一种含有恩替卡韦的长效注射微球及其制备方法与流程

本发明涉及一种含有恩替卡韦的长效注射微球及其制备方法。

背景技术

恩替卡韦是2015年版《慢性乙型肝炎防治指南》中推荐的治疗慢性乙肝的首选药物，目前上市的剂型是口服液和片剂，片剂的推荐剂量为每天一次，每次0.5mg。在服用恩替卡韦口服液和片剂过程中需要注意以下2点：

1.进食会使药物峰浓度(cmax)下降63％，生物利用度(auc0-t)下降22％，药物达峰时间(tmax)延迟1.5h，因此应空腹服用(餐前或餐后至少2小时)；

2.在使用过程中，没有停药指征之前不能随便停药，否则容易发生病毒反跳。

慢性乙肝是一种需要较长时间用药维持治疗的疾病，但有报道称在口服抗病毒药物过程中，63％患者会自行停药，其中57％的患者病情加重。在使用过程中，没有停药指征之前不能随便停药，否则一停药就容易产生病毒反跳，有大约8％的人反跳症状比较严重，出现黄疸和肝功能代谢失常。临床要求患者空腹用药，加剧了恶心、呕吐、腹痛、腹泻、腹部不适和消化不良等不良反应。

因此，开发安全、稳定的慢性乙肝抗病毒药物可以避免胃肠道副反应，减少病毒反弹的机率，延长药物作用时间，降低副作用，改善患者用药顺应性。

技术实现要素：

针对上述现有技术的不足，本申请提供一种课延长药物释放周期的含有恩替卡韦的长效注射微球的制备方法。

一种含有恩替卡韦的长效注射微球的制备方法，步骤包括：将气流粉碎后的恩替卡韦加入到plga溶液中得到恩替卡韦-plga混悬液，将该混悬液超声并高速分散后，迅速滴入到0.5％-2％质量浓度的聚乙烯醇水溶液中，800-1500r/min搅拌乳化3-5min，再迅速转入到0.1-0.5％质量浓度的聚乙烯醇水溶液中，磁力搅拌4-6h，过筛收集后冷冻干燥，得到微球。

优选的，所述plga为：la/ga＝50:50-85:15，所述plga粘度为0.15-0.80dl/g。

优选的，所述恩替卡韦和plga的重量比为1：(5-10)。

优选的，所述plga溶液为plga-二氯甲烷溶液，质量浓度为150-300mg/ml。

优选的，所述0.5％-2％质量浓度的聚乙烯醇溶液与plga溶液的体积比例为5:1-20:1。

优选的，所述0.1-0.5％质量浓度的聚乙烯醇溶液与plga溶液的体积比例为50:1-100:1。

本申请还提供一种含有恩替卡韦的长效注射微球，采用上述的制备方法制备得到。

有益效果：

采用s/w/o(油包水包固)工艺制备恩替卡韦微球，制备过程中采用了超声分散法，减小药物粒径，避免药物颗粒聚集，并将固体药物均匀分散于油相中，延长药物释放周期。

现有技术中的恩替卡韦-plga缓释微球，体外缓释时间仅为20天，本发明制备的微球体外释药长达60天，所制备的微球体内释药长达6周，42天仍维持在有效血药浓度，有望开发成为每42天注射一次的长效注射剂。

附图说明

图1为本发明实施例1微球的扫描电镜图。

图2为本发明实施例1微球粒度分布图。

图3为本发明实施例1-6微球体外释药曲线(n＝3)。

图4为本发明实施例3-4微球体内释药曲线(n＝6)。

具体实施方式

实施例1

本发明采用s/w/o(油包水包固)工艺制备恩替卡韦微球，具体制备方法为：

称取4gplga溶于20ml二氯甲烷，向其中加入0.4～0.8g经气流粉碎后的恩替卡韦，得到恩替卡韦-plga混悬液，将该混悬液超声并高速分散，具体为6500～10000/min超声分散3～5min；

将恩替卡韦-plga分散溶液迅速滴入1％聚乙烯醇(pva)水溶液中，1000r/min搅拌乳化3～5min，迅速转入0.1％pva中，磁力搅拌4～6h去除二氯甲烷，1000-1200目筛收集洗球，冷冻干燥，即得成品恩替卡韦微球。

本申请将恩替卡韦经恩替卡气流粉碎后再加入到plga溶液中是重要的，气流粉碎可以减小恩替卡韦的粒径，具体使得恩替卡韦的粒径为1-5微米最佳；但同时1-5微米粒径的恩替卡韦颗粒在分散到plga溶液的过程中容易发生粒子聚集和沉淀，本申请采用了超声和高速分散的方法克服这一问题；恩替卡韦在水中微溶，在二氯甲烷中几乎不溶，需要将恩替卡韦在保持晶型不变的前提下粉碎到较小的粒径；综上，本申请克服很大困难摸索到制备恩替卡韦微球的工艺，从而有效增大微球的包封率和载药量。

将恩替卡韦-plga混悬液超声并高速分散后，迅速滴入到1％质量浓度的聚乙烯醇水溶液中是重要的，超声并高速分散可以将恩替卡韦颗粒均匀地分散到plga溶液中，迅速滴入可以防止均匀分散的恩替卡韦粒子发生聚集或沉淀。

微球形态观察：

将10mg实施例1制得的恩替卡韦微球均匀分散于导电胶上，10kv电压下喷金后，采用扫描电子显微镜(sem，韩国coxem)观察微球外观形态可知，本研究所得微球形态圆整，表面光滑，观察结果见图1。

粒径分布测试：

将200mg实施例1制得的恩替卡韦微球分散于激光粒度仪(malvern，mastersizer2000)中，测定微球粒径分布见图2，所得微球d(10)＝54.386μm，d(50)＝91.273μm，d(90)＝150.696μm，d[3,2]＝84.213μm,span:1.055。

实施例2-实施例6，其制备方法同实施例1。不同之处仅在于，plga的型号和粘度，具体见表1所示。

表1实施例1-6的plga的型号和粘度

备注：plga型号中，5050、6535、8515表示高分子材料中乳酸/羟基乙酸(la/ga)分别为50：50，65：35，85：15，a表示高分子以羧基封端，e表示高分子以酯基封端。

载药量和包封率测定：

高效液相色谱条件：色谱柱：c18柱(200mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇：水＝20:80，检测波长：254nm，流速：1.0ml·min^-1，柱温：40℃，进样量：100μl。

精密称取实施例1制得的恩替卡韦微球10mg，加入适量二氯甲烷溶解plga，用流动相萃取恩替卡韦后，进hplc测定峰面积，并按以下公式计算载药量和包封率：

载药量(％)＝微球中药物重量/微球总重量×100％

包封率(％)＝微球实际载药量/理论投药量×100％

按照实施例1-6，制备所得微球的平均载药量和包封率结果见表2。

表2实施例1-6所得微球的平均载药量和包封率结果

体外药物释放实验：

将适量实施例1～6制得的恩替卡韦微球置于50mlph7.4磷酸盐缓冲液中，50r/min,37℃摇床中震摇，分别于1h，6h，24h及2～60天每隔一天取样一次，并补充等量缓冲液，高效液相色谱法测定药物的释放曲线见图3。

大鼠体内药物释放实验：

参考临床用药剂量，成人口服恩替卡韦，每天一次，每次0.5mg。连续6周给药总剂量为21mg。按体重计大鼠给药剂量约为人的7倍，按照6周给药剂量换算大鼠等效剂量为2.25mg/kg体重。称取一定量的实施例3～4制得的恩替卡韦微球，加入1％cmc-na溶液，振摇混匀，配制成混悬液经sd大鼠(雄性，200±20g，4～5周龄)后腿肌肉注射给药，所得体内释药曲线见图4。

本发明开发了安全、稳定的恩替卡韦长效微球注射剂，体外释药可达60天(2个月)，大鼠体内释药实验证明：注射6周(42天)后，仍可在大鼠体内监测到有效血药浓度。该长效注射微球可以避免胃肠道副反应，减少病毒反弹的机率，延长药物作用时间，降低副作用，减小给药频率，改善患者用药顺应性。

本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。