一种不植骨上颌窦底提升小鼠模型的构建方法与流程

本发明属于口腔种植学技术领域，具体涉及一种不植骨上颌窦底提升小鼠模型的构建方法。

背景技术：

上颌窦是上颌骨中的窦腔结构，在灵长类、犬类、偶蹄类(小型猪)动物中的相对解剖位置各不相同，但由于其体积较大，在直视下可以完成上颌窦底提升术，因此在目前针对上颌窦底提升术的研究中，主要采用上述动物作为研究模型。小鼠作为常用实验动物的代表，由于其体型的限制，导致其上颌窦体积几乎可忽略不计，无法直接从上颌窦入路模拟该临床术式。

目前，有部分临床及大动物研究报道，在上颌窦底提升术中，即使不使用植骨材料，仅依靠种植体将上颌窦黏膜抬升，也可获得良好的预期成骨效果，为了研究过程中成骨组织的细胞来源、详细的成骨过程与机制，需要引入大型动物模型，如比格犬、猕猴、小型猪等，通过定位其上颌窦腔的位置，仅植入种植体，抬升上颌窦底粘膜，观察术后局部组织的生理愈合过程，从而达到模拟临床手术愈合过程的目的。由于上颌窦腔的解剖体积小、手术位置难以掌握，导致目前研究主要采用以比格犬、猕猴、小型猪等为代表的大型动物，而采用这些动物进行研究存在如下不足之处：①动物购买及饲养成本高，手术过程复杂；②造模、取材及标本处理周期长；③配套试剂耗材如抗体等的选择性少，不利于从分子生物学角度深入探究该过程的相关机制；④目前基于大动物的基因编辑技术还有待成熟，主流的模式动物仍以小鼠作为背景，而模式动物是研究人员对基因功能挖掘及深入认识的最直接工具，大动物在该方面处于完全劣势。

技术实现要素：

为克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种不植骨上颌窦底提升小鼠模型的构建方法，小鼠鼻窦及鼻旁窦黏膜相互移行，其基本组织结构相似且分为三层，即表层(上皮细胞层)、中间层(疏松结缔组织层)及骨膜层，鼻骨长且平坦，鼻腔解剖结构较为宽大，从小鼠鼻骨入路等效替代临床上广泛应用的窦腔提升模型。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

不植骨上颌窦底提升小鼠模型的构建方法，具体地，包括以下步骤：

s1：将待建模小鼠行腹腔全身麻醉；

s2：75％酒精消毒小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮；

s3：75％酒精消毒备皮后术区皮肤两次；

s4：用11号刀片沿矢状向切开鼻中部皮肤，切口长为8～10mm；

s5：暴露鼻骨中部骨面，用manifg1/4高速钨钢车针预备植入位点，钻穿局部鼻骨骨皮质；

s6：用生理盐水检验局部鼻粘膜是否破裂，保证小鼠鼻粘膜完整性；

s7：将微型种植体垂直于所述鼻骨骨面，完全种植于所述植入位点，并获得初期稳定性；

s8：用6-0可吸收缝线拉拢间断缝合术区皮肤；

s9：局部及全身运用抗生素三天，预防可能出现的局部及全身感染。

所述待建模小鼠的鼻骨中点宽度为1.0～1.2mm，鼻骨厚度为0.15～0.2mm，鼻腔矢状向长度为1.0～1.2mm。

所述鼻粘膜完整性的检测方法为：若生理盐水在局部迅速漏入鼻腔并从小鼠鼻孔溢出，则鼻粘膜破裂；反之则鼻粘膜完整。

在某些优选的实施方案中，所述微型种植体包括金属种植体、金属合金种植体或非金属种植体中的一种；在某些优选的实施方案中，所述微型种植体的材质选自纯钛、钛合金、氧化锆、不锈钢或peek中的一种；在某些优选的实施方案中，所述微型种植体为纯钛种植体，且表面预先进行酸蚀处理。在某些优选的实施方案中，所述微型种植体的直径为0.4～0.8mm，长度为0.6～1mm。

所述植入位点位于鼻骨中部。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明将临床上颌窦提升术整合入小鼠模型中，具有操作方便快捷，成本低，利于深入研究等重要优势。

2、本发明基于小鼠(小动物)模型不植骨，仅使用纯钛种植体实现了临床广泛运用的上颌窦底提升术。

3、本发明模拟临床上鼻黏膜是否漏液、鼻孔是否溢水的方法判断鼻粘膜是否破裂，操作简单，判断准确。

附图说明

图1为建模前小鼠头骨体的体视显微镜照片；

图2为建模9天后局部提升组织he染色；

图3为建模后小鼠头骨体的体视显微镜照片；

图4为建模9天后局部提升组织masson染色；

图5为微型种植体的体视显微镜照片。

具体实施方式

下面结合附图详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

1、试验材料

8周龄c57/bl6小鼠12只，24～26g，由南京南方模式动物提供，饲养于本院动物中心的spf级环境中，本实验得到本院伦理委员会许可；便携式牙科综合涡轮机由上海通达医疗器械有限公司提供；高速牙科手机(panamax)由日本nsk公司提供；11号手术刀片及6～0可吸收缝线由上海金环医疗用品股份有限公司提供；车针(fg1/4)由日本mani公司提供；h&e染色试剂盒及masson染色试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；体视显微镜及拍照系统由日本尼康公司提供。

2、建立小鼠窦腔提升模型

12只c57/bl6小鼠适应性喂养一周后，用1.5％戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠，剂量为40mg/kg；75％酒精消毒小鼠鼻中部对应表皮两次，并备皮；75％酒精消毒备皮后术区皮肤两次；用11号刀片沿矢状向切开鼻中部皮肤，切口长8～10mm；暴露鼻骨中部骨面，用manifg1/4高速钨钢车针预备植入位点，钻穿局部鼻骨骨皮质；生理盐水检验局部鼻粘膜是否破裂，如破裂，生理盐水在局部将迅速漏入鼻腔并从小鼠鼻孔溢出，需要保证鼻粘膜的完整性；将微型种植体垂直于骨面，完全植入种植位点，并获得一定初期稳定性；用6-0可吸收缝线，拉拢间断缝合术区皮肤；局部及全身运用抗生素三天，预防可能出现的局部及全身感染，参见附图1和3。

3、组织病理分析

用4％多聚甲醛灌流固定后浸泡24小时，10％edta完全脱钙3周，石蜡包埋，切片，片厚4μm，进行he染色及masson染色。he及masson染色观察形成组织的成分、纤维分布及成骨矿化度。

4、组织病理学染色

参见附图2所示，窦腔提升组织he染色：鼻腔黏膜保持完整，可见种植体占位像，种植体周可见明显而完全的骨样组织，间隙中分布有少许纤维组织。

参见附图4所示，窦腔提升组织masson染色：鼻腔黏膜保持完整，可见种植体占位像，种植体周可见明显而完全的骨样组织，骨样组织全部呈蓝色着色，骨样组织间散在分布有纤维组织，呈红色染色。

本发明不植骨上颌窦底提升小鼠模型的构建方法中，通过对小鼠局部提升组织进行组织病理学分析，证明该方法建立的不植骨上颌窦底提升模型能有效形成骨组织，充分模拟临床组织病理学过程，且相较于基于小型猪、比格犬等大型动物的模型构，本发明构建的小鼠模型具有如表1所示的优势，为临床研究提供了新思路。

表1

以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。