钾0.2％，芦荟冻干粉0.1％，余量水。在上述方案的基础上，所述深海鱼皮胶原蛋白肽的分子量为500d，海参胶原蛋白肽的分子量为500-3000d，鱼籽多肽的分子量为1000-3000d。在上述方案的基础上，所述海参胶原蛋白肽的制备方法为：海参清洗干净并脱水后绞碎成0.5～1cm2的小块，按料液比1:5-40(w/w)的比例加入去离子水；加入0.5％-1.5％复合蛋白酶解，ph为8.0～8.5，50～60℃水解2～8h，升温至100℃～120℃保温10min～15min灭酶，离心，乙醇沉淀多糖后取上清液，超滤得到分子量小于3000da的组分，干燥后即得。在上述方案的基础上，所述复合酶为碱性蛋白酶∶胰蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶纤维素酶按2∶2∶2∶3的质量比组成。在上述方案的基础上，所述干燥为冷冻干燥或者喷雾干燥。在上述方案的基础上，所述的面膜基质溶液的制备方法为：常温下称量一定量水，加入羟乙基纤维素搅拌均匀后，再加入戊二醇、丁二醇、尿囊素、烟酰胺、多肽组合物、甘草酸二钾、芦荟冻干粉搅拌均匀。在上述方案的基础上，所述面膜基布为壳聚糖含量≥20％的无纺布。在上述方案的基础上，所述海洋生物肽祛痘修复面膜的制备方法，步骤如下：取制备好的面膜基质溶液30ml，灌装到装有基布的袋子中，平行放置30min，让面膜液和膜布充分接触，即得。上述方法制备的海洋生物肽祛痘修复面膜在抗菌、消炎、治疗痤疮、美白、抗紫外线功效以及抗氧化中的应用。本发明技术方案的优点壳聚糖化学名为多聚葡萄糖胺，属于天然多糖高分子材料，其本身具有优良的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、乳酸杆菌等常见菌种具有很好的抑菌作用，为此以壳聚糖为原料制成的无纺布也承接了其优良的抗菌活性和生物安全性。库拉索芦荟又名吉拉索芦荟、翠叶芦荟或美国芦荟，俗称药用芦荟，含有大量的酚类、多糖类及氨基酸等化合物，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌有抑制作用，且芦荟多糖和维生素对皮肤有良好的滋润与增白作用。深海鱼皮胶原蛋白肽、海参胶原蛋白肽、鱼籽多肽的组合物，分子量3000以下，不仅具有胶原蛋白的生物学特性和功能，而且更易吸收和渗透到角质层、真皮层，其酪氨酸残基可以与皮肤中的酪氨酸竞争，抑制酪氨酸酶催化酪氨酸转化为多巴醌，从一定程度上防止黑色素的形成，减少色素沉着，除此之外还有抗紫外线以及抗氧化的功效。本发明的面膜采用的壳聚糖膜布具有抑制金黄色葡萄球菌的功效，可以抑制皮肤表面上存在的金黄色葡萄球菌，芦荟冻干粉和甘草酸二钾具有抑制痤疮丙酸杆菌的功效，可以抑制毛囊深处和皮肤表面的痤疮丙酸杆菌，多肽组合物等具有修复肌肤胶原、抑制酪氨酸酶活性、抗紫外线、抗氧化的功效，可以填补痘坑、美白、抗氧化，多种活性物质协同作用，共同起到祛痘修复的功效。此外，本发明的海洋生物肽祛痘修复面膜微生物和重金属含量检测符合国家标准，对皮肤无刺激，对细胞无毒性作用，对皮肤无致敏作用，祛痘效果明显，优于市售产品。附图说明图1海洋生物肽祛痘修复面膜对金黄色葡萄球菌的作用；图2广州创尔产品对金黄色葡萄球菌的作用；图3海洋生物肽祛痘修复面膜和广州创尔产品对痤疮丙酸杆菌的作用；图4海洋生物肽祛痘修复面膜祛痘效果。具体实施方式在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。实施例1一种海参多肽的制备方法，步骤如下：海参清洗干净并脱水后绞碎成0.5～1cm2的小块，按料液比1:5-40(w/w)的比例加入去离子水；加入0.5％-1.5％复合蛋白酶解，ph为8.0～8.5，50～60℃水解2～8h，升温至100℃～120℃保温10min～15min灭酶，离心，乙醇沉淀多糖后取上清液，超滤得到分子量小于3000da的组分，干燥后即得。所述复合酶为碱性蛋白酶∶胰蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶纤维素酶按2∶2∶2∶3的质量比组成。所述干燥为冷冻干燥或者喷雾干燥。实施例2一种海洋生物肽祛痘修复面膜，是由面膜基布和面膜基质溶液组成；所述的面膜基质溶液包括以下重量分数的组分：羟乙基纤维素0.1％，戊二醇1％，丁二醇1％，尿囊素0.1％，烟酰胺1％，多肽组合物：深海鱼皮胶原蛋白肽0.2％、海参胶原蛋白肽0.2％、鱼籽多肽0.04％，甘草酸二钾0.05％，芦荟冻干粉0.1％，余量水。所述面膜基布为壳聚糖含量≥20％的无纺布。实施例3一种海洋生物肽祛痘修复面膜，是由面膜基布和面膜基质溶液组成；所述的面膜基质溶液包括以下重量分数的组分：羟乙基纤维素0.3％，戊二醇5％，丁二醇5％，尿囊素0.3％，烟酰胺3％，多肽组合物：深海鱼皮胶原蛋白肽0.35％、海参胶原蛋白肽0.35％、鱼籽多肽0.07％，甘草酸二钾0.2％，芦荟冻干粉0.5％，余量水。所述面膜基布为壳聚糖含量≥20％的无纺布。实施例4一种海洋生物肽祛痘修复面膜，是由面膜基布和面膜基质溶液组成；所述的面膜基质溶液包括以下重量分数的组分：羟乙基纤维素0.2％，戊二醇2％，丁二醇2％，尿囊素0.2％，烟酰胺3％，多肽组合物：深海鱼皮胶原蛋白肽0.5％、海参胶原蛋白肽0.5％、鱼籽多肽0.1％，甘草酸二钾0.2％，芦荟冻干粉0.1％，余量水。所述面膜基布为壳聚糖含量≥20％的无纺布。实施例5海洋生物肽祛痘修复面膜的制备方法，步骤为：取制备好的面膜基质溶液30ml，灌装到装有基布的袋子中，平行放置30min，让面膜液和膜布充分接触，即得。一、海洋生物肽祛痘修复面膜抑菌性效果以本发明实施例4的面膜为例检测其对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑菌效果，同时与广州创尔的同款产品做对比。其中，对金黄色葡萄球菌的抑制结果如图1、图2所示。由图1可知，海洋生物肽祛痘修复面膜对金黄色葡萄球菌有很好的抑制作用，随着时间增长，金黄色葡萄球菌数量减少，2h以后精华液中无金黄色葡萄球菌。由图2可知，随着时间增长，创尔产品精华液中的金黄色葡萄球菌数量先减少后增多，尤其4h后金黄色葡萄球菌大量增殖。整体来说，广州创尔产品对金黄色葡萄球菌没有明显抑制作用，反而是很好的培养基利于金黄色葡萄球菌生长。两者对痤疮丙酸杆菌抑菌性试验结果如图3所示。由图3可知，本发明制备的海洋生物肽祛痘修复面膜对痤疮菌的抑制效果优于广州创尔产品。痤疮丙酸杆菌购自北纳创联生物技术有限公司编号：bncc336649；金黄色葡萄球菌购自北纳创联生物技术有限公司编号：atcc6538。二、海洋生物肽祛痘修复面膜重金属含量检测按照《化妆品安全技术规范》(2015版)方法分别检测本发明实施例4的面膜基质溶液和面膜基布的重金属含量如表1所示。表1海洋生物肽祛痘修复面膜重金属含量检测结果由表1可知，本发明实施例4的面膜重金属含量检测结果符合标准。三、海洋生物肽祛痘修复面膜微生物含量检测按照gb15979-2002中附录b规定的方法检测本发明实施例4的面膜基质溶液和面膜基布中微生物含量。表2海洋生物肽祛痘修复面膜菌落总数表3海洋生物肽祛痘修复面膜粪大肠杆菌含量检测表4海洋生物肽祛痘修复面膜铜绿假单胞菌含量检测表5海洋生物肽祛痘修复面膜金黄色葡萄球菌含量检测表6海洋生物肽祛痘修复面膜霉菌和酵母菌含量检测由表2～6可知，本发明实施例4的面膜中菌落总数＜10cfu/ml，霉菌与酵母菌＜1cfu/ml；致病菌群检测结果为阴性，包括粪大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。四、海洋生物肽祛痘修复面膜皮肤刺激性检测将本发明实施例4的面膜，取出包装内的产品，充分挤压，获取挤出液不少于1ml，按gb/t16886.10-2005中规定的方法测定，结果如表7所示。表7海洋生物肽祛痘修复面膜皮肤刺激性检测结果由表7可知，涂敷本发明实施例4的面膜挤出液部位未见红斑、水肿，所有观察时间点刺激强度评分值均为0，刺激强度分级为：无刺激性。五、海洋生物肽祛痘修复面膜细胞毒性试验将本发明实施例4的面膜，取出包装内的产品，充分挤压，获取挤出液不少于1ml，按gb/16886.5-2003中规定的方法测定，结果如表8所示。表8海洋生物肽祛痘修复面膜细胞毒性试验结果样品毒性根据相对增值率rcg分级：0级≥100；99≥1级≥75；50≥2级≥74；25≥3级≥49；1≥4级≥24；5级＝0。样品合格判定标准：0级和1级判为合格，2级根据形态综合分析，3级、4级和5级判为不合格。由表8试验结果可知本发明实施例4的面膜及原料均无细胞毒性，安全可靠。六、海洋生物肽祛痘修复面膜致敏性将豚鼠按体重性别随机分成三组，每组3只(雄性)。第一组给实施例4的面膜，第二组空白对照(给生理盐水)，第三组阳性对照(给阳性致敏物：2,4-二硝基氯苯)；取实施例4的面膜挤出液0.1ml涂在动物左侧脱毛区，固定，持续6小时。第7天和第14天，以同样方法重复一次。空白对照组与阳性对照组方法同上。与末次给实施例4的面膜挤出液致敏后14天，将实施例4的面膜挤出液0.1ml涂于豚鼠背部右侧脱毛区，6小时后去掉受试物，即刻观察，然后于24小时、48小时、72小时再次观察皮肤过敏反应情况，按表评分(空白对照与阳性对照方法均同上)。表9皮肤过敏反应评分标准试验结果按皮肤反应标准评分后，根据实验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别，按表10判断受试物对皮肤过敏反应性质。表10皮肤过敏反应性质评判标准表11海洋生物肽祛痘修复面膜致敏性检测结果由表11可知，空白对照组与海洋生物肽祛痘面膜组在诱发接触期间均未出现红斑、水肿；激发后24h和48h亦未有皮肤红斑和水肿出现，皮肤刺激反应积分均为0，致敏率为0，结果显示，海洋生物肽祛痘面膜对豚鼠不产生皮肤变态反应，无致敏作用。阳性对照组动物在诱导接触期间均出现红斑和水肿；激发接触后24h和48h均可见到皮肤明显红斑和水肿，动物皮肤刺激反应积分均＞1，致敏率为100％，结果显示2,4-二硝基氯苯为作用极强的致敏物质，对受试豚鼠皮肤有致敏作用，说明采用的实验系统可靠。七、甘草酸二钾和芦荟凝胶冻干粉对痤疮丙酸杆菌抑菌性试验向丙酸杆菌培养液中加入一定量的甘草酸二钾和/或芦荟凝胶冻干粉，采用微量肉汤稀释法培养24h，用分光光度计分别测定600nm下各培养液的吸光度值，结果如表12所示。表12海洋生物肽祛痘修复面膜对应痤疮菌的od值从表12中数据可以看出，单独成分甘草酸二钾与芦荟凝胶冻干粉对痤疮丙酸杆菌都有抑制作用，其中芦荟凝胶冻干粉作用比较明显，当两种组分混合后，对痤疮丙酸杆菌的抑菌作用增强。八、多肽组合物具有吸收紫外线的作用分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱，因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液。紫外线(uv)是从波长从100nm到420nm辐射的总称，太阳光能够到达地面的紫外辐射主要包括uva(320～420nm)和少量uvb(275～320nm)，以320nm为检测波长，通过紫外线的透光率来检测待测样品对紫外的防护作用。配制待测样品溶液，调整分光光度计波长为320nm，读取光吸收值。空白为纯水，调零。试验结果表示，2mg/ml多肽组合物(深海鱼皮胶原蛋白肽∶海参胶原蛋白肽∶鱼籽多肽重量比＝5∶5∶1)在320nm波长处的吸收值为1.5，8％胡莫柳酯(80mg/ml)在320nm波长处的吸收值为3.6，2mg/ml多肽组合物吸收值是80mg/ml胡莫柳酯的41.6％，说明多肽组合物具有明显的吸收紫外线的作用。九、海洋生物肽祛痘修复面膜抗氧化性能研究9.1试验分组：试验组9.1.1试验组1：实施例2的面膜挤出液；9.1.2试验组2：实施例3的面膜挤出液；9.1.3试验组3：实施例4的面膜挤出液；对照组9.1.4对照组1：实施例4不添加深海鱼皮胶原蛋白肽的面膜挤出液；9.1.5对照组2：实施例4不添加多肽组合物的面膜挤出液；9.1.6对照组3：实施例4不添加芦荟冻干粉的面膜挤出液；9.1.7对照组4：实施例4的面膜基质溶液；9.1.8对照组5：实施例4不添加海参胶原蛋白肽的面膜挤出液；9.1.9空白对照组：羟乙基纤维素0.2％，戊二醇2％，丁二醇2％，尿囊素0.2％，烟酰胺3％，余量水。试验方法抗氧化体外实验采用清除dpph活性和清除羟自由基能力测试。结果如表13所示。表13海洋生物肽祛痘修复面膜抗氧化性能组别dpph自由基清除率(ic50,mg/ml)羟自由基清除率(ic50,mg/ml)试验组10.191.9试验组20.151.2试验组30.090.5对照组10.322.6对照组20.453.8对照组30.151.3对照组40.100.8对照组50.352.3空白对照组----------由表13可知，试验组3对于dpph和羟自由基的清除能力最强，其次为对照组3，而不加深海鱼皮胶原蛋白肽、海参胶原蛋白肽、多肽组合物的面膜液抗氧化性能降低，说明深海鱼皮胶原蛋白肽、海参胶原蛋白肽、多肽组合物具有一定清除dpph和羟自由基的能力。试验组1、试验组2的抗氧化结果均不如试验组3理想，说明试验组3多肽组合物比例适当，添加量合适，可以更好的起到抗氧化功效。十、海洋生物肽祛痘修复面膜基布抑菌性能研究按照gb/t20944.3-2008纺织品抗菌性能的评价第三部分：振荡法，采用菌种为金黄色葡萄球菌atcc6538，得到结果如下：表14海洋生物肽祛痘修复面膜基布抑菌率试验菌种名称(菌种编号)金黄色葡萄球菌(atcc6538)接种菌液浓度(cfu/ml)2.6×105对照样的增长值f2.3抗菌样品18小时振荡接触后烧瓶的活菌浓度(cfu/ml)21抑菌率(％)99灭菌方式高压蒸汽灭菌121℃，15min表15不同材质无纺布对金黄色葡萄球菌的抑制作用通过表14和表15可以看出天丝面膜基布接种金黄色葡萄球菌24h后，金黄色葡萄球菌大量繁殖；壳聚糖面膜基布(≥20％)接种金黄色葡萄球菌24h后，金黄色葡萄球菌几乎不生长。十一、海洋生物肽祛痘修复面膜美白祛痘性能研究11.1海洋生物肽祛痘修复面膜美白性能研究试验分组同八；试验方法酪氨酸酶抑制率采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶抑制率，具体检测方法如下所示。样品处理用超纯水将受试物配成10g/l的溶液(酪氨酸酶是铜蛋白，溶液中不应含有铜离子)作为样品液备用。在玻璃管中进行生化反应，各管加入所需要的ph6.8磷酸缓冲液(磷酸氢二钾6.8g和氢氧化钠0.944g定容至1000ml)、样品液、曲酸溶液(10g/l)和酶溶液(约3.5mg酪氨酸酶定容至100ml)于37℃水浴中反应10min，再依次加入l-多巴溶液(2.5g/l)，于37℃水浴中反应10min，测475nm波长的吸光值。试验体系设计见表16。表16试验体系设计表注：空白对照采用3ml缓冲液结果计算抑制率计算方法：样品对酪氨酸酶活性的抑制强度以抑制率表示。样品抑制率＝[阳性对照吸光度值-(样品管吸光度值-阴性对照吸光度值)]/阳性对照吸光度值×100％，标准对照抑制率＝(阳性对照吸光值-标准管吸光值)/阳性对照吸光值×100％，抑制率高表明其对酶活性抑制强度最高。标准品参比：为保证实验结果的准确性，在实验室做检测都应设有标准品对照。我们选用曲酸作为标准对照，不同批次实验时，曲酸标准对照的抑制率会有所不同，可以将标准对照的抑制率折算成100％，受试物的抑制率等比例变化后再作比较。表17酪氨酸酶抑制率组别酪氨酸酶抑制率(％)试验组182.34试验组284.56试验组386.63对照组150.87对照组223.67对照组370.89对照组477.45对照组556.45空白对照组0从表17可知：试验组3对于酪氨酸酶活性抑制率最强，其次为对照组3，而不加深海鱼皮胶原蛋白肽、海参胶原蛋白肽、多肽组合物的面膜液抑制酪氨酸酶活性低，说明深海鱼皮胶原蛋白肽、海参胶原蛋白肽、多肽组合物具有一定抑制酪氨酸酶活性的能力。试验组1、试验组2的抑制酪氨酸酶活性均不如试验组3理想，说明试验组3多肽组合物比例适当，添加量合适，可以更好的起到抑制酪氨酸酶活性的功效。11.2海洋生物肽祛痘修复面膜祛痘性能研究试验分组试验组11.2.1试验组1：实施例2的面膜；11.2.2试验组2：实施例3的面膜；11.2.3试验组3：实施例4的面膜；对照组11.2.4对照组1：实施例4不添加深海鱼皮胶原蛋白肽的面膜；11.2.5对照组2：实施例4不添加多肽组合物的面膜；11.2.6对照组3：实施例4不添加芦荟冻干粉的面膜；11.2.7对照组4：实施例4的面膜基质溶液；11.2.8对照组5：实施例4不添加海参胶原蛋白肽的面膜；11.2.9空白对照组：羟乙基纤维素0.2％，戊二醇2％，丁二醇2％，尿囊素0.2％，烟酰胺3％，余量水。试验方法选择200名年龄在20～35岁间的无化妆品过敏史、诊断为轻度和较轻中度痤疮志愿者(男112名，女88名，病程3～5年)，将志愿者随机分为10组，1～9组每晚分别敷用11.2.1～11.2.9的面膜20min，敷面前清洁面部，且每人洁面时间相同，第10组敷用广州创尔功效类似的面膜(胶原净澈祛痘面膜)，各志愿者每天敷贴面膜一次，连续使用4周。综合疗效评价参考《中药新药临床研究指导原则·中药新药治疗寻常痤疮的临床研究指导原则》，以皮损程度、皮损分布、体征的总积分计算疗效分4级判定。计算公式(尼莫地平法)为：(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分×100％。痊愈：皮损消退，或仅遗留少许色素沉着，症状消失，积分值减少≥95％。显效：皮损大部分消退，症状明显减轻，积分值减少≥70％。有效：皮损部分消退，症状改善，积分值减少≥50％。无效：皮损消退不明显，症状未改善，积分值减少不足50％。表18海洋生物肽祛痘修复面膜祛痘性能组别治愈率％显效％有效％无效％总有效率％试验组14020103070试验组24525151585试验组3552515595对照组1351554555对照组2301055545对照组3251056040对照组410558020对照组53015104555创尔组201056535由表18可知，海洋生物祛痘面膜有较好的治愈痘痘的功效，这是因为壳聚糖膜布可以抑制皮肤表面的金黄色葡萄球菌，甘草酸二钾和芦荟冻干粉组合物可以抑制毛囊中的痤疮丙酸杆菌，多肽组合物可以修复痘坑、抗氧化，多种成分共同起到祛痘作用。图4为真人试用后效果，通过图片可以看出，用过产品两周后的右脸明显痘痘减少、脓包减少，效果明显优于未用此产品的效果。以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。当前第1页12